药学学报

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1′	104.9	4.91 d (7.7)

绞股蓝中4个新达玛烷型三萜皂苷的分离鉴定

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杨光 ¹^,² , 梁海珍 ² , 张洁 ² , 陈晓娟 ² , 郭宝林 ³ , 马百平 ¹^,²^,^*

药学学报 | 研究论文 2024,59(8): 2288-2294

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药学学报 | 研究论文 2024, 59(8): 2288-2294

绞股蓝中4个新达玛烷型三萜皂苷的分离鉴定

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杨光¹^,², 梁海珍², 张洁², 陈晓娟², 郭宝林³, 马百平¹^,²^,^*

作者信息

1.广东药科大学, 广东广州 510006

2.军事科学院军事医学研究院辐射医学研究所, 北京 100850

3.中国医学科学院、北京协和医学院药用植物研究所, 北京 100193

通讯作者:

^*马百平, Tel: 86-10-66930265, E-mail: mabaiping@sina.com

Four new dammarane-type triterpenoid saponins from Gynostemma pentaphyllum (Thunb.) Makino

Guang YANG¹^,², Hai-zhen LIANG², Jie ZHANG², Xiao-juan CHEN², Bao-lin GUO³, Bai-ping MA¹^,²^,^*

Affiliations

1. Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 510006, China

2. Institute of Radiation Medicine, Academy of Military Medical Sciences, Academy of Military Sciences, Beijing 100850, China

3. Institute of Medicinal Plant Development, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College, Beijing 100193, China

出版时间: 2024-08-12 doi: 10.16438/j.0513-4870.2024-0119

文章导航

摘要

收起

本文对广西产绞股蓝[Gynostemma pentaphyllum (Thunb.) Makino] 中达玛烷型三萜皂苷成分进行研究, 综合使用D101大孔吸附树脂、硅胶和C18柱色谱以及制备型高效液相色谱等分离手段, 从中分离得到4个达玛烷型三萜皂苷类化合物, 利用MS、NMR和圆二色谱(CD) 等波谱技术鉴定其结构, 分别为3β, 12β-二羟基-25-过氧氢基达玛烷-20, 23-二烯-3-O-[β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖苷(1)、3β, 12β, 24S-三羟基达玛烷-20, 25-二烯-3-O-[β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖苷(2)、3β, 20α-二羟基-24-烯-12β, 22S-环氧达玛烷-3-O-[β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖苷(3)、3β, 12β, 20S-三羟基达玛烷-24-烯-3-O-[6-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖基]-20-O-β-D-吡喃木糖基(1→3)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(4)。化合物1~4均为新化合物。

关键词

葫芦科 / 绞股蓝 / 三萜皂苷 / 分离 / 结构鉴定

Abstract

收起

Damarane-type triterpene saponins are the main active ingredients in Gynostemma pentaphyllum (Thunb.) Makino. By using D101 macroporous adsorption resin and silica gel open-columns, C18 medium-pressure column chromatography, and preparative high performance liquid chromatography, we isolated four compounds from the leaves of G. pentaphyllum planted in Guangxi Zhuang Autonomous Region. Their structures were determined by comprehensive analyses of MS, NMR data and circular dichroism spectroscopy and identified as (3β, 12β)-dihydroxy-25-peroxyhydrohydrodammarane-20, 23-diene-3-O-[β-D-glucopyranosyl(1→2)]-β-D-glucopyranoside (1), (3β, 12β, 24S)-trihydroxydammarane-20, 25-diene-3-O-[β-D-glucopyranosyl(1→2)]-β-D-glucopyranoside (2), (3β, 20α)-dihydroxy-24-en-12β, 22S-epoxydammarane-3-O-[β-D-glucopyranosyl(1→2)]-β-D-glucopyranoside (3), (3β, 12β, 20S)-trihydroxydammarane-24-en-3-O-[6-O-acetyl-β-D-glucopyranosyl(1→2)-β-D-glucopyranosyl]-20-O-β-D-xylopyranosyl(1→3)-α-L-rhamnopyranosyl (1→6)-β-D-glucopyranoside (4). Compounds 1-4 are new dammarane-type triterpene saponins.

Key words

Cucurbitaceae / Gynostemma pentaphyllum / triterpenoid saponin / isolation / structural elucidation

引用本文

杨光, 梁海珍, 张洁, 陈晓娟, 郭宝林, 马百平. 绞股蓝中4个新达玛烷型三萜皂苷的分离鉴定. 药学学报, 2024 , 59 (8) : 2288 -2294 . DOI: 10.16438/j.0513-4870.2024-0119

Guang YANG, Hai-zhen LIANG, Jie ZHANG, Xiao-juan CHEN, Bao-lin GUO, Bai-ping MA. Four new dammarane-type triterpenoid saponins from Gynostemma pentaphyllum (Thunb.) Makino[J]. Acta Pharmaceutica Sinica, 2024 , 59 (8) : 2288 -2294 . DOI: 10.16438/j.0513-4870.2024-0119

正文

收起

绞股蓝[Gynostemma pentaphyllum (Thunb.) Makino] 又名天堂草、小苦药等, 是葫芦科(Cucurbitaceae) 绞股蓝属(Gynostemma Blume) 草质攀援植物, 多生长于疏林、草丛及灌丛地区等阴湿温和的气候环境中。在我国广泛分布于陕西南部和长江以南等地区。绞股蓝属植物是我国重要的植物资源, 其应用历史最早可追溯至春秋战国时期^[1]。目前, 在国内应用最广泛的是来自秦巴山区的药用长梗绞股蓝(G. longipes C.Y.Wu)^[2]以及来自福建、广西、云南等地的茶用的绞股蓝。绞股蓝中的达玛烷型三萜皂苷又被称为绞股蓝皂苷, 是其主要化学成分, 是绞股蓝发挥药理作用的主要物质基础。目前已从绞股蓝属植物中分离得到445种达玛烷型三萜皂苷^[2-14], 其化学结构具有多样性。此外, 现代药理研究表明, 绞股蓝具有降血糖、降血脂、抗衰老、抗疲劳等作用^[14-17]。绞股蓝皂苷具有较广的应用领域和重要使用价值。

本课题组前期已对陕西、福建、云南、广西等主要产区绞股蓝进行了UPLC-QTOF/MS分析, 发现各个产地的绞股蓝中三萜皂苷结构特征明显不同, 其中广西产绞股蓝含有原人参二醇型皂苷, 在报道如此多绞股蓝皂苷结构的情况下, 广西产绞股蓝中仍然存在未报道的皂苷结构。因此, 本文利用多种分离方法和波谱技术对广西产绞股蓝中的成分进行分离、鉴定, 最终从中分离得到4个新化合物(1~4), 结构见图 1。本文主要介绍4个新化合物的分离鉴定。

结果与讨论

收起

1 结构鉴定

化合物1 白色无定形粉末, 易溶于吡啶、甲醇、乙腈。TLC 10%硫酸乙醇溶液显色, 呈紫红色。[α]

$ {}_{\mathrm{D}}^{25} $

+2.00 (c 0.05, MeOH), (-)-HR-ESI-MS: 分子离子峰m/z 797.470 0 [M-H]^- (C₄₂H₆₉O₁₄计算值: 797.468 7), 因此, 推测分子式为C₄₂H₇₀O₁₄。¹H NMR (pyridine-d₅, 500 MHz) 出现δ_H 1.56 (6H, overlap)、1.31 (3H, s)、1.13 (3H, s)、1.06 (3H, s)、0.97 (3H, s)、0.84 (3H, s) 苷元上7个甲基质子信号, 另有δ_H 4.95 (d, J = 7.6 Hz)、5.40 (d, J = 7.6 Hz) 共2个糖端基质子信号。根据酸水解实验结果可知, 其糖基为D-吡喃葡萄糖基, 此外, 根据偶合常数可判断, 苷键为β构型。¹³C NMR (pyridine-d₅, 150 MHz) 提示δ_C 154.5、137.3、128.9、109.7为4个烯烃碳信号, 89.0、81.2、72.4为苷元上3个含氧取代碳信号。综合分子量、糖酸水解实验和碳谱中42个碳信号可知: 该化合物为连接有两个β-D-葡萄糖吡喃基的三萜皂苷。在HMBC谱中(图 2), 由δ_H 4.95 (H-1′) 与δ_C 89.0 (C-3), δ_H 5.40 (H-1″) 与δ_C 83.5 (C-2′) 存在相关, 可以确定糖基分别连接在C-3与C-2′。H-21 (δ_H 4.99, 5.15) 与δ_C 48.0 (C-17)/δ_C 37.4 (C-22), H-22 (δ_H 3.06, 3.20) 与δ_C 154.5 (C-20) 有HMBC相关信号, 表明C-20、C-21位成双键, C-21为末端烯烃碳; 此外, H-21 (δ_H 4.99, 5.15) 磁不等价有2个氢信号, 也可快速推测C-21为末端烯烃碳。在¹H-¹H COSY谱中(图 2), δ_H 6.01 (H-23) 与H-22 (δ_H 3.06, 3.20)/δ_H 6.01 (H-24) 存在相关信号, 推测C-22、C-23、C-24依次连接形成的丙烯片段; δ_H 6.01 (H-23) 与δ_C 81.2 (C-25) 存在相关信号; δ_H 6.01 (H-24) 与δ_C 25.2 (C-26)/δ_C 25.3 (C-27), δ_H 1.56 (H-26) 与δ_C 81.2 (C-25) 存在HMBC相关信号, 可证明C-23、C-24位成烯。化合物1和gypenoside GD₅^[18]在C-22到C-27侧链的碳谱数据相似, 尤其是被过氧氢基取代的C-25位信号(δ_C 81.2) 与C-25位被羟基取代的gypenoside LX (δ_C 70.2) 相比^[19], 其化学位移明显向低场移动, 同时在化合物1氢谱中观察到δ_H 12.90 (1H, s) 的氢信号, 与已知化合物gypenoside GD₅的氢谱一致[δ_H 12.87(1H, s)]; 此外, C-25的过氧氢基取代也对应了化合物1元素组成中的两个氧原子。根据NOESY谱(图 3) δ_H 3.31 (H-3) 与δ_H 0.70 (H-5α), δ_H 3.91 (H-12) 与δ_H 2.88 (H-17) 存在相关信号, 说明C-3和C-12均连接β-OH, H-17位α构型。综上, 化合物1鉴定为3β, 12β-二羟基-25-过氧氢基达玛烷-20, 23-二烯-3-O-[β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖苷, 结构式见图 1, 确定为新化合物。¹H NMR、¹³C NMR信号归属见表 1。

化合物2 白色无定形粉末, 易溶于吡啶、甲醇、乙腈。TLC提示10%硫酸乙醇溶液显色, 呈紫红色。[α]

$ {}_{\mathrm{D}}^{25} $

+25.00 (c 0.1, MeOH), (-)-HR-ESI-MS: 分子离子峰m/z 781.473 2 [M-H]^- (C₄₂H₆₉O₁₃计算值: 781.473 8), 因此, 推测分子式为C₄₂H₇₀O₁₃。¹H NMR (pyridine-d₅, 500 MHz) 提示δ_H 1.91 (3H, s)、1.31 (3H, s)、1.12 (3H, s)、1.02 (3H, s)、0.96 (3H, s)、0.81 (3H, s) 苷元上6个甲基质子信号, 另有δ_H 4.95 (overlap)、5.40 (d, J=7.8 Hz) 共2个糖端基质子信号。根据酸水解实验结果可知, 其糖基为D-吡喃葡萄糖基, 此外, 根据偶合常数可判断苷键为β构型。¹³C NMR (pyridine-d₅, 150 MHz) 提示δ_C 155.9、149.9、110.1、108.0为4个烯烃碳信号, 88.9、74.9、72.5为苷元上3个含氧取代碳信号。对比化合物1与化合物2的碳谱数据基本一致, 只是在苷元侧链部分有不同, 因此判断化合物2同样为连接有两个β-D-葡萄吡喃糖基的三萜皂苷并且糖基分别连接在C-3与C-2′。由¹H-¹H COSY谱(图 2), H-23 (δ_H 2.08, 2.16) 与δ_H 2.63 (H-22)/δ_H 4.47 (H-24) 的相关信号可得C-22、C-23、C-24依次连接。H-21 (δ_H 4.97, 5.18) 与δ_C 48.5 (C-17)/δ_C 30.0 (C-22), δ_H 2.63 (H-22) 与δ_C 48.5 (C-17), H-23 (δ_H 2.08, 2.16) 与δ_C 149.9 (C-25)/δ_C 155.9 (C-20)/δ_C 74.9 (C-24), H-26 (δ_H 4.95, 5.27) 与δ_C 18.2 (C-27)/δ_C 74.9 (C-24) 存在HMBC相关信号(图 2), 表明C-20、C-21, C-25、C-26位成烯; C-21、C-26为末端烯烃碳; C-24被羟基取代。根据NOESY谱(图 3), δ_H 3.31 (H-3) 与δ_H 0.68 (H-5α), δ_H 3.91 (H-12) 与δ_H 2.87 (H-17) 存在相关信号, 说明C-3和C-12均连接β-OH, H-17位α构型。关于C-24位构型的确定, 文献^[20]报道, 可利用圆二色谱(CD) 来确定绞股蓝皂苷中24位R/S差向异构体的绝对构型, 当CD谱图出现cotton正效应时C-24位为R构型, 呈负效应时则为S构型, 通过测定发现化合物2的CD谱图呈现为cotton负效应, 因此确定其C-24位为S构型。综上, 化合物2鉴定为3β, 12β, 24S-三羟基达玛烷-20, 25-二烯-3-O-[β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖苷, 结构式见图 1, 确定为新化合物。¹H NMR、¹³C NMR信号归属见表 1。

化合物3 白色无定形粉末, 易溶于吡啶、甲醇、乙腈。TLC 10%硫酸乙醇溶液显色, 呈紫红色。[α]

$ {}_{\mathrm{D}}^{25} $

-11.00 (c 0.09, MeOH), (-)-HR-ESI-MS: 分子离子峰m/z 781.471 4 [M-H]^- (C₄₂H₆₉O₁₃计算值: 781.473 8), 因此, 推测分子式为C₄₂H₇₀O₁₃。¹H NMR (pyridine-d₅, 500 MHz) 提示δ_H 1.74 (3H, s)、1.71 (3H, s)、1.43 (3H, s)、1.29 (3H, s)、1.12 (3H, s)、0.99 (3H, s)、0.93 (3H, s)、0.82 (3H, s) 共8个苷元上甲基质子信号, 另有δ_H 4.92 (d, J = 7.6 Hz) 和5.39 (d, J = 7.6 Hz) 2个糖端基质子信号。根据酸水解实验结果可知, 其糖基为D-吡喃葡萄糖基, 此外, 根据偶合常数可判断苷键为β构型。¹³C NMR (pyridine-d₅, 150 MHz) 提示δ_C 131.6、124.6为2个烯烃碳信号, 88.8、87.6、77.0、73.5为苷元上4个含氧取代碳信号。化合物1与化合物3的碳谱数据仅苷元侧链部分有不同, 可知化合物3同连有2个β-D-吡喃葡萄糖基, 并分别连接在C-3与C-2′。根据¹H-¹H COSY谱(图 2), H-23 (δ_H 2.40, 3.09) 与δ_H 3.42 (H-22)/δ_H 5.74 (H-24) 存在相关信号, 证明C-22、C-23、C-24依次连接。δ_H 3.42 (H-22) 与δ_C 77.0 (C-12)/δ_C 49.0 (C-17)/δ_C 73.5 (C-20)/δ_C 15.7 (C-21)/δ_C 28.0 (C-23)/δ_C 124.6 (C-24), H-23 (δ_H 2.40, 3.09) 与δ_C 124.6 (C-24)/δ 131.6 (C-25), δ_H 5.74 (H-24) 与δ_C 26.0 (C-26)/δ_C 18.0 (C-27) 存在HMBC相关(图 2), 表明C-12、C-13、C-17、C-20、C-22形成一个吡喃环, C-24、C-25成烯。δ_H 3.27 (H-3) 与δ_H 0.68 (H-5α), δ_H 2.21 (H-17) 与δ_H 3.39 (H-12)/δ_H 3.42 (H-22) 具有NOESY相关(图 3), H-21与H-17无相关信号, 说明C-3和C-12均连接β-OH、C-20连接α-OH, C-22位为S构型。综上, 化合物3鉴定为3β, 20α-二羟基-24-烯-12β, 22S-环氧达玛烷-3-O-[β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖苷, 结构式见图 1, 确定为新化合物。¹H NMR、¹³C NMR信号归属见表 1。

化合物4 白色无定形粉末, 易溶于吡啶、甲醇、乙腈。TLC 10%硫酸乙醇溶液显色, 呈紫红色。[α]

$ {}_{\mathrm{D}}^{25} $

-9.00 (c 0.08, MeOH), (-)-HR-ESI-MS: 分子离子峰m/z 1 265.651 0 [M-H]^- (C₆₁H₁₀₁O₂₇计算值: 1 265.653 0), 因此, 推测分子式为C₆₁H₁₀₂O₂₇。碳谱数据与gypenoside XCIV^[21]对比, 发现二者数据一致。但由于两个葡萄糖基化学环境的相似, 乙酰基的取代位置尚不明确。根据HMBC谱(图 2), H-6″ (δ_H 4.81, 4.94) 与δ_C 171.0 (C-1″″″) /δ_C 71.0 (C-4″)/δ_C 75.4 (C-5″) 存在相关信号, 由此可以确定乙酰基取代位置为葡萄糖基C-6″羟基; δ_H 5.33 (H-1″) 与δ_C 75.4 (C-5″)/δ_C 84.4 (C-2′) 存在相关信号, 说明被乙酰基取代的C-6″位的羟基位于2′-O-β-D-葡萄糖基。综上, 化合物4鉴定为3β, 12β, 20S-三羟基达玛烷-24-烯-3-O-[6-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖基]-20-O-β-D-吡喃木糖基(1→3)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷, 确定为新化合物, 结构式见图 1。¹H NMR和¹³C NMR信号归属见表 2。

2 讨论

本文在课题组的前期研究基础上, 通过一系列分离纯化方法及结构鉴定技术, 从广西产绞股蓝中分离得到4个达玛烷型三萜皂苷新化合物, 均含有2个及以上的糖基取代, 且C-17侧链结构呈现多样性。化合物1与2在侧链拥有少见的C-20和21位双键; 此外, 化合物1的C-23和24位成双键, C-25位被过氧氢基取代; 化合物2的C-24位被羟基取代, C-25和26位成双键; 化合物3的C-17位侧链与C-12形成一个吡喃环, 化合物2与化合物3互为一对同分异构体; 化合物4含有五个糖基, 与已有报道的化合物区别在于糖基上乙酰基取代位置不同。本研究获得的4个新三萜皂苷的结构, 不仅对达玛烷型三萜皂苷的多样性有了进一步认识, 也加深了对广西产绞股蓝中三萜皂苷组成的认识, 为后续广西产绞股蓝药效物质基础的研究以及药材质量分析奠定了化合物基础。

实验部分

收起

Vanquish Flex UHPLC液相色谱仪连接CAD电雾式检测器(美国ThermoFisher公司); Waters ACQUITY Ⅰ-Class UPLC系统连接VION-Q-TOF/MS、Waters HSS T3 (100 mm × 2.1 mm, 1.8 μm), 美国Waters公司; 中高压纯化系统Pure C-850 (瑞士BUCHI公司); Hannon New style NP700 Serial Pump (汉邦科技有限公司); 示差折光检测器Shodex RI-102 (日本Showa Denko Group); Bruker Avance Ⅲ 600型核磁共振仪(德国布鲁克公司); 亚荣SHZ-Ⅲ型循环水真空泵、亚荣RE-2020A旋转蒸发仪, 上海亚荣生化仪器厂; BP-211D型十万分之一天平(德国Sartorius公司); Chirascan圆二光谱仪(英国应用光物理公司); Anton Paar MCP 200旋光光谱仪(奥地利安东帕公司); HH-W2S型水浴锅(上海锦赋实验仪器设备有限公司)。

X Union C18 (250 mm × 20 mm, 5 μm), 华谱新创科技有限公司; Chrom Core Phenyl (250 mm × 10 mm, 5 μm), 纳谱分析技术(苏州)有限公司; 5C18-MS-Ⅱ (250 mm × 10 mm, 5 μm), 日本Nacalai Tesque公司; BUCHI Flash Pure C18柱(50 μm, 220 g), 瑞士BUCHI公司; D101大孔吸附树脂填料(天津浩聚树脂科技有限公司); 硅胶填料300~400目(青岛海洋化工有限公司); 可裁剪薄层层析板(天津思利达科技有限公司); 甲醇、乙醇、三氯甲烷、无水吡啶(分析纯, 国药集团化学试剂有限公司); 色谱甲醇、色谱乙腈、三氟乙酸(美国ThermoFisher公司); L-半胱氨酸甲酯盐酸盐、D-木糖、L-鼠李糖(麦克林生化科技股份有限公司); D-葡萄糖、邻甲苯异硫氰酸酯(北京百灵威科技有限公司); 纯净水(娃哈哈集团有限公司); 蒸馏水(屈臣氏集团)。

本实验所用药材为绞股蓝叶, 采自广西壮族自治区桂林市, 经中国医学科学院药用植物研究所郭宝林研究员鉴定为葫芦科绞股蓝属植物绞股蓝G. pentaphyllum (Thunb.) Makino。

1 提取与分离

绞股蓝叶10 kg, 水煎煮提取3次(16倍水提10 h, 重复3次), 浓缩后用90%乙醇沉淀, 弃去沉淀, 上清液浓缩至无醇味, 分3次进行D-101大孔吸附树脂(5 kg) 柱层析, 分别用水洗脱未沉淀掉的寡糖、黄酮类物质, 再分别用20%、70%、85%乙醇洗脱, 浓缩干燥后得到20%乙醇洗脱部位(D1, 220 g)、70%乙醇洗脱部位(D2, 1 110 g)、85%乙醇洗脱部位(D3, 40 g)。对D3 (40 g) 进行硅胶开放柱色谱分离, 以三氯甲烷-甲醇-水(95∶5∶0.5→90∶10∶1→85∶15∶1.5→80∶20∶6下层→75∶25∶7.5下层→70∶30∶9下层→甲醇) 体系进行洗脱。经TLC检识合并后得到Fr.1~Fr.18共18个组分。其中Fr.9、Fr.11使用BUCHI Flash Pure C18柱(50 μm, 220 g) 以甲醇-水(40%→50%→60%→70%→75%→80%→85%→90%→100%甲醇) 为流动相体系进行梯度洗脱Fr.9得到14个组分, Fr.9-1到Fr.9-14, Fr.11得到15个组分: Fr.11-1到Fr.11-15。选择Fr.9-7使用X Union C18 (250 mm × 20 mm, 5 μm) 色谱柱, 73%甲醇分离得到8个组分: Fr.9-7-8使用5C18-MS-Ⅱ (250 mm × 10 mm, 5 μm) C18色谱柱以38%乙腈水为流动相分离得到化合物1 (t_R = 27.0 min, 2.7 mg); Fr.9-7-7使用5C18-MS-Ⅱ (250 mm × 10 mm, 5 μm) C18色谱柱以38%乙腈水为流动相分离得到化合物2 (t_R = 18.0 min, 3.1 mg); Fr.9-7-4使用5C18-MS-Ⅱ C18色谱柱以38%乙腈水为流动相分离得到化合物3 (t_R = 19.0 min, 3.9 mg); 选择Fr.11-6使用Chrom Core Phenyl苯基色谱柱以35%乙腈水为流动相分离得到化合物4 (t_R = 13.2 min, 6.5 mg)。

2 糖绝对构型的确定

将化合物1~4 (各1.0 mg) 溶解在6 mol·L^-1三氟乙酸(1 mL) 中, 在90 ℃下水浴加热2 h, 冷却至室温。用三氯甲烷萃取三次, 浓缩水层, 得到含糖残基。将得到的残基与单糖对照品用无水吡啶(200 μL) 溶解, 加入L-半胱氨酸甲酯盐酸盐(1 mg), 60 ℃水浴加热1 h。再分别加入邻甲苯异硫氰酸酯10 µL, 在60 ℃水浴下加热1 h。反应结束后, 冷却至室温, 过滤上清液, 使用Waters ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱进行UPLC分析。

UPLC-CAD分析条件: Vanquish Flex UPLC液相色谱仪连接CAD电雾式检测器(ThermoFisher, 美国); Waters ACQUITY^TM UPLC HSS T3色谱柱; 梯度洗脱: 0.1%甲酸水(A), 乙腈(B), 0~8 min, 20%~30% B; 柱温40 ℃; 流速0.6 mL·min^-1, 雾化温度35 ℃; 滤波1 s。通过与单糖对照品衍生化产物的保留时间对比, 确定各糖基的绝对构型。D-葡萄糖(4.5 min)、D-木糖(4.9 min)、L-鼠李糖(6.3 min)。

3 结构鉴定

化合物1 白色无定形粉末, [α]

$ {}_{\mathrm{D}}^{25} $

+2.00 (c 0.05, MeOH), HR-ESI-MS (-): m/z 797.470 0 [M-H]^-, 分子式为C₄₂H₇₀O₁₄ (C₄₂H₆₉O₁₄计算值: 797.468 7)。¹H NMR (pyridine-d₅, 500 MHz) 和¹³C NMR (pyridine-d₅, 150 MHz) 数据见表 1。

化合物2 白色无定形粉末, [α]

$ {}_{\mathrm{D}}^{25} $

+25.00 (c 0.10, MeOH), CD (MeOH): 225.0 (Δε +0.48) nm, HR-ESI-MS (-): m/z 781.473 2 [M-H]^-, 分子式为C₄₂H₇₀O₁₃ (C₄₂H₆₉O₁₃计算值: 781.473 8)。¹H NMR (pyridine-d₅, 500 MHz) 和¹³C NMR (pyridine-d₅, 150 MHz) 数据见表 1。

化合物3 白色无定形粉末, [α]

$ {}_{\mathrm{D}}^{25} $

-11.00 (c 0.09, MeOH), HR-ESI-MS (-): m/z 781.471 4 [M-H]^-, 分子式为C₄₂H₇₀O₁₃ (C₄₂H₆₉O₁₃计算值: 781.473 8)。¹H NMR (pyridine-d₅, 500 MHz) 和¹³C NMR (pyridine-d₅, 150 MHz) 数据见表 1。

化合物4 白色无定形粉末, [α]

$ {}_{\mathrm{D}}^{25} $

-9.00 (c 0.08, MeOH), HR-ESI-MS (-): m/z 1 265.651 0 [M-H]^-, 分子式为C₆₁H₁₀₂O₂₇ (C₆₁H₁₀₁O₂₇计算值: 1 265.653 0)。¹H NMR (pyridine-d₅, 500 MHz) 和¹³C NMR (pyridine-d₅, 150 MHz) 数据见表 2。

作者贡献: 杨光负责实验实施、数据分析及撰写稿件; 梁海珍参与数据分析及稿件修改; 张洁和陈晓娟协助实施部分实验; 郭宝林负责药材鉴定; 马百平对研究工作进行设计、监督、指导以及稿件的修改, 承担研究工作各方面的责任。

利益冲突: 本文无任何利益冲突。

参考文献

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文献

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排序方式：

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2024年第59卷第8期

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doi: 10.16438/j.0513-4870.2024-0119

接收时间：2024-02-05
首发时间：2025-11-26
出版时间：2024-08-12

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收稿日期：2024-02-05
修回日期：2024-04-30

基金

作者信息

1.广东药科大学, 广东广州 510006

2.军事科学院军事医学研究院辐射医学研究所, 北京 100850

3.中国医学科学院、北京协和医学院药用植物研究所, 北京 100193

通讯作者:

^*马百平, Tel: 86-10-66930265, E-mail: mabaiping@sina.com

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https://castjournals.cast.org.cn/joweb/yxxb/CN/10.16438/j.0513-4870.2024-0119

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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RefWorks
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δ_C

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3.91 m

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1.31 s

28.1

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1.13 s

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0.97 s

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105.2

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3.95 m

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