药学学报

No.	δ_H	δ_C
1		137.1
2, 6	7.60 (2H, d, J = 12.3 Hz)	129.1
3, 5	7.44-7.33 (2H, m)	130.0
4	7.44-7.33 (1H, m)	131.0
β	7.62 (1H, d, J = 15.7 Hz)	141.8
α	8.00 (1H, d, J = 15.7 Hz)	129.6
C=O		194.1
1′		105.9
2′		166.2
3′		104.6
4′		161.4
5′	5.86 (1H, s)	95.3
6′		164.3
1″	3.48 (1H, s)	30.0
2″	1.88 (1H, d, J = 12.6 Hz) 1.73 (1H, d, J = 12.6 Hz)	37.9
3″		78.0
4″	2.02 (1H, d, J = 13.3 Hz) 1.66-1.58 (1H, m)	41.4
5″	1.66-1.58 (1H, m) 1.31-1.26 (1H, m)	23.7
6″	1.31-1.26 (1H, m)	51.4
7″	1.44 (3H, s)	29.3
8″	1.38-1.34 (1H, m)	30.8
9″	1.09 (3H, d, J = 6.5 Hz)	23.2
10″	0.74 (3H, d, J = 6.5 Hz)	20.8

No.	δ_H	δ_C
1		137.1
2, 6	7.60 (2H, d, J = 12.3 Hz)	129.1
3, 5	7.44-7.33 (2H, m)	130.0
4	7.44-7.33 (1H, m)	131.0
β	7.62 (1H, d, J = 15.7 Hz)	141.8
α	8.00 (1H, d, J = 15.7 Hz)	129.6
C=O		194.1
1′		105.9
2′		166.2
3′		104.6
4′		161.4
5′	5.86 (1H, s)	95.3
6′		164.3
1″	3.48 (1H, s)	30.0
2″	1.88 (1H, d, J = 12.6 Hz) 1.73 (1H, d, J = 12.6 Hz)	37.9
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4″	2.02 (1H, d, J = 13.3 Hz) 1.66-1.58 (1H, m)	41.4
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6″	1.31-1.26 (1H, m)	51.4
7″	1.44 (3H, s)	29.3
8″	1.38-1.34 (1H, m)	30.8
9″	1.09 (3H, d, J = 6.5 Hz)	23.2
10″	0.74 (3H, d, J = 6.5 Hz)	20.8

Method	(1″R, 3″S, 6″R)-1	(1″R, 3″S, 6″S)-1	(1″S, 3″S, 6″R)-1	(1″R, 3″R, 6″R)-1
DP4+ (H data)	0.00%	0.00%	100.00%	0.00%
DP4+ (C data)	0.04%	0.00%	92.01%	7.94%
DP4+ (all data)	0.00%	0.00%	100.00%	0.00%

Method	(1″R, 3″S, 6″R)-1	(1″R, 3″S, 6″S)-1	(1″S, 3″S, 6″R)-1	(1″R, 3″R, 6″R)-1
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DP4+ (all data)	0.00%	0.00%	100.00%	0.00%

Compound	IC₅₀/μmol·L^-1	Compound	IC₅₀/μmol·L^-1
1	5.58	11	> 100
2	23.41	12	> 100
3	25.72	13	> 100
4	> 100	14	> 100
5	98.83	15	> 100
6	> 100	16	20.96
7	> 100	17	> 100
8	> 100	18	> 100
9	> 100	19	> 100
10	> 100	20	89.26

Compound	IC₅₀/μmol·L^-1	Compound	IC₅₀/μmol·L^-1
1	5.58	11	> 100
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3	25.72	13	> 100
4	> 100	14	> 100
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8	> 100	18	> 100
9	> 100	19	> 100
10	> 100	20	89.26

湖南产山橿乙酸乙酯部位化学成分及抗肿瘤活性研究

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张珊珊 ¹^,² , 韩月 ¹^,² , 侯亚迪 ¹^,² , 魏雨婕 ¹ , 孙孝亚 ¹^,²^,^* , 陈随清 ¹^,²^,³^,^*

药学学报 | 研究论文 2024,59(6): 1741-1750

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药学学报 | 研究论文 2024, 59(6): 1741-1750

湖南产山橿乙酸乙酯部位化学成分及抗肿瘤活性研究

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张珊珊¹^,², 韩月¹^,², 侯亚迪¹^,², 魏雨婕¹, 孙孝亚¹^,²^,^*, 陈随清¹^,²^,³^,^*

作者信息

1.河南中医药大学, 河南郑州 450046

2.河南省中药资源与中药化学重点实验室, 河南郑州 450046

3.呼吸疾病中医药防治省部共建协同创新中心, 河南郑州 450046

通讯作者:

^*孙孝亚, E-mail: sxy7336@163.com;

陈随清, E-mail: suiqingchen0371@163.com

Study on the chemical constituents and antitumor activity of ethyl acetate extract of Lindera reflexa from Hunan province

Shan-shan ZHANG¹^,², Yue HAN¹^,², Ya-di HOU¹^,², Yu-jie WEI¹, Xiao-ya SUN¹^,²^,^*, Sui-qing CHEN¹^,²^,³^,^*

Affiliations

1. Henan University of Chinese Medicine, Zhengzhou 450046, China

2. Henan Key Laboratory of Chinese Medicine Resources and Chinese Medicine Chemistry, Zhengzhou 450046, China

3. Collaborative Innovation Center for Chinese Medicine and Respiratory Diseases Co-constructed by Henan Province & Education Ministry of P. R. China, Zhengzhou 450046, China

出版时间: 2024-06-12 doi: 10.16438/j.0513-4870.2023-1279

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摘要

收起

采用硅胶、MCI、Sephadex LH-20及半制备高效液相等色谱技术进行分离纯化, 并根据NMR、MS等波谱数据确定化合物结构, 从湖南产山橿乙酸乙酯部位分离得到20个单体化合物, 分别鉴定为: (1″S, 3″S, 6″R)-2′, 4′, 6′-三羟基-3′-[1″-(3″-羟基)-对薄荷烷基]-查尔酮(1)、sumadain D (2)、槲皮素(3)、儿茶素(4)、表儿茶素(5)、N-顺式阿魏酰酪胺(6)、N-反式阿魏酰酪胺(7)、N-反式-阿魏酰-3-甲氧基酪胺(8)、flavifloramides B (9)、northalifoline (10)、异落叶松脂素(11)、丁香树脂酚(12)、松脂素(13)、皮树脂醇(14)、二氢去氢二愈创木基醇(15)、4-methoxyl-denudaquinol (16)、miliusanal (17)、丁香酸(18)、脱落酸(19)、桂酸桂酯(20)。化合物1为新化合物, 化合物2~20首次从山橿中分离得到。抗肿瘤活性筛选结果表明, 化合物1、2、3、16可以显著降低胃癌细胞MGC-803的存活能力, 其IC₅₀值分别为5.58、23.41、25.72、20.96 μmol·L^-1。化合物5、20可以降低胃癌细胞MGC-803的存活能力, IC₅₀值分别为98.83、89.26 μmol·L^-1。

关键词

山橿 / 抗肿瘤活性 / 黄酮 / 酰胺 / 木脂素

Abstract

收起

The compounds were isolated and purified by silica gel, MCI, Sephadex LH-20 and semi-preparative high performance liquid chromatography. The structures of the compounds were determined by NMR and MS spectroscopic data. Twenty monomer compounds were isolated from the ethyl acetate extract of Lindera reflexa root from Hunan province, and identified as: (1″S, 3″S, 6″R)-2′, 4′, 6′-trihydroxy-3′-[1″-(3″-hydroxy)-p-menthanyl]-chalcone (1), sumadain D (2), quercetin (3), catechin (4), epicatechin (5), N-cis-feruloyltyramine (6), N-trans-feruloyltyramine (7), N-trans-feruloyl-3-methoxytyramine (8), flavifloramides B (9), northalifoline (10), isolariciresinol (11), syringaresinol (12), pinoresinol (13), medioresinol (14), dehydroconiferyl alcohol (15), 4-methoxyl-denudaquinol (16), miliusanal (17), syringic acid (18), abscisic acid (19), (E)-cinnamyl-(E)-cinnamate (20). Compound 1 is a new compound, and compounds 2‒20 have been isolated from Lindera reflexa for the first time. The results showed that compounds 1, 2, 3 and 16 could significantly reduce the survival ability of MGC-803 cells with IC₅₀ values of 5.58, 23.41, 25.72 and 20.96 μmol·L^-1, respectively. Compounds 5 and 20 can reduce the survival ability of MGC-803 cells with IC₅₀ values of 98.83 and 89.26 μmol·L^-1, respectively.

Key words

Lindera reflexa / antitumor activity / flavonoid / amide / lignane

引用本文

张珊珊, 韩月, 侯亚迪, 魏雨婕, 孙孝亚, 陈随清. 湖南产山橿乙酸乙酯部位化学成分及抗肿瘤活性研究. 药学学报, 2024 , 59 (6) : 1741 -1750 . DOI: 10.16438/j.0513-4870.2023-1279

Shan-shan ZHANG, Yue HAN, Ya-di HOU, Yu-jie WEI, Xiao-ya SUN, Sui-qing CHEN. Study on the chemical constituents and antitumor activity of ethyl acetate extract of Lindera reflexa from Hunan province[J]. Acta Pharmaceutica Sinica, 2024 , 59 (6) : 1741 -1750 . DOI: 10.16438/j.0513-4870.2023-1279

正文

收起

山橿为樟科山胡椒属植物山橿(Lindera reflexa Hemsl.) 的根, 主产于河南、江苏、安徽等地, 植物资源丰富^[1]。山橿为近代发现的民间草药, 其性辛、温, 有止血消肿、行气止痛等功效, 用于治疗疥癣、风疹、胃痛等^[2]。现代研究证明其临床疗效确切, 在河南省大别山区民间用于治疗慢性胃炎和胃溃疡等^[3]。文献报道山橿中主要包括黄酮类、二苯乙烯类、生物碱类、香豆素类、吡喃酮类以及挥发油类等化学成分^[4-11], 具有抗炎、镇痛、抗胃溃疡、抑菌、抗肿瘤等药理作用^[9-13]。目前, 山橿在河南地区作为中成药原料使用, 为了扩大新药源, 本课题组前期对河南与湖南产山橿根进行了大量的化学成分和药理活性研究, 结果表明两者之间化学成分存在一定的差异, 为更深入研究并揭示山橿的活性成分, 扩大新药源, 为临床药用和开发应用提供科学依据, 本实验对湖南产山橿乙酸乙酯部位进行了化学成分研究, 从中分离得到20个化合物, 包括5个黄酮类化合物(1~5)、5个酰胺类化合物(6~10)、5个木脂素类化合物(11~15)、2个萜类化合物(16、17)、3个其他类化合物(18~20), 结构见图 1。化合物1为新化合物, 化合物2~20首次从山橿中分离得到。细胞毒活性实验表明化合物1、2、3、5、16、20对胃癌细胞MGC-803有不同程度的细胞毒活性, IC₅₀值分别为5.58、23.41、25.72、98.83、20.96、89.26 μmol·L^-1。

结果与讨论

收起

1 结构鉴定

化合物1 棕色油状物, [α]_D²⁵ = -46.8 (c 0.05, MeOH), HR-ESI-MS m/z: 393.205 8 [M-H₂O+H]⁺ (calcd. 393.206 0), 分子式为C₂₅H₃₀O₅。UV (MeOH) λ_max (log ε): 220.20 (3.41) nm, 348.20 (3.11) nm; IR光谱数据显示该结构中含有羟基(3 363, 1 036 cm^-1)、羰基(1 627 cm^-1)、苯环(1 554, 1 504 cm^-1)、甲基(2 944, 1 342 cm^-1)、亚甲基(2 836 cm^-1) 等官能团。¹H NMR谱(表 1) 中显示3个甲基氢信号δ_H 1.44 (3H, s, H-7″), 1.09 (3H, d, J = 6.5 Hz, H-9″), 0.74 (3H, d, J = 6.5 Hz, H-10″); 3个亚甲基氢信号δ_H 1.88 (1H, d, J = 12.6 Hz, H-2″a), 1.73 (1H, d, J = 12.6 Hz, H-2″b), 2.02 (1H, d, J = 13.3 Hz, H-4″a), 1.66~1.58 (1H, m, H-4″b), 1.66~1.58 (1H, m, H-5″a), 1.31~1.26 (1H, m, H-5″b); 11个次甲基信号δ_H 7.60 (2H, d, J = 12.3 Hz, H-2, 6), 7.44~7.33 (3H, m, H-3, 4, 5), 7.62 (1H, d, J = 15.7 Hz, H-β), 8.00 (1H, d, J = 15.7 Hz, H-α), 5.86 (1H, s, H-5′), 3.48 (1H, s, H-1″), 1.31~1.26 (1H, m, H-6″), 1.38~1.34 (1H, m, H-8″)。¹³C NMR谱(表 1) 中显示23个碳信号, 结合HSQC谱、DEPT 135谱, 显示δ_C 129.1, 130.0分别代表两个碳原子, 因此该结构中含25个碳原子, 包括3个甲基碳、3个亚甲基碳、11个次甲基碳(包括8个烯碳信号)、7个季碳以及1个酮羰基碳信号。¹H NMR、¹³C NMR数据(表 1) 结合HMBC和¹H-¹H COSY相关(图 2), 推断化合物1为一个含对薄荷基的查尔酮类结构, 且与化合物linderachalcone^[14]的结构相似, 不同之处在于, 对薄荷烯基在化合物1中被3″-羟基-对薄荷烷基取代。在HSQC谱, δ_C 37.9 (C-2″) 与δ_H 1.88 (1H, d, J = 12.6 Hz, H-2″a)、1.73 (1H, d, J = 12.6 Hz, H-2″b) 相关, 证明δ_C 37.9 (C-2″) 为亚甲基碳。在¹³C NMR谱中, δ_C 78.0 (C-3″) 处于高场区, 且在DEPT 135谱中无信号峰, 证明δ_C 78.0 (C-3″) 为季碳而非不含氢原子的烯碳。由此推断出化合物1的平面结构见图 2。在NOESY谱图(图 2) 中, H-7″与H-1″存在相关关系, 表明H-7″与H-1″共面; H-5″与H-6″信号高度重叠, 无法通过NOE确定相对构型。为了进一步确定化合物的相对构型和绝对构型, 通过计算NMR与实验NMR对比, 通过直线回归方程的决定系数R²区分4对差向异构体, 再通过计算ECD与实验ECD对比确定绝对构型。结果显示(1″S, 3″S, 6″R)-1的¹³C NMR、¹H NMR计算值与实验值比较接近, 相关系数R²最大, CMAD和CLAD值均在正常范围, 为最有可能的构型。接着进行了DP4+概率分析(表 2) 进行确证, 结果表明(1″S, 3″S, 6″R)-1或其对映异构体(1″R, 3″R, 6″S)-1为正确的构型。为了进一步确定化合物1的绝对构型, 测定了其圆二色谱(ECD), 通过密度泛函理论(DFT) 计算, 当C-1″, 3″位为S构型, C-6″为R构型时, 化合物1的理论计算ECD谱与实际测试图较为一致(图 3), 进而确定化合物1的绝对构型为(1″S, 3″S, 6″R)-1。因此, 鉴定化合物1的结构为(1″S, 3″S, 6″R)-2′, 4′, 6′-三羟基-3′- [1″-(3″-羟基)-对薄荷烷基]-查尔酮。

2 体外抗肿瘤活性评价

MTT法考察化合物对胃癌细胞MGC-803抑制活性测定结果见表 3。结果表明, 化合物1~3和16表现出明显的胃癌细胞MGC-803增殖抑制活性, 其IC₅₀值分别为5.58、23.41、25.72、20.96 μmol·L^-1。化合物5、20表现出一定程度胃癌细胞MGC-803增殖抑制活性, IC₅₀值分别为98.83、89.26 μmol·L^-1。其他化合物的IC₅₀值均大于100 μmol·L^-1, 未表现出明显抗肿瘤活性。

3 讨论

本实验通过对湖南产山橿的化学成分进行研究, 共从中分离鉴定了20个化合物, 包括5个黄酮类、5个酰胺类、5个木脂素类、2个萜类、3个其他类化合物, 其中化合物1为新化合物, 化合物2~20首次从山橿中分离得到, 本研究丰富了山橿的化学成分。对比报道从山橿分离出的化学成分可以发现, 不同产地的山橿化学成分存在一定差异, 河南产山橿化学成分以二苯乙烯类、黄酮类为主^[5-7,9-11], 而湖南产山橿化学成分以吡喃酮类、黄酮类为主^[8], 截至目前, 未见从湖南产山橿分离出二苯乙烯类化合物的相关报道。化学成分是发挥药理药效的基础, 由此可见, 湖南产山橿与河南产山橿在药理药效方面可能存在一定区别。关于湖南产山橿与河南产山橿在化学成分、生物活性等各方面的差异有待进一步研究。抗肿瘤活性筛选结果显示, 化合物1~3和16对胃癌细胞MGC-803的抑制作用较为显著, 其IC₅₀值分别为5.58、23.41、25.72、20.96 μmol·L^-1, 化合物5、20对胃癌细胞MGC-803有一定的抑制作用。其中化合物1~3和5均属于黄酮类化合物, 表明黄酮类化合物可以作为肿瘤药物的研究重点, 与文献^[9]报道一致。山橿中含有丰富的黄酮类化合物, 表明其可以作为潜在的抗肿瘤药物。山橿作为地方用药, 有其出色的临床疗效, 本研究为扩大药源、丰富山橿化学成分及探究其活性成分提供了一定的科学依据, 为后续山橿药用价值研究提供了一定的理论支撑和研究方向。

实验部分

收起

LC-52型半制备液相色谱仪[赛普锐思(北京) 科技有限公司]; Bruker AVANCE Ⅲ 500型核磁共振仪(德国Bruker公司); LTQ-Orbitrap XL Hybrid型质谱仪(美国Thermo Fisher Scientific公司); WFH-201BJ型紫外可见透射反射仪(上海精科实业有限公司); Autopol Ⅳ全自动旋光仪(美国鲁道夫公司); N-1100型旋转蒸发仪(日本东京理化器械株式会社); BT25S型分析天平(赛多利斯科技有限公司); 371型CO₂培养箱、VARIOSKANLUX型酶标仪[赛默飞世尔科技(中国) 有限公司]。柱色谱硅胶(200~300目)、薄层色谱硅胶GF₂₅₄ (青岛海洋化工有限公司); Sephadex LH-20凝胶(美国GE公司); MCI GEL CHP-20 (日本三菱公司); YMC-Pack ODS-A色谱柱(250 mm × 10 mm, 5 μm, 日本YMC有限公司); 胎牛血清(美国Gibco公司); RPMI-1640培养基(含双抗, 武汉普诺赛生命科技有限公司); 噻唑蓝(北京索莱宝科技有限公司); 分析纯甲醇、石油醚、二氯甲烷等购买自天津市富宇精细化工有限公司; 色谱纯甲醇、乙腈购买自安徽天地高纯溶剂有限公司。

湖南产山橿药材于2020年10月采自湖南省湘潭市湘潭县, 经河南中医药大学陈随清教授鉴定为樟科山胡椒属山橿(Lindera reflexa Hemsl.) 的根, 药材标本(No.20201003) 保存于河南省中药资源与中药化学重点实验室。

1 提取分离

取湖南产山橿15 kg, 用70%乙醇回流提取3次, 每次2 h, 滤过, 合并提取液, 减压浓缩得粗提物浸膏。将浸膏用水混悬分散, 分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取, 得石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位。将乙酸乙酯部位减压浓缩得浸膏1 153.0 g。

将乙酸乙酯部位(1 153.0 g) 经硅胶柱色谱粗分, 以石油醚-丙酮系统(100∶1→1∶1) 和二氯甲烷-甲醇系统(100∶1→0∶100) 梯度洗脱, 合并得7个组分Fr.1~Fr.7。Fr.2 (71.6 g) 经硅胶柱色谱分离, 以石油醚-乙酸乙酯系统和二氯甲烷-甲醇系统梯度洗脱, 合并得8个组分Fr.2.1~Fr.2.8。Fr.2.1经硅胶柱色谱分离, 以石油醚-乙酸乙酯系统(200∶1→1∶1) 梯度洗脱, 合并得5个组分Fr.2.1.1~Fr.2.1.5。Fr.2.1.3经半制备高效液相(乙腈-水, 77∶23) 纯化得化合物20 (t_R = 26.1 min; 74.7 mg)。

Fr.3 (880.0 g) 经硅胶柱色谱分离, 以石油醚-乙酸乙酯(50∶1→1∶1) 梯度洗脱, 合并得21个组分Fr.3.1~Fr.3.21。Fr.3.7 (2.1 g) 经半制备液相梯度(甲醇-水, 70∶30→100∶0) 洗脱得到化合物16 (t_R = 30.0 min; 5.0 mg)。Fr.3.8 (1.0 g) 经Sephadex LH-20柱色谱(甲醇) 洗脱, 合并得到6个组分Fr.3.8.1~Fr.3.8.6, Fr.3.8.6 (107.0 mg) 经过半制备液相(乙腈-水, 90∶10) 纯化得化合物2 (t_R = 15.4 min; 4.1 mg)。Fr.3.9 (3.0 g) 经Sephadex LH-20柱色谱(甲醇) 洗脱, 合并得4个组分Fr.3.9.1~Fr.3.9.4。Fr.3.9.4 (1.2 g) 经Sephadex LH-20柱色谱(甲醇) 洗脱, 合并得8个组分Fr.3.9.4.1~Fr.3.9.4.8。Fr.3.9.4.3经半制备液相(甲醇-水, 85∶15) 纯化得化合物17 (t_R = 14.1 min; 47.8 mg)。Fr.3.9.4.6 (104.0 mg) 经半制备液相(乙腈-水, 70∶30) 纯化得化合物1 (t_R = 48.5 min; 10.7 mg)。Fr.3.18 (101.0 g) 经MCI柱色谱分离, 以甲醇-水(10∶90→100∶0) 梯度洗脱, 合并得10个组分Fr.3.18.1~Fr.3.18.10。Fr.3.18.2 (3.8 g) 经硅胶柱色谱分离, 以二氯甲烷-甲醇(50∶1→0∶1) 洗脱后, 合并得7个组分Fr.3.18.2.1~Fr.3.18.2.7。Fr.3.18.2.2 (0.6 g) 再经过半制备高效液相色谱(甲醇-水, 70∶30) 纯化得到化合物18 (t_R = 4.0 min; 7.6 mg)。Fr.3.18.4 (5.8 g) 经硅胶柱色谱分离, 以二氯甲烷-甲醇(50∶1→0∶1) 洗脱后, 合并得5个组分Fr.3.18.4.1~Fr.3.18.4.5。Fr.3.18.4.2再经过半制备高效液相色谱(甲醇-水, 65∶35) 纯化得化合物19 (t_R = 4.3 min; 2.0 mg) 和化合物3 (t_R = 8.8 min; 24.1 mg)。Fr.3.18.6 (12.8 g) 经过Sephadex LH-20柱色谱(甲醇) 洗脱, 合并得6个组分Fr.3.18.6.1~Fr.3.18.6.6。Fr.3.18.6.3经半制备高效液相(甲醇-水, 41∶59) 进一步纯化得化合物13 (t_R = 33.1 min; 17.4 mg)。Fr.3.19 (16.5 g) 经MCI柱色谱分离, 以甲醇-水(10∶90→100∶0) 梯度洗脱, 合并得到7个组分Fr.3.19.1~Fr.3.19.7。Fr.3.19.3经过半制备高效液相色谱(甲醇-水, 52∶48) 纯化得到化合物14 (t_R = 11.4 min; 4.5 mg)。Fr.3.19.4经硅胶柱色谱分离, 以二氯甲烷-甲醇(50∶1→0∶1) 梯度洗脱后, 经过半制备高效液相色谱(甲醇-水, 36∶64) 进一步纯化, 得到化合物11 (t_R = 17.8 min; 6.0 mg)、6 (t_R = 27.5 min; 8.3 mg)、12 (t_R = 55.1 min; 17.4 mg)、7 (t_R = 57.7 min; 18.5 mg) 和8 (t_R = 66.0 min; 9.7 mg)。

Fr.5 (30.1 g) 经MCI柱色谱分离, 以甲醇-水(10∶90→100∶0) 梯度洗脱, 合并得到6个组分Fr.5.1~Fr.5.6。Fr.5.2经Sephadex LH-20柱色谱(甲醇) 洗脱, 合并得8个组分Fr.5.2.1~Fr.5.2.8。Fr.5.2.2经硅胶柱色谱分离, 以二氯甲烷-甲醇系统(100∶0→0∶100) 梯度洗脱, 合并得8个组分Fr.5.2.2.1~Fr.5.2.2.8。Fr.5.2.2.3经半制备高效液相(乙腈-水, 23∶77) 纯化得化合物10 (t_R = 6.0 min; 8.0 mg)、15 (t_R = 27.2 min; 4.0 mg)。Fr.5.2.5经半制备高效液相(乙腈-水, 14∶86) 纯化得化合物4 (t_R = 11.1 min; 7.1 mg)、5 (t_R = 20.0 min; 5.4 mg)。Fr.5.4经Sephadex LH-20柱色谱(甲醇) 洗脱, 合并得5个组分Fr.5.4.1~Fr.5.4.5。Fr.5.4.1经半制备高效液相(乙腈-水, 26∶74) 进一步纯化, 得到化合物9 (t_R = 35.2 min; 9.7 mg)。

2 结构鉴定

化合物1 棕色油状物, HR-ESI-MS m/z: 393.205 8 [M-H₂O+H]⁺ (calcd. 393.206 0), 分子式为C₂₅H₃₀O₅; [α]_D²⁵= -46.8 (c 0.05, MeOH); UV (MeOH) λ_max (log ε): 220.20 (3.41), 348.20 (3.11); IR ν_max 3 363, 2 944, 2 836, 1 627, 1 554, 1 504, 1 342, 1 036 cm^-1; ¹H NMR (500 MHz, CD₃OD) 和¹³C NMR (125 MHz, CD₃OD) 数据见表 1。

化合物2 黄色粉末, ESI-MS m/z: 461 [M+H]⁺, 分子式为C₃₀H₃₆O₄。¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ: 12.34 (1H, s, 5-OH), 7.42~7.29 (5H, m, H-2′, 3′, 4′, 5′, 6′), 6.14 (1H, s, 7-OH), 5.95 (1H, s, H-6), 5.34 (1H, dd, J = 12.9, 2.9 Hz, H-2), 5.21 (1H, t, J = 7.0 Hz, H-2″), 5.02 (2H, q, J = 5.9 Hz, H-6″, 10″), 3.32 (2H, d, J = 7.1 Hz, H-1″), 3.02 (1H, dd, J = 17.1, 13.0 Hz, H-3a), 2.76 (1H, dd, J = 17.1, 3.0 Hz, H-3b), 2.04 (4H, dt, J = 18.3, 6.1 Hz, H-4″, 5″), 1.94 (4H, dt, J = 36.4, 7.4 Hz, H-8″, 9″), 1.76 (3H, s, H-13″), 1.61 (3H, s, H-12″), 1.53 (6H, s, H-14″, 15″); ¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃) δ: 195.9 (C-4), 164.0 (C-7), 161.2 (C-5), 161.0 (C-9), 139.6 (C-3″), 138.5 (C-1′), 135.7 (C-7″), 131.3 (C-11″), 128.8 (C-2′, 6′), 128.8 (C-4′), 126.1 (C-3′, 5′), 124.4 (C-10″), 123.5 (C-6″), 121.2 (C-2″), 106.8 (C-8), 102.9 (C-10), 95.7 (C-6), 79.1 (C-2), 43.5 (C-3), 39.7 (C-4″), 39.7 (C-8″), 26.7 (C-9″), 26.2 (C-5″), 25.7 (C-12″), 21.1 (C-1″), 17.7 (C-15″), 16.2 (C-13″), 16.0 (C-14″)。以上数据经查阅文献^[15]报道, 鉴定化合物2为sumadain D。

化合物3 黄绿色粉末, ESI-MS m/z: 303 [M+H]⁺, 分子式为C₁₅H₁₀O₇。¹H NMR (500 MHz, CD₃OD) δ: 7.72 (1H, d, J = 1.5 Hz, H-2′), 7.62 (1H, d, J = 8.4 Hz, H-6′), 6.87 (1H, d, J = 8.5 Hz, H-5′), 6.38 (1H, s, H-8), 6.17 (1H, d, J = 1.0 Hz, H-6); ¹³C NMR (125 MHz, CD₃OD) δ: 177.3 (C-4), 165.6 (C-7), 162.5 (C-5), 158.2 (C-9), 148.8 (C-4′), 148.0 (C-2), 146.3 (C-3′), 137.2 (C-3), 124.1 (C-1′), 121.7 (C-6′), 116.2 (C-5′), 116.0 (C-2′), 104.5 (C-10), 99.2 (C-6), 94.4 (C-8)。以上数据经查阅文献^[16]报道, 鉴定化合物3为槲皮素(quercetin)。

化合物4 白色粉末, ESI-MS m/z: 291 [M+H]⁺, 分子式为C₁₅H₁₄O₆。¹H NMR (500 MHz, CD₃OD) δ: 6.83 (1H, d, J = 1.9 Hz, H-2′), 6.75 (1H, d, J = 8.1 Hz, H-5′), 6.71 (1H, dd, J = 8.2, 1.9 Hz, H-6′), 5.92 (1H, d, J = 2.3 Hz, H-8), 5.84 (1H, d, J = 2.3 Hz, H-6), 4.55 (1H, d, J = 7.5 Hz, H-2), 3.96 (1H, td, J = 7.9, 5.5 Hz, H-3), 2.84 (1H, dd, J = 16.1, 5.4 Hz, H-4a), 2.49 (1H, dd, J = 16.1, 8.2 Hz, H-4b); ¹³C NMR (125 MHz, CD₃OD) δ: 157.8 (C-7), 157.6 (C-5), 156.9 (C-9), 146.3 (C-3′), 146.2 (C-4′), 132.2 (C-1′), 120.0 (C-5′), 116.1 (C-6′), 115.2 (C-2′), 100.8 (C-10), 96.3 (C-6), 95.5 (C-8), 82.9 (C-2), 68.8 (C-3), 28.5 (C-4)。以上数据经查阅文献^[17]报道, 鉴定化合物4为儿茶素(catechin)。

化合物5 黄色粉末, ESI-MS m/z: 291 [M+H]⁺, 分子式为C₁₅H₁₄O₆。¹H NMR (500 MHz, CD₃OD) δ: 6.96 (1H, d, J = 1.9 Hz, H-2′), 6.79 (1H, dd, J = 8.3, 1.9 Hz, H-6′), 6.75 (1H, d, J = 8.1 Hz, H-5′), 5.93 (1H, d, J = 1.6 Hz, H-8), 5.90 (1H, d, J = 2.2 Hz, H-6), 4.81 (1H, s, H-2), 4.17 (1H, ddd, J = 4.5, 3.0, 1.4 Hz, H-3), 2.85 (1H, dd, J = 16.7, 4.6 Hz, H-4a), 2.73 (1H, dd, J = 16.8, 2.7 Hz, H-4b); ¹³C NMR (125 MHz, CD₃OD) δ: 158.0 (C-5), 157.6 (C-7), 157.3 (C-9), 146.0 (C-3′), 145.8 (C-4′), 132.3 (C-1′), 119.4 (C-6′), 115.9 (C-2′), 115.3 (C-5′), 100.1 (C-10), 96.4 (C-6), 95.6 (C-8), 79.9 (C-2), 67.5 (C-3), 29.3 (C-4)。以上数据经查阅文献^[18]报道, 鉴定化合物5为表儿茶素(epicatechin)。

化合物6 绿色油状物, ESI-MS m/z: 314 [M+H]⁺, 分子式为C₁₈H₁₉NO₄。¹H NMR (500 MHz, CD₃OD) δ: 7.35 (1H, d, J = 1.9 Hz, H-2′), 6.98 (2H, d, J = 8.4 Hz, H-2, 6), 6.92 (1H, dd, J = 8.2, 1.9 Hz, H-6′), 6.73 (1H, d, J = 8.2 Hz, H-5′), 6.69~6.66 (2H, m, H-3, 5), 6.60 (1H, d, J = 12.6 Hz, H-7′), 5.80 (1H, d, J = 12.6 Hz, H-8′), 3.82 (3H, s, 3′-OCH₃), 3.42~3.34 (2H, m, H-8), 2.72~2.63 (2H, m, H-7); ¹³C NMR (125 MHz, CD₃OD) δ: 170.3 (C-9′), 156.9 (C-4), 148.6 (C-4′), 148.5 (C-3′), 138.4 (C-7′), 131.1 (C-1), 130.7 (C-2, 6), 128.5 (C-1′), 124.8 (C-6′), 121.6 (C-8′), 116.2 (C-3, 5), 115.8 (C-5′), 113.9 (C-2′), 56.4 (3′-OCH₃), 42.3 (C-8), 35.6 (C-7)。以上数据经查阅文献^[19]报道, 鉴定化合物6为N-顺式阿魏酰酪胺(N-cis-feruloyltyramine)。

化合物7 棕色油状物, ESI-MS m/z: 314 [M+H]⁺, 分子式为C₁₈H₁₉NO₄。¹H NMR (500 MHz, CD₃OD) δ: 7.42 (1H, d, J = 15.7 Hz, H-7′), 7.09 (1H, d, J = 1.9 Hz, H-2′), 7.06~7.02 (2H, m, H-2, 6), 7.00 (1H, dd, J = 8.2, 1.9 Hz, H-6′), 6.78 (1H, d, J = 8.2 Hz, H-5′), 6.73~6.69 (2H, m, H-3, 5), 6.39 (1H, d, J = 15.7 Hz, H-8′), 3.86 (3H, s, 3′-OCH₃), 3.49~3.41 (2H, m, H-8), 2.74 (2H, t, J = 7.4 Hz, H-7); ¹³C NMR (125 MHz, CD₃OD) δ: 169.2 (C-9′), 156.9 (C-4), 149.8 (C-4′), 149.3 (C-3′), 142.0 (C-7′), 131.3 (C-1), 130.7 (C-2, 6), 128.2 (C-1′), 123.2 (C-6′), 118.7 (C-8′), 116.4 (C-5′), 116.3 (C-3, 5), 111.5 (C-2′), 56.4 (3′-OCH₃), 42.5 (C-8), 35.8 (C-7)。以上数据经查阅文献^[20]报道, 鉴定化合物7为N-反式阿魏酰酪胺(N-trans-feruloyltyramine)。

化合物8 白绿色油状物, ESI-MS m/z: 344 [M+H]⁺, 分子式为C₁₉H₂₁NO₅。¹H NMR (500 MHz, CD₃OD) δ: 7.43 (1H, d, J = 15.7 Hz, H-7′), 7.10 (1H, s, H-2′), 7.01 (1H, d, J = 8.1 Hz, H-6′), 6.80 (1H, s, H-2), 6.78 (1H, d, J = 8.2 Hz, H-5′), 6.72 (1H, dd, J = 8.1, 4.2 Hz, H-5), 6.68~6.63 (1H, m, H-6), 6.40 (1H, d, J = 15.7 Hz, H-8′), 3.86 (3H, s, 3′-OCH₃), 3.81 (3H, s, 3-OCH₃), 3.47 (2H, t, J = 7.3 Hz, H-8), 2.76 (2H, t, J = 7.3 Hz, H-7); ¹³C NMR (125 MHz, CD₃OD) δ: 169.2 (C-9′), 149.8 (C-3′), 149.3 (C-3), 148.9 (C-4′), 146.0 (C-4), 142.0 (C-7′), 132.0 (C-1), 128.3 (C-1′), 123.2 (C-6′), 122.2 (C-6), 118.7 (C-8′), 116.5 (C-5′), 116.2 (C-5), 113.4 (C-2), 111.5 (C-2′), 56.4 (3′-OCH₃), 56.3 (3-OCH₃), 42.5 (C-8), 36.20 (C-7)。以上数据经查阅文献^[21]报道, 鉴定化合物8为N-反式-阿魏酰-3-甲氧基酪胺(N-trans-feruloyl-3-methoxytyramine)。

化合物9 黄色油状物, ESI-MS m/z: 685 [M+H]⁺, 分子式为C₃₈H₄₀N₂O₁₀。¹H NMR (500 MHz, CD₃OD) δ: 7.27 (1H, s, H-4), 6.93 (2H, d, J = 8.4 Hz, H-2″, 6″), 6.82 (2H, d, J = 8.4 Hz, H-2‴, 6‴), 6.76 (1H, s, H-5), 6.66~6.61 (4H, m, H-3″, 3‴, 5″, 5‴), 6.33 (2H, s, H-2′, 6′), 4.84 (1H, s, H-1), 3.91 (3H, s, 6-OCH₃), 3.69 (1H, s, H-2) 3.69 (6H, s, 3′, 5′-OCH₃), 3.57 (3H, s, 8-OCH₃), 3.40 (1H, dd, J = 13.4, 7.0 Hz, H-a), 3.37~3.32 (2H, m, H-a′), 3.19 (1H, dt, J = 13.6, 6.9 Hz, H-a), 2.67 (2H, t, J = 7.2 Hz, H-b′), 2.53 (2H, td, J = 6.7, 2.6 Hz, H-b); ¹³C NMR (125 MHz, CD₃OD) δ: 174.0 (C-2a), 170.0 (C-3a), 156.9 (C-4″ or 4‴), 156.8 (C-4″ or 4‴), 149.2 (C-6), 149.0 (C-3′, 5′), 147.0 (C-8), 143.1 (C-7), 135.3 (C-1′), 135.2 (C-4), 135.1 (C-4′), 131.3 (C-1‴), 131.1 (C-1″), 130.8 (C-2″, 6″), 130.8 (C-2‴, 6‴), 127.1 (C-3), 125.2 (C-8a), 124.3 (C-4a), 116.2 (C-3″, 5″ or 3‴, 5‴), 116.2 (C-3″, 5″ or 3‴, 5‴), 109.0 (C-5), 106.0 (C-2′, 6′), 60.8 (8-OCH₃), 56.8 (6-OCH₃), 56.7 (3′, 5′-OCH₃), 50.2 (C-2), 42.8 (C-a), 42.5 (C-a′), 41.6 (C-1), 35.6 (C-b′), 35.4 (C-b)。以上数据经查阅文献^[22]报道, 鉴定化合物9为flavifloramides B。

化合物10 油状物, ESI-MS m/z: 194 [M+H]⁺, 分子式为C₁₀H₁₁NO₃。¹H NMR (500 MHz, CD₃OD) δ: 7.34 (1H, s, H-8), 6.82 (1H, s, H-5), 3.90 (3H, s, 6-OCH₃), 3.45 (2H, t, J = 6.8 Hz, H-3), 2.88 (2H, t, J = 6.7 Hz, H-4); ¹³C NMR (125 MHz, CD₃OD) δ: 168.6 (C-1), 152.8 (C-6), 146.6 (C-7), 133.6 (C-10), 122.4 (C-9), 114.9 (C-8), 111.1 (C-5), 56.5 (6-OCH₃), 41.2 (C-3), 28.7 (C-4)。以上数据经查阅文献^[23]报道, 鉴定化合物10为northalifoline。

化合物11 白色油状物, ESI-MS m/z: 361 [M+H]⁺, 分子式为C₂₀H₂₄O₆。¹H NMR (500 MHz, CD₃OD) δ: 6.73 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-5′), 6.67 (1H, d, J = 1.9 Hz, H-2′), 6.65 (1H, s, H-2), 6.61 (1H, dd, J = 8.0, 1.9 Hz, H-6′), 6.17 (1H, s, H-5), 3.81~3.78 (1H, m, H-7′), 3.80 (3H, s, 3′-OCH₃), 3.77 (3H, s, 3-OCH₃), 3.72~3.61 (3H, m, H-9, 9′a), 3.39 (1H, dd, J = 11.3, 4.1 Hz, H-9′b), 2.77 (2H, d, J = 7.7 Hz, H-7), 2.06~1.94 (1H, m, H-8), 1.75 (1H, tt, J = 10.1, 3.6 Hz, H-8′); ¹³C NMR (125 MHz, CD₃OD) δ: 149.0 (C-3′), 147.2 (C-3), 146.0 (C-4′), 145.3 (C-4), 138.6 (C-1′), 134.1 (C-6), 129.0 (C-1), 123.2 (C-6′), 117.3 (C-5), 116.0 (C-5′), 113.8 (C-2′), 112.4 (C-2), 65.9 (C-9), 62.1 (C-9′), 56.4 (3 or 3′-OCH₃), 56.3 (3 or 3′-OCH₃), 48.0 (C-8′), 48.0 (C-7′), 40.0 (C-8), 33.6 (C-7)。以上数据经查阅文献^[24]报道, 鉴定化合物11为异落叶松脂素(isolariciresinol)。

化合物12 白色油状物, ESI-MS m/z: 419 [M+H]⁺, 分子式为C₂₂H₂₆O₈。¹H NMR (500 MHz, CD₃OD) δ: 6.64 (4H, s, H-2, 2′, 6, 6′), 4.69 (2H, d, J = 4.3 Hz, H-7, 7′), 4.24 (2H, dd, J = 9.0, 6.8 Hz, H-9a, 9′a), 3.86 (2H, dd, J = 9.2, 3.5 Hz, H-9b, 9′b), 3.82 (12H, s, 3, 5, 3′, 5′-OCH₃), 3.12 (2H, dd, J = 6.4, 4.7 Hz, H-8, 8′); ¹³C NMR (125 MHz, CD₃OD) δ: 149.3 (C-3, 3′, 5, 5′), 136.2 (C-4, 4′), 133.1 (C-1, 1′), 104.5 (C-2, 2′, 6, 6′), 87.6 (C-7, 7′), 72.7 (C-9, 9′), 56.8 (3, 5, 3′, 5′-OCH₃), 55.5 (C-8, 8′)。以上数据经查阅文献^[25]报道, 鉴定化合物12为丁香树脂酚(syringaresinol)。

化合物13 透明油状物, ESI-MS m/z: 359 [M+H]⁺, 分子式为C₂₀H₂₂O₆。¹H NMR (500 MHz, CD₃OD) δ: 6.93 (2H, d, J = 1.5 Hz, H-2, 2′), 6.79 (2H, d, J = 8.2 Hz, H-6, 6′), 6.76 (2H, d, J = 8.1 Hz, H-5, 5′), 4.69 (2H, d, J = 3.9 Hz, H-7, 7′), 4.24~4.18 (2H, m, H-9a, 9a′), 3.84 (6H, s, 3, 3′-OCH₃), 3.83~3.80 (2H, m, H-9b, 9b′), 3.12 (2H, s, H-8, 8′); ¹³C NMR (125 MHz, CD₃OD) δ: 149.1 (C-3, 3′), 147.3 (C-4, 4′), 133.8 (C-1, 1′), 120.0 (C-6, 6′), 116.1 (C-5, 5′), 111.0 (C-2, 2′), 87.5 (C-7, 7′), 72.6 (C-9, 9′), 56.4 (3, 3′-OCH₃), 55.3 (C-8, 8′)。以上数据经查阅文献^[26]报道, 鉴定化合物13为松脂素(pinoresinol)。

化合物14 黄色油状物, ESI-MS m/z: 389 [M+H]⁺, 分子式为C₂₁H₂₄O₇。¹H NMR (500 MHz, CD₃OD) δ: 6.94 (1H, d, J = 1.8 Hz, H-2), 6.80 (1H, dd, J = 8.1, 1.8 Hz, H-6), 6.76 (1H, d, J = 8.1 Hz, H-5), 6.65 (2H, s, H-2′, 6′), 4.70 (2H, d, J = 4.3 Hz, H-7, 7′), 4.24 (2H, ddd, J = 9.0, 6.8, 4.5 Hz, H-9a, 9′a), 3.87 (2H, dd, J = 6.6, 3.0 Hz, H-9b, 9′b), 3.85 (3H, s, 3-OCH₃), 3.84 (6H, s, 3′, 5′-OCH₃), 3.16~3.10 (2H, m, H-8, 8′); ¹³C NMR (125 MHz, CD₃OD) δ: 149.4 (C-3′, 5′), 149.1 (C-3), 147.3 (C-4), 136.2 (C-4′), 133.8 (C-1), 133.2 (C-1′), 120.1 (C-6), 116.1 (C-5), 111.0 (C-2), 104.5 (C-2′, 6′), 87.7 (C-7′), 87.5 (C-7), 72.7 (C-9′), 72.6 (C-9), 56.8 (3′, 5′-OCH₃), 56.4 (3-OCH₃), 55.6 (C-8′), 55.3 (C-8)。以上数据经查阅文献^[27,28]报道, 鉴定化合物14为皮树脂醇(medioresinol)。

化合物15 淡黄色粉末, ESI-MS m/z: 361 [M+H]⁺, 分子式为C₂₀H₂₄O₆。¹H NMR (500 MHz, CD₃OD) δ: 6.94 (1H, d, J = 1.9 Hz, H-2), 6.82 (1H, dd, J = 8.2, 1.8 Hz, H-6), 6.75 (1H, d, J = 8.1 Hz, H-5), 6.72 (2H, s, H-4′, 6′), 5.48 (1H, d, J = 6.3 Hz, H-7), 3.84 (3H, s, 3′-OCH₃), 3.82 (1H, d, J = 5.7 Hz, H-9a), 3.80 (3H, s, 3-OCH₃), 3.75 (1H, dd, J = 11.0, 7.2 Hz, H-9b), 3.56 (2H, t, J = 6.5 Hz, H-9′), 3.46 (1H, dd, J = 12.5, 6.3 Hz, H-8), 2.65~2.59 (2H, m, H-7′), 1.81 (2H, tt, J = 13.1, 6.5 Hz, H-8′); ¹³C NMR (125 MHz, CD₃OD) δ: 149.1 (C-3), 147.5 (C-4), 147.5 (C-2′), 145.2 (C-3′), 136.9 (C-5′), 134.8 (C-1), 129.9 (C-1′), 119.7 (C-6), 117.9 (C-6′), 116.1 (C-5), 114.1 (C-4′), 110.5 (C-2), 89.0 (C-7), 65.0 (C-9), 62.2 (C-9′), 56.7 (3-OCH₃), 56.4 (3′-OCH₃), 55.5 (C-8), 35.8 (C-8′), 32.9 (C-7′)。以上数据经查阅文献^[29]报道, 鉴定化合物15为二氢去氢二愈创木基醇(dehydroconiferyl alcohol)。

化合物16黄色油状物, ESI-MS m/z: 333 [M+H]⁺, 分子式为C₂₀H₂₈O₄。¹H NMR (500 MHz, CD₃OD) δ: 6.57 (1H, d, J = 3.0 Hz, H-5), 6.56 (1H, d, J = 3.0 Hz, H-3), 5.30 (1H, td, J = 7.3, 1.1 Hz, H-2′), 5.10 (1H, ddd, J = 7.0, 4.1, 1.3 Hz, H-6′), 3.69 (3H, s, 4-OCH₃), 3.67 (3H, s, H-9), 3.62 (2H, s, H-7), 3.29 (2H, s, H-1′), 2.12 (2H, dd, J = 14.3, 7.1 Hz, H-5′), 2.08~2.02 (2H, m, H-4′), 1.69 (3H, s, H-10′), 1.65 (3H, s, H-9′), 1.59 (3H, s, H-8′); ¹³C NMR (125 MHz, CD₃OD) δ: 174.7 (C-8), 154.8 (C-4), 147.7 (C-1), 137.7 (C-3′), 132.4 (C-7′), 131.9 (C-6), 125.3 (C-6′), 124.8 (C-2′), 123.5 (C-2), 115.2 (C-5), 114.4 (C-3), 56.0 (4-OCH₃), 52.5 (C-9), 40.9 (C-4′), 37.2 (C-7), 29.4 (C-1′), 27.7 (C-5′), 25.9 (C-9′), 17.8 (C-8′), 16.2 (C-10′)。以上数据经查阅文献^[30]报道, 鉴定化合物16为4-methoxyl-denudaquinol。

化合物17黄绿色粉末, ESI-MS m/z: 275 [M+H]⁺, 分子式为C₁₇H₂₂O₃。¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ: 10.82 (2H, s, 2, 5-OH), 9.72 (1H, s, -CHO), 6.91 (1H, s, H-4), 6.77 (1H, s, H-6), 5.23 (1H, t, J = 6.8 Hz, H-2′), 5.04 (1H, t, J = 6.0 Hz, H-6′), 3.28 (2H, d, J = 7.1 Hz, H-1′), 2.09~1.95 (4H, m, H-4′, 5′), 1.63 (3H, s, H-10′), 1.62 (3H, s, H-9′), 1.53 (3H, s, H-8′); ¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃) δ: 196.3 (-CHO), 154.0 (C-2), 148.2 (C-5), 137.7 (C-3′), 132.0 (C-3), 131.5 (C-7′), 125.3 (C-4), 124.1 (C-6′), 120.7 (C-2′), 119.6 (C-1), 115.2 (C-6), 39.7 (C-4′), 27.0 (C-1′), 26.5 (C-5′), 25.6 (C-9′), 17.7 (C-8′), 16.1 (C-10′), 以上数据经查阅文献^[31]报道, 鉴定化合物17为miliusanal。

化合物18白色晶体, ESI-MS m/z: 199 [M+H]⁺, 分子式为C₉H₁₀O₅。¹H NMR (500 MHz, CD₃OD) δ: 7.32 (2H, s, H-2, 6), 3.87 (6H, s, 3, 5-OCH₃); ¹³C NMR (125 MHz, CD₃OD) δ: 170.0 (-COOH), 148.8 (C-3, 5), 141.7 (C-4), 121.9 (C-1), 108.3 (C-2, 6), 56.8 (3, 5-OCH₃)。以上数据经查阅文献^[32]报道, 鉴定化合物18为丁香酸(syringic acid)。

化合物19黄棕色粉末, ESI-MS m/z: 265 [M+H]⁺, 分子式为C₁₅H₂₀O₄。¹H NMR (500 MHz, CD₃OD) δ: 7.77 (1H, d, J = 16.1 Hz, H-4), 6.23 (1H, d, J = 16.2 Hz, H-5), 5.91 (1H, s, H-8), 5.74 (1H, s, H-2), 2.52 (1H, d, J = 16.9 Hz, H-10a), 2.17 (1H, d, J = 17.0 Hz, H-10b), 2.03 (3H, d, J = 0.9 Hz, H-15), 1.92 (3H, d, J = 1.2 Hz, H-14), 1.06 (3H, s, H-12), 1.02 (3H, s, H-13); ¹³C NMR (125 MHz, CD₃OD) δ: 201.0 (C-9), 169.5 (C-1), 166.5 (C-3), 151.1 (C-7), 137.9 (C-5), 129.4 (C-4), 127.6 (C-8), 119.6 (C-2), 80.6 (C-6), 50.7 (C-10), 42.9 (C-11), 24.6 (C-15), 23.6 (C-13), 21.2 (C-14), 19.6 (C-12)。以上数据经查阅文献^[33]报道, 鉴定化合物19为脱落酸(abscisic acid)。

化合物20晶体, ESI-MS m/z: 265 [M+H]⁺, 分子式为C₁₈H₁₆O₂。¹H NMR (500 MHz, CD₃OD) δ: 7.73 (1H, d, J = 16.0 Hz, H-3), 7.63~7.59 (2H, m, H-5, 9), 7.45~7.42 (2H, m, H-5′, 9′), 7.42~7.39 (3H, m, H-6, 7, 8), 7.32 (2H, dd, J = 10.3, 4.8 Hz, H-6′, 8′), 7.26~7.22 (1H, m, H-7′), 6.73 (1H, d, J = 15.9 Hz, H-3′), 6.57 (1H, d, J = 16.0 Hz, H-2), 6.40 (1H, dt, J = 15.9, 6.3 Hz, H-2′), 4.86 (2H, d, J = 1.3 Hz, H-1′); ¹³C NMR (125 MHz, CD₃OD) δ: 168.4 (C-1), 146.5 (C-3), 137.8 (C-4′), 135.8 (C-4), 135.2 (C-3′), 131.6 (C-7), 130.0 (C-6, 8), 129.7 (C-6′, 8′), 129.3 (C-5, 9), 129.1 (C-7′), 127.6 (C-5′, 9′), 124.5 (C-2′), 118.8 (C-2), 66.2 (C-1′)。以上数据经查阅文献^[34,35]报道, 鉴定化合物20为桂酸桂酯[(E)-cinnamyl-(E)-cinnamate]。

3 NMR和ECD谱计算

应用Gaussian 09软件在MMFF94分子力场中对化合物使用7 kcal·mol^-1的能量窗进行构象搜索。应用Gaussian 09^[36]程序, 依次在PM6和B3LYP/6-31+G(d) 水平上, 对搜索获得的构象进行优化得到优化构象。在mPW1PW91/6-311+G(2d, p) 水平上, 用GIAO算法(Gauge‐independent atomic orbital)^[37]和IEFPCM模型模拟溶剂效应计算优化构象的NMR, 再通过加权平均化, 拟合得到理论计算的¹H和¹³C NMR数据, 再经DP4+概率分析, 进行确证。基于含时密度泛函理论(TD-DFT), 在B3LYP/6-311G(d, p) 水平上对优化构象进行ECD计算。通过重叠高斯函数拟合得到ECD谱。

4 体外抗肿瘤活性评价

采用MTT法测定化合物抗肿瘤活性, 取对数生长期的人胃癌细胞系MGC-803, 弃去原培养液, 用2 mL磷酸盐缓冲液PBS洗涤2遍, 用1 mL胰酶消化后离心, 弃上清, 之后用10%胎牛血清RPMI-1640培养基稀释, 以每毫升5×10⁴个接种至96孔板中, 每孔100 µL, 置于37 ℃、5% CO₂培养箱中培养24 h, 弃去孔内上清液, 空白组加入200 µL不含胎牛血清的RPMI-1640培养基, 实验组中加入200 µL相应浓度的含药培养基, 每组设置3个复孔, 继续培养48 h。弃去孔内上清液, 每孔加入100 µL RPMI-1640培养基和20 µL MTT (5 mg·mL^-1), 放入培养箱中继续培养4 h, 弃去孔内上清液, 每孔加入150 µL DMSO于摇床上振荡10 min。用酶标仪570 nm波长处测定吸光度(A) 值, 根据公式计算细胞抑制率, 并用IBM SPSS Statistics 26计算细胞的IC₅₀值。抑制率= 1-A_实验/A_空白, A_实验为实验组的吸光度, A_空白为空白组的吸光度。

作者贡献: 张珊珊负责化合物的分离、结构鉴定及文章的撰写; 韩月对化合物的分离、结构鉴定提供帮助; 侯亚迪和魏雨婕负责化合物的抗肿瘤活性筛选; 孙孝亚对实验中遇到的问题给予指导并负责相关稿件的修改; 陈随清负责实验设计、稿件修改等工作。

利益冲突: 作者声明不存在任何利益冲突。

基金

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河南省科技攻关项目(212102310353)
国家自然科学基金资助项目(81773859)

参考文献

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文献

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2024年第59卷第6期

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doi: 10.16438/j.0513-4870.2023-1279

接收时间：2023-11-10
首发时间：2025-11-26
出版时间：2024-06-12

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出版历史

收稿日期：2023-11-10
修回日期：2024-02-19

基金

河南省科技攻关项目(212102310353)

国家自然科学基金资助项目(81773859)

作者信息

1.河南中医药大学, 河南郑州 450046

2.河南省中药资源与中药化学重点实验室, 河南郑州 450046

3.呼吸疾病中医药防治省部共建协同创新中心, 河南郑州 450046

通讯作者:

^*孙孝亚, E-mail: sxy7336@163.com;

陈随清, E-mail: suiqingchen0371@163.com

参考文献

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https://castjournals.cast.org.cn/joweb/yxxb/CN/10.16438/j.0513-4870.2023-1279

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本文的引用情况

2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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TxT

No.	δ_H	δ_C
1		137.1
2, 6	7.60 (2H, d, J = 12.3 Hz)	129.1
3, 5	7.44-7.33 (2H, m)	130.0
4	7.44-7.33 (1H, m)	131.0
β	7.62 (1H, d, J = 15.7 Hz)	141.8
α	8.00 (1H, d, J = 15.7 Hz)	129.6
C=O		194.1
1′		105.9
2′		166.2
3′		104.6
4′		161.4
5′	5.86 (1H, s)	95.3
6′		164.3
1″	3.48 (1H, s)	30.0
2″	1.88 (1H, d, J = 12.6 Hz) 1.73 (1H, d, J = 12.6 Hz)	37.9
3″		78.0
4″	2.02 (1H, d, J = 13.3 Hz) 1.66-1.58 (1H, m)	41.4
5″	1.66-1.58 (1H, m) 1.31-1.26 (1H, m)	23.7
6″	1.31-1.26 (1H, m)	51.4
7″	1.44 (3H, s)	29.3
8″	1.38-1.34 (1H, m)	30.8
9″	1.09 (3H, d, J = 6.5 Hz)	23.2
10″	0.74 (3H, d, J = 6.5 Hz)	20.8

No.

δ_H

δ_C

137.1

2, 6

7.60 (2H, d, J = 12.3 Hz)

129.1

3, 5

7.44-7.33 (2H, m)

130.0

7.44-7.33 (1H, m)

131.0

7.62 (1H, d, J = 15.7 Hz)

141.8

8.00 (1H, d, J = 15.7 Hz)

129.6

C=O

194.1

1′

105.9

2′

166.2

3′

104.6

4′

161.4

5′

5.86 (1H, s)

95.3

6′

164.3

1″

3.48 (1H, s)

30.0

2″

1.88 (1H, d, J = 12.6 Hz)
1.73 (1H, d, J = 12.6 Hz)

37.9

3″

78.0

4″

2.02 (1H, d, J = 13.3 Hz)
1.66-1.58 (1H, m)

41.4

5″

1.66-1.58 (1H, m)
1.31-1.26 (1H, m)

23.7

6″

1.31-1.26 (1H, m)

51.4

7″

1.44 (3H, s)

29.3

8″

1.38-1.34 (1H, m)

30.8

9″

1.09 (3H, d, J = 6.5 Hz)

23.2

10″

0.74 (3H, d, J = 6.5 Hz)

20.8

Method	(1″R, 3″S, 6″R)-1	(1″R, 3″S, 6″S)-1	(1″S, 3″S, 6″R)-1	(1″R, 3″R, 6″R)-1
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DP4+ (C data)	0.04%	0.00%	92.01%	7.94%
DP4+ (all data)	0.00%	0.00%	100.00%	0.00%

Method

(1″R, 3″S, 6″R)-1

(1″R, 3″S, 6″S)-1

(1″S, 3″S, 6″R)-1

(1″R, 3″R, 6″R)-1

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0.00%

100.00%

0.00%

DP4+ (C data)

0.04%

0.00%

92.01%

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0.00%

100.00%

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Compound	IC₅₀/μmol·L^-1	Compound	IC₅₀/μmol·L^-1
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8	> 100	18	> 100
9	> 100	19	> 100
10	> 100	20	89.26

Compound

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Compound

IC₅₀/μmol·L^-1

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> 100

23.41

> 100

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> 100

98.83

> 100

20.96

> 100

89.26