药学学报

No.	1
1		184.0
2		151.0
3		116.8
4		187.7
5		145.4
6		141.7
7	2.11 (3H, s)	12.9
8	1.92 (3H, s)	8.4
9	2.90 (1H, qd, J = 7.2, 10.0 Hz)	42.7
10	1.20 (3H, d, J = 7.2 Hz)	16.2
11	4.20 (1H, qd, J = 6.1, 10.0 Hz)	70.2
12	1.24 (3H, d, J = 6.1 Hz)	22.8

No.	1
1		184.0
2		151.0
3		116.8
4		187.7
5		145.4
6		141.7
7	2.11 (3H, s)	12.9
8	1.92 (3H, s)	8.4
9	2.90 (1H, qd, J = 7.2, 10.0 Hz)	42.7
10	1.20 (3H, d, J = 7.2 Hz)	16.2
11	4.20 (1H, qd, J = 6.1, 10.0 Hz)	70.2
12	1.24 (3H, d, J = 6.1 Hz)	22.8

扩展青霉Penicillium expansum GY618的次生代谢产物及抑制酪氨酸酶活性研究

PDF下载

尹飞宇 ¹ , 梁盛 ² , 朱前恒 ³ , 袁丰华 ² , 黄浩 ³ , 温慧玲 ³^,^*

药学学报 | 研究论文 2025,60(2): 427-433

收起

药学学报 | 研究论文 2025, 60(2): 427-433

扩展青霉Penicillium expansum GY618的次生代谢产物及抑制酪氨酸酶活性研究

全屏

尹飞宇¹, 梁盛², 朱前恒³, 袁丰华², 黄浩³, 温慧玲³^,^*

作者信息

1.赣南医科大学康复学院, 江西赣州 341000

2.赣南医科大学基础医学院, 江西赣州 341000

3.赣南医科大学药学院, 江西赣州 341000

通讯作者:

^*温慧玲, E-mail: wenhuiling1984_whl@163.com

Study on secondary metabolites of Penicillium expansum GY618 and their tyrosinase inhibitory activities

Fei-yu YIN¹, Sheng LIANG², Qian-heng ZHU³, Feng-hua YUAN², Hao HUANG³, Hui-ling WEN³^,^*

Affiliations

1. School of Rehabilitation, Gannan Medical University, Ganzhou 341000, China

2. School of Basic Medicine, Gannan Medical University, Ganzhou 341000, China

3. School of Pharmacy, Gannan Medical University, Ganzhou 341000, China

出版时间: 2025-02-12 doi: 10.16438/j.0513-4870.2024-0845

文章导航

摘要

收起

采用硅胶柱层析、凝胶柱层析、反相硅胶柱层析和半制备高效液相等多种分离技术对扩展青霉Penicillium expansum GY618的大米固体发酵物进行分离纯化得到12个化合物。经高分辨质谱(HR-ESI-MS)、核磁共振波谱等技术, 结合与文献数据对比等方法, 鉴定为: 11-hydroxyl-penicitrinone F (1)、penicitrinone F (2)、白桦脂醇(3)、高根二醇(4)、麦角甾-5, 7, 22E-三烯-3β-醇(5)、(22E)-5α, 8α-表二氧麦角甾-6, 22-二烯-3β-醇(6)、(22E)-5α, 8α-表二氧麦角甾-6, 9, 22-三烯-3β-醇(7)、(22E, 24R)-5α, 8α-过氧化麦角甾-23-甲基-6, 22-二烯-3β-醇(8)、(22E, 24R)-5α, 8α-过氧化麦角甾-23-甲基-6, 9, 22-三烯-3β-醇(9)、dankasterone A (10)、(17R)-4-hydroxy-17-methylincisterol (11) 和麦角甾-4, 6, 8 (14), 22-四烯-3-酮(12)。化合物1为新化合物, 化合物2~4、6~12均首次从扩展青霉中分离得到。在酪氨酸酶抑制活性评价中, 化合物1、3、12具有一定的抑制酪氨酸酶活性。化合物1的IC₅₀值为75 ± 9 μmol·L^-1, 化合物3和12的IC₅₀值分别为69 ± 8和64 ± 2 μmol·L^-1。其他化合物的IC₅₀值均 > 100 μmol·L^-1。曲酸作为阳性对照IC₅₀值为46 ± 4 μmol·L^-1。

关键词

扩展青霉 / 大米固体发酵 / 次生代谢产物 / 结构鉴定 / 酪氨酸酶抑制活性

Abstract

收起

Twelve compounds were isolated from the rice fermentation extracts of Penicillium expansum GY618 by silica column chromatography, Sephadex gel column chromatography, ODS column chromatography and semi preparative HPLC methods. They were determined as 11-hydroxyl-penicitrinone F (1), penicitrinone F (2), betulin (3), erythrodiol (4), ergosterol (5), ergost-5α, 8α-epidioxy-6, 22-dien-3β-ol (6), (5α, 8α-epidioxy-(22E, 24R)-ergosta-6, 9(11), 22-trien-3β-ol) (7), 5α, 8α-epidioxy-(22E, 24R)-23-methylergosta-6, 22-dien-3β-ol (8), 5α, 8α-epidioxy- 23, 24(R)-dimethylcholesta-6, 9(11), 22-trien-3β-ol (9), dankasterone A (10), (17R)-4-hydroxy-17-methylincisterol (11) and ergosta-4, 6, 8(14), 22-tetraen-3-one (12), through mass spectrometer, nuclear magnetic resonance (NMR) and comparison with the literature. Compound 1 was a new compound and compounds 2-4, 6-12 were isolated from Penicillium expansum fungus for the first time. The tyrosinase inhibitory activity experiment showed that compounds 1, 3 and 12 showed certain inhibitory activity against tyrosinase with IC₅₀ values of (75 ± 9), (69 ± 8) and (64 ± 2) μmol·L^-1, respectively. The IC₅₀ of other compounds were all greater than 100 μmol·L^-1, while IC₅₀ of the positive control kojic acid was (46 ± 4) μmol·L^-1.

Key words

Penicillium expansum / rice fermentation / secondary metabolite / structural identification / tyrosinase inhibitory activity

引用本文

尹飞宇, 梁盛, 朱前恒, 袁丰华, 黄浩, 温慧玲. 扩展青霉Penicillium expansum GY618的次生代谢产物及抑制酪氨酸酶活性研究. 药学学报, 2025 , 60 (2) : 427 -433 . DOI: 10.16438/j.0513-4870.2024-0845

Fei-yu YIN, Sheng LIANG, Qian-heng ZHU, Feng-hua YUAN, Hao HUANG, Hui-ling WEN. Study on secondary metabolites of Penicillium expansum GY618 and their tyrosinase inhibitory activities[J]. Acta Pharmaceutica Sinica, 2025 , 60 (2) : 427 -433 . DOI: 10.16438/j.0513-4870.2024-0845

正文

收起

扩展青霉广泛存在于自然界中, 容易使植物致病, 污染采后水果蔬菜, 导致水果腐烂等, 关于扩展青霉的研究大部分为有关生物防治的研究^[1-3]。近年来, 对扩展青霉(Penicillium expansum) 的化学成分也开展了一些研究。结果表明扩展青霉的主要代谢产物有球毛壳菌素^[4]、生物碱^[5-8]、聚酮^[9]、倍半萜^[10]和杂萜^[9]等, 代谢产物丰富多样而且具有较好的活性, 引起化学、药学、生物学等相关研究领域的热切关注。

酪氨酸酶又称多酚氧化酶, 是一种含铜酶, 是黑色素合成过程中的关键限速酶, 参与黑色素合成, 与色素沉着障碍、癌症和神经退行性疾病密切相关^[11]。当酪氨酸酶过量表达, 能促进黑色素生成的量过多, 引起人体皮肤色素沉着性疾病^[12]。因此, 抑制酪氨酸酶活性, 可阻断黑色素合成反应链, 减少黑色素合成, 则达到美白肌肤的效果。基于此, 酪氨酸酶抑制剂也被用于护肤美白及色素沉着性疾病的治疗。同时, 酪氨酸酶能有效地将某些酚类物质氧化为醌类物质, 导致水果和蔬菜的切面褐变。因此, 酪氨酸酶抑制剂在医药、化妆品、食品工业等领域应用广泛。但是已知的酪氨酸酶抑制剂具有许多不良反应, 因此从天然产物中筛选开发无毒、长期稳定的新型酪氨酸酶抑制剂尤为重要。

本研究从扩展青霉的大米固体发酵物中分离鉴定得到12个化合物, 结构见图 1。其中化合物1为新化合物, 化合物2~4、6~12均首次从该菌种中分离得到。本研究对分离所得的12个化合物进行酪氨酸酶抑制活性的筛选, 化合物1、3、12表现出一定的抑制酪氨酸酶活性, 其IC₅₀值分别为75 ± 9、69 ± 8、64 ± 2 μmol·L^-1。其他化合物的IC₅₀值均大于100 μmol·L^-1, 未表现出明显抑制酪氨酸酶的活性。

结果与讨论

收起

1 新化合物结构鉴定

化合物1, 常温下为黄色油状。[α]

$ {}_{\mathrm{D}}^{24} $

-5.6 (c 0.1, MeOH); UV (MeOH) λ_max (logε) 245 (3.66) nm; 高分辨质谱给出准分子离子峰[M-H]^- 223.095 7 (计算值为223.097 0), 可推测出其分子式为C₁₂H₁₆O₄, 表明不饱和度为5。化合物1的¹H NMR谱图显示, 化合物中含有明显的4个甲基(δ_H 2.11、1.92、1.25、1.20), 见表 1。化合物1的氢谱与化合物2的氢谱高度相似, 差异只是化合物1的氢谱中少了一个化学位移为7.58的单峰。通过¹³C NMR、DEPT和HSQC谱图可以知道化合物1共存在12个碳信号, 分别为4个甲基、2个次甲基, 6个不饱和碳(其中δ_C 184.0、187.7为羰基碳, δ_C 151.0、145.4、141.7、116.8)。这与化合物2的碳谱信号相比, 差异是化合物1少了一个化学位移为160.4的碳信号。推测化合物2为化合物1的甲酸酯。通过数据库检索化合物1为新化合物。为了确证化合物1的结构, 采集了化合物1的系列二维谱图。从¹H-¹H COSY谱(图 2), 显示存在C-9/C-10/C-11/C-12片段。HMBC谱(图 2) 显示了H₃-7与C-4、C-6相关, H₃-8与C-2、C-4相关, H-9与C-1、C-5相关, H₃-10与C-6相关, H-11与C-6、C-10相关。因此确证了化合物1的平面结构。

该化合物含有2个手性中心C-9和C-11。通过和具有相似手性中心的citrinin类似物citrinin H1、citrinin H2、citriquinone A及7-methyl-citrinin H1的偶合常数(³J_{H-9, H-11}偶合常数= 10 Hz) 的对比, 可以推测化合物1中的H-9和H-11与类似化合物具有相同的相对构型。由于化合物1与7-methyl-citrinin H1以及化合物2 (penicitrinone F) 均分离自Penicillium expansum GY618, 从生源途径考虑具有相同的绝对构型, 即C-9、C-11的绝对构型分别为9S, 11R^{[9, 13-15]}。最终将化合物1命名为11-hydroxyl-penicitrinone F。

2 酪氨酸酶抑制活性结果

12个化合物的酪氨酸酶抑制活性结果表明, 化合物1、3、12表现出一定的抑制酪氨酸酶活性, 其IC₅₀值分别为75 ± 9、69 ± 8、64 ± 2 μmol·L^-1。其他化合物的IC₅₀值均大于100 μmol·L^-1, 未表现出明显抑制酪氨酸酶的活性。曲酸作为阳性对照IC₅₀值为46 ± 4 μmol·L^-1。

讨论

收起

本研究从扩展青霉的大米固体发酵物中分离鉴定得到12个化合物, 其中化合物1为新化合物, 化合物2~4、6~12均首次从该菌种中分离得到, 除化合物1和2为苯醌类化合物, 化合物3、4为三萜类化合物, 其他化合物为甾体类化合物。甾体化合物是一类广泛存在于动植物体内的天然化合物, 这些化合物通常在细胞毒活性、抗炎、抗菌抑菌活性、抑制乙酰胆碱酯酶活性等方面表现突出。本研究对分离所得的12个化合物进行酪氨酸酶抑制活性的筛选, 发现化合物1的IC₅₀值为75 ± 9 μmol·L^-1, 而化合物2的IC₅₀值为 > 100 μmol·L^-1。化合物1和2同为苯醌类化合物, 化合物2是化合物1的甲酸酯, 提示化合物1侧链上的羟基对抑制酪氨酸酶有正向作用。化合物3~12中的大部分化合物的IC₅₀值> 100 μmol·L^-1, 而化合物3和12的IC₅₀值分别为69 ± 8和64 ± 2 μmol·L^-1。化合物1、3、12具有一定的酪氨酸酶抑制剂的活性。本研究丰富了扩展青霉次生代谢产物结构的多样性。

实验部分

收起

AVANCE NEO 400 MHz核磁共振(瑞士布鲁克公司); 旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂); Agilent 1100 Series高效液相色谱仪(美国Agilent公司); BSA224S电子天平(赛多利斯科学仪器有限公司); DW-HL768超低温冷冻储存箱(中科美菱低温科技股份有限公司); Perkinelmer victor nivo酶标仪(珀金埃尔默仪器有限公司)。PDA培养基购自北京陆桥技术股份有限公司; 大米培养基: 使用1 000 mL三角瓶, 装250 g市售食用大米, 160 mL纯净水, 121 ℃高温灭菌30 min。酪氨酸酶(规格100 KU, 上海源叶生物科技有限公司); L-酪氨酸(上海泰坦科技股份有限公司); 曲酸(上海泰坦科技股份有限公司); 色谱甲醇和乙腈(美国Thermo Fisher Scientific公司); 柱色谱硅胶GF₂₅₄ (100~200和200~300目, 安徽良臣硅源材料有限公司); 其他提取分离所用试剂级别均为分析纯。

菌株是本课题组从北京百欧博伟生物有限公司购买的扩展青霉, 根据菌株形态特征与ITS测序鉴定为Penicillium expansum, 并且命名为Penicillium expansum GY618, 随后在进化树中添加了Penicillium expansum GY618数据, 在G-BANK注册编号为OL598580。菌种在斜面培养基上活化好后放入4 ℃冰箱, 保存于赣南医科大学江西省天然产物研究实验室。

1 真菌发酵

将菌株Penicillium expansum GY618接种至PDA平板, 放在28 ℃恒温培养箱中培养3天, 使菌株活化。在1 L锥形瓶中加入250 g大米和160 mL水, 随后放到立式压力蒸汽灭菌锅中以121 ℃灭菌30 min, 拿出放置在洁净工作台冷却, 冷却至室温后接入活化的3方块(大小约0.5 cm × 0.5 cm) 扩展青霉(Penicillium expansum GY618) 菌饼接种到锥形瓶中并放置于28 ℃的恒温环境下培养三周。

2 提取与分离

将扩展青霉的发酵产物(50 kg大米) 在室温下用乙醇浸泡, 浸提液减压浓缩, 反复提取5次后得到总浸膏。然后使用乙酸乙酯萃取7次, 得到乙酸乙酯部位浸膏100 g。对乙酸乙酯部位用质量比1∶2与80~120目硅胶拌样, 用石油醚-乙酸乙酯体系为洗脱液(100∶1→1∶1) 进行梯度洗脱, 得到8个部分(A~H)。首先对G部分使用反相硅胶柱用甲醇水体系梯度洗脱分离得到GA~GD四个部分。GB部分用正相硅胶柱分离得到4个馏分GB₁~GB₄, 之后GB₂使用Sephadex LH-20柱分离, 以甲醇-二氯甲烷(1∶1) 洗脱得到两个子馏分GB₂₁~GB₂₂, 再用半制备型高效液相色谱对GB₂₁纯化后得到1 (1.0 mg) 和2 (2.6 mg)。GC部分用正相硅胶柱分离得到5个馏分GC₁~GC₅, GC₂部分使用Sephadex LH-20柱分离, 以甲醇-二氯甲烷(1∶1) 洗脱得到两个子馏分GC₂₁~GC₂₂, 对GC₂₁使用半制备型高效液相色谱纯化后得到3 (4.6 mg) 和4 (3.5 mg)。GC₄部分使用Sephadex LH-20柱分离, 以甲醇-二氯甲烷(1∶1) 洗脱得到两个子馏分GC₄₁~GC₄₂, 对GC₄₁使用半制备型高效液相色谱纯化后得到5 (7.6 mg)、6 (2.5 mg)、7 (3.6 mg)、8 (4.5 mg)、9 (1.6 mg) 和10 (0.5 mg)。对GC₅使用半制备型高效液相色谱纯化后得到11 (0.8 mg) 和12 (1.2 mg)。

3 结构鉴定

化合物1, 常温下为黄色油状。[α]

$ {}_{\mathrm{D}}^{24} $

-5.6 (c 0.1, MeOH); UV (MeOH) λ_max (log ε): 245 (3.66) nm; HRESI-MS m/z: 223.095 7 [M-H]^- (计算值为223.097 0); IR (MeOH) ν_max 2 947, 2 363, 1 014; ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) 和¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) 数据见表 1。

化合物2, 常温下为黄色油状。[α]

$ {}_{\mathrm{D}}^{24} $

-10.6 (c 0.1, CHCl₃); ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ_H: 5.48 (1H, dq, J = 12.1, 6.3 Hz, H-11), 3.05 (1H, m, H-9), 2.09 (3H, s, H-7), 1.91 (3H, s, H-8), 1.36 (3H, d, J = 6.2 Hz, H-12), 1.25 (3H, d, J = 7.1Hz, H-10); ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ_C: 183.0 (C-1), 151.0 (C-2), 116.6 (C-3), 187.6 (C-4), 144.9 (C-5), 140.3 (C-6), 12.7 (C-7), 8.4 (C-8), 40.2 (C-9), 15.6 (C-10), 73.0 (C-11), 19.2 (C-12), 160.4 (C-13)。以上数据与文献^[16]报道基本一致, 且旋光值与文献报道的[α]

$ {}_{\mathrm{D}}^{20} $

-16.3 (c 2.0, CHCl₃)^[16]接近, 因此鉴定化合物2为penicitrinone F。

化合物3, 白色固体, 易溶于二氯甲烷; ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ_H: 4.68 (1H, br s, H-29a), 4.58 (1H, br s, H-29b), 3.79 (1H, d, J = 10.7 Hz, H-28a), 3.32 (1H, d, J = 11.0 Hz, H-28b), 3.17 (1H, dd, J = 11.0, 5.1 Hz, H-3), 2.37 (1H, m, H-19), 1.67 (3H, s, H-30), 1.01 (3H, s, H-27), 0.98 (3H, s, H-26), 0.97 (3H, s, H-23), 0.83 (3H, s, H-25), 0.76 (3H, s, H-24); ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ_C: 38.8 (C-1), 27.5 (C-2), 79.1 (C-3), 39.0 (C-4), 55.4 (C-5), 18.4 (C-6), 34.4 (C-7), 41.0 (C-8), 50.5 (C-9), 37.3 (C-10), 21.0 (C-11), 25.3 (C-12), 37.4 (C-13), 42.9 (C-14), 27.2 (C-15), 29.3 (C-16), 47.9 (C-17, C-19), 48.9 (C-18), 150.6 (C-20), 29.9 (C-21), 34.1 (C-22), 28.1 (C-23), 15.5 (C-24), 16.2 (C-25), 16.1 (C-26), 14.9 (C-27), 60.7 (C-28), 109.8 (C-29), 19.2 (C-30)。以上数据与文献^[17-20]报道基本一致, 鉴定化合物3为白桦脂醇。

化合物4, 白色固体, 易溶于二氯甲烷: ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ_H: 5.19 (1H, t, J = 3.7 Hz), 3.55 (1H, d, J = 10.9 Hz), 3.22 (1H, m), 3.20 (1H, m), 1.16 (3H, s), 0.99 (3H, s), 0.94 (3H, s, 0.93 (3H, s), 0.89 (3H, s), 0.87 (3H, s), 0.79 (3H, s); ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ_C: 38.7 (C-1), 27.4 (C-2), 79.2 (C-3), 38.9 (C-4), 55.3 (C-5), 18.5 (C-6), 32.7 (C-7), 39.9 (C-8), 47.7 (C-9), 37.1 (C-10), 23.7 (C-11), 122.5 (C-12), 144.2 (C-13), 41.9 (C-14), 25.7 (C-15), 22.1 (C-16), 37.1 (C-17), 42.5 (C-18), 46.6 (C-19), 31.1 (C-20), 34.29 (C-21), 31.2 (C-22), 28.2 (C-23), 15.7 (C-24), 15.7 (C-25), 16.9 (C-26), 26.1 (C-27), 69.9 (C-28), 33.3 (C-29), 23.9 (C-30)。以上数据与文献^[21-24]报道基本一致, 故鉴定化合物4为高根二醇。

化合物5, 白色固体, 易溶于二氯甲烷; ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ_H: 5.56 (1H, dd, J = 5.7, 2.5 Hz, H-6), 5.38 (1H, m, H-7), 5.19 (2H, m, H-22, H-23), 3.63 (1H, m, H-3), 2.46 (1H, m, H-4a), 2.28 (1H, m, H-4b), 1.03 (3H, d, J = 6.7 Hz, H-21), 0.94 (3H, s, H-19), 0.91 (3H, d, J = 6.9 Hz, H-28), 0.83 (3H, d, J = 6.4 Hz, H-27), 0.81 (3H, d, J = 6.4 Hz, H-26), 0.62 (3H, s); ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ_C: 38.5 (C-1), 32.1 (C-2), 70.6 (C-3), 40.9 (C-4), 139.9 (C-5), 119.7 (C-6), 116.4 (C-7), 141.5 (C-8), 46.4 (C-9), 37.2 (C-10), 21.2 (C-11), 39.2 (C-12), 43.0 (C-13), 54.7 (C-14), 23.1 (C-15), 28.4 (C-16), 55.8 (C-17), 12.2 (C-18), 16.4 (C-19), 40.6 (C-20), 21.2 (C-21), 132.1 (C-22), 135.7 (C-23), 43.0 (C-24), 33.2 (C-25), 19.8 (C-26), 20.1 (C-27), 17.8 (C-28)。以上数据与文献^[25-27]报道的麦角甾-5, 7, 22E-三烯-3β-醇数据基本一致, 故鉴定化合物5为麦角甾-5, 7, 22E-三烯-3β-醇。

化合物6, 白色固体, 易溶于二氯甲烷; ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ_H: 6.50 (1H, d, J = 8.5 Hz, H-7), 6.24 (1H, d, J = 8.5 Hz, H-6), 5.24 (1H, dd, J = 15.2, 7.6 Hz, H-22), 5.13 (1H, dd, J = 15.1, 8.0 Hz, H-23), 3.96 (1H, m, H-3), 0.99 (3H, d, J = 6.6 Hz, H-21), 0.90 (3H, d, J = 6.6 Hz, H-28), 0.88 (3H, s, H-19), 0.83 (3H, d, J = 6.6 Hz, H-27), 0.81 (3H, d, J = 6.6 Hz, H-26), 0.82 (3H, s, H-18); ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ_C: 34.8 (C-1), 30.2 (C-2), 66.5 (C-3), 37.0 (C-4), 82.3 (C-5), 135.5 (C-6), 130.8 (C-7), 79.6 (C-8), 51.2 (C-9), 37.1 (C-10), 20.7 (C-11), 39.4 (C-12), 44.7 (C-13), 51.8 (C-14), 23.5 (C-15), 28.8 (C-16), 56.3 (C-17), 13.0 (C-18), 18.3 (C-19), 39.9 (C-20), 19.8 (C-21), 132.4 (C-22), 135.3 (C-23), 42.9 (C-24), 33.2 (C-25), 20.1 (C-26), 21.0 (C-27), 17.7 (C-28)。以上数据与文献^[28]报道基本一致, 故鉴定化合物6为(22E)-5α, 8α-表二氧麦角甾-6, 22-二烯-3β-醇。

化合物7, 白色固体, 易溶于二氯甲烷; ¹H NMR(400 MHz, CDCl₃) δ_H: 6.59 (1H, d, J = 8.5 Hz, H-7), 6.28 (1H, d, J = 8.5 Hz, H-6), 5.43 (1H, dd, J = 6.1, 2.0 Hz, H-11), 5.24 (1H, dd, J = 15.2, 7.6 Hz, H-22), 5.13 (1H, dd, J = 15.1, 8.0 Hz, H-23), 4.01 (1H, m, H-3), 1.09 (3H, s, H-19), 1.00 (3H, d, J = 6.6 Hz, H-21), 0.91 (3H, d, J = 6.8 Hz, H-28), 0.82 (3H, d, J = 6.6 Hz, H-26), 0.81 (3H, d, J = 6.6 Hz, H-27), 0.73 (3H, s, H-18); ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ_C: 32.7 (C-1), 30.7 (C-2), 66.5 (C-3), 36.2 (C-4), 82.8 (C-5), 135.6 (C-6), 130.9 (C-7), 78.5 (C-8), 142.6 (C-9), 38.1 (C-10), 119.9 (C-11), 41.3 (C-12), 43.7 (C-13), 48.3 (C-14), 21.0 (C-15), 28.8 (C-16), 56.0 (C-17), 13.1 (C-18), 25.7 (C-19), 40.0 (C-20), 20.8 (C-21), 132.6 (C-22), 135.2 (C-23), 42.9 (C-24), 33.2 (C-25), 19.8 (C-26), 20.1 (C-27), 17.7 (C-28)。以上数据与文献^[28]报道基本一致, 故鉴定化合物7为(22E)-5α, 8α-表二氧麦角甾-6, 9, 22-三烯-3β-醇。

化合物8, 白色固体, 易溶于二氯甲烷; ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ_H: 6.51 (1H, d, J = 8.5 Hz, H-7), 6.25 (1H, d, J = 8.5 Hz, H-6), 4.88 (1H, dd, J = 9.6, 1.6 Hz, H-22), 3.97 (1H, m, H-3), 1.50 (3H, d, J = 1.3 Hz, H-29), 0.93 (3H, d, J = 6.6 Hz, H-28), 0.92 (3H, d, J = 6.6 Hz, H-21), 0.89 (3H, s, H-19), 0.84 (3H, s, H-18), 0.83 (3H, d, J = 6.6 Hz, H-26), 0.78 (3H, d, J = 6.6 Hz, H-27); ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ_C: 34.8 (C-1), 30.2 (C-2), 66.6 (C-3), 37.0 (C-4), 82.3 (C-5), 135.6 (C-6), 130.9 (C-7), 79.6 (C-8), 51.2 (C-9), 37.1 (C-10), 20.8 (C-11), 39.5 (C-12), 44.7 (C-13), 51.8 (C-14), 23.5 (C-15), 28.1 (C-16), 57.1 (C-17), 13.1 (C-18), 18.3 (C-19), 34.2 (C-20), 20.7 (C-21), 131.2 (C-22), 135.9 (C-23), 50.3 (C-24), 30.9 (C-25), 20.2 (C-26), 21.9 (C-27), 17.1 (C-28), 13.3 (C-29)。以上数据与文献^{[29, 30]}报道基本一致, 故鉴定化合物8为(22E, 24R)-5α, 8α-过氧化麦角甾-23-甲基-6, 22-二烯-3β-醇。

化合物9, 白色固体, 易溶于二氯甲烷; ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ_H: 6.59 (1H, d, J = 8.5 Hz, H-7), 6.29 (1H, d, J = 8.5 Hz, H-6), 5.43 (1H, dd, J = 6.0, 2.0 Hz, H-11), 4.89 (1H, d, J = 9.6 Hz, H-22), 4.01 (1H, m, H-3), 1.51 (3H, d, J = 1.3 Hz, H-29), 1.08 (3H, s, H-19), 0.93 (3H, d, J = 6.6 Hz, H-28), 0.91 (3H, d, J = 6.6 Hz, H-21), 0.83 (3H, d, J = 6.6 Hz, H-26), 0.78 (3H, d, J = 6.6 Hz, H-27), 0.76 (3H, s, H-18); ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ_C: 32.7 (C-1), 30.7 (C-2), 66.5 (C-3), 36.2 (C-4), 82.8 (C-5), 135.6 (C-6), 130.9 (C-7), 78.5 (C-8), 142.6 (C-9), 38.1 (C-10), 119.9 (C-11), 41.3 (C-12), 43.7 (C-13), 50.3 (C-14), 21.0 (C-15), 28.1 (C-16), 56.8 (C-17), 13.2 (C-18), 25.7 (C-19), 34.4 (C-20), 20.5 (C-21), 131.1 (C-22), 136.1 (C-23), 48.3 (C-24), 30.9 (C-25), 20.2 (C-26), 21.9 (C-27), 17.1 (C-28), 13.4 (C-29)。以上数据与文献^{[31, 32]}报道基本一致, 故鉴定9为(22E, 24R)-5α, 8α-过氧化麦角甾-23-甲基-6, 9, 22-三烯-3β-醇。

化合物10, 白色固体, 易溶于二氯甲烷; ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ_H: 6.36 (1H, s, H-4), 5.26 (2H, m, H-22, 23), 1.26 (3H, s, H-19), 1.08 (3H, d, J = 6.8 Hz, H-21), 0.97 (3H, s, H-18), 0.90 (3H, d, J = 6.8 Hz, H-28), 0.82 (3H, d, J = 7.0 Hz, H-27), 0.80 (3H, d, J = 7.0 Hz, H-26); ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ_C: 39.0 (C-1), 34.5 (C-2), 199.3 (C-3), 126.6 (C-4), 156.2 (C-5), 200.2 (C-6), 40.9 (C-7), 62.3 (C-8), 49.5 (C-9), 36.1 (C-10), 25.2 (C-11), 38.4 (C-12), 54.2 (C-13), 215.0 (C-14), 38.1 (C-15), 23.3 (C-16), 49.4 (C-17), 17.2 (C-18), 24.1 (C-19), 37.3 (C-20), 23.8 (C-21), 132.4 (C-22), 135.2 (C-23), 43.4 (C-24), 33.2 (C-25), 19.8 (C-26), 20.2 (C-27), 17.7 (C-28)。以上数据与文献^[33]报道基本一致, 故鉴定化合物10为dankasterone A。

化合物11, 无色油状, 易溶于二氯甲烷; ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ_H: 5.62 (1H, d, J = 1.8 Hz, H-2), 5.25 (1H, d, J = 7.3, 15.1 Hz, H-15), 5.17 (1H, d, J = 8.3, 15.3 Hz, H-16), 1.03 (3H, d, J = 6.8 Hz, H-14), 0.92 (3H, d, J = 6.8 Hz, H-21), 0.84 (3H, d, J = 6.8 Hz, H-20), 0.82 (3H, d, J = 6.8 Hz, H-19), 0.60 (3H, s, H-12); ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ_C: 171.4 (C-1), 112.4 (C-2), 170.8 (C-3), 105.3 (C-4), 35.4 (C-5), 35.2 (C-6), 49.0 (C-7), 50.5 (C-8), 21.5 (C-9), 29.0 (C-10), 55.4 (C-11), 11.9 (C-12), 40.3 (C-13), 21.2 (C-14), 134.8 (C-15), 133.0 (C-16), 43.0 (C-17), 33.2 (C-18), 19.8 (C-19), 20.1 (C-20), 17.7 (C-21)。以上数据与文献^[34]报道基本一致, 故鉴定化合物11为(17R)-4-hydroxy-17-methylincisterol。

化合物12, 黄色的粉末, 易溶于二氯甲烷; ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ_H: 6.60 (1H, d, J = 9.5 Hz, H-7), 6.03 (1H, d, J = 9.5 Hz, H-6, 5.73 (1H, s, H-4), 5.23 (2H, dd, J = 10.2, 7.3 Hz, H-22, 23), 1.05 (3H, d, J = 6.7 Hz, H-21), 0.99 (3H, s, H-19), 0.96 (3H, s, H-18), 0.93 (3H, d, J = 6.8 Hz, H-28), 0.84 (3H, d, J = 6.8 Hz, H-27), 0.82 (3H, d, J = 6.8 Hz, H-26); ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ_C: 34.3 (C-1), 34.3 (C-2), 199.7 (C-3), 123.1 (C-4), 124.6 (C-5), 124.6 (C-6), 134.2 (C-7), 164.5 (C-8), 44.5 (C-9), 36.9 (C-10), 19.1 (C-11), 35.7 (C-12), 44.1 (C-13), 156.2 (C-14), 25.5 (C-15), 27.9 (C-16), 55.8 (C-17), 19.1 (C-18), 16.8 (C-19), 39.4 (C-20), 21.4 (C-21), 135.2 (C-22), 132.7 (C-23), 43.0 (C-24), 33.2 (C-25), 20.1 (C-26), 19.8 (C-27), 17.8 (C-28)。以上数据与文献^{[35, 36]}报道基本一致, 故鉴定化合物12为麦角甾-4, 6, 8(14), 22-四烯-3-酮。

4 抑制酪氨酸酶的活性测定

以曲酸为阳性对照, 参照Mikayoulou等^[37]的方法并结合Chen^[38]的方法测定化合物抑制酪氨酸酶的活性。将L-酪氨酸用PBS缓冲溶液配制成浓度为552 μmol·L^-1的溶液。将酪氨酸酶用PBS缓冲液配制成100 U·mL^-1的溶液。用乙醇将化合物和曲酸配制成初始浓度为1 000 μmol·L^-1的溶液, 倍比稀释成一系列浓度, 分别为500、250、125、62.5 μmol·L^-1。试验分为样品溶液组和空白溶液组。在96孔板中总体系液为200 μL, 其中20 μL样品溶液, 40 μL L-酪氨酸、40 μL酪氨酸酶溶液和100 μL PBS缓冲溶液。样品溶液组分别加入40 μL L-酪氨酸、20 μL样品溶液、100 μL PBS缓冲溶液和40 μL酪氨酸酶溶液。空白溶液组则用PBS替代样品溶液的加入。按照上述顺序加完后, 在492 nm下测定孵育前的吸光度值; 37 ℃恒温箱中孵育25 min, 在492 nm下测定孵育后的吸光度值。抑制率(%) = [(A-B)-(C-D)]/(A-B)×100。其中A为空白溶液孵育后的吸光度, B为空白溶液孵育前的吸光度, C为样品溶液孵育后的吸光度, D为样品溶液孵育前的吸光度。

5 统计学分析

实验数据采用SPSS 16.0软件进行统计分析, 所有实验数据以三个独立实验的平均值±标准差(

$ \overline{x} $

± s) 表示, 两组间数据的比较采用单因素方差分析(ANOVA) 和Dunnett比较检验进行差异分析, 当P < 0.05时, 差异具有统计显著性。

作者贡献: 尹飞宇是本文第一作者, 负责酪氨酸酶抑制活性的测试及稿件的撰写; 梁盛负责酪氨酸酶抑制活性的测试; 朱前恒负责真菌的发酵、化合物的分离纯化; 袁丰华负责酪氨酸酶抑制活性测试的指导; 黄浩负责结构解析的指导; 温慧玲是本文的通讯作者, 负责实验设计及把关, 提供本文思路, 参与稿件修改等工作。

利益冲突: 所有作者均声明不存在利益冲突。

基金

收起

国家自然科学基金资助项目(82260685)
江西省科技厅资助项目(20232BAB206181)

参考文献

收起

文献

收起

参考文献引证文献

排序方式：

[1]

Wang KL, Ngea GLN, Godana EA, et al. Recent advances in Penicillium expansum infection mechanisms and current methods in controlling P. expansum in postharvest apples [J]. Crit Rev Food Sci Nutr, 2023, 63: 2598-2611.

[2]

Chen Y, Zhang YC, Xu DY, et al. PeAP1-mediated oxidative stress response plays an important role in the growth and pathogenicity of Penicillium expansum [J]. Microbiol Spectr, 2023, 11: e0380822.

[3]

Wang YR, Yang QY, Godana EA, et al. Ultrastructural observation and transcriptome analysis provide insights into mechanisms of Penicillium expansum invading apple wounds [J]. Food Chem, 2023, 414: 135633.

[4]

Andersen B, Smedsgaard J, Frisvad JC. Penicillium expansum: consistent production of patulin, chaetoglobosins, and other secondary metabolites in culture and their natural occurrence in fruit products [J]. J Agric Food Chem, 2004, 52: 2421-2428.

[5]

Yao S, Zhang RG, Wang JP, et al. A new diketopiperazine-type alkaloid from the endophytic fungus Penicillium expansum [J]. Nat Prod Res, 2023, 37: 3716-3721.

[6]

Li CZ, Zhang FM, Gan D, et al. Secondary metabolites isolated from Penicillium expansum and their chemotaxonomic value [J]. Biochem Syst Ecol, 2023, 107: 104584.

[7]

Lin HC, Chiou G, Chooi YH, et al. Elucidation of the concise biosynthetic pathway of the communesin indole alkaloids [J]. Angew Chem Int Edit, 2015, 54: 3004-3007.

[8]

Fan YQ, Li PH, Chao YX, et al. Alkaloids with cardiovascular effects from the marine-derived fungus Penicillium expansum Y32 [J]. Mar Drugs, 2015, 13: 6489-6504.

[9]

Zhu QH, Zang Y, Luo JJ, et al. A new meroterpenoid and a new polyketide from Penicillium expansum GY618 fungus [J]. Phytochem Lett, 2022, 51: 57-62.

[10]

Massias M, Rebuffat S, Molho L, et al. Expansolides A and B: tetracyclic sesquiterpene lactones from Penicillium expansum [J]. J Am Chem Soc, 1990, 112: 8112-8115.

[11]

Ma ZY, Lu Y. Melanin synthesis and regulation in vivo and commonly used melanin inhibitors from natural products and traditional Chinese medicine [J]. China J Chin Mater Med (中国中药杂志), 2020, 45: 5898-5916.

[12]

Benito-Martínez S, Salavessa L, Raposo G, et al. Melanin transfer and fate within keratinocytes in human skin pigmentation [J]. Integr Comp Biol, 2021, 61: 1546-1555.

[13]

Vinitha Ranji PK, Chandrani Wijeyaratne S, Hector Jayawardana K, et al. Citriquinones A and B, new benzoquinones from Penicillium citrinum [J]. Nat Prod Commun, 2013, 8: 1431-1434.

[14]

Trivedi AB, Hirota M, Doi E, et al. Formation of new toxic compound, citrinin H1, fromcitrinin on mild heating in water [J]. J Chem Soc Perkin 1, 1993, 18: 2167-2171.

[15]

Hirota M, Mehta A, Yoneyama K, et al. A major decomposition product, citrinin H2, from citrinin on heating with moisture [J]. Biosci Biotechnol Biochem, 2002, 66: 206-210.

[16]

Yang JK, Zhang B, Gao T, et al. A pair of enantiomeric 5-oxabicyclic[4.3. 0] lactam derivatives and one new polyketide from the marine-derived fungus Penicillium griseofulvum [J]. Nat Prod Res, 2018, 32: 2366-2369.

[17]

Jin WY, Cai XF, Na M, et al. Triterpenoids and diarylheptanoids from Alnus hirsuta inhibit HIF-1 in AGS cells [J]. Arch Pharm Res, 2007, 30: 412-418.

[18]

Xia LZ, Zhou M, Xiao YH, et al. Chemical constituents from Helwingia japonica [J]. Chin J Nat Med, 2010, 8: 16-20.

[19]

Kim DK, Nam IY, Kim JW, et al. Pentacyclic triterpenoids from IIex macropoda [J]. Arch Pharm Res, 2002, 25: 617-620.

[20]

Mochammad S, Kazuo Y, Ryoji K, et al. ¹³C nuclear magnetic resonance of lupane-type triterpenes, lupeol, betulin and berulinic acid [J]. Chem Pharm Bull, 1980, 28: 1006-1008.

[21]

Dong ZQ, Wang W, Xu WQ. Pentacyclic triterpenoids from Spiraea pubescens (Ⅱ) [J]. Chin J Exp Tradit Med Formulae (中国实验方剂学杂志), 2014, 20: 93-97.

[22]

Kagawa M, Minami H, Nakahara M, et al. Oleanane-type triterpenes from Viburnum awabuki [J]. Phytochemistry, 1998, 47: 1337-1341.

[23]

Lee CK, Chang MH. The chemical constituents from the heartwood of Eucalyptus citriodora [J]. J Chin Chem Soc, 2000, 47: 555-560.

[24]

Li BQ, Song QS. Study on the chemical constituents of the branches and leaves of Kopsia officinalis [J]. Chin Tradit Herb Drugs (中草药), 2008, 39: 1299-1301.

[25]

Zhang QH, Tian L, Yan ZQ, et al. Chemical constituents of a marine fungus Nigrospora sphaerica [J]. Chin Pharm J (中国药学杂志), 2014, 49: 26-29.

[26]

Li JT, Chen QQ, Zeng Y, et al. A new phenol compound from endophytic Phomopsis sp. DC01 [J]. Nat Prod Res, 2012, 26: 2008-2012.

[27]

Kwon HC, Zee SD, Cho SY, et al. Cytotoxic ergosterols from Paecilomyces sp. J300 [J]. Arch Pharm Res, 2002, 25: 851-855.

[28]

Jiang B, Zhao QS, Peng LY, et al. Constituents from Thamnolia vermicularis [J]. Acta Bot Yunnanica (云南植物研究), 2002, 24: 525-530.

[29]

Cheng CL, Gong KK, Li PL, et al. Studies on chemical constituents of Sonneratia paracaseolaris [J]. Chin J Mar Drugs (中国海洋药物), 2014, 33: 53-57.

[30]

Xin ZH, Tian L, Zhu TJ, et al. Isocoumarin derivatives from the sea squirt-derived fungus Penicillium stoloniferum QY2-10 and the halotolerant fungus Penicillium notatum B-52 [J]. Arch Pharm Res, 2007, 30: 816-819.

[31]

Yaoita Y, Amemiya K, Ohnuma H, et al. Sterol constituents from five edible mushrooms [J]. Chem Pharm Bull, 1998, 46: 944-950.

[32]

Wang FZ, Fang YC, Zhang M, et al. Six new ergosterols from the marine-derived fungus Rhizopus sp. [J]. Steroids, 2008, 73: 19-26.

[33]

Amagata T, Tanaka M, Yamada T, et al. Variation in cytostatic constituents of a sponge-derived Gymnascella dankaliensis by manipulating the carbon source [J]. J Nat Prod, 2007, 70: 1731-1740.

[34]

Togashi H, Mizushina Y, Takemura M, et al. 4-Hydroxy-17-methylincisterol, an inhibitor of DNA polymerasea activity and the growth of human cancer cells in vitro [J]. Biochem Pharmacol, 1998, 56: 583-590.

[35]

Wang YY, Zheng SN, Tian T, et al. Bioassay-guided isolation of cytotoxic steroids from Neosartorya fischeri [J]. Chem Nat Compd, 2020, 56: 173-176.

[36]

Fujimoto H, Nakamura E, Okuyama E, et al. Six immunosuppressive features from an ascomycete, Zopfifiella longicaudata, found in a screening study monitored by immunomodulatory activity [J]. Chem Pharm Bull, 2004, 52: 1005-1008.

[37]

Mikayoulou M, Mayr F, Temml V, et al. Anti-tyrosinase activity of South African Aloe species and isolated compounds plicataloside and aloesin [J]. Fitoterapia, 2021, 150: 104828.

[38]

Chen LJ. Screeming and Determining Activity of a Class of Tyrosinase Inhibitors (新型酪氨酸酶抑制剂筛选及其活性测试) [D]. Changsha: Central South University of Forestry & Technology, 2012.

2025年第60卷第2期

PDF下载

142

引用本文

BibTeX

文章信息

doi: 10.16438/j.0513-4870.2024-0845

接收时间：2024-08-30
首发时间：2025-11-07
出版时间：2025-02-12

补充材料

相关文章

文章信息

作者

出版历史

收稿日期：2024-08-30
修回日期：2024-12-05

基金

国家自然科学基金资助项目(82260685)

江西省科技厅资助项目(20232BAB206181)

作者信息

1.赣南医科大学康复学院, 江西赣州 341000

2.赣南医科大学基础医学院, 江西赣州 341000

3.赣南医科大学药学院, 江西赣州 341000

通讯作者:

^*温慧玲, E-mail: wenhuiling1984_whl@163.com

参考文献

分享链接

https://castjournals.cast.org.cn/joweb/yxxb/CN/10.16438/j.0513-4870.2024-0845

分享至

全文二维码

扫描看全文

引用本文

BibTeX

本文的引用情况

2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

关闭全屏

BibTeX
EndNote
RefWorks
TxT

No.	1
No.	δ_H	δ_C
1		184.0
2		151.0
3		116.8
4		187.7
5		145.4
6		141.7
7	2.11 (3H, s)	12.9
8	1.92 (3H, s)	8.4
9	2.90 (1H, qd, J = 7.2, 10.0 Hz)	42.7
10	1.20 (3H, d, J = 7.2 Hz)	16.2
11	4.20 (1H, qd, J = 6.1, 10.0 Hz)	70.2
12	1.24 (3H, d, J = 6.1 Hz)	22.8