药学学报


7a	Ph-	0.34 ± 0.07
7b	3-CH₃-Ph-	0.13 ± 0.03
7c	4-CH₃-Ph-	1.00 ± 0.11
7d	4-F-Ph-	0.31 ± 0.15
7e	4-Cl-Ph-	0.17 ± 0.06
7f	4-OCH₃-Ph-	0.41 ± 0.17
7g	1-Naphthalene-	NA^a
7h	5-Benzo[d]^[1,3]dioxole-	NA^a
9a	H-	0.08 ± 0.01
9b	NO₂-	0.27 ± 0.09
9c	I-	0.03 ± 0.01
Vorinostat	-	0.13 ± 0.05

Cpd.

HDACs IC₅₀/μmol·L^-1

Ph-

0.34 ± 0.07

3-CH₃-Ph-

0.13 ± 0.03

4-CH₃-Ph-

1.00 ± 0.11

4-F-Ph-

0.31 ± 0.15

4-Cl-Ph-

0.17 ± 0.06

4-OCH₃-Ph-

0.41 ± 0.17

1-Naphthalene-

NA^a

5-Benzo[d]^[1,3]dioxole-

NA^a

H-

0.08 ± 0.01

NO₂-

0.27 ± 0.09

I-

0.03 ± 0.01

Vorinostat

0.13 ± 0.05


7a	Ph-	0.34 ± 0.07
7b	3-CH₃-Ph-	0.13 ± 0.03
7c	4-CH₃-Ph-	1.00 ± 0.11
7d	4-F-Ph-	0.31 ± 0.15
7e	4-Cl-Ph-	0.17 ± 0.06
7f	4-OCH₃-Ph-	0.41 ± 0.17
7g	1-Naphthalene-	NA^a
7h	5-Benzo[d]^[1,3]dioxole-	NA^a
9a	H-	0.08 ± 0.01
9b	NO₂-	0.27 ± 0.09
9c	I-	0.03 ± 0.01
Vorinostat	-	0.13 ± 0.05

Cpd.

HDACs IC₅₀/μmol·L^-1

Ph-

0.34 ± 0.07

3-CH₃-Ph-

0.13 ± 0.03

4-CH₃-Ph-

1.00 ± 0.11

4-F-Ph-

0.31 ± 0.15

4-Cl-Ph-

0.17 ± 0.06

4-OCH₃-Ph-

0.41 ± 0.17

1-Naphthalene-

NA^a

5-Benzo[d]^[1,3]dioxole-

NA^a

H-

0.08 ± 0.01

NO₂-

0.27 ± 0.09

I-

0.03 ± 0.01

Vorinostat

0.13 ± 0.05

Compound	IC₅₀/μmol·L^-1
9a	2.04 ± 0.46	6.74 ± 1.99	1.36 ± 0.14	1.53 ± 1.08
9c	2.79 ± 0.12	7.04 ± 1.26	1.03 ± 0.40	1.65 ± 0.79
Vorinostat	4.33 ± 1.17	9.73 ± 0.62	3.14 ± 0.60	3.35 ± 0.23

Compound

IC₅₀/μmol·L^-1

MDA-MB-231

PC-3

KG1

K562

2.04 ± 0.46

6.74 ± 1.99

1.36 ± 0.14

1.53 ± 1.08

2.79 ± 0.12

7.04 ± 1.26

1.03 ± 0.40

1.65 ± 0.79

Vorinostat

4.33 ± 1.17

9.73 ± 0.62

3.14 ± 0.60

3.35 ± 0.23

Compound	IC₅₀/μmol·L^-1
9a	2.04 ± 0.46	6.74 ± 1.99	1.36 ± 0.14	1.53 ± 1.08
9c	2.79 ± 0.12	7.04 ± 1.26	1.03 ± 0.40	1.65 ± 0.79
Vorinostat	4.33 ± 1.17	9.73 ± 0.62	3.14 ± 0.60	3.35 ± 0.23

Compound

IC₅₀/μmol·L^-1

MDA-MB-231

PC-3

KG1

K562

2.04 ± 0.46

6.74 ± 1.99

1.36 ± 0.14

1.53 ± 1.08

2.79 ± 0.12

7.04 ± 1.26

1.03 ± 0.40

1.65 ± 0.79

Vorinostat

4.33 ± 1.17

9.73 ± 0.62

3.14 ± 0.60

3.35 ± 0.23

邻苯甲酰磺酰亚胺类HDACs抑制剂的设计、合成及抗三阴性乳腺癌活性研究

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李晓萌 ¹ , 权梦谣 ² , 刘昱辰 ² , 侯旭奔 ² , 韩雷强 ¹^,^* , 方浩 ²^,^*

药学学报 | 专题报道: 蛋白成熟与翻译后修饰的化学干预 2024,59(11): 3017-3026

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药学学报 | 专题报道: 蛋白成熟与翻译后修饰的化学干预 2024, 59(11): 3017-3026

邻苯甲酰磺酰亚胺类HDACs抑制剂的设计、合成及抗三阴性乳腺癌活性研究

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李晓萌¹, 权梦谣², 刘昱辰², 侯旭奔², 韩雷强¹^,^*, 方浩²^,^*

作者信息

1.山东大学第二医院药学部, 山东济南 250033

2.山东大学药学院, 天然产物化学生物学教育部重点实验室, 山东济南 250012

通讯作者:

^*韩雷强, Tel: 86-531-85875139, E-mail: hanlq007@sina.cn;

方浩, Tel: 86-531-88381168, E-mail: haofangcn@sdu.edu.cn

Design, synthesis and biological evaluation of saccharin-based HDACs inhibitors for the treatment of triple-negative breast cancer

Xiao-meng LI¹, Meng-yao QUAN², Yu-chen LIU², Xu-ben HOU², Lei-qiang HAN¹^,^*, Hao FANG²^,^*

Affiliations

1. Department of Pharmacy, the Second Hospital of Shandong University, Ji′nan 250033, China

2. School of Pharmaceutical Science, Key Laboratory of Chemical Biology (Ministry of Education), Shandong University, Ji′nan 250012, China

出版时间: 2024-11-12 doi: 10.16438/j.0513-4870.2024-0562

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摘要

收起

作为一种关键的表观遗传调节因子, 组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylases, HDACs) 在癌症的发展中发挥着重要作用。小分子HDACs抑制剂已被证明能够抑制肿瘤增殖并诱导细胞凋亡, 因此受到了广泛的研究关注。本研究设计和合成了一系列新的邻苯甲酰磺酰亚胺衍生物作为HDACs抑制剂。生物学实验表明, 目标化合物9a展现出优于vorinostat的HDACs抑制活性, 且对三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer, TNBC) 具有良好的体内外抗肿瘤活性。所有动物实验经山东大学药学院伦理委员会批准(批准号: 230094)。该项工作是以邻苯甲酰磺酰亚胺为母核发展HDACs抑制剂的一次探索, 以9a为代表的活性化合物可以作为先导化合物进一步研究。

关键词

邻苯甲酰磺酰亚胺 / HDAC抑制剂 / 抗肿瘤 / 三阴性乳腺癌 / 构效关系

Abstract

收起

As a key epigenetic regulator, histone deacetylases (HDACs) play a crucial role in cancer development. Small molecule HDAC inhibitors have been shown to inhibit tumor proliferation and induce apoptosis, attracting significant research attention. In this study, we designed and synthesized a series of novel saccharin derivatives as HDAC inhibitors. Biological experiments demonstrated that the target compound 9a exhibited superior HDACs inhibition activity to vorinostat and demonstrating promising in vitro and in vivo anti-tumor activity against triple-negative breast cancer (TNBC). All animal experiments in this study were performed in strict accordance with the protocols approved by the Ethical Committee of School of Pharmaceutical Sciences in Shandong University (Approval No. 230094). This work represents an initial exploration of developing saccharin-based HDAC inhibitors, and the active compound 9a could serve as a lead compound for further study.

Key words

saccharin / histone deacetylase inhibitor / anti-tumor / triple-negative breast cancer / structure-activity relationship

引用本文

李晓萌, 权梦谣, 刘昱辰, 侯旭奔, 韩雷强, 方浩. 邻苯甲酰磺酰亚胺类HDACs抑制剂的设计、合成及抗三阴性乳腺癌活性研究. 药学学报, 2024 , 59 (11) : 3017 -3026 . DOI: 10.16438/j.0513-4870.2024-0562

Xiao-meng LI, Meng-yao QUAN, Yu-chen LIU, Xu-ben HOU, Lei-qiang HAN, Hao FANG. Design, synthesis and biological evaluation of saccharin-based HDACs inhibitors for the treatment of triple-negative breast cancer[J]. Acta Pharmaceutica Sinica, 2024 , 59 (11) : 3017 -3026 . DOI: 10.16438/j.0513-4870.2024-0562

正文

收起

表观遗传修饰与癌症的发生和发展密切相关^[1]。作为一种常见的组蛋白翻译后修饰, 组蛋白乙酰化通过调节染色质构象来刺激基因转录^[2]。在人体中, 组蛋白的乙酰化水平由组蛋白乙酰转移酶(histone acetyltransferase, HATs) 和组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylases, HDACs) 共同控制^[3]。HATs将乙酰辅酶A的乙酰基转移到组蛋白的赖氨酸残基上, 而HDACs则从赖氨酸残基上去除乙酰基^[4]。根据同源结构和细胞定位, 经典的HDACs可分为4类: I类(HDAC1、2、3和8)、II类(IIa类: HDAC4、5、7和9, IIb类: HDAC6和10)、III类(Sirt1-Sirt7) 和IV类(HDAC11)。其中, I、II和IV类HDACs是锌依赖型酶, 而III类HDACs则是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD⁺) 依赖型酶^[5]。

抑制HDAC在癌症治疗中取得了良好的效果^[6]。迄今为止, 已有多种HDACs抑制剂(vorinostat^[7]、romidepsin^[8]、belinostat^[9]、panobinostat^[10]和chidamide^[11]) 被批准用于治疗T细胞淋巴瘤等肿瘤的治疗。HDACs抑制剂的常见药效团包括3个特征部分: 与活性位点Zn²⁺离子螯合的锌结合基团(zinc binding group, ZBG)、饱和或不饱和Linker基团及与HDACs表面氨基酸残基相互作用的表面识别Cap基团^[12]。前期研究表明, 在保留异羟肟酸作为ZBG的同时, 通过改变表面识别Cap基团和Linker基团结构, 可以改善HDACs的抑制活性^[13]。

三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer, TNBC) 是指雌激素受体(estrogens recepter, ER)、孕激素受体(progestin recepter, PR) 和人表皮生长因子受体-2 (human epidermal growth factor receptor-2, HER2) 均呈阴性表达的一种特殊类型的乳腺癌^[14]。与其他乳腺癌亚型相比, TNBC具有发病年龄小^[15]、侵袭性强和预后差的特点^[16]。TNBC对激素治疗不敏感, 且缺乏靶向治疗^[17], 因此迫切需要探索新的治疗方向。近期研究表明, HDACs可作为治疗TNBC的分子靶点^{[18, 19]}。HDACs抑制剂可重组异染色质相关蛋白, 恢复沉默的ER基因的表达^[20]。此外, 有研究表明, 选择性HDAC6抑制剂BAS-6可以通过改变TNBC细胞的糖代谢, 选择性地杀死抗凋亡的TNBC细胞^[21]。I类组蛋白去乙酰化酶抑制剂可增强抗血管生成基因的表达, 从而抑制TNBC的肿瘤进展^[22]。因此, HDACs是TNBC的重要治疗靶点。

在前期的研究中, 作者开发了一系列以糖精(1, 2-二氢苯并[d]异噻唑-3-酮-1, 1-二氧化物) 为Cap基团的HDACs抑制剂, 先后探索了脂肪链或苯环作为Linker基团的HDACs抑制活性, 活性最优的化合物对TNBC细胞系具有较好的体外抗增殖活性^{[23, 24]}。在本项研究中, 设计并合成了11个以糖精环为Cap区、以苯丙烯酰胺为Linker的新型HDACs抑制剂。其中, 活性最高的化合物9a的HDAC抑制活性和抗TNBC活性均优于vorinostat, 且在MDA-MB-231小鼠肿瘤异种移植模型中也具备显著的抗肿瘤活性, 可作为新的先导化合物用于HDAC抑制剂的优化。

结果

收起

1 目标化合物的合成

关键中间体和所有目标化合物的合成路线如合成路线1、2所示。中间体2是由起始原料1 [6-硝基苯并[d]异噻唑-3(2H)-酮-1, 1-二氧化物] 通过氢化反应制备而成。然后, 通过Sandmeyer反应得到中间体3。中间体4a~4h是由不同取代的苯硼酸和中间体3通过Suzuki反应合成的。将糖精或取代糖精与5混合, 在DMF中于70 ℃加热, 得到中间体6a~6h和8a~8c。然后, 根据已报道的方法分别合成最终的异羟肟酸7a~7h和9a~9c^[25]。

2 HDACs抑制活性

以已上市的HDACs抑制剂vorinostat为阳性对照, 使用HeLa细胞核提取物(主要包含HDAC1和HDAC2) 评估所有目标化合物的HDACs抑制活性。相关结果如表 1所示, 在糖精环上引入苯基或者取代的苯基, 均表现出较好的HDACs抑制活性(化合物7a~7f, IC₅₀ = 0.13~1.00 μmol·L^-1), 但引入体积更大的萘基(化合物7g) 或1, 3-苯并间二氧杂环戊烯(化合物7h) 不利于HDACs抑制活性(IC₅₀ > 5 μmol·L^-1)。另一方面, 与无取代的化合物9a相比(IC₅₀ = 0.08 μmol·L^-1), 在糖精环上引入硝基后HDACs抑制活性略有减弱(化合物9b, IC₅₀ = 0.27 μmol·L^-1), 但引入碘原子后活性进一步增强(化合物9c, IC₅₀ = 0.03 μmol·L^-1)。上述结果表明, 糖精环上的大取代基不利于目标化合物与HDACs的相互作用。在所有的目标化合物中, 化合物9a和9c具有优于vorinostat (IC₅₀ = 0.13 μmol·L^-1) 的HDACs抑制活性。

3 分子对接研究

使用AutoDock Vina进行了分子对接研究, 以探索代表性化合物9a和9c与HDAC1的潜在结合模式。如图 1所示, 化合物9a和9c能够嵌入HDAC1的催化口袋, 且异羟肟酸基团能够与口袋底部的锌原子形成适当的螯合作用。此外, 肉桂酸连接基团占据了HDAC1的疏水通道, 糖精环则作为表面识别基团与HDAC1活性位点表面的氨基酸相互作用。上述分子对接结果为进一步的结构优化提供了思路。

4 体外抗增殖活性

为了进一步研究活性化合物在细胞水平上的抗肿瘤活性, 使用MTT试验测定了化合物9a和9c对三阴性乳腺癌细胞(MDA-MB-231) 及其他3种肿瘤细胞(PC-3、KG1和K562) 的抗增殖活性。如表 2所示, 两个目标化合物都具有优于vorinostat的抑制活性。其中化合物9a的活性最优, 对TNBC细胞系MDA-MB-231的活性(IC₅₀ = 2.04 μmol·L^-1) 是vorinostat (IC₅₀ = 4.33 μmol·L^-1) 的2倍。

5 化合物9a对组蛋白H3乙酰化的调控作用

上述实验已经证实, 化合物9a具有优于vorinostat的HDACs抑制活性及体外抗增殖活性。进一步使用Western blot实验检测化合物9a对组蛋白H3乙酰化(Ac-H3) 水平的影响。如图 2所示, 化合物9a能以剂量依赖的方式增加组蛋白H3的乙酰化水平, 且效果优于vorinostat, 这与其更好的HDAC抑制活性和抗增殖活性结果一致。这些结果进一步证实了化合物9a能够在细胞内抑制HDACs活性。

6 体内抗肿瘤活性研究

进一步构建了MDA-MB-231异种移植小鼠模型, 以评估化合物9a的体内抗肿瘤活性。在荷瘤成功之后, 以腹腔注射的方式给予小鼠化合物9a (50 mg·kg^-1), 记录动物的体重及肿瘤体积变化。如图 3所示, 化合物9a能够显著抑制MDA-MD-231肿瘤的体内生长, 且对小鼠体重没有显著影响。

结论

收起

表观遗传调控在TNBC的发生和发展过程中起着重要作用^[26]。研究表明, HDACs抑制剂vorinostat和panobinostat均能够显著地抑制TNBC细胞株的增殖并促进细胞凋亡^[27]。HDACs在TNBC中的抗肿瘤作用机制包括: 激活上皮间质转化表型和下调生长因子FOXA1^[28]、影响DNA同源重组修复途径^[29]、上调肿瘤抑制因子p21和p27, 并下调抗凋亡蛋白Bcl-2^[30]。

本文合成了一系列以糖精为Cap、肉桂酸为Linker、异羟肟酸为ZBG的新型HDACs抑制剂, 目标化合物在HDACs酶抑制实验中表现出良好的抑制活性。活性最优的化合物9a对HDAC抑制活性(IC₅₀ = 0.08 ± 0.01 μmol·L^-1) 优于vorinostat (IC₅₀ = 0.13 ± 0.05 μmol·L^-1), 且能够显著的调控细胞中组蛋白H3的乙酰化水平。化合物9a (IC₅₀ = 2.04 μmol·L^-1) 对TNBC细胞株MDA-MB-231具有优于vorinostat (IC₅₀ = 4.33 μmol·L^-1) 的体外抗增殖活性。初步的体内实验也进一步证实, 化合物9a能够抑制MDA-MB-231的体内生长。上述结果表明, 邻苯甲酰磺酰亚胺类HDACs抑制剂9a有望成为用于TNBC治疗的新型先导化合物。

实验部分

收起

所有试剂和溶剂未经说明的均为分析纯。化学材料购自Bide Pharmatech有限公司。所有反应均在0.25 mm硅胶板(60GF₂₅₄) 上进行薄层色谱监测, 并用紫外光或氯化铁显色。使用RY-1电热熔点仪测量熔点。本实验中所有¹H NMR和¹³C NMR图谱通过Bruker DRX光谱仪测定(400 MHz), 内标为四甲基硅烷(TMS)。高分辨质谱(HR-MS) 采用SCI EX X500e Q TOF LC/MS仪器测定。

1 化学合成

1.1 6-氨基苯并[d]异噻唑-3(2H)-酮-1, 1-二氧化物(2)的合成

将起始原料1 (6.17 g, 27.0 mmol) 溶于350 mL THF, 加入10% Pd/C。然后用氢气还原4 h, 过滤除去催化剂。旋去溶剂, 得到略带黄色的粉末, 无需再提纯, 产率95%。

1.2 6-碘苯并[d]异噻唑-3(2H)-酮-1, 1-二氧化物(3)的合成

中间体3是根据文献^[23]相关步骤合成的。产率: 95%, 熔点: 224~226 ℃。¹H NMR (CDCl₃) δ_H: 7.75 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 8.20 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 8.26 (s, 1H)。MS (ESI) m/z: 308.2 [M-H]^-。

1.3 6-苯基苯并[d]异噻唑-3(2H)-酮-1, 1-二氧化物(4a)的合成

将化合物3 (0.62 g, 2.0 mmol)、苯硼酸(0.24 g, 2.0 mmol)、Na₂CO₃ (0.64 g, 6.0 mmol)、醋酸钯(0.001 8 g, 0.008 mmol) 和H₂O (6 mL) 装入密封管中, 在110 ℃、150 W的条件下微波辐照10 min。冷却后, 将混合物倒入盐酸(1 mol·L^-1, 20 mL) 中并过滤, 用EtOH重结晶纯化。产率: 96%, 熔点: 289~291 ℃。¹H NMR (DMSO-d₆) δ_H: 7.47 (m, 3H), 7.85 (m, 2H), 8.04 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.22 (dd, J = 8.1 Hz, 1.5 Hz, 1H), 8.50 (s, 1H)。MS (ESI) m/z: 258.2 [M-H]^-。

1.4 6-(间甲苯基)苯并[d]异噻唑-3(2H)-酮-1, 1-二氧化物(4b)的合成

以间甲基苯硼酸(0.44 g, 3.2 mmol) 为起始原料, 合成与纯化方法类似4a。产率: 86%, 熔点: 260~262 ℃。¹H NMR (DMSO-d₆) δ_H: 2.41 (s, 3H), 7.30 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.40 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.64 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.72 (s, 1H), 8.02 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.20 (dd, J = 8.1 Hz, 1.5 Hz, 1H), 8.47 (d, J = 1.2 Hz, 1H)。MS (ESI) m/z: 272.4 [M-H]^-。

1.5 6-(对甲苯基)苯并[d]异噻唑-3(2H)-酮-1, 1-二氧化物(4c)的合成

以对甲基苯硼酸(0.44 g, 3.2 mmol) 为起始原料, 合成与纯化方法类似4a。产率: 87%, 熔点: 296~298 ℃。¹H NMR (DMSO-d₆) δ_H: 2.38 (s, 3H), 7.34 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.77 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 8.02 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.19 (dd, J = 8.1 Hz, 1.5 Hz, 1H), 8.47 (d, J = 1.2 Hz, 1H)。MS (ESI) m/z: 272.4 [M-H]^-。

1.6 6-(4-氟苯基)苯并[d]异噻唑-3(2H)-酮-1, 1-二氧化物(4d)的合成

以4-氟苯硼酸(0.45 g, 3.2 mmol) 为起始原料, 合成与纯化方法类似4a。产率: 89%, 熔点: 294~297 ℃。¹H NMR (DMSO-d₆) δ_H: 7.35 (m, 2H), 7.92 (m, 2H), 8.03 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.20 (dd, J = 8.1 Hz, 1.8 Hz, 1H), 8.50 (d, J = 1.2 Hz, 1H)。MS (ESI) m/z: 276.3 [M-H]^-。

1.7 6-(4-氯苯基)苯并[d]异噻唑-3(2H)-酮-1, 1-二氧化物(4e)的合成

以4-氯苯硼酸(0.50 g, 3.2 mmol) 为起始原料, 合成与纯化方法类似4a。产率: 92%, 熔点: > 300 ℃。¹H NMR (DMSO-d₆) δ_H: 7.59 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.90 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 8.04 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.22 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.53 (s, 1H)。MS (ESI) m/z: 292.3 [M-H]^-。

1.8 6-(4-甲氧基苯基)苯并[d]异噻唑-3(2H)-酮-1, 1-二氧化物(4f)的合成

以4-甲氧基苯硼酸(0.49 g, 3.2 mmol) 为起始原料, 合成与纯化方法类似4a。产率: 95%, 熔点: > 300 ℃。¹H NMR (DMSO-d₆) δ_H: 3.84 (s, 3H), 7.07 (m, 2H), 7.83 (m, 2H), 7.99 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.17 (dd, J = 8.4 Hz, 1.8 Hz, 1H), 8.44 (s, 1H)。MS (ESI) m/z: 288.2 [M-H]^-。

1.9 6-(萘-1-基)苯并[d]异噻唑-3(2H)-酮-1, 1-二氧化物(4g)的合成

以1-萘硼酸(0.55 g, 3.2 mmol) 为起始原料, 合成与纯化方法类似4a。产率: 85%, 熔点: 209~211 ℃。¹H NMR (DMSO-d₆) δ_H: 7.53 (m, 5H), 8.00 (dd, J = 7.8 Hz, 1.5 Hz, 1H), 8.06 (m, 2H), 8.12 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 8.29 (s, 1H)。MS (ESI) m/z: 308.4 [M-H]^-。

1.10 6-(苯并[d]^[1,3]二氧杂环戊烯-5-基)苯并[d]异噻唑-3(2H)-酮-1, 1-二氧化物(4h)的合成

以苯并[d]^[1,3]二氧杂环戊烯-5-基硼酸(0.53 g, 3.2 mmol) 为起始原料, 合成与纯化方法类似4a。产率: 92%, 熔点: 281~284 ℃。¹H NMR (DMSO-d₆) δ_H: 6.12 (s, 2H), 7.06 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.38 (dd, J = 8.4 Hz, 1.8 Hz, 1H), 7.51 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.97 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.15 (dd, J = 8.1 Hz, 1.5 Hz, 1H), 8.43 (s, 1H)。MS (ESI) m/z: 302.4 [M-H]^-。

1.11 (E)-3-(4-((1, 1-二氧代-3-氧代-6-苯基苯并[d]异噻唑-2(3H)-基)甲基)苯基)丙烯酸(6a)的合成

将4a (1.71 g, 6.6 mmol) 和碳酸氢钠(1.11 g, 13.2 mmol) 加入3 mL DMF中, 然后逐渐加入5 (1.90 g, 7.9 mmol), 并在60~80 ℃下搅拌4 h。将混合物倒入15 mL水中, 用EtOH重结晶, 得到纯品6a。产率: 87%, 熔点: 271~273 ℃。¹H NMR (DMSO-d₆) δ_H: 4.98 (s, 2H), 6.51 (d, J = 15.9 Hz, 1H), 7.46 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.51 (m, 4H), 7.69 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.89 (dd, J = 8.4 Hz, 1.2 Hz, 2H), 8.16 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.30 (dd, J = 8.1 Hz, 1.5 Hz, 1H), 8.73 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 12.43 (s, 1H)。MS (ESI) m/z: 418.5 [M-H]^-。

1.12 (E)-3-(4-((1, 1-二氧代-3-氧代-6-(间甲苯基)苯并[d]异噻唑-2(3H)-基)甲基)苯基)丙烯酸(6b)的合成

以4b (1.0 g, 3.7 mmol) 为起始原料, 合成与纯化方法类似6a。产率: 88%, 熔点: 297~299 ℃。¹H NMR (DMSO-d₆) δ_H: 2.41 (s, 3H), 4.97 (s, 2H), 6.51 (d, J = 16.2 Hz, 1H), 7.31 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.41 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.46 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.56 (d, J = 15.9 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 8.1 Hz, 3H), 7.75 (s, 1H), 8.14 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.29 (dd, J = 8.1 Hz, 1.5 Hz, 1H), 8.70 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 12.40 (s, 1H)。MS (ESI) m/z: 432.5 [M-H]^-。

1.13 (E)-3-(4-((1, 1-二氧代-3-氧代-6-(对甲苯基)苯并[d]异噻唑-2(3H)-基)甲基)苯基)丙烯酸(6c)的合成

以4c (1.0 g, 3.7 mmol) 为起始原料, 合成与纯化方法类似6a。产率: 90%, 熔点: 298~300 ℃。¹H NMR (DMSO-d₆) δ_H: 2.39 (s, 3H), 4.97 (s, 2H), 6.51 (d, J = 15.9 Hz, 1H), 7.35 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.46 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.55 (d, J = 15.9 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 8.4Hz, 2H), 7.80 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 8.13 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.28 (dd, J = 8.1 Hz, 1.5 Hz, 1H), 8.70 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 12.42 (s, 1H)。MS (ESI) m/z: 432.5 [M-H]^-。

1.14 (E)-3-(4-((6-(4-氟苯基)-1, 1-二氧代-3-氧代苯并[d]异噻唑-2(3H)-基)甲基)苯基)丙烯酸(6d)的合成

以4d (1.0 g, 3.6 mmol) 为起始原料, 合成与纯化方法类似6a。产率: 93%, 熔点: 264~266 ℃。¹H NMR (DMSO-d₆) δ_H: 4.97 (s, 2H), 6.50 (d, J = 16.2 Hz, 1H), 7.37 (m, 2H), 7.46 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.55 (d, J = 16.2 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.95 (m, 2H), 8.15 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.29 (dd, J = 8.1 Hz, 1.5 Hz, 1H), 8.72 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 12.40 (s, 1H)。MS (ESI) m/z: 436.5 [M-H]^-。

1.15 (E)-3-(4-((6-(4-氯苯基)-1, 1-二氧代-3-氧代苯并[d]异噻唑-2(3H)-基)甲基)苯基)丙烯酸(6e)的合成

以4e (1.0 g, 3.4 mmol) 为起始原料, 合成与纯化方法类似6a。产率: 92%, 熔点: > 300 ℃。¹H NMR (DMSO-d₆) δ_H: 4.98 (s, 2H), 6.50 (d, J = 15.9 Hz, 1H), 7.46 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.55 (d, J = 15.9 Hz, 1H), 7.60 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.68 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.93 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 8.16 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.30 (dd, J = 8.1 Hz, 1.5 Hz, 1H), 8.75 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 12.40 (s, 1H)。MS (ESI) m/z: 452.4 [M-H]^-。

1.16 (E)-3-(4-((6-(4-甲氧基苯基)-1, 1-二氧代-3-氧代苯并[d]异噻唑-2(3H)-基)甲基)苯基)丙烯酸(6f)的合成

以4f (1.0 g, 3.5 mmol) 为起始原料, 合成与纯化方法类似6a。产率: 94%, 熔点: 289~292 ℃。¹H NMR (DMSO-d₆) δ_H: 3.84 (s, 3H), 4.96 (s, 2H), 6.50 (d, J = 15.9 Hz, 1H), 7.09 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.46 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.55 (d, J = 15.9 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.88 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 8.11 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.26 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.66 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 12.39 (s, 1H)。MS (ESI) m/z: 448.5 [M-H]^-。

1.17 (E)-3-(4-((6-(萘-1-基)-1, 1-二氧代-3-氧代苯并[d]异噻唑-2(3H)-基)甲基)苯基)丙烯酸(6g)的合成

以4g (1.0 g, 3.2 mmol) 为起始原料, 合成与纯化方法类似6a。产率: 75%, 熔点: 239~241 ℃。¹H NMR (DMSO-d₆) δ_H: 5.01 (s, 2H), 6.52 (d, J = 15.9 Hz, 1H), 7.49 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.54 (m, 8H), 8.06 (m, 3H), 8.23 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 8.51 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 12.40 (s, 1H)。MS (ESI) m/z: 468.5[M-H]^-。

1.18 (E)-3-(4-((6-(苯并[d]^[1,3]二氧杂环戊烯-5-基)-1, 1-二氧代-3-氧代苯并[d]异噻唑-2(3H)-基)甲基)苯基)丙烯酸(6h)的合成

以4h (1.0 g, 3.3 mmol) 为起始原料, 合成与纯化方法类似6a。产率: 85%, 熔点: > 300 ℃。¹H NMR (DMSO-d₆) δ_H: 4.96 (s, 2H), 6.13 (s, 2H), 6.50 (d, J = 16.2 Hz, 1H), 7.07 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.43 (m, 5H), 7.68 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 8.09 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.24 (dd, J = 8.1 Hz, 1.5 Hz, 1H), 8.65 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 12.39 (s, 1H)。MS (ESI) m/z: 462.4 [M-H]^-。

1.19 (E)-3-(4-((1, 1-二氧代-3-氧代苯并[d]异噻唑- 2(3H)-基)甲基)苯基)丙烯酸(8a)的合成

将糖精(1.21 g, 6.6 mmol) 和碳酸氢钠(1.11 g, 13.2 mmol) 加入3 mL DMF中, 然后逐渐加入5 (1.90 g, 7.9 mmol), 并在60~80 ℃下搅拌4 h。将混合物倒入15 mL水中, 用EtOH重结晶, 得到纯品8a。产率: 92%, 熔点: 273~276 ℃。¹H NMR (DMSO-d₆) δ_H: 4.96 (s, 2H), 6.50 (d, J = 16.2 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.55 (d, J = 16.2 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.99 (m, 3H), 8.34 (dd, J = 6.9 Hz, 0.9 Hz, 1H), 12.42 (s, 1H)。MS (ESI) m/z: 342.2[M-H]^-。

1.20 (E)-3-(4-((6-硝基-1, 1-二氧代-3-氧代苯并[d]异噻唑-2(3H)-基)甲基)苯基)丙烯酸(8b)的合成

以1 (1.51 g, 6.6 mmol) 为起始原料, 合成与纯化方法类似8a。产率: 71%, 熔点: 285~287 ℃。¹H NMR (DMSO-d₆) δ_H: 5.00 (s, 2H), 6.51 (d, J = 16.2 Hz, 1H), 7.47 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.55 (d, J = 16.2 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 8.33 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.71 (dd, J = 8.4 Hz, 2.1 Hz, 1H), 9.32 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 12.40 (s, 1H)。MS (ESI) m/z: 387.3 [M-H]^-。

1.21 (E)-3-(4-((6-碘-1, 1-二氧代-3-氧代苯并[d]异噻唑-2(3H)-基)甲基)苯基)丙烯酸(8c)的合成

以3 (2.04 g, 6.6 mmol) 为起始原料, 合成与纯化方法类似8a。产率: 87%, 熔点: 295~297 ℃。¹H NMR (DMSO-d₆) δ_H: 4.93 (s, 2H), 6.51 (d, J = 15.9 Hz, 1H), 7.43 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.55 (d, J = 15.9 Hz, 1H), 7.67 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.82 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.36 (dd, J = 8.1 Hz, 1.5 Hz, 1H), 8.87 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 12.43 (s, 1H)。MS (ESI) m/z: 468.2 [M-H]^-。

1.22 (E)-3-(4-((1, 1-二氧代-3-氧代-6-苯基苯并[d]异噻唑-2(3H)-基)甲基)苯基)-N-羟基丙烯酰胺(7a)的合成

将Et₃N (0.33 mL, 3.3 mmol) 和氯甲酸异丁酯(0.43 mL, 3.3 mmol) 加入6a (3.3 mmol) 的无水THF (20 mL) 溶液中, 在0 ℃下搅拌10 min。然后, 加入溶于无水CH₃OH (1 mL) 中的混合物NH₂OH^.HCl (0.34 g, 5.0 mmol) 和Et₃N (0.53 mL, 5.0 mmol)。将所得溶液搅拌3~6 h。过滤混合物并除去溶剂后, 用乙酸乙酯(50 mL) 溶解, 并分别用盐酸(1 mol·L^-1, 55 mL) 和饱和碳酸氢钠(50 mL) 洗涤3次。粗产物可通过柱色谱法(DCM/MeOH, 100∶1) 纯化最终得到终产物。产率: 56%。熔点: 214~216 ℃。¹H NMR (DMSO-d₆) δ_H: 4.97 (s, 2H), 6.43 (d, J = 15.9 Hz, 1H), 7.42 (m, 8H), 7.89 (dd, J = 7.8 Hz, 1.2 Hz, 2H), 8.16 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.30 (dd, J = 8.1 Hz, 1.5 Hz, 1H), 8.72 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 9.03 (s, 1H), 10.76 (s, 1H); ¹³C NMR (DMSO-d₆) δ_C: 41.42, 119.37, 119.53, 124.80, 125.71, 127.51, 127.61, 128.36, 129.25, 129.49, 133.19, 134.38, 136.44, 136.97, 137.76, 138.00, 147.49, 158.41, 162.65。HRMS (AP-ESI): m/z calcd. for C₂₃H₁₈N₂O₅S [M+H]⁺ 435.100 9, found 435.100 6。

1.23 (E)-3-(4-((1, 1-二氧代-3-氧代-6-(间甲苯基)苯并[d]异噻唑-2(3H)-基)甲基)苯基)-N-羟基丙烯酰胺(7b)的合成

以6b (1.0 g, 2.3 mmol) 为起始原料, 合成与纯化方法参照7a。产率: 59%。熔点: 188~190 ℃。¹H NMR (DMSO-d₆) δ_H: 2.41 (s, 3H), 4.96 (s, 2H), 6.43 (d, J = 15.9 Hz, 1H), 7.32 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.42 (m, 4H), 7.55 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.68 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.76 (s, 1H), 8.15 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.29 (dd, J = 8.4 Hz, 1.8 Hz, 1H), 8.71 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 9.04 (s, 1H), 10.77 (s, 1H); ¹³C NMR (DMSO-d₆) δ_C: 20.93, 41.41, 119.36, 119.44, 124.55, 124.70, 125.67, 127.61, 128.12, 128.36, 129.14, 130.13, 133.08, 134.37, 136.45, 136.86, 137.75, 137.98, 138.63, 147.59, 158.44, 162.64。HRMS (AP-ESI) m/z calcd. for C₂₄H₂₀N₂O₅S [M+H]⁺ 449.116 6, found 449.116 4。

1.24 (E)-3-(4-((1, 1-二氧代-3-氧代-6-(对甲苯基)苯并[d]异噻唑-2(3H)-基)甲基)苯基)-N-羟基丙烯酰胺(7c)的合成

以6c (1.0 g, 2.3 mmol) 为起始原料, 合成与纯化方法参照7a。产率: 50%。熔点: 211~213 ℃。¹H NMR (DMSO-d₆) δ_H: 2.38 (s, 3H), 4.96 (s, 2H), 6.43 (d, J = 15.9 Hz, 1H), 7.35 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.42 (m, 3H), 7.55 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.80 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 8.13 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.28 (dd, J = 8.1 Hz, 1.2 Hz, 1H), 8.69 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 9.04 (s, 1H), 10.76 (s, 1H); ¹³C NMR (DMSO-d₆) δ_C: 20.71, 41.40, 119.10, 119.36, 124.43, 125.66, 127.32, 127.61, 128.36, 129.85, 132.73, 134.04, 134.37, 136.46, 137.76, 138.02, 139.33, 147.42, 158.44, 162.65。HRMS (AP-ESI) m/z calcd. for C₂₄H₂₀N₂O₅S [M+H]⁺ 449.116 6, found 449.116 5。

1.25 (E)-3-(4-((6-(4-氟苯基)-1, 1-二氧代-3-氧代苯并[d]异噻唑-2(3H)-基)甲基)苯基)-N-羟基丙烯酰胺(7d)的合成

以6d (1.0 g, 2.3 mmol) 为起始原料, 合成与纯化方法参照7a。产率: 43%。熔点: 204~206 ℃。¹H NMR (DMSO-d₆) δ_H: 4.96 (s, 2H), 6.43 (d, J = 15.9 Hz, 1H), 7.37 (m, 5H), 7.55 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.95 (m, 2H), 8.15 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.29 (dd, J = 8.1 Hz, 1.2 Hz, 1H), 8.73 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 9.05 (s, 1H), 10.77 (s, 1H); ¹³C NMR (DMSO-d₆) δ_C: 41.43, 116.14 (d, J = 21.5 Hz), 119.37, 119.50, 124.74, 125.70, 127.61, 128.36, 129.85 (d, J = 8.6 Hz), 133.10, 133.45 (d, J = 3.1 Hz), 134.38, 136.42, 137.75, 137.99, 146.38, 158.38, 162.65, 163.02 (d, J = 246.1 Hz)。HRMS (AP-ESI) m/z calcd for C₂₃H₁₇FN₂O₅S [M+H]⁺ 453.091 5, found 453.091 9。

1.26 (E)-3-(4-((6-(4-氯苯基)-1, 1-二氧代-3-氧代苯并[d]异噻唑-2(3H)-基)甲基)苯基)-N-羟基丙烯酰胺(7e)的合成

以6e (1.0 g, 2.2 mmol) 为起始原料, 合成与纯化方法参照7a。产率: 52%。熔点: 230~232 ℃。¹H NMR (DMSO-d₆) δ_H: 4.97 (s, 2H), 6.43 (d, J = 15.9 Hz, 1H), 7.42 (m, 3H), 7.55 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.61 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.93 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 8.16 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.31 (dd, J = 8.1 Hz, 1.5 Hz, 1H), 8.76 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 9.05 (s, 1H), 10.77 (s, 1H); ¹³C NMR (DMSO-d₆) δ_C: 41.45, 119.37, 119.61, 125.05, 125.74, 127.61, 128.37, 129.18, 129.33, 133.15, 134.39, 134.54, 135.75, 136.40, 137.76, 137.98, 146.09, 158.33, 162.66。HRMS (AP-ESI) m/z calcd. for C₂₃H₁₇ClN₂O₅S [M+H]⁺ 469.061 9, found 469.061 9。

1.27 (E)-3-(4-((6-(4-甲氧基苯基)-1, 1-二氧代-3-氧代苯并[d]异噻唑-2(3H)-基)甲基)苯基)-N-羟基丙烯酰胺(7f)的合成

以6f (1.0 g, 2.2 mmol) 为起始原料, 合成与纯化方法参照7a。产率: 54%。熔点: 216~217 ℃。¹H NMR (DMSO-d₆) δ_H: 3.84 (s, 3H), 4.95 (s, 2H), 6.43 (d, J = 15.9 Hz, 1H), 7.09 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.42 (m, 3H), 7.55 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.88 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 8.11 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.26 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.67 (s, 1H), 9.05 (s, 1H), 10.77 (s, 1H); ¹³C NMR (DMSO-d₆) δ_C: 41.37, 55.35, 114.71, 118.62, 119.35, 123.87, 125.64, 127.60, 128.33, 128.87, 129.08, 132.25, 134.35, 136.49, 137.74, 138.08, 147.13, 158.48, 160.54, 162.64。HRMS (AP-ESI) m/z calcd. for C₂₄H₂₀N₂O₆S [M+H]⁺ 465.111 5, found 465.111 5。

1.28 (E)-3-(4-((6-(萘-1-基)-1, 1-二氧代-3-氧代苯并[d]异噻唑-2(3H)-基)甲基)苯基)-N-羟基丙烯酰胺(7g)的合成

以6g (1.0 g, 2.1 mmol) 为起始原料, 合成与纯化方法参照7a。产率: 55%。熔点: 188~190 ℃。¹H NMR (DMSO-d₆) δ_H: 5.00 (s, 2H), 6.44 (d, J = 15.9 Hz, 1H), 7.43 (m, 10H), 8.06 (m, 3H), 8.23 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 8.51 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 9.04 (s, 1H), 10.77 (s, 1H); ¹³C NMR (DMSO-d₆) δ_C: 41.45, 119.37, 122.60, 124.49, 125.23, 125.25, 125.54, 126.35, 127.13, 127.61, 127.66, 128.37, 128.56, 129.19, 130.22, 133.32, 134.39, 136.43, 136.48, 136.68, 137.46, 137.76, 147.70, 158.44, 162.64。HRMS (AP-ESI) m/z calcd. for C₂₇H₂₀N₂O₅S [M+H]⁺ 485.116 6, found 485.116 5。

1.29 (E)-3-(4-((6-(苯并[d]^[1,3]二氧杂环戊烯-5-基)-1, 1-二氧代-3-氧代苯并[d]异噻唑-2(3H)-基)甲基)苯基)-N-羟基丙烯酰胺(7h)的合成

以6h (1.0 g, 2.2 mmol) 为起始原料, 合成与纯化方法参照7a。产率: 45%。熔点: 200~202 ℃。¹H NMR (DMSO-d₆) δ_H: 4.95 (s, 2H), 6.13 (s, 2H), 6.43 (d, J = 15.9 Hz, 1H), 7.07 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.42 (m, 7H), 8.09 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.24 (dd, J = 8.1 Hz, 1.5 Hz, 1H), 8.65 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 9.03 (s, 1H), 10.76 (s, 1H); ¹³C NMR (DMSO-d₆) δ_C: 41.37, 101.64, 107.63, 108.90, 119.00, 119.34, 121.93, 124.13, 125.57, 127.60, 128.33, 130.93, 132.61, 134.35, 136.48, 137.74, 138.01, 147.11, 148.35, 148.63, 158.43, 162.63。HRMS (AP-ESI) m/z calcd. for C₂₄H₁₈N₂O₇S [M+H]⁺ 479.090 7, found 479.090 5。

1.30 (E)-3-(4-((1, 1-二氧代-3-氧代苯并[d]异噻唑- 2(3H)-基)甲基)苯基)-N-羟基丙烯酰胺(9a)的合成

将Et₃N (0.33 mL, 3.3 mmol) 和氯甲酸异丁酯(0.43 mL, 3.3 mmol) 加入8a (3.3 mmol) 的无水THF (20 mL) 溶液中, 在0 ℃下搅拌10 min。然后, 加入溶于无水CH₃OH (1 mL) 中的混合物NH₂OH^.HCl (0.34 g, 5.0 mmol) 和Et₃N (0.53 mL, 5.0 mmol)。将所得溶液搅拌3~6 h。过滤混合物并除去溶剂后, 用乙酸乙酯(50 mL) 溶解, 并分别用盐酸(1 mol·L^-1, 55 mL) 和饱和碳酸氢钠(50 mL) 洗涤3次。粗产物可通过柱色谱法(DCM/MeOH, 100∶1) 纯化最终得到终产物。产率: 52%。熔点: 191~193 ℃。¹H NMR (DMSO-d₆) δ_H: 4.94 (s, 2H), 6.43 (d, J = 15.3 Hz, 1H), 7.42 (d, J = 15.3 Hz, 1H), 7.44 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.54 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.99 (m, 3H), 8.33 (dd, J = 6.9 Hz, 0.9 Hz, 1H), 9.03 (s, 1H), 10.76 (s, 1H); ¹³C NMR (DMSO-d₆) δ_C: 41.36, 119.37, 121.62, 125.19, 126.18, 127.59, 128.36, 134.37, 135.30, 135.89, 136.36, 136.83, 137.72, 158.59, 162.62。HRMS (AP-ESI) m/z calcd. for C₁₇H₁₄N₂O₅S [M+H]⁺ 359.069 6, found 359.069 6。

1.31 (E)-3-(4-((6-硝基-1, 1-二氧代-3-氧代苯并[d]异噻唑-2(3H)-基)甲基)苯基)-N-羟基丙烯酰胺(9b)的合成

以8b (1.0 g, 2.6 mmol) 为起始原料, 合成与纯化方法参照9a。产率: 57%。熔点: 198~200 ℃。¹H NMR (DMSO-d₆) δ_H: 5.00 (s, 2H), 6.44 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 7.42 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 7.46 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.55 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 8.33 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.72 (dd, J = 8.7 Hz, 2.1 Hz, 1H), 9.06 (s, 1H), 9.32 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 10.79 (s, 1H); ¹³C NMR (DMSO-d₆) δ_C: 41.90, 118.06, 119.54, 126.96, 127.59, 128.49, 130.27, 130.92, 134.52, 135.92, 137.63, 137.72, 151.85, 157.10, 162.61。HRMS (AP-ESI) m/z calcd. for C₁₇H₁₃N₃O₇S [M+H]⁺ 404.054 7, found 404.054 9。

1.32 (E)-3-(4-((6-碘-1, 1-二氧代-3-氧代苯并[d]异噻唑-2(3H)-基)甲基)苯基)-N-羟基丙烯酰胺(9c)的合成

以8c (1.0 g, 2.1 mmol) 为起始原料, 合成与纯化方法参照9a。产率: 47%。熔点: 193~195 ℃。¹H NMR (DMSO-d₆) δ_H: 4.92 (s, 2H), 6.42 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 7.41 (d, J = 15.6 Hz, 2H), 7.43 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.54 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.83 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.36 (dd, J = 8.1 Hz, 1.5 Hz, 1H), 8.86 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 9.05 (s, 1H), 10.77 (s, 1H); ¹³C NMR (DMSO-d₆) δ_C: 41.43, 103.95, 119.39, 125.63, 126.41, 127.58, 128.39, 129.97, 134.41, 136.19, 137.69, 137.84, 144.07, 158.29, 162.59。HRMS (AP-ESI) m/z calcd. for C₁₇H₁₃IN₂O₅S [M+H]⁺ 484.966 3, found 484.966 2。

2 HDACs酶抑制活性测试

在96孔黑色酶标板板中加入50 μL不同浓度的待测化合物和10 μL HDACs酶溶液(HeLa细胞核提取物), 将混合物在37 ℃下孵育5 min。然后, 加入40 μL荧光底物Ac-LeuGlyLys (Ac)-AMC (25 μmol·L^-1), 在37 ℃下继续孵育30 min。孵育结束后, 加入100 μL含有胰蛋白酶(10 mg·mL^-1) 和TSA (2 μmol·L^-1) 的终止液以终止反应。反应在37 ℃终止20 min后, 使用微孔板读取器分别在390和460 nm的激发波长和发射波长下测量荧光强度。最后, 计算抑制率并使用GraphPad Prism软件计算IC₅₀值。

3 细胞培养

所有细胞在含5% CO₂的恒温培养箱中培养, 温度为37 ℃。人乳腺癌细胞系MDA-MB-231、人急性髓系白血病细胞系KG1使用DMEM培养基; 人前列腺癌细胞系PC-3使用Ham's F-12K培养基; 人急性髓系白血病细胞系K562使用IMDM培养基, 所有细胞均培养于10% FBS (VivaCell, C04001500) + 1% P/S (Solarbio, P1400) 中, 细胞长至90%密度时进行传代处理, 所有细胞均购自中国科学院上海细胞库。

4 抗增殖实验

取对数生长期的细胞, 常规细胞消化后接种于96孔板中, 每孔100 μL。MDA-MB-231细胞、PC-3细胞铺板密度为每毫升3×10⁴, KG1细胞、K562细胞铺板密度为每毫升8×10⁴, 37 ℃培养12 h使贴壁细胞进行贴壁。使用相应培养基对化合物进行不同梯度的稀释, 并设置相应的对照组和空白组。每组设3个复孔, 所有化合物均使用DMSO配制为10 mmol·L^-1储备液。37 ℃、5% CO₂条件下继续培养48 h, 每孔加入MTT (Solarbio, M8180) 溶液(5 mg·mL^-1) 20 μL, 37 ℃避光孵育4 h。以100 r·min^-1离心10 min, 小心吸弃培养基, 每孔加入200 μL DMSO, 低速振摇10 min使结晶物充分溶解。在酶标仪上测定490 nm (630 nm校准) 处的吸光度, 并使用GraphPad Prism软件计算抑制率和IC₅₀值。

5 分子对接

HDAC1蛋白结构来自RCSB数据库(PDB: 5ICN), 然后使用Sybyl-x软件包对蛋白和小分子的结构进行准备处理。分子对接使用AutoDock Vina进行, 根据对接得分及异羟肟酸与活性位点的锌离子的螯合作用, 选择代表性的构象作为目标化合物的预测结合模式。图片使用UCSF Chimera生成。

6 蛋白质分离和蛋白免疫印迹

将MDA-MB-231细胞(4×10⁶) 置于60 mm培养皿中, 加入指定浓度的目标化合物继续培养24 h。使用总蛋白提取试剂盒(Bestbio, 中国上海) 提取蛋白质, 在10%十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) 上电泳分离, 然后电转移到聚偏二氟乙烯膜上。用5%脱脂牛奶封闭膜, 并与抗乙酰组蛋白兔单克隆抗体(H3K9) 和抗β-actin兔多克隆抗体一起孵育。最后, 用Odyssey红外成像系统对印迹膜进行成像。

7 肿瘤异种移植模型

本研究所有动物实验均严格按照山东大学药学院伦理委员会批准的研究方案进行(批准号: 230094)。BALB/c裸鼠购自维通利华公司, 并在山东大学模式动物研究中心饲养(SPF级)。当MDA-MB-231细胞长至对数生长期时, 1 000 r·min^-1离心10 min收集细胞, 并使用无菌PBS溶液洗涤两次。充分混匀细胞悬液, 调整细胞密度至每毫升4×10⁷个, 以每只100 μL的体积对裸鼠(雄性, 8周龄) 右侧腋下进行皮下接种。待肿瘤体积达到100 mm³时, 对小鼠随机分组并开始给药, 以20 g小鼠体重给药200 μL的体积配置目标化合物浓度, 每隔3天称量并记录小鼠体重和肿瘤体积。治疗结束后, 对小鼠进行CO₂安乐死, 称量并记录肿瘤组织的重量。

作者贡献: 李晓萌负责化学合成、生物评价和文章写作; 方浩对本文提供指导性支持, 设计论文总纲, 终审论文; 韩雷强负责设计研究方案, 指导研究开展, 对文章进行修改; 侯旭奔负责分子对接研究; 刘昱辰负责中间体和目标化合物合成; 权梦谣负责文章修改与统计分析。

利益冲突: 本文所有作者声明不存在利益冲突关系。

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国家自然科学基金资助项目(81874288)

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2024年第59卷第11期

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doi: 10.16438/j.0513-4870.2024-0562

接收时间：2024-06-17
首发时间：2025-11-24
出版时间：2024-11-12

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收稿日期：2024-06-17
修回日期：2024-08-28

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国家自然科学基金资助项目(81874288)

作者信息

1.山东大学第二医院药学部, 山东济南 250033

2.山东大学药学院, 天然产物化学生物学教育部重点实验室, 山东济南 250012

通讯作者:

^*韩雷强, Tel: 86-531-85875139, E-mail: hanlq007@sina.cn;

方浩, Tel: 86-531-88381168, E-mail: haofangcn@sdu.edu.cn

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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