药学学报

No.	δ_C, type	δ_H (J in Hz)		No.	δ_C, type	δ_H (J in Hz)
2	159.7, C			5″	72.0, CH	3.90, dq (9.5, 6.1)
3	134.3, C		6″	18.1, CH₃	1.33, d (6.1)
4	179.0, C		1‴	107.0, CH	3.36, d (7.7)
5	162.9, C		2‴	76.3, CH	3.16, overlapped
6	106.5, C		3‴	77.1, CH	3.27, t (9.2)
7	162.2, C		4‴	71.6, CH	3.04, t (9.4)
8	100.1, CH	6.35, s	5‴	77.4, CH	3.16, overlapped
9	155.7, C		6‴	64.0, CH₂	5.35, dd (12.0, 2.0) 3.51, dd (12.0, 9.6)
10	107.0, C		1″″	127.0, C
1′	122.0, C		2″″	133.7, CH	8.03, d (2.1)
2′, 6′	133.2, CH	7.54, d (8.3)	3″″	120.9, C
3′, 5′	116.5, CH	6.68, d (8.3)	4″″	158.9, C
4′	161.6, C		5″″	117.9, CH	6.97, d (8.2)
1″	102.8, CH	5.44, d (1.3)	6″″	133.3, CH	7.38, dd (8.3, 2.3)
2″	68.7, CH	3.65, dd (3.6, 1.3)	7″″	145.2, CH	7.74, d (16.0)
3″	85.4, CH	3.08, dd (9.3, 3.7)	8″″	117.2, CH	6.69, d (16.1)
4″	72.5, CH	3.46, d (9.5)	9″″	168.1, C

No.	δ_C, type	δ_H (J in Hz)		No.	δ_C, type	δ_H (J in Hz)
2	159.7, C			5″	72.0, CH	3.90, dq (9.5, 6.1)
3	134.3, C		6″	18.1, CH₃	1.33, d (6.1)
4	179.0, C		1‴	107.0, CH	3.36, d (7.7)
5	162.9, C		2‴	76.3, CH	3.16, overlapped
6	106.5, C		3‴	77.1, CH	3.27, t (9.2)
7	162.2, C		4‴	71.6, CH	3.04, t (9.4)
8	100.1, CH	6.35, s	5‴	77.4, CH	3.16, overlapped
9	155.7, C		6‴	64.0, CH₂	5.35, dd (12.0, 2.0) 3.51, dd (12.0, 9.6)
10	107.0, C		1″″	127.0, C
1′	122.0, C		2″″	133.7, CH	8.03, d (2.1)
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4″	72.5, CH	3.46, d (9.5)	9″″	168.1, C

Compd.	IC₅₀ value/μmol·L^-1
7	> 50	39.18 ± 1.40	25.67 ± 0.50	> 50	36.77 ± 2.04
DDP	6.65 ± 0.83	16.74 ± 0.68	5.05 ± 0.12	26.69 ± 0.50	28.83 ± 0.83
Taxol	< 0.008	< 0.008	0.12 ± 0.02	< 0.008	< 0.008

Compd.	IC₅₀ value/μmol·L^-1
7	> 50	39.18 ± 1.40	25.67 ± 0.50	> 50	36.77 ± 2.04
DDP	6.65 ± 0.83	16.74 ± 0.68	5.05 ± 0.12	26.69 ± 0.50	28.83 ± 0.83
Taxol	< 0.008	< 0.008	0.12 ± 0.02	< 0.008	< 0.008

野雉尾金粉蕨中一个新的大环黄酮

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廖广凤 ^# , 莫柳艳 ^# , 滕明雪 , 徐秀虹 , 黄千禧 , 卢汝梅 ^*

药学学报 | 研究论文 2023,58(2): 423-428

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药学学报 | 研究论文 2023, 58(2): 423-428

野雉尾金粉蕨中一个新的大环黄酮

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廖广凤^#, 莫柳艳^#, 滕明雪, 徐秀虹, 黄千禧, 卢汝梅^*

作者信息

广西中医药大学药学院, 广西南宁 530001

通讯作者:

*卢汝梅, Tel: 86-771-4953513, E-mail: lrm1969@163.com

A new macrocyclic flavonoid from Onychium japonicum

Guang-feng LIAO, Liu-yan MO, Ming-xue TENG, Xiu-hong XU, Qian-xi HUANG, Ru-mei LU^*

Affiliations

College of Pharmacy, Guangxi University of Chinese Medicine, Nanning 530001, China

出版时间: 2023-02-12 doi: 10.16438/j.0513-4870.2022-1067

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摘要

收起

采用大孔树脂、硅胶、反相硅胶、葡聚糖凝胶及高效液相等色谱法, 从野雉尾金粉蕨中分离纯化得到7个化合物。通过核磁共振谱、质谱等波谱学方法分别鉴定为金粉蕨酮A (1)、槲皮素(2)、槲皮素-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷(3)、山柰酚-7-O-β-D-葡萄糖苷(4)、山柰酚-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷(5)、(-)-prunin (6) 和1, 3, 6, 7-四羟基酮(7), 其中化合物1为结构新颖的大环黄酮类化合物, 其余化合物均为首次从该植物中分离得到。采用MTS法测试化合物对5种肿瘤细胞株的细胞毒活性, 结果显示化合物7对肺癌A549、肝癌SMMC-7721和结肠癌SW480细胞具有弱的细胞增殖抑制活性。

关键词

野雉尾金粉蕨 / 金粉蕨酮A / 金粉蕨属 / 黄酮 / 细胞毒活性

Abstract

收起

Seven compounds were isolated from Onychium japonicum by macroporous resin, silica gel, ODS, Sephadex LH-20 column chromatography and semi-preparative HPLC. Their structures were identified by NMR, MS and other spectroscopic methods as onychone A (1), quercetin (2), quercetin-3-O-α-L-rhamnoside (3), kaempferol-7-O-β-D-glucopyranoside (4), kaempferol-3-O-α-L-rhamnopyranoside (5), (-)-prunin (6), and norathyriol (7). Compound 1 is a novel macrocyclic flavonoid, and all the others are reported from this plant for the first time. In vitro cytotoxic activities of compounds 1-7 were evaluated by MTS testing with five cancer cell lines. Compound 7 exhibited weak cytotoxicity against tumor cell lines A549, SMMC-7721, and SW480.

Key words

Onychium japonicum / onychone A / Onychium / flavonoids / cytotoxic activity

引用本文

廖广凤, 莫柳艳, 滕明雪, 徐秀虹, 黄千禧, 卢汝梅. 野雉尾金粉蕨中一个新的大环黄酮. 药学学报, 2023 , 58 (2) : 423 -428 . DOI: 10.16438/j.0513-4870.2022-1067

Guang-feng LIAO, Liu-yan MO, Ming-xue TENG, Xiu-hong XU, Qian-xi HUANG, Ru-mei LU. A new macrocyclic flavonoid from Onychium japonicum[J]. Acta Pharmaceutica Sinica, 2023 , 58 (2) : 423 -428 . DOI: 10.16438/j.0513-4870.2022-1067

正文

收起

野雉尾金粉蕨Onychium japonicum (Thumb.) Kunze是中国蕨科金粉蕨属植物, 又称小叶金花草、解毒蕨、解毒草、野鸡尾等, 广泛分布于我国华东、华中、东南及西南地区, 日本、菲律宾、印度尼西亚等也有分布^{[1, 2]}。野雉尾金粉蕨在广西壮族地区是常用的解毒药(壮药名: Gutgaijdoeg棍盖冬), 壮医认为其具有调龙路(人体血液循环的通路), 通气道(人体与环境进行气体交换功能的通道)、谷道(人体消化、吸收食物并排出残渣的通道), 解毒除湿, 止血的功效, 用于治疗贫痧(感冒)、能蚌(黄疸)、阿意咪(痢疾)、林得叮相(跌打损伤) 和农药中毒等疾病^[3]。该药临床上常单用或配伍用于治疗癌症等疾病, 是正在研制的抗肿瘤新药“壮药复方铁草胶囊(国家科技支撑计划2006BAI06A17)”的主要药物之一^[4]。“壮药复方铁草胶囊”是广西国际壮医医院用于治疗肝癌、肺癌等恶性肿瘤的临床经验方, 具有消肿散结、驱邪扶正之功, 临床效果显著^[5]。同时, 现代药理研究亦表明野雉尾金粉蕨的醇提物能明显抑制小鼠体内移植性肿瘤小鼠肉瘤S₁₈₀和小鼠肝癌H₂₂的生长, 而且呈现量效关系^[6]。文献报道野雉尾金粉蕨的主要成分有黄酮^{[7, 8]}、蕨素倍半萜^[9]及鸟巢烷二萜^[10]等类成分。为了进一步阐明野雉尾金粉蕨的化学成分, 筛选出结构新颖具有抗肿瘤活性的天然产物, 本文对野雉尾金粉蕨乙酸乙酯部位的化学成分进行研究, 从中分离鉴定了7个黄酮类成分, 分别鉴定为金粉蕨酮A (1)、槲皮素(2)、槲皮素-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷(3)、山柰酚- 7-O-β-D-葡萄糖苷(4)、山柰酚-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷(5)、(-)-prunin (6) 和1, 3, 6, 7-四羟基

酮(7), 其中化合物1为结构罕见的大环黄酮类化合物, 其他化合物均为首次从该植物中分离得到(图 1)。活性测试结果显示, 化合物7对肺癌A549、肝癌SMMC-7721和结肠癌SW480细胞具有一定的细胞增殖抑制活性。

结果与讨论

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1 结构解析

化合物1 黄色固体, [α]$ {}_{\mathrm{D}}^{20} $ +769.7 (c 0.1, MeOH)。HR-ESI-MS显示准分子离子峰m/z: 737.171 7 [M-H]^– (计算值737.171 8), 提示该化合物分子式为C₃₆H₃₄O₁₇, 不饱和度为20。

¹H NMR谱中显示有10个芳香或双键质子信号(表 1), 推测可能含有1个ABX耦合体系的苯环[δ_H 8.03 (1H, d, J = 2.1 Hz, H-2″″), 7.38 (1H, dd, J = 8.3, 2.3 Hz, H-6″″), 6.97 (1H, d, J = 8.2 Hz, H-5″″)]; 1个AA′BB′耦合体系的苯环[δ_H 7.54 (2H, d, J = 8.3 Hz, H-2′, -6′), 6.68 (2H, d, J = 8.3 Hz, H-3′, -5′)]; 1个孤立的芳香质子信号δ_H 6.35 (1H, s, H-8) 及2个反式双键质子信号[δ_H 7.74 (1H, d, J = 16.0 Hz, H-7″″), 6.69 (1H, d, J = 16.1 Hz, H-8″″)]; 以及11个连氧次甲基或亚甲基和1个甲基质子信号δ_H 1.33 (3H, d, J = 6.1 Hz, H-6″), 推测可能为2个糖基的质子信号。¹³C NMR谱、DEPT谱结合HSQC谱显示34个碳信号(包含2个重叠的碳信号δ_C 133.2和116.5), 包括14个季碳, 其中δ_C 179.0、168.1为2个羰基信号; 20个次甲基碳。其中δ_C 145.2、117.2为2个烯碳信号; 1个连氧亚甲基信号δ_C 64.0及1个甲基信号δ_C 18.1。¹H-¹H COSY谱显示H-5″″/H-6″″相关, H-7″″/H-8″″相关, HMBC谱显示H-2″″与C-4″″、C-6″″、C-7″″相关, H-6″″与C-2″″、C-4″″、C-7″″相关, H-7″″与C-2″″、C-6″″、C-9″″相关, H-8″″与C-1″″相关, 确证了对羟基桂皮酰结构片段的存在(图 2)。

¹H-¹H COSY谱显示两组糖残基自旋耦合片段: H-1″/H-2″/H-3″/H-4″/H-5″/H₃-6″和H-1‴/H-2‴/H-3‴/H-4‴/H-5‴/H₂-6‴, 推测可能存在一个鼠李糖和一个葡萄糖单元; 通过酸水解实验, 并结合糖端基质子耦合常数[δ_H 5.44 (1H, d, J = 1.3 Hz, H-1″), 3.36 (1H, d, J = 7.7 Hz, H-1‴)], 最终确定为α-L-鼠李糖和β-D-葡萄糖^[11]。HMBC谱显示H-3″与C-1‴相关, H-6‴与C-9″″相关, 说明鼠李糖的C-3″位通过氧原子与葡萄糖的端基C-1‴位相连, 葡萄糖基的C-6‴通过酯键与对羟基桂皮酸片段的C-9″″相连。

至此, 该化合物剩余15个碳原子, ¹H-¹H COSY谱显示H-2′ (H-6′)/H-3′ (H-5′) 相关, HMBC谱显示H-2′ (H-6′) 与C-2相关, H-8与C-6、C-7、C-10相关, 结合化学位移和分子式, 说明该化合物还存在一个黄酮母核。HMBC谱显示, 鼠李糖的H-1″与C-3相关, 对羟基桂皮酰的H-2″″与C-6相关(图 2), 说明鼠李糖的端基C-1″通过氧原子连接在黄酮的C-3位, 对羟基桂皮酸的C-3″″连接在黄酮的C-6位, 形成了如图 1所示的大环黄酮结构。

化合物1黄酮的A环与桂皮酰基的苯环间存在联苯轴手性分子的特征, 进一步采用TDDFT方法, 计算了该化合物简化模型的ECD谱, 发现计算ECD谱与实验ECD谱(图 3) Cotton吸收峰一致, 从而确定化合物1的绝对构型为aS, 命名为金粉蕨酮A (onychone A)。该化合物属于结构罕见的大环黄酮类, 大环母核中由对羟基桂皮酰、葡萄糖、鼠李糖以及黄酮的A和B环构成。

2 化合物的肿瘤细胞毒活性

体外细胞毒活性测试结果表明(表 2), 化合物7对肺癌A549、肝癌SMMC-7721和结肠癌SW480细胞显示弱的细胞毒活性; 在50 μmol·L^-1浓度下, 化合物1~6对测试的5种肿瘤细胞增殖均无显著抑制作用。

实验部分

收起

岛津UV-2401PC型紫外可见分光光度仪、LC-20AR半制备液相色谱仪(日本岛津公司), 半制备柱为YMC-Pack ODS-A (250 mm × 10 mm, 5 μm)、分析柱为YMC-Pack ODS-A (250 mm × 4.6 mm, 5 μm) (日本株式会社维美希上海代表处); 鲁道夫Autopol IV旋光仪、布鲁克Avance III -500 MHz型核磁共振波谱仪(德国鲁道夫公司); 赛默飞世尔NICOLET iS10型中红外光谱仪(美国赛默飞世尔公司); 安捷伦TOF-G6230型质谱仪、安捷伦1100及1260高效液相色谱仪(美国安捷伦公司); 赛默飞世尔FAB-DFS型质谱仪(德国赛默飞世尔科技公司); 中低压半制备-REVELERIS X2型液相色谱仪(美国格雷斯戴维森公司); 柱色谱硅胶(100~200、200~300目)、薄层硅胶板60 F254 (青岛海洋化工厂); ODS填料(日本YMC公司); MCI填料(日本三菱化学公司); Sephadex LH-20 (美国Pharmacia公司); 甲醇、乙腈[色谱级, 赛默飞世尔科技(中国) 有限公司]; 实验用水(自制, Milli-Q型超纯水机); L-半胱氨酸甲酯盐酸盐、邻甲苯异硫氰酸酯、吡啶(上海麦克林生化科技有限公司); D-葡萄糖、L-鼠李糖(成都麦德生科技有限公司); 其他试剂为分析纯(西陇化工股份有限公司)。二氧化碳培养箱、MULTISKAN FC酶标仪(赛默飞世尔公司); 移液枪(德国艾本德); 白血病HL-60、肺癌A549、肝癌SMMC-7721、乳腺癌MDA-MB-231、结肠癌SW480细胞株(美国ATCC)。

野雉尾金粉蕨药材于2020年5月由广西仙茱中药科技有限公司提供, 经广西中医药大学廖月葵高级实验师鉴定为中国蕨科金粉蕨属植物野雉尾金粉蕨Onychium japonicum (Thumb.) Kunze的干燥全草。植物标本(编号JDC-001) 保存于广西中医药大学药学院。

1 提取与分离

干燥的野雉尾金粉蕨全草18 kg, 用75%乙醇加热回流提取2次, 每次2 h。合并提取液后减压浓缩得总浸膏2 076 g, 总浸膏用等量水悬浮, 依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取, 回收溶剂, 得石油醚部位浸膏110 g, 乙酸乙酯部位浸膏1 023 g, 正丁醇部位浸膏217 g和水部位浸膏726 g。

乙酸乙酯部位浸膏950 g, 经AB-8大孔树脂柱色谱分离, 依次以甲醇-水(30%~100%) 梯度洗脱, 得到5个组分Fr. A~Fr. E。Fr. B经硅胶柱色谱分离, 以二氯甲烷-甲醇(50∶1→30∶1→10∶1→5∶1→3∶1→1∶1→0∶1) 系统梯度洗脱, 得到11个组分Fr. B.1~Fr. B.11。Fr. B.8经C18反相中低压柱色谱(甲醇-水, 10%~100%) 得到8个组分Fr. B.8.1~Fr. B.8.8。Fr. B.8.5用硅胶柱色谱分离, 以二氯甲烷-甲醇(50∶1→30∶1→20∶1→15∶1→10∶1→5∶1→1∶1→0∶1) 为洗脱剂进行梯度洗脱, 得到8个组分Fr. B.8.5.1~Fr. B.8.5.8。Fr. B.8.5.5经半制备高效液相色谱(25%乙腈-水, 3 mL·min^-1) 分离得到化合物7 (4.9 mg, t_R = 24.2 min)、化合物2 (4.2 mg, t_R = 37.1 min)。Fr.B.8.5.8经MCI柱色谱(甲醇-水, 30%~100%) 得到6个组分Fr. B.8.5.8.1~Fr. B.8.5.8.6。Fr. B.8.5.8.4经Sephadex LH-20柱色谱(甲醇) 分离, 再经半制备高效液相色谱(22%乙腈-水, 3 mL·min^-1) 分离得到化合物5 (29.3 mg, t_R = 33.0 min)。Fr. B.9经C18柱色谱(甲醇-水, 10%~100%) 得到11个组分Fr. B.9.1~Fr.B.9.11。Fr. B.9.5经半制备高效液相色谱(43%甲醇-水, 3 mL·min^-1) 分离得到化合物6 (8.5 mg, t_R = 17.5 min)、4 (3.2 mg, t_R = 22.0 min)、3 (7.0 mg, t_R = 30.0 min)。Fr.B.9.8经半制备高效液相色谱(28%乙腈-水, 3 mL·min^-1) 分离得到化合物1 (5.9 mg, t_R= 19.5 min)。

2 酸水解及衍生化反应

称取化合物1 (1.0 mg), 加入2 mol·L^-1盐酸(5 mL), 密封, 于100 ℃反应4 h, 减压浓缩至干后加入5 mL蒸馏水溶解, 用乙酸乙酯萃取3次, 每次5 mL。将水解得到的单糖部分和标准糖分别溶于含有L-半胱氨酸甲酯盐酸盐(1.0 mg) 的吡啶(1 mL) 中, 并在60 ℃下加热反应1 h后加入邻甲苯异硫氰酸酯(2 µL), 并将溶液在60 ℃下继续反应1 h, 浓缩至干。对反应混合物进行HPLC分析[YMC-Pack ODS-A色谱柱(250 mm × 4.6 mm, 5 μm), 流动相为乙腈∶水= 25∶75, 流速0.8 mL·min^-1, 检测波长为250 nm, 柱温为30 ℃, 进样量为5 μL]。通过比较标准糖衍生物和样品单糖衍生物的保留时间, 确定化合物中单糖的绝对构型(D-葡萄糖20.43 min, L-鼠李糖34.67 min)。

3 结构鉴定

化合物1 黄色固体; [α]$ {}_{\mathrm{D}}^{20} $ +769.7 (c 0.1, MeOH); HR-ESI-MS显示准分子离子峰m/z: 737.171 7 [M-H]^– (计算值737.171 8), 分子式为C₃₆H₃₄O₁₇; UV (MeOH) λ_max (log ε) 203 (4.18), 227 (4.47), 298 (4.54) nm; IR (KBr) ν_max 3 424, 2 911, 1 703, 1 641, 1 601, 1 508, 1 359, 1 173, 1 070, 983, 812 cm^-1; ¹H NMR (500 MHz, CD₃OD) 和¹³C NMR (125 MHz, CD₃OD) 数据见表 1。

化合物2 黄色粉末; EI-MS m/z: 302 [M]⁺, 分子式C₁₅H₁₀O₇; ¹H NMR (500 MHz, CD₃OD) δ_H: 7.74 (1H, d, J = 2.1 Hz, H-2′), 7.63 (1H, dd, J = 8.5, 2.1 Hz, H-6′), 6.88 (1H, d, J = 8.4 Hz, H-5′), 6.39 (1H, d, J = 2.1 Hz, H-8), 6.18 (1H, d, J = 1.9 Hz, H-6); ¹³C NMR (125 MHz, CD₃OD) δ_C: 148.0 (C-2), 137.3 (C-3), 177.3 (C-4), 158.2 (C-5), 99.3 (C-6), 165.7 (C-7), 94.4 (C-8), 162.5 (C-9), 104.5 (C-10), 124.2 (C-1′), 116.0 (C-2′), 146.2 (C-3′), 148.7 (C-4′), 116.2 (C-5′), 121.6 (C-6′)。以上数据与文献^[12]报道基本一致, 故鉴定化合物2为槲皮素。

化合物3 黄色粉末; ESI-MS m/z: 471 [M+Na]⁺, 分子式C₂₁H₂₀O₁₁; ¹H NMR (500 MHz, CD₃OD) δ_H: 7.34 (1H, d, J = 2.1 Hz, H-2′), 7.31 (1H, dd, J = 8.2, 2.1 Hz, H-6′), 6.91 (1H, d, J = 8.3 Hz, H-5′), 6.37 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-8), 6.20 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-6), 5.35 (1H, d, J = 1.6 Hz, H-1″), 4.22 (1H, dd, J = 3.4, 1.7 Hz, H-2″), 3.75 (1H, dd, J = 9.4, 3.4 Hz, H-3″), 3.42 (1H, dq, J = 9.5, 6.2 Hz, H-5″), 3.35 (1H, m, H-4″), 0.94 (3H, d, J = 6.1 Hz, H-6″); ¹³C NMR (125 MHz, CD₃OD) δ_C: 159.3 (C-2), 136.2 (C-3), 179.6 (C-4), 163.2 (C-5), 99.8 (C-6), 166.0 (C-7), 94.7 (C-8), 158.5 (C-9), 105.9 (C-10), 123.0 (C-1′), 116.9 (C-2′), 146.4 (C-3′), 149.8 (C-4′), 116.4 (C-5′), 122.8 (C-6′), 103.5 (C-1″), 71.9 (C-2″), 72.1 (C-3″), 73.2 (C-4″), 72.0 (C-5″), 17.7 (C-6″)。以上数据与文献^[13]报道基本一致, 故鉴定化合物3为槲皮素-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷。

化合物4 黄色粉末; ESI-MS m/z: 447 [M-H]^-, 分子式C₂₁H₂₀O₁₁; ¹H NMR (500 MHz, CD₃OD) δ_H: 8.13 (2H, d, J = 9.0 Hz, H-2′, 6′), 6.91 (2H, d, J = 9.0 Hz, H-3′, 5′), 6.77 (1H, d, J = 2.2 Hz, H-8), 6.47 (1H, d, J = 2.1 Hz, H-6), 5.06 (1H, d, J = 7.3 Hz, H-1″), 3.94 (1H, dd, J = 12.1, 2.3 Hz, H-2″), 3.72 (1H, dd, J = 12.2, 5.8 Hz, H-3″), 3.55 (1H, ddd, J = 9.8, 5.8, 2.3 Hz, H-5″), 3.50 (2H, m, H-4″, 6″a), 3.40 (1H, t, J = 9.3 Hz, H-6″b); ¹³C NMR (125 MHz, CD₃OD) δ_C: 148.8 (C-2), 137.6 (C-3), 177.6 (C-4), 162.2 (C-5), 100.2 (C-6), 164.5 (C-7), 95.6 (C-8), 157.8 (C-9), 106.3 (C-10), 123.6 (C-1′), 130.9 (C-2′, 6′), 116.3 (C-3′, 5′), 160.8 (C-4′), 101.6 (C-1″), 74.7 (C-2″), 77.9 (C-3″), 71.3 (C-4″), 78.4 (C-5″), 62.5 (C-6″)。以上数据与文献^[14]报道基本一致, 故鉴定化合物4为山柰酚-7-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物5 黄色粉末; ESI-MS m/z: 455 [M+Na]⁺, 分子式C₂₁H₂₀O₁₀; ¹H NMR (500 MHz, CD₃OD) δ_H: 7.75 (2H, d, J = 8.5 Hz, H-2′, 6′), 6.92 (2H, d, J = 8.4 Hz, H-3′, 5′), 6.34 (1H, s, H-8), 6.18 (1H, s, H-6), 5.37 (1H, d, J = 1.6 Hz, H-1″), 4.24 (1H, dd, J = 3.3, 1.7 Hz, H-2″), 3.72 (1H, m, H-3″), 3.34 (2H, m, H-4″, 5″), 0.93 (3H, m, H-6″); ¹³C NMR (125 MHz, CD₃OD) δ_C: 159.2 (C-2), 136.2 (C-3), 179.5 (C-4), 163.1 (C-5), 99.8 (C-6), 165.9 (C-7), 94.8 (C-8), 158.5 (C-9), 105.9 (C-10), 122.6 (C-1′), 131.9 (C-2′, 6′), 116.5 (C-3′, 5′), 161.5 (C-4′), 103.4 (C-1″), 71.9 (C-2″), 72.1 (C-3″), 73.2 (C-4″), 72.0 (C-5″), 17.6 (C-6″)。以上数据与文献^[15]报道基本一致, 故鉴定化合物5为山柰酚3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷。

化合物6 淡黄色粉末; [α]$ {}_{\mathrm{D}}^{25} $ -42.1 (c 0.1, MeOH); ESI-MS m/z: 457 [M+Na]⁺, 分子式C₂₁H₂₂O₁₀; ¹H NMR (500 MHz, CD₃OD) δ_H: 7.32 (2H, d, J = 8.6 Hz, H-2′, 6′), 6.82 (2H, d, J = 8.6 Hz, H-3′, 5′), 6.21 (1H, t, J = 2.2 Hz, H-8), 6.19 (1H, t, J = 2.2 Hz, H-6), 5.38 (1H, dt, J = 2.8, 13.0 Hz, H-2), 4.97 (1H, dd, J = 5.4, 7.2 Hz, H-1″), 3.88 (1H, ddd, J = 1.1, 2.2, 12.2 Hz, H-6″a), 3.69 (1H, ddd, J = 3.9, 5.5, 12.1 Hz, H-6″b), 3.43 (4H, m, H-2″, 3″, 4″, 5″), 3.17 (1H, ddd, J = 1.5, 13.0, 17.2 Hz, H-3a), 2.75 (1H, dt, J = 3.3, 17.2 Hz, H-3b); ¹³C NMR (125 MHz, CD₃OD) δ_C: 80.7 (C-2), 44.1 (C-3), 198.5 (C-4), 164.9 (C-5), 98.0 (C-6), 167.0 (C-7), 96.9 (C-8), 164.6 (C-9), 104.9 (C-10), 130.8 (C-1′), 129.1 (C-2′, 6), 116.3 (C-3′, 5′), 159.1 (C-4′), 101.2 (C-1″), 74.6 (C-2″), 78.2 (C-3″), 71.1 (C-4″), 77.8 (C-5″), 62.3 (C-6″)。以上数据与文献^{[16, 17]}报道基本一致, 故鉴定化合物6为(-)-prunin。

化合物7 黄白色粉末; EI-MS m/z: 260 [M]⁺, 分子式C₁₃H₈O₆; ¹H NMR (500 MHz, CD₃OD) δ_H: 7.43 (1H, s, H-8), 6.81 (1H, s, H-5), 6.28 (1H, d, J = 1.7 Hz, H-4), 6.14 (1H, d, J = 1.7 Hz, H-2); ¹³C NMR (125 MHz, CD₃OD) δ_C: 164.4 (C-1), 98.7 (C-2), 166.3 (C-3), 94.7 (C-4), 159.4 (C-4a), 155.2 (C-5a), 103.5 (C-5), 144.8 (C-6), 153.2 (C-7), 109.1 (C-8), 113.9 (C-8a), 181.1 (C-9), 103.3 (C-9a)。以上数据与文献^[18]报道基本一致, 故鉴定化合物7为1, 3, 6, 7-四羟基

酮。

4 肿瘤细胞毒活性测试

用含10%胎牛血清的培养液(DMEM或RMPI1640) 配成单个细胞悬液, 以每孔3×10³~1.5×10⁴个细胞数接种到96孔板, 每孔体积100 μL, 培养24 h后弃去旧培养液。分组给药, 每组3个复孔, 空白组加入新的完全培养液, 实验组分别加入含待测样品的完全培养液200 μL/孔, 单体化合物用DMSO溶解, 初次筛选终浓度为单体化合物50 μmol·L^-1, 根据初筛结果进行复筛, 单体化合物终浓度分别为50、10、2、0.4、0.08 μmol·L^-1; 并设顺铂(DDP) 和紫杉醇(Taxol) 两个阳性对照组。给药后放入培养箱中培养48 h后, 弃去贴壁细胞孔内的培养液并加入MTS溶液和培养液分别为20和100 μL; 弃去悬浮细胞孔内培养上清液100 μL, 再加入MTS溶液20 μL。设置加入MTS溶液和培养液分别为20和100 μL的3个空白复孔, 放入培养箱中继续孵育2~4 h后测定光吸收值。使用多功能酶标仪于492 nm波长处, 读取并记录各孔OD值。

细胞的生长抑制率= [1 - (实验组OD值- 空白组OD值) / (对照组OD值- 空白组OD值)] × 100%, 并利用Graphpad Prism计算半数抑制浓度(IC₅₀)。

作者贡献: 廖广凤是本文第一作者, 负责实验设计及指导、结构解析和论文写作; 莫柳艳是本文共同第一作者, 负责提取分离、活性测试及论文撰写; 滕明雪、徐秀虹和黄千禧协助完成部分提取分离纯化工作; 卢汝梅是本文的通讯作者, 负责实验设计及把关, 提供本文思路, 参与稿件修改等工作。

利益冲突: 所有作者声明本文无任何利益冲突。

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广西科技基地和人才专项(2019AC20275)
广西中医药大学桂派中医药传承创新团队资助项目(2022B005)

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排序方式：

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2023年第58卷第2期

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195

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doi: 10.16438/j.0513-4870.2022-1067

接收时间：2022-09-21
首发时间：2025-11-21
出版时间：2023-02-12

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收稿日期：2022-09-21
修回日期：2022-11-03

基金

广西科技基地和人才专项(2019AC20275)

广西中医药大学桂派中医药传承创新团队资助项目(2022B005)

作者信息

广西中医药大学药学院, 广西南宁 530001

通讯作者:

*卢汝梅, Tel: 86-771-4953513, E-mail: lrm1969@163.com

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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TxT

No.	δ_C, type	δ_H (J in Hz)		No.	δ_C, type	δ_H (J in Hz)
2	159.7, C			5″	72.0, CH	3.90, dq (9.5, 6.1)
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6	106.5, C		3‴	77.1, CH	3.27, t (9.2)
7	162.2, C		4‴	71.6, CH	3.04, t (9.4)
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9	155.7, C		6‴	64.0, CH₂	5.35, dd (12.0, 2.0) 3.51, dd (12.0, 9.6)
10	107.0, C		1″″	127.0, C
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4″	72.5, CH	3.46, d (9.5)	9″″	168.1, C

No.

δ_C, type

δ_H (J in Hz)

No.

δ_C, type

δ_H (J in Hz)

159.7, C

5″

72.0, CH

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134.3, C

6″

18.1, CH₃

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179.0, C

1‴

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162.9, C

2‴

76.3, CH

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3‴

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3.27, t (9.2)

162.2, C

4‴

71.6, CH

3.04, t (9.4)

100.1, CH

6.35, s

5‴

77.4, CH

3.16, overlapped

155.7, C

6‴

64.0, CH₂

5.35, dd (12.0, 2.0)
3.51, dd (12.0, 9.6)

107.0, C

1″″

127.0, C

1′

122.0, C

2″″

133.7, CH

8.03, d (2.1)

2′, 6′

133.2, CH

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3″″

120.9, C

3′, 5′

116.5, CH

6.68, d (8.3)

4″″

158.9, C

4′

161.6, C

5″″

117.9, CH

6.97, d (8.2)

1″

102.8, CH

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6″″

133.3, CH

7.38, dd (8.3, 2.3)

2″

68.7, CH

3.65, dd (3.6, 1.3)

7″″

145.2, CH

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3″

85.4, CH

3.08, dd (9.3, 3.7)

8″″

117.2, CH

6.69, d (16.1)

4″

72.5, CH

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9″″

168.1, C

Compd.	IC₅₀ value/μmol·L^-1
7	> 50	39.18 ± 1.40	25.67 ± 0.50	> 50	36.77 ± 2.04
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Taxol	< 0.008	< 0.008	0.12 ± 0.02	< 0.008	< 0.008

Compd.

IC₅₀ value/μmol·L^-1

HL-60

A549

SMMC-7721

MDA-MB-231

SW480

> 50

39.18 ± 1.40

25.67 ± 0.50

> 50

36.77 ± 2.04

DDP

6.65 ± 0.83

16.74 ± 0.68

5.05 ± 0.12

26.69 ± 0.50

28.83 ± 0.83

Taxol

< 0.008

0.12 ± 0.02

< 0.008