药学学报

No.	δ_H	δ_C
1		190.9 (C)
2	5.83 (1H, q, J = 1.2 Hz)	129.2 (CH)
3		160.3 (C)
4	4.24 (1H, dd, J = 7.6, 4.8 Hz)	69.1 (CH)
5	2.95 (1H, dd, J = 14.0, 4.8 Hz) 2.64 (1H, dd, J = 14.0, 7.6 Hz)	37.4 (CH₂)
6		126.0 (C)
7	1.99 (3H, s)	20.1 (CH₃)
8		146.2 (C)
9	2.07 (3H, s)	22.8 (CH₃)
10	1.85 (3H, s)	22.7 (CH₃)

No.	δ_H	δ_C
1		190.9 (C)
2	5.83 (1H, q, J = 1.2 Hz)	129.2 (CH)
3		160.3 (C)
4	4.24 (1H, dd, J = 7.6, 4.8 Hz)	69.1 (CH)
5	2.95 (1H, dd, J = 14.0, 4.8 Hz) 2.64 (1H, dd, J = 14.0, 7.6 Hz)	37.4 (CH₂)
6		126.0 (C)
7	1.99 (3H, s)	20.1 (CH₃)
8		146.2 (C)
9	2.07 (3H, s)	22.8 (CH₃)
10	1.85 (3H, s)	22.7 (CH₃)

Compd./40 μmol·L^-1	NO inhibition rate/%	Cell viability/%
1	20.71 ± 2.71	103.51 ± 3.01
2	-1.34 ± 1.16	93.19 ± 2.04
3	17.18 ± 1.06	99.96 ± 1.42
4	0.00 ± 1.06	95.65 ± 1.61
5	-4.91 ± 1.06	102.99 ± 0.90
6	16.11 ± 0	99.31 ± 2.01
7	31.95 ± 1.03	92.99 ± 1.32
8	24.85 ± 1.03	101.01 ± 5.45
9	21.30 ± 1.02	106.29 ± 2.79
10	26.63 ± 4.47	96.08 ± 3.00
11	35.57 ± 1.16	70.96 ± 1.33
12	40.83 ± 1.02	94.61 ± 0.50
13	18.79 ± 1.16	103.33 ± 0.64
14	66.27 ± 1.77	99.67 ± 1.48
15	28.40 ± 1.02	129.25 ± 3.58
16	28.99 ± 1.77	102.40 ± 1.57
17	25.44 ± 0	81.45 ± 2.51

Compd./40 μmol·L^-1	NO inhibition rate/%	Cell viability/%
1	20.71 ± 2.71	103.51 ± 3.01
2	-1.34 ± 1.16	93.19 ± 2.04
3	17.18 ± 1.06	99.96 ± 1.42
4	0.00 ± 1.06	95.65 ± 1.61
5	-4.91 ± 1.06	102.99 ± 0.90
6	16.11 ± 0	99.31 ± 2.01
7	31.95 ± 1.03	92.99 ± 1.32
8	24.85 ± 1.03	101.01 ± 5.45
9	21.30 ± 1.02	106.29 ± 2.79
10	26.63 ± 4.47	96.08 ± 3.00
11	35.57 ± 1.16	70.96 ± 1.33
12	40.83 ± 1.02	94.61 ± 0.50
13	18.79 ± 1.16	103.33 ± 0.64
14	66.27 ± 1.77	99.67 ± 1.48
15	28.40 ± 1.02	129.25 ± 3.58
16	28.99 ± 1.77	102.40 ± 1.57
17	25.44 ± 0	81.45 ± 2.51

荜澄茄化学成分及一对新的单萜对映异构体的鉴定和抗炎活性研究

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陆玫霖 ¹ , 黄婉凤 ¹ , 何宇铭 ¹ , 王宝林 ¹ , 袁富红 ¹ , 张婷 ¹ , 潘其明 ¹^,^* , 徐新亚 ² , 何佳 ³ , 韩珊 ³ , 王琴琴 ³ , 杨世林 ¹^,³ , 高红伟 ¹^,^*

药学学报 | 研究论文 2024,59(5): 1348-1356

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药学学报 | 研究论文 2024, 59(5): 1348-1356

荜澄茄化学成分及一对新的单萜对映异构体的鉴定和抗炎活性研究

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陆玫霖¹, 黄婉凤¹, 何宇铭¹, 王宝林¹, 袁富红¹, 张婷¹, 潘其明¹^,^*, 徐新亚², 何佳³, 韩珊³, 王琴琴³, 杨世林¹^,³, 高红伟¹^,^*

作者信息

1.广西中医药大学药学院, 广西南宁 530200

2.广西中医药大学海洋药物研究院, 广西南宁 530200

3.江西中医药大学药学院, 江西南昌 330000

通讯作者:

^*潘其明, Tel: 86-771-4953513, E-mail: qmingpan@163.com;

高红伟, Tel: 86-771-4953513, E-mail: gaohongwei06@126.com

Identification and anti-inflammatory activity of chemical constituents and a pair of new monoterpenoid enantiomers from the fruits of Litsea cubeba

Mei-lin LU¹, Wan-feng HUANG¹, Yu-ming HE¹, Bao-lin WANG¹, Fu-hong YUAN¹, Ting ZHANG¹, Qi-ming PAN¹^,^*, Xin-ya XU², Jia HE³, Shan HAN³, Qin-qin WANG³, Shi-lin YANG¹^,³, Hong-wei GAO¹^,^*

Affiliations

1. College of Pharmacy, Guangxi University of Chinese Medicine, Nanning 530200, China

2. Institute of Marine Drugs, Guangxi University of Chinese Medicine, Nanning 530200, China

3. College of Pharmacy, Jiangxi University of Chinese Medicine, Nanchang 330000, China

出版时间: 2024-05-12 doi: 10.16438/j.0513-4870.2023-1216

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摘要

收起

综合运用正相硅胶、ODS、Sephadex LH-20凝胶柱色谱, 反相和手性HPLC及重结晶等分离方法从荜澄茄(山鸡椒Litsea cubeba的干燥成熟果实) 甲醇浸提物中分离得到18个化合物, 通过波谱数据分析和与文献对比确定化合物的结构, 并通过实验和量子化学计算电子圆二色谱确定对映异构体的绝对构型。分别鉴定为(+)-(R)-4-hydroxypiperitenone (1a)、(-)-(S)-4-hydroxypiperitenone (1b)、(3S,4S,6R)-3,6-dihydroxy-1-menthene (2)、(4S,5R)-4-羟基-5-异丙基-2-甲基环己-2-烯-1-酮(3)、(R)-6-羟基-3-(2-羟基异丙基)-6-甲基环己-2-烯-1-酮(4)、(4S,6R)-4-羟基-6-异丙基-3-甲基环己-2-烯-1-酮(5)、(1R,3S,4R)-3-羟基异胡薄荷醇(6)、subamone (7)、(6S)-3,7-dimethyl-7-hydroxy-2(Z)-octen-6-olide (8)、(6S)-6,7-二羟基-3,7-二甲基辛-2(Z)-烯酸甲酯(9)、holostylactone (10)、芝麻脂素(11)、二甲基罗汉松脂素(12)、p-hydroxybenzoylcarbinol (13)、丁香醛(14)、对羟基苯甲醛(15)、4-羟基-3-甲氧基苯甲醛(16)、5,4ʹ-二羟基-7-甲氧基黄酮(17)。其中化合物1a和1b为一对新的单萜对映异构体, 8和9为新天然产物, 2~7、10~11和17均为首次从木姜子属植物中分离得到。化合物1~17体外抗炎活性测试结果表明, 在40 μmol·L^-1的浓度下, 化合物14具有显著的抗炎活性, 对脂多糖诱导的小鼠腹腔巨噬细胞(RAW264.7) 中NO的产生有抑制作用, 抑制率为66.27%。

关键词

樟科 / 山鸡椒 / 荜澄茄 / 单萜 / 对映异构体 / 抗炎

Abstract

收起

Eighteen compounds were isolated from the methanol extract of the fruits of Litsea cubeba by silica gel, ODS, Sephadex LH-20 column chromatography, semi-preparative RP-HPLC, chiral HPLC and recrystallization. Their structures were elucidated by spectroscopic analyses and by comparison with reported spectroscopic data and physicochemical properties, and the absolute configurations of the enantiomers were established by experimental and calculated electronic circular dichroism spectra. These compounds were identified as (+)-(R)-4-hydroxypiperitenone (1a), (-)-(S)-4-hydroxypiperitenone (1b), (3S,4S,6R)-3,6-dihydroxy-1-menthene (2), (4S,5R)-4-hydroxy-5-isopropyl-2-methylcyclohex-2-en-1-one (3), (R)-6-hydroxy-3-(2-hydroxypropan-2-yl)-6-methylcyclohex-2-enone (4), (4S,6R)-4-hydroxy-6-isopropyl-3-methylcyclohex-2-enone (5), (1R,3S,4R)-3-hydroxy isopulegol (6), subamone (7), (6S)-3,7-dimethyl-7-hydroxy-2(Z)-octen-6-olide (8), (6S)-6,7-dihydroxy-3,7-dimethyloct-2(Z)-enoate (9), holostylactone (10), sesamin (11), dimethylmatairesinol (12), p-hydroxybenzoylcarbinol (13), syringaldehyde (14), p-hydroxybenzaldehyde (15), 4-hydroxy-3-methoxybenzaldehyde (16), 5,4ʹ-dihydroxy-7-methoxyflavone (17). Among them, compounds 1a and 1b were a pair of new monoterpenoid enantiomers, 8 and 9 were new natural products, 2-7, 10, 11 and 17 were isolated from Litsea genus for the first time. The in vitro anti-inflammatory effects of compounds 1-17 were evaluated using lipopolysaccharide-stimulated RAW264.7 cells, the results showed that compound 14 exhibited significant anti-inflammatory activity with NO inhibitory rate of 66.27% at a concentration of 40 μmol·L^-1.

Key words

Lauraceae / Litsea cubeba / Litsea cubeba fruit / monoterpenoid / enantiomer / anti-inflammatory activity

引用本文

陆玫霖, 黄婉凤, 何宇铭, 王宝林, 袁富红, 张婷, 潘其明, 徐新亚, 何佳, 韩珊, 王琴琴, 杨世林, 高红伟. 荜澄茄化学成分及一对新的单萜对映异构体的鉴定和抗炎活性研究. 药学学报, 2024 , 59 (5) : 1348 -1356 . DOI: 10.16438/j.0513-4870.2023-1216

Mei-lin LU, Wan-feng HUANG, Yu-ming HE, Bao-lin WANG, Fu-hong YUAN, Ting ZHANG, Qi-ming PAN, Xin-ya XU, Jia HE, Shan HAN, Qin-qin WANG, Shi-lin YANG, Hong-wei GAO. Identification and anti-inflammatory activity of chemical constituents and a pair of new monoterpenoid enantiomers from the fruits of Litsea cubeba[J]. Acta Pharmaceutica Sinica, 2024 , 59 (5) : 1348 -1356 . DOI: 10.16438/j.0513-4870.2023-1216

正文

收起

荜澄茄为樟科(Lauraceae) 木姜子属Litsea Lam.植物山鸡椒Litsea cubeba Pers.的干燥成熟果实, 主要分布于广西、江西、福建、浙江等长江以南地区。其气芳香, 味辛、微苦, 性温, 具有温中散寒, 行气止痛的功效, 用于胃寒呕逆, 脘腹冷痛, 寒疝腹痛, 寒湿郁滞, 小便浑浊等症^[1]。目前临床上有以荜澄茄为“君药”, 用于治疗(或辅助治疗) 气滞血瘀型胃脘痛、慢性胃炎等症的荜铃胃痛颗粒^{[2, 3]}。山鸡椒是具有独特芳香气味的药食两用植物, 在民间山鸡椒新鲜果实捣烂内服用于治疗胃寒、呕吐、中暑、积食、胀气等, 外敷用于治疗皮肤病和无名肿痛。除作为药用外, 山鸡椒果实还可以作为食品增味剂, 添加在各种食品中, 风味独特还有很好的抑菌作用^[4]。研究表明, 荜澄茄主要含有以单萜和倍半萜为主的挥发油、木脂素以及少量黄酮成分, 其中柠檬醛为其挥发油的主要化学成分, 具有抗炎、抗菌、抗氧化、抗肿瘤、平喘和抗过敏等作用^[4-7]。为了进一步挖掘荜澄茄的抗炎活性成分, 本实验对荜澄茄甲醇浸提物的化学成分及其抗炎活性进行研究, 从其二氯甲烷和乙酸乙酯萃取部位共分离得到18个化合物(1~17), 结构见图 1, 其中化合物1a和1b为一对新的单萜对映异构体, 8和9为新天然产物, 2~7、10、11和17均为首次从该属植物中分离得到。化合物1~17的体外抗炎活性初步评价表明, 化合物14对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS) 诱导的RAW264.7细胞中一氧化氮(NO) 释放有较强的抑制作用。

结果与讨论

收起

1 结构鉴定

化合物1 无色油状物; 薄层喷以10%硫酸乙醇-香草醛溶液, 加热显棕色。HR-ESI-MS给出准分子离子峰m/z 167.107 9 [M+H]⁺ (计算值167.106 7, C₁₀H₁₅O₂), 推测其分子式为C₁₀H₁₄O₂, 不饱和度为4。

¹H NMR谱(表 1) 显示13个氢信号。其中δ_H 5.83 (1H, q, J = 1.2 Hz) 为1个三取代双键氢信号; δ_H 4.24 (1H, dd, J = 7.6, 4.8 Hz) 为1个与吸电子基团相连的脂肪次甲基氢信号。δ_H 2.95 (1H, dd, J = 14.0, 4.8 Hz) 和2.64 (1H, dd, J = 14.0, 7.6 Hz) 为2个同碳偶合的脂肪亚甲基氢信号; 由偶合常数知该亚甲基与上述次甲基直接相连; δ_H 2.07 (3H, s)、1.99 (3H, s) 和1.85 (3H, s) 为3个与季碳相连的甲基氢信号。

¹³C NMR谱(表 1) 显示10个碳信号, 结合DEPT 135谱可知δ_C 190.9 (C) 为1个共轭的羰基碳信号, δ_C 160.3 (C)、146.2 (C)、129.2 (CH) 和126.0 (C) 为4个烯碳信号, 提示1中含有2个双键; δ_C 69.1 (CH) 为1个与吸电子基团相连的脂肪次甲基碳信号, δ_C 37.4 (CH₂) 为1个脂肪亚甲基碳信号, δ_C 22.8 (CH₃)、22.7 (CH₃) 和20.1 (CH₃) 为3个甲基碳信号。

通过HSQC谱进一步将上述碳与对应的氢关联。HSQC谱显示δ_H 5.83 (1H, q, J = 1.2 Hz) 与δ_C 129.2 (CH) 相关, 提示δ_H 5.83为烯碳δ_C 129.2上的一个烯氢; δ_H 4.24 (1H, dd, J = 7.6, 4.8 Hz) 与δ_C 69.1 (CH) 相关, 证实δ_H 4.24为与吸电子基团相连的脂肪次甲基碳δ_C 69.1上的氢原子。δ_H 2.95 (1H, dd, J = 14.0, 4.8 Hz) 和2.64 (1H, dd, J = 14.0, 7.6 Hz) 均与δ_C 37.4 (CH₂) 相关, 证实δ_H 2.95和2.64为脂肪亚甲基碳δ_C 37.4上的两个氢原子; δ_H 2.07 (3H, s)、1.99 (3H, s) 和1.85 (3H, s) 分别与δ_C 22.7 (CH₃)、20.1 (CH₃) 和22.8 (CH₃) 相关, 证实δ_H 2.07、1.99和1.85分别为脂肪甲基碳δ_C 22.8、20.1和22.7上的氢原子。结合分子式可知上述吸电子基团为羟基。

以上信息结合不饱和度, 初步推断化合物1为含有1个羟基取代的单环单萜。进一步通过¹H-¹H COSY和HMBC谱(图 2A) 确定化合物1的平面结构。HMBC谱中, δ_H 5.83 (H-2) 与δ_C 69.1 (C-4), 20.1 (C-7) 相关, δ_H 1.99 (H₃-7) 与δ_C 69.1 (C-4) 相关, 以及H-4/H₂-5的 ¹H-¹H COSY相关, 提示1的结构中存在一个图 2B所示的羟基取代的异戊烯基片段。脂肪甲基氢信号δ_H 2.07 (H₃-9), 1.85 (H₃-10) 均与δ_C 126.0 (C-6), 146.2 (C-8) 存在远程相关, 表明它们可能为同一双键碳上的两个甲基; 结合δ_H 2.07 (H₃-9), 1.85 (H₃-10) 均与δ_C 190.9 (C-1) 存在远程相关, 可推测1结构中存在的另一个氧化的异戊烯基片段(图 2C)。B片段的δ_H 5.83 (H-2), 1.99 (H₃-7) 分别与C片段的δ_C 126.0 (C-6), 190.9 (C-1) 存在远程相关, 证明B片段的C-2与C片段的C-1相连; B片段的δ_H 4.24 (H-4) 和C片段的δ_C 126.0 (C-6) 存在远程相关, 及B片段的δ_H 2.95, 2.64 (H₂-5) 与C片段的δ_C 126.0 (C-6), 146.2 (C-8), 190.9 (C-1) 的远程相关证明B片段的C-5和C片段的C-6相连。因此, 化合物1的平面结构确定为4-hydroxypiperitenone (图 2D)。

查阅文献发现化合物1的平面结构与从piperitenone的大鼠代谢物^[8]、piperitenone的真菌Mucor piriformis生物转化产物^[9]及金丝皇菊Chrysanthemum morifolium^[10]中分离得到的4-hydroxypiperitenone的平面结构相同。但从piperitenone的大鼠代谢物和piperitenone的真菌Mucor piriformis生物转化产物中分离得到的4-hydroxypiperitenone的¹H NMR数据与本文化合物1的数据相差较大, 通过仔细对比发现这两篇文献^{[8, 9]}中的5-hydroxypiperitenone的¹H NMR数据与本文1的数据一致, 由于本文1的平面结构为通过2D NMR数据分析确定, 故可知这两篇文献中的4-hydroxypiperitenone和5-hydroxypiperitenone的羟基位置鉴定有误。且上述3篇文献^[8-10]均只对4-hydroxypiperitenone的平面结构进行了报道, 均未对其绝对构型进行确定。

为了确定化合物1的绝对构型, 本研究进一步对其旋光和电子圆二色谱(electronic circular dichroism, ECD) 进行了测试, 可知该化合物比旋光度较小, [α]

$ {}_{\mathrm{D}}^{20} $

-7.3 (c 0.11, MeOH), 且ECD谱中无明显的Cotton效应, 表明该化合物为外消旋体。随后, 采用手性HPLC (Hplcone 5-C手性柱, 正己烷-异丙醇, 90∶10) 对1进行拆分, 得到色谱峰面积比约为1∶1的一对对映异构体1a ([α]

$ {}_{\mathrm{D}}^{20} $

+19.5) 和1b ([α]

$ {}_{\mathrm{D}}^{20} $

-18.3)。最后, 通过实验及计算ECD确定化合物1a和1b的绝对构型, 1a和1b的实验ECD谱曲线呈镜像关系, 采用量子化学计算的方法[B3LYP/6-31G(d)] 计算了(R)-1和(S)-1的ECD谱, 结果表明化合物1a和1b的实验ECD分别与(R)-1, (S)-1的计算ECD吻合较好(图 3), 从而确定1a和1b的绝对构型分别为4R和4S。因此, 化合物1a和1b的结构分别鉴定为(+)-(R)-4-hydroxypiperitenone (1a) 和(-)-(S)-4-hydroxypiperitenone (1b), 为一对新的单萜对映异构体。

2 抗炎活性

采用MTT比色法检测化合物1~17对RAW264.7细胞活性的影响, Griess试剂法评价它们对LPS诱导的RAW264.7细胞释放NO的影响。实验结果(表 2) 显示在40 μmol·L^-1浓度下化合物14对RAW264.7细胞无毒, 且对NO产生有较强的抑制作用, 抑制率为66.27%, 具有潜在的抗炎活性。

3 讨论

本实验通过对荜澄茄甲醇浸提物的化学成分和抗炎活性进行研究, 从中共分离鉴定18个化合物, 其中化合物1a和1b为1经手性拆分得到的一对新的单萜对映异构体, 化合物14具有潜在的抗炎活性。本研究综合化合物1的1D和2D NMR谱信息, 首次对4-hydroxypiperitenone的氢碳谱进行了全归属(表 1), 并通过量子化学计算ECD确定了手性HPLC拆分得到的一对新的单萜对映异构体1a和1b的绝对构型。化合物1a和1b的发现在一定程度上丰富了荜澄茄的化学成分结构类型。荜澄茄中挥发油类成分含量丰富, 分子结构类型复杂多样, 具有抗炎、抗菌、抗氧化、抗肿瘤、平喘和抗过敏等生物活性^[4-7], 且其温中散寒, 行气止痛功效的物质基础尚未明确, 值得进一步深入研究。

实验部分

收起

Avance Ⅲ HD 500 MHz核磁共振波谱仪(德国Bruker公司); Waters G2-XS飞行时间质谱仪和Waters e2695分析型高效液相色谱仪(美国Waters公司); UV-5200PC紫外光谱仪(上海元析仪器有限公司); Nicolet iS10红外光谱仪(美国Thermo Scientific公司); WZZ-3自动旋光仪(上海仪电物光公司); Shimadzu LC-20AD XR, SPD-20A半制备型高效液相色谱仪(日本岛津公司); HT7200S中压制备色谱仪(苏州本草天成生物技术有限公司); RV3 eco S096旋转蒸发仪(德国IKA公司); Alpha 2-4 LSCbasic真空冷冻干燥机(德国Christ公司); ME204E分析天平[梅特勒-托利多仪器(上海) 有限公司]; HH-8水浴锅(常州易晨仪器制造有限公司); ZF-7暗箱式三用紫外分析仪(上海嘉鹏科技有限公司); SYNERGYH1多功能微孔板检测仪(美国伯腾仪器公司); Shimadzu shim-pack GIST分析型反相色谱柱(4.6 mm × 250 mm, 5 μm, 日本岛津公司); Waters SunFire C18 OBD半制备型色谱柱(10 mm × 250 mm, 5 µm, 美国Waters公司); COSMOSIL 5PE-MS苯乙基半制备柱(10 mm × 250 mm, 5 µm, 日本COSMOSIL公司); Hplcone 5-C手性柱(4.6 mm × 250 mm, 5 µm, 苏州速研医药科技有限公司); 柱层析用硅胶(200~300目, 青岛海洋化工厂); ODS填料(5μm, 日本Daisogel公司); Sephadex LH-20凝胶(美国Cytiva公司); 薄层色谱(硅胶G, 青岛海洋化工厂); 色谱甲醇、乙腈(美国费希尔公司); 其他试剂均为分析纯(科隆化学品有限公司)。

荜澄茄药材于2021年4月采购于广西壮族自治区柳州市, 经广西中医药大学王柳萍教授鉴定为樟科(Lauraceae) 木姜子属Litsea植物山鸡椒Litsea cubeba Pers.的干燥成熟果实。标本(BCQ20210412) 现保存于广西中医药大学科学实验中心。

1 提取与分离

干燥荜澄茄药材50.0 kg, 粉碎, 用10倍量甲醇室温浸提3次, 每次3天, 合并提取液减压浓缩得浸膏20.9 kg。浸膏加水混悬后, 依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次, 浓缩后得各部位萃取物(A~D)。

二氯甲烷部位B (150.0 g) 经硅胶(200~300目) 柱色谱分离, 石油醚-乙酸乙酯(50∶1、40∶1、30∶1、20∶1、10∶1、5∶1、3∶1、1∶1) 梯度洗脱, TLC检测合并得到20个组分(B-1~B-20)。B-14 (1.3 g) 经中压ODS柱色谱分离, 依次用30%、40%、50%、60%、70%甲醇-水(8.0 mL·min^-1) 梯度洗脱得到20个流分(B-14-1~B-14-20), B-14-13 (32.1 mg) 再经Sephadex LH-20凝胶柱色谱(二氯甲烷-甲醇, 1∶1) 纯化, 得到黄色油状物1 (16.7 mg); 再用正相手性HPLC (Hplcone 5-C手性色谱柱, 正己烷-异丙醇, 90∶10, 1.0 mL·min^-1) 拆分得到化合物1a (2.0 mg, t_R = 20.5 min) 和1b (2.3 mg, t_R = 23.5 min)。B-17 (2.0 g) 经硅胶(200~300目) 柱色谱分离, 二氯甲烷-甲醇(1∶0、200∶1、100∶1、50∶1、0∶1) 梯度洗脱, 得到8个流分(B-17-1~B-17-8)。B-17-7 (464.0 mg) 经中压ODS柱色谱分离, 依次用20%、30%、40%、50%、60%乙腈-水梯度洗脱(4.0 mL·min^-1) 分离得到15个流分(B-17-7-1~B-17-7-15), B-17-7-6 (230.6 mg) 再经半制备HPLC (SunFire C18色谱柱, 乙腈-水, 12∶88, 2.0 mL·min^-1) 纯化, 得到白色无定形粉末6 (118.5 mg, t_R = 47.6 min)。B-19 (7.0 g) 经中压ODS柱色谱, 依次用20%、30%、40%、50%、60%、70%甲醇-水梯度洗脱(30.0 mL·min^-1), 得到10个流分(B-19-1~B-19-10)。B-19-9 (127.9 mg) 经半制备HPLC (COSMOSIL苯乙基柱, 乙腈-水, 22∶87, 2.0 mL·min^-1, ) 分离, 得到黄色油状物8 (62.0 mg, t_R = 16.3 min) 和9 (4.0 mg, t_R = 26.2 min)。

乙酸乙酯部位C (160.0 g) 经硅胶(200~300目) 柱色谱分离, 石油醚-丙酮(20∶1、15∶1、9∶1、5∶1、1∶1) 梯度洗脱, TLC检测合并相同流分, 得到5个组分(C-1~C-5)。C-2 (25.7 g) 经硅胶(200~300目) 柱色谱分离, 石油醚-乙酸乙酯(20∶1、15∶1、9∶1、5∶1、1∶1) 梯度洗脱, 得到10个流分(C-2-1~C-2-10)。C-2-6 (3.2 g) 经甲醇重结晶, 得到白色粉末11 (321.0 mg)。C-2-8 (8.4 g) 经硅胶柱色谱分离, 二氯甲烷-甲醇(1∶0、300∶1、200∶1、100∶1、70∶1、30∶1、0∶1) 梯度洗脱, 得到10个流分(C-2-8-1~C-2-8-10)。C-2-8-3 (174.2 mg) 经半制备HPLC (SunFire C18色谱柱, 甲醇-水, 40∶60, 2.0 mL·min^-1) 分离, 得到白色粉末16 (5.0 mg, t_R = 16.3 min)。C-2-8-6 (720.0 mg) 经中压ODS柱色谱, 依次用40%、50%、60%、70%、80%、90%甲醇-水梯度洗脱(4.0 mL·min^-1), 得到10个流分(C-2-8-6-1~C-2-8-6-10), C-2-8-6-2 (56.0 mg) 再经半制备HPLC (COSMOSIL苯乙基柱, 甲醇-水, 30∶60, 2.0 mL·min^-1) 分离纯化得到无色结晶15 (2.3 mg, t_R = 25.5 min)。C-2-8-6-5 (103.3 mg) 经半制备HPLC (COSMOSIL苯乙基柱, 甲醇-水, 50∶50, 2.0 mL·min^-1) 纯化得到无色油状物5 (1.0 mg, t_R = 20.0 min) 和7 (10.0 mg, t_R = 25.1 min)。C-2-8-7 (494.5 mg) 经半制备HPLC (SunFire C18色谱柱, 甲醇-水, 36∶64, 2.0 mL·min^-1) 分离得到C-2-8-7-1 (8.2 mg) 和C-2-8-7-2 (4.3 mg), C-2-8-7-1和C-2-8-7-2再分别通过Sephadex LH-20凝胶柱色谱(二氯甲烷-甲醇, 1∶1) 纯化得到无色油状物3 (6.8 mg) 和4 (3.0 mg)。C-4 (23.1 g) 经中压ODS柱色谱, 依次用30%、40%、50%、60%、70%甲醇-水梯度洗脱(30.0 mL·min^-1), 得到40个组分(C-4-1~C-4-40), C-4-1 (1.3 g) 经半制备HPLC (COSMOSIL苯乙基柱, 甲醇-水, 60∶40, 2.0 mL·min^-1, ) 纯化得到白色结晶2 (159.0 mg, t_R = 12.7 min)。C-4-5 (139.7 mg) 经半制备HPLC (COSMOSIL苯乙基柱, 甲醇-水, 20∶80, 2.0 mL·min^-1, ) 分离得到无色油状物10 (7.8 mg, t_R = 26.5 min) 和白色粉末13 (1.7 mg, t_R = 29.4 min)。C-4-15 (199.2 mg) 经半制备HPLC (COSMOSIL苯乙基柱, 甲醇-水, 30: 70, 2.0 mL·min^-1) 分离得到黄色粉末14 (3.0 mg, t_R = 42.1 min)。C-4-30 (678.2 mg) 经半制备HPLC (COSMOSIL苯乙基柱, 甲醇-水, 65∶35, 2.0 mL·min^-1) 分离, 得到白色粉末12 (103.2 mg, t_R = 30.3 min)。C-4-38 (218.7 mg) 经Sephadex LH-20凝胶柱色谱(二氯甲烷-甲醇, 1∶1) 分离, 得到黄色粉末17 (4.3 mg)。

2 结构鉴定

化合物1 无色油状物; UV (MeOH) λ_max (log ε) 239 (3.92), 278 (3.76) nm; IR (KBr) ν_max 3 360 (-OH)、2 922 (-CH₃)、2 852 (-CH₂-)、1 658 (共轭C=O)、1 633 (C=C) cm^-1; ¹H NMR (CDCl₃, 500 MHz)、¹³C NMR (CDCl₃, 125 MHz) 数据见表 1; HR-ESI-MS m/z 167.107 9 [M+H]⁺ (计算值167.106 7, C₁₀H₁₅O₂)。1a: [α]

$ {}_{\mathrm{D}}^{20} $

+19.5 (c 0.32, MeOH); ECD (MeOH) λ_max (Δε) 204 (+0.74), 282 (-0.24) nm。1b: [α]

$ {}_{\mathrm{D}}^{20} $

-18.3 (c 0.31, MeOH); ECD (MeOH) λ_max (Δε) 204 (-0.72), 282 (-0.20) nm。

化合物2 白色片状晶体(甲醇); [α]

$ {}_{\mathrm{D}}^{20} $

+26.6 (c 0.45, MeOH)。ESI-MS m/z 171 [M+H]⁺, 分子式C₁₀H₁₈O₂; ¹H NMR (CD₃OD, 500 MHz) δ_H 5.47 (1H, s, H-2), 3.92 (1H, br s, H-6), 3.85 (1H, d, J = 9.2 Hz, H-3), 2.11 (1H, m, H-8), 1.77 (3H, s, H-7), 1.73 (1H, dt, J = 13.5, 2.7 Hz, H-5a), 1.60 (1H, m, H-4), 1.39 (1H, td, J = 13.5, 4.1 Hz, H-5b), 0.97 (3H, d, J = 6.9 Hz, 8-CH₃), 0.83 (3H, d, J = 6.9 Hz, 8-CH₃); ¹³C NMR (CD₃OD, 125 MHz) δ_C 137.4 (C-1), 131.0 (C-2), 69.9 (C-3), 68.4 (C-6), 42.8 (C-4), 30.9 (C-5), 27.0 (C-8), 21.4 (8-CH₃), 20.7 (C-7), 17.1 (8-CH₃)。以上数据结合文献^[11], 鉴定化合物2为(3S, 4S, 6R)-3, 6-dihydroxy-1-menthene。

化合物3 无色油状物; ESI-MS m/z 169 [M+H]⁺, 分子式C₁₀H₁₆O₂; ¹H NMR (CDCl₃, 500 MHz) δ_H 6.76 (1H, dq, J = 5.8, 1.5 Hz, H-3), 4.40 (1H, dd, J = 5.8, 3.1 Hz, H-4), 2.53 (1H, dd, J = 16.5, 4.3 Hz, H-6a), 2.43 (1H, dd, J = 16.5, 12.8 Hz, H-6b), 1.78 (3H, d, J = 1.5 Hz, H-7), 1.78 (1H, overlap, H-8), 1.63 (1H, m, H-5), 1.01 (3H, d, J = 6.6 Hz, 8-CH₃), 0.94 (3H, d, J = 6.6 Hz, 8-CH₃); ¹³C NMR (CDCl₃, 125 MHz) δ_C 200.4 (C-1), 143.1 (C-3), 137.0 (C-2), 64.1 (C-4), 45.9 (C-5), 36.8 (C-6), 28.5 (C-8), 20.4 (8-CH₃), 20.2 (8-CH₃), 15.6 (C-7)。以上数据结合文献^[12], 鉴定化合物3为(4S, 5R)-4-羟基-5-异丙基-2-甲基环己-2-烯-1-酮。

化合物4 无色油状物; ESI-MS m/z 207 [M+Na]⁺, 分子式C₁₀H₁₆O₃; ¹H NMR (CD₃OD, 500 MHz) δ_H 6.09 (1H, d, J = 1.7 Hz, H-2), 2.62 (1H, m, H-5a), 2.48 (1H, m, H-4a), 2.02 (1H, m, H-4b), 2.01 (1H, m, H-5b), 1.37 (3H, s, 7-CH₃), 1.35 (3H, s, 7-CH₃), 1.28 (3H, s, 6-CH₃); ¹³C NMR (CD₃OD, 125 MHz) δ_C 204.1 (C-1), 173.4 (C-3), 120.9 (C-2), 73.6 (C-6), 73.1 (C-7), 37.6 (C-5), 28.7 (7-CH₃), 28.6 (7-CH₃), 25.6 (C-4), 23.7 (6-CH₃)。以上数据结合文献^[13], 鉴定化合物4为(R)-6-羟基-3-(2-羟基异丙基)-6-甲基环己-2-烯-1-酮。

化合物5 无色油状物; ESI-MS m/z 169 [M+H]⁺, 分子式C₁₀H₁₆O₂; ¹H NMR (CDCl₃, 500 MHz) δ_H 5.81 (1H, br d, J = 1.6 Hz, H-2), 4.36 (1H, t, J = 4.5 Hz, H-4), 2.37 (1H, ddd, J = 9.0, 5.8, 4.6 Hz, H-6), 2.26 (1H, dq, J = 7.0, 6.8 Hz, H-8), 2.16 (1H, ddd, J = 13.3, 9.0, 4.2 Hz, H-5a), 2.05 (1H, dt, J = 13.3, 5.3 Hz, H-5b), 2.04 (3H, s, H-7), 0.94 (3H, d, J = 6.8 Hz, 8-CH₃), 0.89 (3H, d, J = 6.8 Hz, 8-CH₃); ¹³C NMR (CDCl₃, 125 MHz) δ_C 200.6 (C-1), 158.9 (C-3), 127.4 (C-2), 67.4 (C-4), 48.5 (C-6), 32.5 (C-5), 26.5 (C-8), 20.9 (8-CH₃), 20.6 (C-7), 19.0 (8-CH₃)。以上数据结合文献^[12], 鉴定化合物5为(4S, 6R)-4-羟基-6-异丙基-3-甲基环己-2-烯-1-酮。

化合物6 白色无定形粉末; [α]

$ {}_{\mathrm{D}}^{20} $

+97.2 (c 0.26, CH₂Cl₂)。ESI-MS m/z 171 [M+H]⁺, 分子式C₁₀H₁₈O₂; ¹H NMR (CDCl₃, 500 MHz) δ_H 4.90 (1H, br s, H-9a), 4.86 (1H, br s, H-9b), 3.81 (1H, td, J = 10.7, 4.5 Hz, H-3), 2.05 (1H, ddd, J = 13.2, 4.4, 2.6 Hz, H-2a), 1.88 (1H, m, H-4), 1.73 (3H, s, H-10), 1.72 (1H, overlap, H-5a), 1.63 (1H, ddd, J = 14.0, 6.1, 2.8 Hz, H-6a), 1.53 (1H, ddd, J = 13.3, 6.6, 3.6 Hz, H-5b), 1.39 (1H, td, J = 14.0, 4.2 Hz, H-6b), 1.32 (1H, dd, J = 13.2, 11.1 Hz, H-2b), 1.27 (3H, s, H-7); ¹³C NMR (CDCl₃, 125 MHz) δ_C 146.3 (C-8), 113.0 (C-9), 71.3 (C-1), 67.3 (C-3), 53.9 (C-4), 46.1 (C-2), 38.1 (C-6), 31.7 (C-7), 25.3 (C-5), 19.2 (C-10)。以上数据结合文献^[11], 鉴定化合物6为(1R, 3S, 4R)-3-羟基异胡薄荷醇。

化合物7 无色油状物; [α]

$ {}_{\mathrm{D}}^{20} $

+74.8 (c 0.11, CHCl₃)。ESI-MS m/z 169 [M+H]⁺, 分子式C₁₀H₁₆O₂; ¹H NMR (CD₃OD, 500 MHz) δ_H 6.72 (1H, q, J = 1.6 Hz, H-2), 4.29 (1H, dq, J = 9.6, 2.0 Hz, H-7), 2.36 (1H, dd, J = 16.0, 3.6 Hz, H-5a), 2.18 (1H, overlap, H-5b), 2.16 (1H, m, H-4), 1.91 (1H, m, H-6), 1.73 (3H, t, J = 1.6 Hz, 3-CH₃), 0.95 (3H, d, J = 7.1 Hz, 6-CH₃), 0.89 (3H, d, J = 6.9 Hz, 4-CH₃); ¹³C NMR δ_C 202.2 (C-1), 151.0 (C-2), 135.4 (C-3), 69.4 (C-7), 51.2 (C-6), 37.2 (C-5), 27.3 (C-4), 20.9 (6-CH₃), 16.8 (4-CH₃), 15.5 (3-CH₃)。以上数据结合文献^[14], 鉴定化合物7为subamone。

化合物8 黄色油状物; [α]

$ {}_{\mathrm{D}}^{20} $

+26.3 (c 0.30, MeOH)。ESI-MS m/z 185 [M+H]⁺, 分子式C₁₀H₁₆O₃; ¹H NMR (CDCl₃, 500 MHz) δ_H 5.85 (1H, q, J = 1.3 Hz, H-2), 4.03 (1H, dd, J = 9.1, 2.1 Hz, H-6), 2.50 (1H, dt, J = 18.0, 5.8 Hz, H-4a), 2.30 (1H, ddd, J = 18.0, 9.0, 6.8 Hz, H-4b), 2.09 (1H, m, H-5a), 1.95 (3H, s, H-9), 1.92 (1H, m, H-5b), 1.26 (3H, s, H-8), 1.25 (3H, s, H-10); ¹³C NMR (CDCl₃, 125 MHz) δ_C 168.1 (C-1), 154.7 (C-3), 118.3 (C-2), 84.4 (C-6), 71.7 (C-7), 33.5 (C-4), 27.3 (C-5), 26.1 (C-9), 25.2 (C-8), 24.6 (C-10)。以上数据结合文献^{[15, 16]}, 鉴定化合物8为(6S)-3,7-dimethyl-7-hydroxy-2(Z)-octen-6-olide, 为新天然产物。

化合物9 黄色油状物; ESI-MS m/z 217 [M+H]⁺, 分子式C₁₁H₂₀O₄; ¹H NMR (CDCl₃, 500 MHz) δ_H 5.77 (1H, s, H-2), 4.08 (1H, br s, OH), 3.70 (3H, s, H-11), 3.27 (1H, br d, J = 10.8 Hz, H-6), 3.14 (1H, ddd, J = 12.6, 10.7, 6.1 Hz, H-4a), 2.61 (1H, br s, OH), 2.32 (1H, ddd, J = 12.6, 6.4, 4.6 Hz, H-4b), 1.89 (3H, br d, J = 1.2 Hz, H-9), 1.72 (1H, dddd, J = 13.8, 10.7, 6.4, 1.8 Hz, H-5a), 1.55 (1H, dddd, J = 13.8, 10.8, 6.1, 4.6 Hz, H-5b), 1.17 (3H, s, H-8), 1.15 (3H, s, H-10); ¹³C NMR (CDCl₃, 125 MHz) δ_C 168.1 (C-1), 160.1 (C-3), 117.0 (C-2), 76.0 (C-6), 73.0 (C-7), 51.4 (C-11), 29.6 (C-4), 29.3 (C-5), 26.1 (C-8), 24.8 (C-9), 23.5 (C-10)。以上数据结合文献^[17], 鉴定化合物9为(6S)-6,7-二羟基-3,7-二甲基辛-2(Z)-烯酸甲酯, 为新天然产物。

化合物10 无色油状物; ESI-MS m/z 269 [M+H]⁺, 分子式C₁₅H₂₄O₄; ¹H NMR (CDCl₃, 500 MHz) δ_H 2.78 (1H, m, H-10), 2.59 (1H, overlap, H-8a), 2.58 (2H, overlap, H-5a, 5b), 2.33 (1H, ddt, J = 11.5, 11.0, 2.0 Hz, H-7), 2.27 (1H, m, H-2a, 2b), 2.17 (3H, s, H-15), 2.14 (1H, m, H-1a), 2.02 (1H, dd, J = 12.5, 2.0 Hz, H-8b), 1.63 (3H, s, H-12), 1.59 (2H, m, H-1b, 6a), 1.32 (3H, s, H-13), 1.28 (1H, m, H-6b), 1.04 (3H, d, J = 7.0 Hz, H-14); ¹³C NMR (CDCl₃, 125 MHz) δ_C 215.5 (C-9), 208.0 (C-4), 171.0 (C-3), 85.0 (C-11), 49.1 (C-7), 47.7 (C-10), 43.0 (C-8), 42.2 (C-5), 34.6 (C-2), 30.9 (C-1), 30.2 (C-15), 25.6 (C-12), 23.7 (C-6), 20.3 (C-13), 18.6 (C-14)。以上数据结合文献^[18], 鉴定化合物10为holostylactone。

化合物11 白色无定形粉末; [α]

$ {}_{\mathrm{D}}^{20} $

+97.8 (c 0.55, CH₂Cl₂)。ESI-MS m/z 355 [M+H]⁺, 分子式C₂₀H₁₈O₆; ¹H NMR (CDCl₃, 500 MHz) δ_H 6.85 (2H, s, H-2ʹ, 2ʺ), 6.80 (2H, d, J = 8.0 Hz, H-6ʹ, 6ʺ), 6.78 (2H, d, J = 8.0 Hz, H-5ʹ, 5ʺ), 5.95 (4H, s, 2×-OCH₂O-), 4.71 (2H, d, J = 3.0 Hz, H-2, 6), 4.23 (2H, dd, J = 9.1, 7.0 Hz, H-4a, 8a), 3.87 (2H, dd, J = 9.1, 2.5 Hz, H-4b, 8b), 3.05 (2H, m, H-1, 5); ¹³C NMR (CDCl₃, 125 MHz) δ_C 148.0 (C-3ʹ, 3ʺ), 147.1 (C-4ʹ, 4ʺ), 135.0 (C-1ʹ, 1ʺ), 119.3 (C-6ʹ, 6ʺ), 108.2 (C-5ʹ, 5ʺ), 106.5 (C-2ʹ, 2ʺ), 101.0 (2×-OCH₂O-), 85.8 (C-2, 6), 71.7 (C-4, 8), 54.3 (C-1, 5)。以上数据结合文献^[19], 鉴定化合物11为芝麻脂素。

化合物12 白色无定形粉末; ESI-MS m/z 387 [M+H]⁺, 分子式C₂₂H₂₆O₆; ¹H NMR (CDCl₃, 500 MHz) δ_H 6.76 (1H, d, J = 8.7 Hz, H-5), 6.75 (1H, d, J = 8.7 Hz, H-5ʹ), 6.68 (1H, br s, H-2), 6.65 (1H, d, J = 8.7 Hz, H-6), 6.54 (1H, d, J = 8.7 Hz, H-6ʹ), 6.48 (1H, br s, H-2ʹ), 4.12 (1H, dd, J = 9.2, 7.2 Hz, H-9a), 3.87 (1H, overlap, H-9b), 3.86 (6H, s, 4, 4ʹ-OCH₃), 3.83 (3H, s, 3-OCH₃), 3.81 (3H, s, 3ʹ-OCH₃), 2.96 (1H, dd, J = 14.1, 5.4 Hz, H-7a), 2.91 (1H, dd, J = 14.1, 6.7 Hz, H-7b), 2.63 (1H, m, H-7ʹa), 2.58 (1H, m, H-8), 2.52 (1H, m, H-7ʹb), 2.48 (1H, m, H-8ʹ); ¹³C NMR (CDCl₃, 125 MHz) δ_C 178.7 (C-9), 149.0 (C-3, 3ʹ), 147.9 (C-4, 4ʹ), 130.4 (C-1ʹ), 130.2 (C-1), 121.3 (C-6), 120.5 (C-6ʹ), 112.4 (C-2), 111.8 (C-2ʹ), 111.3 (C-5ʹ), 111.1 (C-5), 71.2 (C-9ʹ), 55.9, 55.8, 55.8, 55.8 (3, 3ʹ, 4, 4ʹ-OCH₃), 46.5 (C-8), 41.0 (C-8ʹ), 38.2 (C-7ʹ), 34.5 (C-7)。以上数据结合文献^[20], 鉴定化合物12为二甲基罗汉松脂素。

化合物13 白色无定形粉末; ESI-MS m/z 153 [M+H]⁺, 分子式C₈H₈O₃; ¹H NMR (CD₃OD, 500 MHz) δ_H 7.84 (2H, dd, J = 8.8, 2.0 Hz, H-2ʹ, 6ʹ), 6.85 (2H, dd, J = 8.8, 2.0 Hz, H-3ʹ, 5ʹ), 4.81 (2H, s, H-1); ¹³C NMR (CD₃OD, 125 MHz) δ_C 198.5 (C-2), 164.3 (C-4ʹ), 131.3 (C-2ʹ, 6ʹ), 127.3 (C-1ʹ), 116.5 (C-3ʹ, 5ʹ), 65.9 (C-1)。以上数据结合文献^[21], 鉴定化合物13为p-hydroxybenzoylcarbinol。

化合物14 黄色无定形粉末; ESI-MS m/z 183 [M+H]⁺, 分子式C₉H₁₀O₄; ¹H NMR (CD₃OD, 500 MHz) δ_H 9.74 (1H, s, H-7), 7.22 (2H, s, H-2, 6), 3.91 (6H, s, 3, 5-OCH₃); ¹³C NMR (CD₃OD, 125 MHz) δ_C 192.9 (C-7), 149.7 (C-3, 5), 144.0 (C-4), 129.0 (C-1), 108.3 (C-2, 6), 56.8 (3, 5-OCH₃)。以上数据结合文献^[22], 鉴定化合14为丁香醛。

化合物15 无色片状晶体(甲醇); ESI-MS m/z 123 [M+H]⁺, 分子式C₇H₆O₂; ¹H NMR (CD₃OD, 500 MHz) δ_H 9.75 (1H, s, H-7), 7.76 (2H, d, J = 8.4 Hz, H-2, 6), 6.90 (2H, d, J = 8.4 Hz, H-3, 5); ¹³C NMR (CD₃OD, 125 MHz) δ_C 192.8 (C-7), 165.4 (C-4), 133.4 (C-2, 6), 130.2 (C-1), 116.9 (C-3, 5)。以上数据结合文献^[23], 鉴定化合物15为对羟基苯甲醛。

化合物16 白色无定形粉末; ESI-MS m/z 153 [M+H]⁺, 分子式C₈H₈O₃; ¹H NMR (CDCl₃, 500 MHz) δ_H 9.82 (1H, s, 1-CHO), 7.42 (1H, dd, J = 8.5, 1.6 Hz, H-6), 7.40 (1H, d, J = 1.6 Hz, H-2), 7.04 (1H, d, J = 8.5 Hz, H-5), 3.96 (3H, s, 3-OCH₃); ¹³C-NMR (CDCl₃, 125 MHz) δ_C 190.9 (1-CHO), 151.7 (C-4), 147.1 (C-3), 129.9 (C-1), 127.5 (C-6), 114.4 (C-2), 108.8 (C-5), 56.1 (3-OCH₃)。以上数据结合文献^[24], 鉴定化合物16为4-羟基-3-甲氧基苯甲醛。

化合物17 黄色无定形粉末; ESI-MS m/z 283 [M+H]⁺, 分子式C₁₆H₁₂O₅; ¹H NMR (DMSO-d₆, 500 MHz) δ_H 12.96 (1H, br s, 5-OH), 7.96 (2H, d, J = 8.7 Hz, H-2ʹ, 6ʹ), 6.93 (2H, d, J = 8.7 Hz, H-3ʹ, 5ʹ), 6.85 (1H, s, H-2), 6.77 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-8), 6.38 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-6), 3.87 (3H, s, 7-OCH₃); ¹³C NMR (DMSO-d₆, 125 MHz) δ_C 182.0 (C-4), 165.1 (C-7), 164.1 (C-2), 161.3 (C-5), 161.2 (C-4ʹ), 157.2 (C-9), 128.6 (C-2ʹ, 6ʹ), 121.0 (C-1ʹ), 116.0 (C-3ʹ, 5ʹ), 104.6 (C-10), 103.0 (C-3), 98.0 (C-6), 92.7 (C-8), 56.0 (7-OCH₃)。以上数据结合文献^[25], 鉴定化合物17为5, 4ʹ-二羟基-7-甲氧基黄酮。

3 对映异构体1a和1b的ECD计算

计算ECD实验包括构象分析、图谱计算和图谱拟合3个步骤。首先利用Chemdraw3D 14.0对(R)-1和(S)-1进行能量最小化操作得到初始构象。接着采用Conflex9软件(CONFLEX Inc., Tokyo, JAPAN) 进行优势构象搜索。利用Gaussian16软件, MeOH为溶剂, 根据密度泛函理论(DFT), 采用密度函数B3LYP和6-31G(d) 基组进行进一步结构优化, 再结合较大基组M062X/def2TZVP计算每个构象的ECD图谱。最后采用SpecDis1.70.1软件分析数据, 拟合图谱, 根据每个构象的玻尔兹曼权重因子, 将所有能量分布率符合的构象按照玻尔兹曼能量分布进行拟合、生成ECD谱图。

4 抗炎活性筛选^[26]

采用MTT比色法检测化合物1~17对RAW264.7细胞活性的影响。将RAW264.7细胞以每孔约2×10⁴个密度接种于96孔板中过夜培养, 待细胞贴壁后, 弃去孔内培养基, 加入40 μmol·L^-1的试样药液, 置于37 ℃, 5% CO₂恒温培养箱中培养24 h, 然后加入MTT试剂, 避光孵育3 h, 以3 000 r·min^-1离心10 min, 弃去上清液后, 每孔加入100 μL的DMSO, 放置摇床上摇晃15 min直至紫色结晶二甲臜完全溶解, 用酶标仪检测490 nm波长下的吸光度值, 计算细胞存活率。

采用Griess试剂法检测化合物1~17对LPS诱导的RAW264.7细胞释放NO的影响。将RAW264.7细胞以每孔约2×10⁴个密度接种于96孔板中过夜培养, 实验分为空白对照组、模型组和给药组, 每组4个复孔。给药组加入40 μmol·L^-1的试样药液, 预处理1 h后, 模型组和给药组均加入LPS (终质量浓度为1 μg·mL^-1) 诱导, 继续培养24 h后, 各组吸取上清液50 μL, 加入50 μL Griess试剂, 继续培养30 min后, 用酶标仪检测540 nm波长下的吸光度值。

作者贡献: 陆玫霖负责化合物分离纯化、结构鉴定及文章撰写等工作; 黄婉凤和何宇铭协助化合物红外和紫外的测定, 王宝林、袁富红和张婷协助化合物分离工作; 何佳、韩珊和王琴琴协助化合物药理活性的检测; 徐新亚负责对映异构体的实验ECD测试和ECD理论计算; 潘其明负责指导化学实验、结构解析、稿件修改, 并最终定稿; 高红伟组织了整个研究, 负责实验指导和实验材料; 杨世林负责研究选题和研究方案设计。

利益冲突: 所有作者均声明本文无任何利益冲突。

基金

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广西中医药大学2020年博士科研启动基金项目(2020BS017)
广西“带土移植”人才引育计划项目(2022AC18022)
广西中医药大学第二批“岐黄工程”高层次人才团队培育项目(2021002)

参考文献

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文献

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参考文献引证文献

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2024年第59卷第5期

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文章信息

doi: 10.16438/j.0513-4870.2023-1216

接收时间：2023-10-29
首发时间：2025-11-27
出版时间：2024-05-12

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作者

出版历史

收稿日期：2023-10-29
修回日期：2023-12-20

基金

广西中医药大学2020年博士科研启动基金项目(2020BS017)

广西“带土移植”人才引育计划项目(2022AC18022)

广西中医药大学第二批“岐黄工程”高层次人才团队培育项目(2021002)

作者信息

1.广西中医药大学药学院, 广西南宁 530200

2.广西中医药大学海洋药物研究院, 广西南宁 530200

3.江西中医药大学药学院, 江西南昌 330000

通讯作者:

^*潘其明, Tel: 86-771-4953513, E-mail: qmingpan@163.com;

高红伟, Tel: 86-771-4953513, E-mail: gaohongwei06@126.com

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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