药学学报

Name	Sequence (5΄-3΄)
IGF1R gene forward	CTG CCT CAT TAC CTG GCT CAC TA
IGF1R gene reverse	CAC CAT GCC ACT TTC CCT TGT
β-actin forward	CCA ACC GCG AGA AGA TGA
β-actin reverse	CCA GAG GCG TAC AGG GAT AG

Name

Sequence (5΄-3΄)

IGF1R gene forward

CTG CCT CAT TAC CTG GCT CAC TA

IGF1R gene reverse

CAC CAT GCC ACT TTC CCT TGT

β-actin forward

CCA ACC GCG AGA AGA TGA

β-actin reverse

CCA GAG GCG TAC AGG GAT AG

Name	Sequence (5΄-3΄)
IGF1R gene forward	CTG CCT CAT TAC CTG GCT CAC TA
IGF1R gene reverse	CAC CAT GCC ACT TTC CCT TGT
β-actin forward	CCA ACC GCG AGA AGA TGA
β-actin reverse	CCA GAG GCG TAC AGG GAT AG

Name

Sequence (5΄-3΄)

IGF1R gene forward

CTG CCT CAT TAC CTG GCT CAC TA

IGF1R gene reverse

CAC CAT GCC ACT TTC CCT TGT

β-actin forward

CCA ACC GCG AGA AGA TGA

β-actin reverse

CCA GAG GCG TAC AGG GAT AG

Name	Sequence (5'-3')
CT102	Ts Cs Cs Ts Cs Cs Gs Gs As Gs Cs Cs As Gs As Cs Ts Ts Cs A
N04	Ts Ts Cs Ts Cs Cs As Cs Ts Cs Gs Ts Cs Gs Gs Cs Cs As Gs A
N04_MOE5	Tes Tes ^mCes Tes ^mCes ^mCs As ^mCs Ts ^mCs Gs Ts ^mCs Gs Gs ^mCes ^mCes Aes Ges Ae
NC	TCC TCG GCA GCC TGT CTA CA

Name

Sequence (5'-3')

CT102

Ts Cs Cs Ts Cs Cs Gs Gs As Gs Cs Cs As Gs As Cs Ts Ts Cs A

N04

Ts Ts Cs Ts Cs Cs As Cs Ts Cs Gs Ts Cs Gs Gs Cs Cs As Gs A

N04_MOE5

Tes Tes ^mCes Tes ^mCes ^mCs As ^mCs Ts ^mCs Gs Ts ^mCs Gs Gs ^mCes ^mCes Aes Ges Ae

TCC TCG GCA GCC TGT CTA CA

Name	Sequence (5'-3')
CT102	Ts Cs Cs Ts Cs Cs Gs Gs As Gs Cs Cs As Gs As Cs Ts Ts Cs A
N04	Ts Ts Cs Ts Cs Cs As Cs Ts Cs Gs Ts Cs Gs Gs Cs Cs As Gs A
N04_MOE5	Tes Tes ^mCes Tes ^mCes ^mCs As ^mCs Ts ^mCs Gs Ts ^mCs Gs Gs ^mCes ^mCes Aes Ges Ae
NC	TCC TCG GCA GCC TGT CTA CA

Name

Sequence (5'-3')

CT102

Ts Cs Cs Ts Cs Cs Gs Gs As Gs Cs Cs As Gs As Cs Ts Ts Cs A

N04

Ts Ts Cs Ts Cs Cs As Cs Ts Cs Gs Ts Cs Gs Gs Cs Cs As Gs A

N04_MOE5

Tes Tes ^mCes Tes ^mCes ^mCs As ^mCs Ts ^mCs Gs Ts ^mCs Gs Gs ^mCes ^mCes Aes Ges Ae

TCC TCG GCA GCC TGT CTA CA

靶向IGF1R mRNA的反义寡核苷酸修饰物新型制剂体外抗肝癌活性研究

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蒲洋 ¹ , 管静 ²^,³ , 何仟一 ² , 朱月洁 ² , 潘德林 ¹^,^* , 关注 ² , 杨振军 ²^,³^,^*

药学学报 | 研究论文 2024,59(5): 1441-1448

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药学学报 | 研究论文 2024, 59(5): 1441-1448

靶向IGF1R mRNA的反义寡核苷酸修饰物新型制剂体外抗肝癌活性研究

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蒲洋¹, 管静²^,³, 何仟一², 朱月洁², 潘德林¹^,^*, 关注², 杨振军²^,³^,^*

作者信息

1.成都中医药大学药学院, 四川成都 611137

2.北京大学药学院/天然药物及仿生药物全国重点实验室, 北京 100191

3.贵州中医药大学药学院, 贵州贵阳 550025

通讯作者:

^*潘德林, E-mail: linfeng_0130@163.com;

杨振军, E-mail: yangzj@bjmu.edu.cn

Investigation on efficacy against hepatocellular carcinoma of novel antisense oligonucleotide targeting IGF1R mRNA encapsulated with neutral cytidinyl/cationic lipid in vitro

Yang PU¹, Jing GUAN²^,³, Qian-yi HE², Yue-jie ZHU², De-lin PAN¹^,^*, Zhu GUAN², Zhen-jun YANG²^,³^,^*

Affiliations

1. School of Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 611137, China

2. State Key Laboratory of Natural and Biomimetic Drugs, School of Pharmaceutical Sciences, Peking University, Beijing 100191, China

3. College of Pharmaceutical Sciences, Guizhou University of Traditional Chinese Medicine, Guiyang 550025, China

出版时间: 2024-05-12 doi: 10.16438/j.0513-4870.2023-1285

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摘要

收起

反义寡核苷酸是一类靶向沉默mRNA后抑制蛋白翻译的基因疗法, 已在多种疾病治疗中应用, 但依然缺乏合适的体内递送载体、存在酶稳定性差及使用剂量高等问题。胰岛素样生长因子1型受体(IGF1R) 是一种具有酪氨酸激酶活性的细胞表面受体, 在多种恶性肿瘤中异常高表达, 通过多种途径介导肿瘤细胞的恶性增殖、迁移及侵袭。本研究设计合成了靶向IGF1R mRNA的反义寡核苷酸(N04), 利用中性胞苷脂材DNCA联合胱氨酸骨架阳离子脂材CLD对其进行包载递送, 并结合化学修饰策略(PS, 2'-OMOE), 得到稳定且高效的反义寡核苷酸修饰物新型制剂。制剂粒径理想(151 nm)、大小均一(多分散系数0.18)、呈近电中性(ζ电位-3.9 mV)、可被肝癌细胞(HepG-2、Huh-7) 高效摄取, 明显沉默靶mRNA、导致细胞S期阻滞、促进细胞凋亡, 进而抑制细胞增殖。本研究为抗肝细胞癌新型反义寡核苷酸制剂药物的研发提供了工作基础。

关键词

反义寡核苷酸 / 中性胞苷脂材 / 胱氨酸骨架阳离子脂材 / 胰岛素样生长因子1型受体 / 肝细胞癌

Abstract

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Antisense oligonucleotides are a type of gene therapy that targets mRNA and inhibits gene expression. They have been applied in the treatment of various diseases, but there are still problems with poor enzyme stability and high dosage in vivo, due to the shortage of appropriate delivery system. Insulin-like growth factor 1 receptor (IGF1R) is a cell surface receptor with tyrosine kinase activity. Its expression is abnormal in a variety of malignant tumors. It mediates the malignant proliferation, migration and invasion of tumor cells through a variety of ways. In this study, an antisense oligonucleotide (ASO, N04) targeting IGF1R mRNA was designed and chemically modified (PS, 2'-OMOE), then neutral cytidine lipid DNCA and cystine backbone cationic lipid CLD (Mix) were used to encapsulate ASOs. The particle size, polymer dispersity index and ζ potential of the formulations were 151 nm, 0.18 and -3.9 mV. The nanoparticles entered liver cancer cells (HepG-2, Huh-7), silenced target mRNA, arrested cell cycle in S phase, promoted apoptosis, and inhibited the proliferation efficiently. These results indicate that Mix/N04_MOE5 has great potential in tumor treatment, which provides a basis for further research on novel agents against hepatocellular carcinoma.

Key words

antisense oligonucleotide / neutral cytidine lipid / cystine backbone cationic lipid / insulin-like growth factor 1 receptor / hepatocellular carcinoma

引用本文

蒲洋, 管静, 何仟一, 朱月洁, 潘德林, 关注, 杨振军. 靶向IGF1R mRNA的反义寡核苷酸修饰物新型制剂体外抗肝癌活性研究. 药学学报, 2024 , 59 (5) : 1441 -1448 . DOI: 10.16438/j.0513-4870.2023-1285

Yang PU, Jing GUAN, Qian-yi HE, Yue-jie ZHU, De-lin PAN, Zhu GUAN, Zhen-jun YANG. Investigation on efficacy against hepatocellular carcinoma of novel antisense oligonucleotide targeting IGF1R mRNA encapsulated with neutral cytidinyl/cationic lipid in vitro[J]. Acta Pharmaceutica Sinica, 2024 , 59 (5) : 1441 -1448 . DOI: 10.16438/j.0513-4870.2023-1285

正文

收起

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC) 是最常见的原发性肝恶性肿瘤, 由于多数肝细胞癌在早期无明显症状, 首次确诊为晚期的比例超过80%, 错过肝细胞癌的最佳治疗时间, 因此肝细胞癌5年的生存率仅约18%^{[1, 2]}。目前治疗肝细胞癌的一线治疗药物主要有索拉非尼、瑞戈非尼等^{[3, 4]}, 但此类药物靶向性差、治疗效果有限, 且会产生较强的耐药性^[5-9], 因此仍需要研发肝细胞癌的精准靶向治疗药物。

反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide, ASO) 是一种单链寡核苷酸分子, 通常包含15~25个核苷酸。其进入细胞后通过碱基互补配对原则与其互补的靶mRNA结合, 在核糖核酸酶H1的作用下抑制靶基因的表达, 或通过空间位阻阻断mRNA的翻译^{[10, 11]}。然而由于未经修饰的ASO在进入细胞中被迅速降解、清除, 导致其作为治疗药物受到很大的限制^[12]。为了解决以上问题, 对ASO进行修饰及运用载体进行包载递送。研究表明, 对ASO的磷酸二酯骨架进行磷硫代和对核糖的2'-OMOE修饰使ASO均能显著提高其酶稳定性及对靶mRNA的结合力^[13]。递送ASO的载体能保护其在递送中及进入细胞后发挥作用之前免于核酸酶降解及巨噬细胞的清除^[14], 现常用的递送载体有脂质纳米颗粒(lipid nanoparticle, LNP), Alnylam公司的Patisiran是第一款获得美国FDA批准上市的采用LNP的siRNA药物, 但由于静脉给药后产生炎症反应或引起组织损伤而限制了其广泛应用^{[15, 16]}。

胰岛素样生长因子1型受体(insulin-like growth factor 1, IGF1R) 在乳腺癌、非小细胞肺癌、肝细胞癌等多种恶性肿瘤中过表达^[17]。该信号通路的激活会通过激活磷脂酰肌醇-3-激酶丝氨酸/苏氨酸特异性蛋白激酶、GTP结合蛋白和促分裂原活化蛋白激酶途径促进肿瘤细胞的恶性增殖、迁移和侵袭^{[18, 19]}。靶向IGF1R mRNA处于II期临床试验的反义寡核苷酸CT102, 通过基因沉默机制治疗HCC取得了良好的抗肿瘤效果。

本课题组前期研发了中性胞苷脂材(DNCA) 联合胱氨酸骨架阳离子脂材(CLD) 递送系统(Mix), 实现了siRNA^{[20, 21]}、ASO^{[22, 23]}、环二鸟苷酸^[24]和核酸适配体^[25]的包载递送, 通过瘤内注射或静脉注射在胰腺癌、黑色素瘤、肝癌、乳腺癌和非小细胞肺癌中发挥显著药效, 且体内安全性良好。机制研究表明, 此类纳米制剂主要通过巨胞饮作用或小窝蛋白途径介导内吞入胞, 避免或者减少了溶酶体途径, 从而有利于寡核苷酸药物高效发挥作用^{[25, 26]}。本研究中设计了靶向IGF1R mRNA的反义寡核苷酸N04, 经2'-OMOE修饰得到了N04_MOE5, 完成了Mix包载(DNCA/CLD/ASO摩尔比为20∶20∶1) (Mix/N04_MOE5) ^[22]及制剂的系统表征, 通过细胞增殖抑制、逆转录-实时定量聚合酶链式反应、细胞周期及凋亡检测等实验考察了抗HCC的体外生物活性。

材料与方法

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仪器 DNA/RNA H-8合成仪(德国, K & A LaborgeraeteGbR); GILSON液相系统(157 UV-VIS、306 PUMP、806、811D, 美国, Gilson); XBridge^TM OST C18 OBD^TM色谱柱(美国, Waters); HiPrep^TM 26/10 Desalting凝胶柱(美国, GE); 多功能酶标仪(美国, Molecular Devices); 贝克曼流式细胞仪(美国, BECKMAN COULTER); Real-time PCR仪(德国, Agilent Technologies); 激光散射粒度分布仪(英国, Malvern Zetasizer Nano ZS, Malvern)。

试剂与药品 GenOpti、DMEM高糖培养基、PBS [批次: G2022M1、L2823M1、J1023M3, 迈晨科技(北京) 有限公司]; FBS [批次: A2826128CP, Gibco (美国) 公司]; Cell Counting Kit-8、Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒、总RNA提取试剂盒[批次: C9215980、A0331671、T8315150, 翌圣生物科技(上海) 股份有限公司]。

寡核苷酸的合成 称取适量Universal-CPG装入到合成柱中, 分别将各试剂装入到相应试剂瓶中。按照每20 mL含1g的dA (rA)、dG (rG)、dC (rC)、dT (rU)亚磷酰胺单体的浓度用超干乙腈进行稀释, 随后放入到合成仪上A、G、C、T单体瓶中; 化学修饰亚磷酰胺单体则放入到5~8号单体瓶中, 通过亚磷酰胺固相合成法合成相应的DNA。开始合成时, DNA亚磷酰胺单体、修饰亚磷酰胺单体偶联时间分别为每次90、900秒, 其他反应参数保持在默认值。通过Deblock颜色变化, 粗略判断每步偶联反应收率。采用其他常规条件及“DMTr-On”方式进行后续固相切割、脱保护和分离纯化。

DNCA/CLD包载ASO的制剂工艺 首先在EP管中加入制剂中总体积一半体积的GenOpti溶液, 随后分别依次加入计算好的ASO、DNCA和CLD至液面以下, 最后再加入另一半总体积的GenOpti, 盖紧EP管, 在100 Hz, 50 ℃条件下超声20 min。

脂质复合物表征检测 使用激光散射粒度分布仪检测Mix/N04_MOE5制剂的平均水合粒径、多分散系数(polymer dispersity index, PDI) 和表面电位(zeta电位)。在120 kV JEM-1400Plus透射电子显微镜上用10 μL样品(0.3 mg·mL^-1)对脂质形态进行成像。

脂质复合物稳定性检测 Mix/N04_MOE5制剂后放置4 ℃冰箱中保存, 分别在0、8、24、48 h时间点使用激光散射粒度仪检测该脂质复合物的平均水合粒径、PDI和zeta电位。

细胞培养 HCC细胞系HepG-2、Huh-7细胞的培养条件为在DMEM高糖的培养基中加入10%胎牛血清(FBS), 温度37 ℃、5% CO₂的恒温培养箱中培养。

细胞增殖抑制试验(Cell Counting Kit-8) 将处于对数生长的Huh-7、HepG-2细胞分别以每孔8×10³、1×10⁴个细胞的密度铺在96孔板中, 恒温培养18~24 h给药, 然后继续培养48 h。检测时吸弃孔中培养基, 加入100 μL含10% CCK-8工作液的培养基, 孵育40 min显色后, 使用酶标仪检测450 nm处吸光度(A) 值。按照公式(1) 计算细胞存活率 (V)。

(1)

$ V = (A_\text{RA} - A_\text{RB})/ (A_\text{RB} - A_\text{RE}) × 100\text{%} $

其中, A_RA、A_RB、A_RE分别代表实验组、对照组及溶剂底色组的吸光度值。

靶基因沉默活性(RT-qPCR) 将处于对数生长的Huh-7、HepG-2细胞分别以每孔8×10⁴、1×10⁵个细胞的密度铺在12孔板中, 然后放置孵箱中培养18~24 h给药, 然后24 h进行RT-qPCR实验, 用Trizol裂解细胞并提取总RNA, 提取的RNA溶于无酶水, 按逆转录试剂盒操作得到cDNA, 再进行实时定量PCR, 获得各个样品组的Ct值。RT-qPCR实验涉及的引物序列如表 1所示。

细胞摄取实验 Huh-7、HepG-2细胞分别以每孔8×10⁴、1×10⁵个细胞的密度铺在12孔板中, 放置孵箱培养18~24 h后进行转染FAM标记的ASO, 避光孵育4 h后, 用胰蛋白酶消化后离心收集细胞, 用预冷PBS进行洗涤两次, 然后离心用300 μL预冷PBS重悬细胞, 再用流式细胞仪检测细胞摄取情况。

细胞凋亡实验 Huh-7、HepG-2细胞铺于12孔板中(铺板密度同细胞摄取实验), 37 ℃, 5% CO₂培养18~24 h后进行转染ASO。然后孵育48 h, 弃去培养基, 使用预冷的DMEM润洗细胞表面, 加入无EDTA胰酶消化并收集细胞, 离心后重悬于1×结合缓冲液中, 加入Annexin V-FITC和PI各5 μL, 避光室温孵育15~20 min。最后过筛, 流式细胞仪检测细胞凋亡情况。

细胞周期试验 Huh-7、HepG-2细胞铺于12孔板中(铺板密度同细胞摄取实验), 37 ℃, 5% CO₂培养18~24 h后进行转染ASO。孵育48 h, 弃去培养基, 使用预冷的DMEM润洗细胞表面, 离心后重悬于1×结合缓冲液中, 加入2 μL PI, 避光孵育15 min。使用0.45 μm筛网分散细胞团, 流式细胞仪检测细胞周期情况。

统计学方法 本研究中的所有数据都是来自至少3个独立重复实验的平均值, 误差线表示标准偏差。单因素方差分析多组独立数据, 得到P值确定显著性。GraphPad Prism 8.0、Origin 2022软件用于所有统计分析。

结果

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1 新序列N04_MOE5具有优异的抗HepG-2/Huh-7活性

CT102是靶向IGF1R mRNA的反义寡核苷酸, 可有效抑制肝细胞癌生长, 目前研究正处于临床II期试验。本项研究设计了靶向IGF1R mRNA的反义寡核苷酸新序列N04, 并对其进行了2'-OMOE修饰(表 2)。

以CT102作为阳性对照、negative control (NC) 序列作为阴性对照, DNCA/CLD (Mix) (图 1) 混合脂材分别包载CT102、N04、N04_MOE5、NC后, 采用CCK-8实验考察各制剂对HepG-2、Huh-7细胞的增殖抑制能力, 采用RT-qPCR实验考察对HepG-2、Huh-7细胞中IGF1R mRNA的沉默情况。结果如图 2所示, 在给药浓度均为50 nmol·L^-1情况下, Mix/N04、Mix/N04_MOE5与Mix/CT102对HepG-2、Huh-7细胞的增殖抑制率均大于65%, 对IGF1R mRNA的沉默效率均大于55%, 且通过单因素方差分析三者无显著性差异(P > 0.05), 表明Mix/N04、Mix/N04_MOE5均具有优异的抗肝癌作用。此外, Mix/NC组对HepG-2、Huh-7细胞均没有显示出细胞毒性, 表明该制剂具有良好的细胞安全性, 后续均以Mix/N04_MOE5作为研究对象。

2 Mix/N04_MOE5脂质复合物的表观形态

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为考察Mix/N04_MOE5是否能形成稳定、均一的纳米颗粒, 使用动态光散射法检测了空脂材Mix和Mix/N04_MOE5的粒径电位。结果如图 3所示, 在DNCA/CLD/N04_MOE5 = 20∶20∶1的比例下, 该脂质复合物可形成圆球状、粒径约151 nm的脂质复合物, 且略大于空脂材Mix的粒径。Mix/N04_MOE5制剂粒径分布图呈单一峰形, PDI为0.18, 表明形成了较为均一的纳米颗粒, 其zeta电位为-3.9 mV, 呈近电中性, 且具有良好的zeta电位分布。随后考察了Mix/N04_MOE5制剂的稳定性, 在完成制剂48 h内Mix/N04_MOE5 zeta电位稳定维持在-4 mV左右, 制剂粒径在24 h内较为稳定, 48 h后略有增大, 因此后续实验均现用现制剂。总体上Mix/N04_MOE5能形成平均粒径约151 nm、表面电位约为-3.9 mV的均一圆球状纳米颗粒。

3 HepG-2/Huh-7细胞高效摄取Mix包载的FAM-N04_MOE5

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用流式细胞仪检测各制剂组给药后4 h, 进入Huh-7、HepG-2细胞的情况(使用荧光基团FAM标记N04_MOE5)。如图 4所示, N04_MOE5组与PBS组的胞内荧光值无显著性差异, 表明裸反义寡核苷酸入胞困难, 而在Mix/N04_MOE5组中检测到HepG-2、Huh-7细胞中有大量荧光, 且细胞摄取峰形图单一(图 4A), 表明Mix可将N04_MOE5高效转染入胞, 且入胞均一性高。进一步分析阳性细胞的比例可发现(图 4B), N04_MOE5组HepG-2、Huh-7细胞的阳转率均在2%以下, 而Mix/N04_MOE5组HepG-2、Huh-7细胞的阳转率可达92%以上, 表明Mix/N04_MOE5高效进入绝大部分HepG-2、Huh-7细胞。

4 Mix/N04_MOE5促使HepG-2/Huh-7细胞凋亡

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为进一步分析反义寡核苷酸制剂对HepG-2、Huh-7细胞增殖抑制的机制, 考察了其对HCC细胞凋亡的影响。使用流式细胞仪检测给药后48 h HepG-2、Huh-7细胞的凋亡情况, 结果如图 5所示, Mix/NC组与PBS组的细胞凋亡率均小于10%, 说明Mix/NC没有促进细胞凋亡作用, 而Mix/CT102、Mix/N04_MOE5分别能诱导约35%、43%的Huh-7细胞凋亡、约37%、35%的HepG-2细胞凋亡, 表现出显著的促进HepG-2、Huh-7细胞凋亡作用, 尤其是促进早期凋亡的作用, 且Mix/N04_MOE5诱导Huh-7细胞凋亡能力优于Mix/CT102。

5 Mix/N04_MOE5引起HepG-2细胞S期阻滞

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有研究^[26]表明, 激活IGF1R信号通路会通过调节细胞周期蛋白和凋亡蛋白, 促进肿瘤细胞的生长和分裂。为探索Mix/N04_MOE5对HepG-2细胞周期的影响情况, 使用流式细胞仪检测给药后48 h的HepG-2细胞周期。如图 6所示, 与PBS组相比, Mix/N04_MOE5组中有超过50%的细胞处于S期, 远远高于PBS组的S期细胞比例(30%), 说明Mix/N04_MOE5可显著引起HepG-2细胞的S期阻滞。

讨论

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ASO是一种优秀基因治疗方法, 目前已有9款ASO药物批准上市。但由于核酸酶稳定性及使用剂量高等问题, 极大的限制了ASO的临床应用。本项研究利用成熟的2'-OMOE和PS修饰提高了ASO的血清稳定性, 使用自主研发的DNCA/CLD (Mix) 混合脂材包载ASO, 其中前者通过氢键、π-π堆积作用, 而后者通过静电作用与ASO结合形成纳米颗粒, 能以非溶酶体途径高效转染入胞, 进一步在谷胱甘肽还原酶作用下断裂CLD的二硫键, 从而更高效释放ASO而发挥作用^{[26, 27]}。Mix包载有效提高ASO的血清稳定性和跨膜转运能力, 从而使其可在低剂量下即表现出较好的药效。同时以IGF1R mRNA为靶标, 设计出新ASO序列N04, 并对其进行合理化学修饰得到N04_MOE5, 利用Mix包载, 细胞水平实验表明, 其在HepG-2、Huh-7细胞中的摄取增加95%以上, 入胞后可显著沉默靶mRNA, 使细胞周期停滞在S期, 促使细胞凋亡尤其是早期凋亡, 并高效抑制肿瘤细胞的恶性增殖。综合以上结果, 本研究获得了性质较好的体外抗肝癌细胞反义的核酸制剂Mix/N04_MOE5, 为抗肝细胞癌新型反义寡核苷酸制剂的研发提供了工作基础。

作者贡献: 蒲洋负责生化、细胞实验及数据分析处理和论文撰写; 管静负责新序列设计; 何仟一负责序列合成; 朱月洁、潘德林和关注负责部分实验数据分析和讨论; 杨振军负责实验设计、结果讨论及论文修改定稿。

利益冲突: 本文所有作者声明不存在利益冲突关系。

基金

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北大医学-哈药核酸药物协同创新实验室及国家科技部重大新药创制科技重大专项资助项目(2017ZX09303013)

参考文献

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文献

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参考文献引证文献

排序方式：

[1]

Wang XZ, Zhao MH, Zhang CS, et al. Establishment and clinical application of the nomogram related to risk or prognosis of hepatocellular carcinoma: a review[J]. J Hepatocell Carcinoma, 2023, 10: 1389-1398.

[2]

Llovet JM, Kelley RK, Villanueva A, et al. Hepatocellular carcinoma[J]. Nat Rev Dis Primers, 2021, 7: 6.

[3]

Hartke J, Johnson M, Ghabril M. The diagnosis and treatment of hepatocellular carcinoma[J]. Semin Diagn Pathol, 2017, 34: 153-159.

[4]

Degasperi E, Colombo M. Distinctive features of hepatocellular carcinoma in non- alcoholic fatty liver disease[J]. Lancet Gastroenterol Hepatol, 2016, 1: 156-164.

[5]

Motomura K, Kuwano A, Tanaka K, et al. Potential predictive biomarkers of systemic drug therapy for hepatocellular carcinoma: anticipated usefulness in clinical practice[J]. Cancers (Basel), 2023, 15: 4345.

[6]

Imai K, Takai K, Unome S, et al. Lenvatinib or sorafenib treatment causing a decrease in skeletal muscle mass, an independent prognostic factor in hepatocellular carcinoma: a survival analysis using time-varying covariates[J]. Cancers (Basel), 2023, 15: 4223.

[7]

Saalfeld S, Kreher R, Hille G, et al. Prognostic role of radiomics-based body composition analysis for the 1-year survival for hepatocellular carcinoma patients[J]. J Cachexia Sarcopenia Muscle, 2023, 14: 2301-2309.

[8]

Jilkova ZM, Kuyucu AZ, Kurma K, et al. Combination of akt inhibitor arq 092 and sorafenib potentiates inhibition of tumor progression in cirrhotic rat model of hepatocellular carcinoma[J]. Oncotarget, 2018, 9: 11145-11158.

[9]

Faivre S, Rimassa L, Finn RS. Molecular therapies for HCC: looking outside the box[J]. J Hepatol, 2020, 72: 342-352.

[10]

Bennett CF. Therapeutic antisense oligonucleotides are coming of age[J]. Annu Rev Med, 2019, 70: 307-321.

[11]

Watts JK, Corey DR. Silencing disease genes in the laboratory and the clinic[J]. J Pathol, 2012, 226: 365-379.

[12]

Crooke ST, Liang XH, Baker BF, et al. Antisense technology: a review[J]. J Biol Chem, 2021, 296: 100416.

[13]

Ramasamy T, Ruttala HB, Munusamy S, et al. Nano drug delivery systems for antisense oligonucleotides (ASO) therapeutics[J]. J Control Release, 2022, 352: 861-878.

[14]

Zhao YN, He W, Shao QL, et al. Research progress of ionizable lipid nanoparticles for siRNA delivery[J]. Acta Pharm Sin (药学学报), 2023, 58: 2292-2299.

[15]

Mitchell MJ, Billingsley MM, Haley RM, et al. Engineering precision nanoparticles for drug delivery[J]. Nat Rev Drug Discov, 2021, 20: 101-124.

[16]

Ganson NJ, Povsic TJ, Sullenger BA, et al. Pre-existing anti-polyethylene glycol antibody linked to first-exposure allergic reactions to pegnivacogin, a pegylated RNA aptamer[J]. J Allergy Clin Immunol, 2016, 137: 1610-1613.

[17]

Galal MA, Alouch SS, Alsultan BS, et al. Insulin receptor isoforms and insulin growth factor-like receptors: implications in cell signaling, carcinogenesis, and chemoresistance[J]. Int J Mol Sci, 2023, 24: 15006.

[18]

Wang Y, Deng BC. Hepatocellular carcinoma: molecular mechanism, targeted therapy, and biomarkers[J]. Cancer Metastasis Rev, 2023, 42: 629-652.

[19]

Enguita-Germán M, Fortes P. Targeting the insulin-like growth factor pathway in hepatocellular carcinoma[J]. World J Hepatol, 2014, 6: 716-737.

[20]

Li LY, Hou JJ, Liu XJ, et al. Nucleolin-targeting liposomes guided by aptamer as1411 for the delivery of siRNA for the treatment of malignant melanomas[J]. Biomaterials, 2014, 35: 3840-3850.

[21]

Gao YQ, Wang XX, Pan YF, et al. Synthesis and anti-HCC activity of full 2ʹ-F/OMe-siRNA encapsulated with neutral cytidinyl/cationic lipid[J]. Acta Pharm Sin (药学学报), 2023, 58: 1634-1640.

[22]

Guan J, Pan YF, Li HT, et al. Activity and tissue distribution of antisense oligonucleotide ct102 encapsulated with cytidinyl/cationic lipid against hepatocellular carcinoma[J]. Mol Pharm, 2022, 19: 4552-4564.

[23]

Pan YF, Guan J, Gao YJ, et al. Modified ASO conjugates encapsulated with cytidinyl/cationic lipids exhibit more potent and longer-lasting anti-HCC effects[J]. Mol Ther Nucleic Acids, 2023, 32: 807-821.

[24]

Yu XT, Yu J, Dai H, et al. Novel formulation of c-di-GMP with cytidinyl/cationic lipid reverses T cell exhaustion and activates stronger anti-tumor immunity[J]. Theranostics, 2022, 12: 6723-6739.

[25]

Ma Y, Zhu YJ, Wang C, et al. Annealing novel nucleobase-lipids with oligonucleotides or plasmid DNA based on H-bonding or π-π interaction: assemblies and transfections[J]. Biomaterials, 2018, 178: 147-157.

[26]

Sun J, Qiu C, Diao YP, et al. Delivery pathway regulation of 3′, 3″-bis-peptide-siRNA conjugate via nanocarrier architecture engineering[J]. Mol Ther Nucleic Acids, 2018, 10: 75-90.

[27]

Ma XF, Sun J, Qiu C, et al. The role of disulfide-bridge on the activities of h-shape gemini-like cationic lipid based siRNA delivery[J]. J Control Release, 2016, 235: 99-111.

2024年第59卷第5期

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doi: 10.16438/j.0513-4870.2023-1285

接收时间：2023-11-14
首发时间：2025-11-27
出版时间：2024-05-12

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出版历史

收稿日期：2023-11-14
修回日期：2024-04-07

基金

北大医学-哈药核酸药物协同创新实验室及国家科技部重大新药创制科技重大专项资助项目(2017ZX09303013)

作者信息

1.成都中医药大学药学院, 四川成都 611137

2.北京大学药学院/天然药物及仿生药物全国重点实验室, 北京 100191

3.贵州中医药大学药学院, 贵州贵阳 550025

通讯作者:

^*潘德林, E-mail: linfeng_0130@163.com;

杨振军, E-mail: yangzj@bjmu.edu.cn

参考文献

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https://castjournals.cast.org.cn/joweb/yxxb/CN/10.16438/j.0513-4870.2023-1285

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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