药学学报

No.	δ_H mult. (J in Hz)	δ_C
1	-	170.2 C
2	5.71 s	115.1 CH
3	-	162.0 C
4	2.25 m, 2.25 m	40.8 CH₂
5	2.33 m, 2.33 m	26.3 CH₂
6	5.43 t (6.9)	131.0 CH
7	-	135.2 C
8	6.35 dd (17.4, 10.6)	141.3 CH
9	4.96 d (10.6), 5.11 d (17.4)	111.4 CH₂
10	2.18 s	19.2 CH₃
11	1.75 s	11.9 CH₃

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4	2.25 m, 2.25 m	40.8 CH₂
5	2.33 m, 2.33 m	26.3 CH₂
6	5.43 t (6.9)	131.0 CH
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8	6.35 dd (17.4, 10.6)	141.3 CH
9	4.96 d (10.6), 5.11 d (17.4)	111.4 CH₂
10	2.18 s	19.2 CH₃
11	1.75 s	11.9 CH₃

短指软珊瑚Sinularia sp.中的化学成分及其PPARs激动活性研究

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张春琳 ¹ , 张莉亭 ² , 曾建昂 ² , 李松威 ³ , 宫益霞 ¹ , 郭跃伟 ² , 王丽红 ¹^,^* , 苏明智 ²^,^*

药学学报 | 研究论文 2026,61(6): 2221-2229

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药学学报 |研究论文 2026 , 61 (6) : 2221 -2229

短指软珊瑚Sinularia sp.中的化学成分及其PPARs激动活性研究

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张春琳¹, 张莉亭², 曾建昂², 李松威³, 宫益霞¹, 郭跃伟², 王丽红¹^,^*, 苏明智²^,^*

作者信息

¹佳木斯大学药学院, 黑龙江佳木斯 154007

²烟台新药创制山东省实验室/中科环渤海 (烟台) 药物高等研究院, 山东烟台 264117

³上海大学医学院, 上海 200444

通讯作者:

王丽红, E-mail: wanglihong@jmsu.edu.cn

苏明智, E-mail: mzsu@baridd.ac.cn

作者简介:

共同第一作者.

作者贡献:

张春琳与张莉亭为本文共同第一作者。张春琳负责化合物的分离、鉴定及文章撰写; 张莉亭负责药理活性的筛选及初稿撰写; 曾建昂负责PPARs活性的筛选工作; 李松威、王丽红及宫益霞在实验过程中提供指导, 并参与稿件修订; 郭跃伟与苏明智负责实验设计、基金支持与论文的最终修订。

Study on the chemical constituents and their PPARs agonistic activities from the soft coral Sinularia sp.

Chun-lin ZHANG¹, Li-ting ZHANG², Jian-ang ZENG², Song-wei LI³, Yi-xia GONG¹, Yue-wei GUO², Li-hong WANG¹^,^*, Ming-zhi SU²^,^*

Affiliations

¹College of Pharmacy, Jiamusi University, Jiamusi 154007, China

²Shandong Laboratory of Yantai Drug Discovery, Bohai Rim Advanced Research Institute for Drug Discovery, Yantai 264117, China

³School of Medicine, Shanghai University, Shanghai 200444, China

出版时间: 2026-06-12 doi: 10.16438/j.0513-4870.2026-0278

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摘要

收起

对采自中国南海西瑁岛的短指软珊瑚Sinularia sp.中的化学成分及其过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator activated receptors, PPARs) 的激动活性和抗炎活性进行研究。采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱和高效液相色谱(HPLC) 等方法进行化学成分分离, 通过核磁共振波谱(NMR)、质谱(MS)、红外光谱(IR) 等手段, 以及比对相关参考文献, 确定了化合物的结构。从短指软珊瑚中分离得到11个化合物, 包括2个降倍半萜、2个呋喃倍半萜、7个甾体类化合物。经波谱数据分析, 其结构分别鉴定为(2E,6E)-3,7-dimethyl-nona-2,6,8-trienoic acid (1)、(3S,6E)-3,7-dimethyl-nona-6,8-dienoic acid (2)、(1′E,5′E)-5-(2′,6′-dimethylocta-1′,5′,7′-trienyl)-furan-3-carboxylic acid (3)、(5′E)-5-(2′,6′-dimethylocta-5′,7′-dienyl)-furan-3-carboxylic acid (4)、(24S)-24-甲基胆甾醇(5)、24(R)-7α-羟基麦角甾-5-烯-3β-醇(6)、brassicasterol (7)、孕甾-5,20-二烯-3β-醇(8)、gorgosterol (9)、β-sitosterol (10)、24-methylenecholesterol (11)。化合物1为新化合物, 化合物6、10为首次从短指软珊瑚Sinularia sp.中分离得到。荧光素酶报告基因检测显示, 化合物8和9在5 μmol·L^-1浓度下具有选择性激活PPAR-α转录因子的活性, 化合物5是PPAR-α和PPAR-β的双激动剂。此外, 化合物5、7和8具有体外抗炎活性, 化合物5对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS) 诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7产生的炎症介质诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS) 和环氧化酶-2 (cyclooxygenase-2, COX-2) 具有显著的抑制作用。

关键词

软珊瑚 / Sinularia sp. / 倍半萜 / 甾体 / PPARs激动剂 / 抗炎活性

Abstract

收起

This study aims to investigate the chemical constituents of the soft coral Sinularia sp. collected from Ximao Island in the South China Sea, and to evaluate the peroxisome proliferator-activated receptor (PPARs) agonistic and anti-inflammatory activities of the isolated compounds. The chemical constituents were isolated using silica gel column chromatography, Sephadex LH-20 gel column chromatography, and high-performance liquid chromatography (HPLC). The structures of the compounds were elucidated by comprehensive analysis of NMR, MS, and IR data and comparing them with those reported in the literature. Eleven compounds were isolated from the soft coral Sinularia sp., including two norsesquiterpenes, two furanosesquiterpenes, and seven steroids. Their structures were elucidated by spectroscopic data analysis as (2E,6E)-3,7-dimethyl-nona-2,6,8-trienoic acid (1), (3S,6E)-3,7-dimethyl-nona-6,8-dienoic acid (2), (1′E,5′E)-5-(2′,6′-dimethylocta-1′,5′,7′-trienyl)-furan-3-carboxylic acid (3), (5′E)-5-(2′,6′-dimethylocta-5′,7′-dienyl)-furan-3-carboxylic acid (4), (24S)-24-methylcholesterol (5), 24R-7α- hydroxyergosta-5-en-3β-ol (6), brassicasterol (7), pregn-5,20-dien-3β-ol (8), gorgosterol (9), β-sitosterol (10), 24-methylenecholesterol (11). Compound 1 was identified as a new compound. Compounds 6 and 10 were obtained from Sinularia sp. for the first time. Luciferase reporter gene assay revealed that compounds 8 and 9 selectively activated the PPAR-α transcription factor at a concentration of 5 μmol·L^-1, while compound 5 acted as a dual agonist of PPAR-α and PPAR-β isomers. In addition, compounds 5, 7, and 8 exhibited in vitro anti-inflammatory activities. Compound 5 significantly inhibited the production of the inflammatory mediators inducible nitric oxide synthase (iNOS) and cyclooxygenase-2 (COX-2) in lipopolysaccharide (LPS) stimulated mouse macrophages RAW264.7.

Key words

soft coral / Sinularia sp. / sesquiterpene / steroid / PPARs agonist / anti-inflammatory activity

引用本文

张春琳, 张莉亭, 曾建昂, 李松威, 宫益霞, 郭跃伟, 王丽红, 苏明智. 短指软珊瑚Sinularia sp.中的化学成分及其PPARs激动活性研究. 药学学报, 2026 , 61 (6) : 2221 -2229 . DOI: 10.16438/j.0513-4870.2026-0278

Chun-lin ZHANG, Li-ting ZHANG, Jian-ang ZENG, Song-wei LI, Yi-xia GONG, Yue-wei GUO, Li-hong WANG, Ming-zhi SU. Study on the chemical constituents and their PPARs agonistic activities from the soft coral Sinularia sp.[J]. Acta Pharmaceutica Sinica, 2026 , 61 (6) : 2221 -2229 . DOI: 10.16438/j.0513-4870.2026-0278

正文

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短指软珊瑚(Sinularia sp.) 属于刺胞动物门(Cnidaria), 珊瑚虫纲(Anthozoa), 八放珊瑚亚纲(Octocorallia), 软珊瑚目(Alcyonacea), 海鸡冠亚目(Alcyoniina), 海鸡冠科。我国海洋资源丰富, 海洋生态环境良好, 短指软珊瑚在我国东海和南海等海域广泛分布。由于海洋特殊的高盐、高压、低氧等环境因素, 固着底栖的短指软珊瑚为了适应海底环境, 并抵御食物链上游生物的捕食或微生物的侵袭, 它们进化出了独特的化学防御体系以保障自身的生存与繁衍。因此它们的次级代谢产物丰富且结构新颖独特, 主要包括倍半萜、二萜、甾体和神经酰胺等^{[1, 2]}。这些次级代谢产物具有广泛的生物活性, 包括抗肿瘤、抗炎、抗菌以及调控糖脂代谢等^[3-6]。

过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator activated receptors, PPARs) 作为核受体超家族成员, 是一类配体依赖型转录因子, 包含PPAR-α、PPAR-β和PPAR-γ三种亚型。它们通过调控靶基因转录, 广泛参与调节脂质代谢、葡萄糖稳态和炎症反应等生理病理过程的^[7-10]。PPAR-α激动剂(GW7647) 可以降低可溶性淀粉样前体蛋白β (soluble amyloid precursor protein beta, sAPPβ) 的表达和抑制β分泌酶1 (beta-site amyloid precursor protein cleaving enzyme 1, BACE-1) 的活性, 并减少了β-淀粉样蛋白1-42 (amyloid beta peptide 1-42, Aβ1-42) 的释放, 在神经炎症性疾病的治疗中具有保护作用^{[11, 12]}。PPAR-β具有促进脂肪酸氧化、增强胰岛素敏感性及调节炎症反应的作用, 其激活后可下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达, 并显著降低促炎细胞因子白细胞介素-1β (interleukin-1 beta, IL-1β)、肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor-alpha, TNF-α) 以及促凋亡蛋白Bax的表达水平^[13]; PPAR-γ主要分布于脂肪组织中, 提高胰岛素敏感性、参与脂肪生成和抗炎过程。临床用于治疗2型糖尿病的PPAR-γ激动剂罗格列酮(rosiglitazone, ROSI), 近期被证实可通过抑制神经元NLRP3炎性小体活化以发挥抗炎效应^[14]。由此可见, PPARs靶点在炎症性疾病中的潜在治疗价值。

为了从海洋天然产物中挖掘具有PPARs激动活性的先导化合物, 本文对采自中国南海西瑁岛的短指软珊瑚Sinularia sp.进行了系统的化学成分分析。从该属软珊瑚中共分离得到11个化合物, 包括4个倍半萜类化合物和7个甾体类化合物(图1)。并对它们进行了针对PPAR-α、PPAR-β和PPAR-γ三个亚型的激动活性以及抗炎活性进行了评估。

结果与讨论

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1　化合物1的结构鉴定

化合物1为无色油状物, 易溶于氯仿。HR-ESI-MS显示1的准分子离子峰[M-H]^-为m/z 179.107 5 (计算值为C₁₁H₁₅O₂ 179.107 8), 提示化合物的分子式为C₁₁H₁₆O₂, 不饱和度为4。¹H NMR波谱数据显示化合物1有两个甲基信号, 分别为δ_H 1.75 (3H, s, H₃-11)和2.18 (3H, s, H₃-10)。¹³C NMR和DEPT波谱数据显示, 化合物1有11个碳信号, 分别为两个甲基(δ_C 11.9和19.2), 两个sp³亚甲基(δ_C 40.8和26.3)、1个sp²亚甲基(δ_C 111.4)、3个sp²次甲基(δ_C 115.1、131.0、141.3) 和3个sp²季碳, 其中包括一个羰基碳信号(δ_C 170.2), 其信号归属如表1所示。通过¹H-¹H COSY可识别出H₂-4 (δ_H 2.25) 至H-6 (δ_H 5.43) 以及H-8 (δ_H 6.35) 和H₂-9 (δ_H 4.96/5.11) 之间的相关信号。结合关键HMBC相关信号: H₃-10与C-2 (δ_C 115.1)/C-3 (δ_C 162.0)/C-4 (δ_C 40.8); H₃-11与C-6 (δ_C 131.0)/C-7 (δ_C 135.2)/C-8 (δ_C 141.3); 以及H-2与C-1 (δ_C 170.2) (图2), 确立了化合物1的平面结构。进一步综合分析表明, 化合物1与2的结构高度相似, 二者主要差异在于化合物1中存在Δ²⁽³⁾双键, 导致其在低场区出现两个sp²碳信号(δ_C 115.1和δ_C 162.0), 这与二者分子质量相差2个质量单位的质谱数据相吻合。

化合物1的相对构型主要通过NOESY数据解析确定(图2)。NOESY谱中H-2/H₂-4的相关信号, 以及H-6/H-8和H₂-5/H₃-11的相关信号, 分别证实了Δ²⁽³⁾和Δ⁶⁽⁷⁾双键均为E构型。综上所述, 化合物1的结构如图2所示, 命名(2E,6E)-3,7-dimethyl-nona-2,6,8-trienoic acid。

2　化合物的活性筛选

2.1　化合物对PPARs转录激活的影响

如图3A所示, 经5 µmol·L^-1浓度处理24 h后, 化合物5、7~9及11对大鼠肝细胞(Ac2F) 细胞活力均保持在90%以上, 表明其在该浓度下无显著细胞毒性。采用PPAR荧光素酶报告基因系统评估化合物对PPAR亚型(α、β、γ) 的激动活性(图3B~D)。结果表明, 阳性药匹立尼酸(pirinixic acid, WY14643)、GW501516及ROSI在5 μmol·L^-1浓度下分别显著激活了PPAR-α、PPAR-β及PPAR-γ。化合物5在5 μmol·L^-1浓度下显著激活了PPAR-α和PPAR-β; 化合物8和9则特异性激活PPAR-α。基于上述结果, 化合物5为PPAR-α/β双重激动剂, 化合物8和9是PPAR-α的选择性激动剂。

2.2　分子对接

基于荧光素酶报告基因检测结果, 通过分子对接模拟分析了化合物5、8和9与PPAR-α的结合模式, 以及化合物5与PPAR-β的结合模式。如图4A所示, PPAR-α激动剂WY 14643结合于配体结合域^[15], 与CYS276、SER280、TYR314、HIS440和TYR464形成氢键, 并与THR279、ILE317和LEU321产生疏水相互作用。化合物5与关键残基SER280形成氢键, 并与MET220、THR279、THR283、PHE318、LEU321及VAL324产生疏水作用(图4B)。化合物8与HIS440和TYR464形成氢键, 同时与TYR314、ILE317、PHE318、LEU321、VAL332和ILE354发生疏水相互作用(图4C)。化合物9与SER280形成氢键, 并与THR279、ILE317、PHE318、LEU321、VAL324及TYR334产生疏水作用, 从而稳定其与PPAR-α的结合(图4D)。值得注意的是, 化合物8与活性口袋形成了更为广泛的氢键网络和疏水相互作用, 这可能与其相对较好的PPAR-α激动活性密切相关。

对于PPAR-β受体^[16], GW 501516与其活性口袋结合时与THR289形成氢键, 与THR288、THR292、ILE326、MET329、ILE333和LEU339存在疏水相互作用, 同时与PHE327形成π-π堆积, 并与HIS323产生盐桥作用(图4E)。化合物5与PPAR-β结合时, 可与HIS323形成氢键, 并与PHE282、TYR283、GLN286和PHE360发生疏水作用(图4F)。综上结果表明, 化合物5与PPAR-α和PPAR-β均具有良好的结合能力。

2.3　抗炎活性测试

化合物5、7和8在50 μmol·L^-1浓度显著抑制了LPS诱导的RAW264.7细胞产生NO, 表明它们具有体外的抗炎活性(图5A)。Western blot结果进一步显示, 化合物5能有效降低LPS诱导的iNOS和COX-2蛋白表达水平(图5B~D)。

3　讨论

短指软珊瑚(Sinularia sp.) 作为中国南海重要的海洋生物资源, 因其独特的化学防御机制, 已成为结构新颖、活性显著化合物的重要来源。本课题对中国南海西瑁岛海域采集的短指软珊瑚进行了系统的化学成分研究, 共分离鉴定得到2个降倍半萜、2个呋喃倍半萜及7个甾体类化合物。其中, 化合物1为新化合物, 化合物6和10为首次从短指属软珊瑚中报道。上述发现进一步丰富了短指软珊瑚的化学成分多样性。

在代谢性疾病中, PPARs靶点与脂质代谢紊乱、胰岛素抵抗和炎症反应等密切相关。由于受到化合物量的限制, 本研究仅对化合物5、7~9和11进行了生物活性测试。本研究首次发现化合物8和9为选择性PPAR-α激动剂, 而化合物5为PPAR-α/β双激动剂。此外, 化合物5、7和8均表现出体外抗炎活性。其中, 化合物5可通过抑制LPS诱导的RAW264.7细胞中炎症相关蛋白iNOS和COX-2的表达, 进而减少NO的生成, 发挥抗炎作用。化合物5、7和8表现出显著的抗炎效果可能与其激动PPARs受体密切相关。上述结果揭示了软珊瑚来源的甾体化合物作为新型PPARs激动剂的开发潜力。

实验部分

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Agilent 1260高效液相色谱仪, ZenoTOF7600高分辨电喷雾质谱(美国Agilent公司); Bruker DRX-600型核磁共振波谱仪(德国Bruker公司); SephadexLH-20凝胶(美国Pharmacia公司); R-210/215旋转蒸发仪(瑞士Buchi公司); Thermo 371二氧化碳恒温培养箱(美国Thermo Fisher公司); EnVision多功能酶标仪(美国PerkinElemer公司); ChemiDoc MP凝胶成像仪(美国Bio-Rad公司)。

Agilent Eclipse XDB-C18半制备色谱柱(250 mm × 9.4 mm, 5 µm, 美国Agilent公司); 薄层层析硅胶板GF254 (烟台江友硅胶开发有限公司); 柱色谱硅胶(200~300和300~400目, 青岛海湾精细化工有限公司); 柱色谱与高效液相色谱所用溶剂分别为分析纯(上海化学试剂有限公司) 和色谱纯(北京迪科马科技); 二甲基亚砜(DMSO, 3230820001) 购自北京索莱宝科技有限公司; 噻唑兰(MTT, P3244322) 购自上海阿达玛斯试剂有限公司; DMEM培养基(6125388) 购自美国Gibco公司; 脂多糖(LPS, 0000189842) 购自德国Sigma-Aldrich公司; 罗格列酮(ROSI, P3244322) 和地塞米松(DEX, P194330) 均购自中国Damas-Beta公司。匹立尼酸(WY 14643, 101345) 和GW 501516 (19891) 均购自美仑生物科技有限公司; iNOS (5) 购自美国Cell Signaling Technology公司; COX-2 (00100441) 购自中国武汉三鹰生物技术有限公司; HRP山羊抗兔IgG (3873A26) 购自美国ImmunoWay公司; ECL化学发光液(FGRGP) 购自中国山东思科捷生物技术有限公司; 荧光素酶报告基因检测试剂盒(A416251021) 购自中国上海碧云天生物技术股份有限公司; 小鼠巨噬细胞(RAW264.7) 购自中国武汉普诺赛生命科技有限公司; 大鼠肝细胞(Ac2F) 获赠于韩国釜山大学。

实验样品于2023年采自中国南海西瑁岛, 经海南大学李秀保教授鉴定为短指软珊瑚Sinularia sp., 标本(编号: 23-SH-65) 保存于烟台新药创制山东省实验室/中科环渤海(烟台) 药物高等研究院。

1　提取分离

将冷冻的短指软珊瑚Sinularia sp. (湿重14.1 kg) 切碎后于室温下用丙酮超声提取6次, 每次15 min。将提取液减压浓缩去除溶剂, 将丙酮提取物用水充分溶解, 再加入等体积的乙醚于常温下萃取6次, 萃取液减压浓缩, 得到乙醚粗浸膏23.0 g。

取乙醚粗浸膏(13.0 g) 经硅胶柱色谱分离, 石油醚-乙酸乙酯体系(100∶1→80∶1→40∶1→20∶1→10∶1→1∶1→1∶5) 和二氯甲烷-甲醇体系(4∶1→2∶1) 进行梯度洗脱, 每个梯度洗脱2个柱体积, 得到A~H共8个组分。组分C经Sephadex LH-20柱层析(石油醚-二氯甲烷-甲醇, 2∶1∶1) 分离, 得到4个亚组分CA~CE。CE通过硅胶柱层析(300~400目, 石油醚-乙酸乙酯, 4∶1) 分离, 得到亚组分CEA。该亚组分再经硅胶柱层析(300~400目, 石油醚-乙酸乙酯, 9∶1) 纯化, 得到化合物1 (1.5 mg) 和2 (1.7 mg)。

组分D经过纯二氯甲烷(DCM) 等度洗脱得到组分DB, DB再经硅胶柱层析石油醚-乙酸乙酯以20∶1→4∶1梯度洗脱组分DBA~DBD, DBB通过半制备型高效液相色谱, 以甲醇-水体系(85∶15) 洗脱得到化合物5 (1.7 mg, t_R = 17.2 min) 和化合物6 (0.8 mg, t_R = 23.5 min), DBD经甲醇-水体系(82∶18) 得到化合物7 (1.9 mg, t_R = 19.4 min)。

组分E先后经过Sephadex LH-20柱色谱(石油醚-二氯甲烷-甲醇, 2∶1∶1) 得到5个亚组分EA~EE, EC进一步通过硅胶柱色谱(石油醚-乙酸乙酯, 9∶1) 纯化, 得到化合物3 (7 mg) 和4 (12.5 mg)、ED通过Sephadex LH-20柱色谱(二氯甲烷等度洗脱)、通过HPLC分离, 流速为3 mL·min^-1的条件下得到化合物8 (1.5 mg, 甲醇-水, 72∶28, t_R = 26 min)、化合物9 (1.6 mg, 甲醇-水, 70∶30, t_R = 28.6 min)、化合物10 (0.7 mg, 甲醇-水, 64∶36, t_R = 27.3 min)、化合物11 (1.7 mg, 乙腈-水, 55∶45, t_R = 37.5 min)。

2　结构鉴定

化合物1: 无色油状物, IR (KBr): max 3 436, 2 955, 2 923, 2 851, 1 692, 1 641, 1 251 cm^-1; ¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) 和¹³C NMR (150 MHz, CDCl₃) 数据见表1, HRESIMS m/z: 179.107 5, [M-H]^- (计算值C₁₁H₁₅O₂, 179.107 8)。

化合物2: 无色油状物, 分子式为C₁₁H₁₈O₂, ESI-MS m/z 183 [M+H]⁺。¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ_H: 6.36 (1H, dd, J = 17.4, 10.7 Hz, H-8), 5.47 (1H, t, J = 7.2 Hz, H-6), 5.09 (1H, dd, J = 17.4 Hz, H-9b), 4.93 (1H, d, J = 10.7 Hz, H-9a), 2.38 (1H, dd, J = 15.0, 5.9 Hz, H-2b), 2.19 (1H, dd, J = 15.0, 7.9 Hz, H-2a), 2.17 (2H, m, H₂-5), 2.0 (1H, m, H-3), 1.74 (3H, s, H₃-11), 1.45 (1H, m, H-4b), 1.30 (1H, m, H-4a), 1.00 (3H, d, J = 6.6 Hz, H₃-10); ¹³C NMR (150 MHz, CDCl₃) δ_C: 177.5 (C-1), 41.2 (C-2), 29.9 (C-3), 36.2 (C-4), 25.6 (C-5), 132.6 (C-6), 134.2 (C-7), 141.5 (C-8), 110.6 (C-9), 19.5 (C-10), 11.6 (C-11)。以上数据与文献^[17]报道一致, 故鉴定化合物2为(3S, 6E)-3, 7-dimethyl-nona-6, 8-dienoic acid。

化合物3: 无色油状物, 分子式为C₁₅H₁₈O₃, ESI-MS m/z 247 [M+H]⁺。¹H NMR (600 MHz, DMSO-d₆) δ_H: 8.05 (1H, s, H-1), 6.53 (1H, s, H-3), 6.36 (1H, dd, J = 17.6, 10.9 Hz, H-11), 6.11 (1H, s, H-5), 5.52 (1H, t, J = 6.7 Hz, H-9), 5.07 (1H, d, J = 17.6 Hz, H-12a), 4.89 (1H, d, J = 10.9 Hz, H-12b), 2.36 (1H, m, H-8), 2.27 (1H, t, J = 8.1 Hz, H-7), 1.99 (3H, s, H₃-14), 1.74 (3H, s, H₃-15); ¹³C NMR (150 MHz, DMSO-d₆) δ_C: 146.8 (C-1), 126.8 (C-2), 107.9 (C-3), 155.5 (C-4), 114.5 (C-5), 141.1 (C-6), 40.8 (C-7), 27.3 (C-8), 132.7 (C-9), 135.2 (C-10), 142.3 (C-11), 110.98 (C-12), 164.51 (C-13), 18.70 (C-14), 11.7 (C-15)。以上数据与文献^[18]报道一致, 故鉴定化合物3为(1E′, 5′E)-5-(2′, 6′-dimethylocta-1′, 5′, 7′-trienyl)-furan-3-carboxylic acid。

化合物4: 无色油状物, 分子式C₁₅H₂₀O₃, ESI-MS m/z 271 [M+Na]⁺。¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ_H: 7.96 (1H, s, H-2), 6.37 (1H, s, H-4), 6.36 (1H, dd, J = 17.2, 10.8 Hz, H-7′), 5.46 (1H, t, J = 7.2 Hz, H-5′), 5.08 (1H, d, J = 17.2 Hz, H-8a′), 4.93 (1H, d, J = 10.8 Hz, H-8b′), 2.64 (1H, dd, J = 14.8, 6.0 Hz, H-1a′), 2.48 (1H, dd, J = 15.2, 8.0 Hz, H-1b′), 2.18 (2H, m, H₂-4′), 1.86 (1H, m, H-2′), 1.74 (3H, s, H₃-10′), 1.44 (1H, m, H-3a′), 1.27 (1H, m, H-3b′), 0.93 (3H, d, J = 6.8 Hz, H₃-9′); ¹³C NMR (150 MHz, CDCl₃) δ_C: 147.5 (C-2), 118.8 (C-3), 106.0 (C-4), 157.2 (C-5), 167.2 (C-6), 35.1 (C-1′), 32.1 (C-2′), 36.1 (C-3′), 25.7 (C-4′), 132.8 (C-5′), 134.1 (C-6′), 141.5 (C-7′), 110.6 (C-8′), 19.4 (C-9′), 11.6 (C-10′) 以上数据与文献^[19]报道一致, 故鉴定化合物4为(5′E)-5-(2′, 6′- dimethylocta-5′, 7′-dienyl)-furan-3-carboxylic acid。

化合物5: 无色油状物, 分子式C₂₈H₄₈O, ESI-MS m/z 401 [M+H]⁺。¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ_H: 5.35 (1H, m, H-6), 3.53 (1H, m, H-3), 1.01 (3H, s, H₃-19), 0.92 (3H, d, J = 6.5 Hz, H₃-21), 0.85 (3H, d, J = 6.8 Hz, H₃-26), 0.78 (3H, d, J = 4.4 Hz, H₃-27), 0.77 (3H, d, J = 4.3 Hz, H₃-24), 0.68 (3H, s, H₃-18); ¹³C NMR (150 MHz, CDCl₃) δ_C: 37.4 (C-1), 31.6 (C-2), 72.0 (C-3), 42.5 (C-4), 140.9 (C-5), 121.9 (C-6), 32.1 (C-7), 31.8 (C-8), 50.3 (C-9), 36.7 (C-10), 21.2 (C-11), 39.9 (C-12), 42.5 (C-13), 56.9 (C-14), 24.5 (C-15), 28.3 (C-16), 56.1 (C-17), 12.0 (C-18), 19.6 (C-19), 36.3 (C-20), 19.0 (C-21), 33.9 (C-22), 30.7 (C-23), 39.2 (C-24), 31.5 (C-25), 17.7 (C-26), 20.7 (C-27), 15.6 (C-28)。以上数据与文献^[20]报道一致, 故鉴定化合物5为(24S)-24-甲基胆甾醇。

化合物6: 无色油状物, 分子式C₂₈H₄₈O₃, ESI-MS m/z 433 [M+H]⁺。¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ_H: 5.72 (1H, dd, J = 5.0, 1.9 Hz, H-6), 4.17 (1H, s, H-7), 3.49 (3H, m, H₃-3), 1.01 (3H, s, H₃-19), 0.92 (3H, d, J = 6.6 Hz, H₃-21), 0.85 (3H, d, J = 6.8 Hz, H₃-26), 0.78 (3H, d, J = 5.6 Hz, H₃-27), 0.77 (3H, d, J = 5.5 Hz, H₃-28), 0.64 (3H, s, H₃-18); ¹³C NMR (150 MHz, CDCl₃) δ_C: 36.9 (C-1), 31.5 (C-2), 71.5 (C-3), 42.3 (C-4), 149.0 (C-5), 120.1 (C-6), 78.6 (C-7), 37.2 (C-8), 43.7 (C-9), 37.6 (C-10), 21.0 (C-11), 39.2 (C-12), 42.5 (C-13), 49.2 (C-14), 24.6 (C-15), 28.3 (C-16), 55.6 (C-17), 11.5 (C-18), 18.4 (C-19), 36.3 (C-20), 19.1 (C-21), 33.8 (C-22), 30.5 (C-23), 39.2 (C-24), 31.6 (C-25), 20.6 (C-26), 17.8 (C-27), 15.6 (C-28)。以上数据与文献^[21]报道一致, 故鉴定化合物6为24(R)-7α-羟基麦角甾-5-烯-3β-醇。

化合物7: 白色油状物, 分子式C₂₈H₄₆O, ESI-MS m/z 399 [M+H]⁺。¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ_H: 5.35 (1H, m, H-6), 5.16-5.22 (2H, m, H-22, 23), 1.01 (3H, d, J = 4.2 Hz, H₃-28), 1.00 (3H, d, J = 6.1 Hz, H₃-21), 0.91 (3H, d, J = 6.9 Hz, H₃-27), 0.83 (3H, d, J = 6.7 Hz, H₃-26), 0.81 (3H, s, H₃-19), 0.69 (3H, s, H₃-18); ¹³C NMR (150 MHz, CDCl₃) δ_C: 37.4 (C-1), 30.3 (C-2), 72.0 (C-3), 42.4 (C-4), 140.9 (C-5), 121.9 (C-6), 31.6 (C-7), 32.1 (C-8), 50.3 (C-9), 36.7 (C-10), 21.2 (C-11), 39.8 (C-12), 42.5 (C-13), 57.0 (C-14), 24.4 (C-15), 28.7 (C-16), 56.2 (C-17), 12.2 (C-18), 19.6 (C-19), 40.3 (C-20), 21.1 (C-21), 136.0 (C-22), 131.9 (C-23), 43.0 (C-24), 33.3 (C-25), 20.1 (C-26), 19.8 (C-27), 17.8 (C-28)。以上数据与文献^[22]报道一致, 故鉴定化合物7为brassicasterol。

化合物8: 白色油状物, 分子式C₂₁H₃₂O, ESI-MS m/z 301 [M+H]⁺。¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ_H: 5.75 (1H, m, H-20), 5.35 (1H, m, H-6), 5.0 (2H, m, H₂-21), 3.55 (1H, m, H-3), 1.01 (1H, s, H-18), 0.61 (1H, s, H-19); ¹³C NMR (150 MHz, CDCl₃) δ_C: 36.9 (C-1), 31.5 (C-2), 71.5 (C-3), 42.3 (C-4), 141.0 (C-5), 121.8 (C-6), 78.6 (C-7), 37.2 (C-8), 43.7 (C-9), 37.6 (C-10), 21.0 (C-11), 39.2 (C-12), 42.5 (C-13), 49.2 (C-14), 24.6 (C-15), 28.3 (C-16), 55.7 (C-17), 11.5 (C-18), 18.4 (C-19), 139.8 (C-20), 114.7 (C-21)。以上数据与文献^[23]报道一致, 故鉴定化合物8为孕甾-5, 20-二烯-3β-醇。

化合物9: 白色油状物, 分子式C₃₀H₅₀O, ESI-MS m/z 427 [M+H]⁺。¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ_H: 5.35 (1H, dd, J = 5.1, 2.7 Hz, H-6), 3.53 (1H, m, H-3), 1.01 (3H, s, H₃-19), 0.95 (3H, d, J = 7.0 Hz, H₃-26), 0.94 (3H, s, H₃-28), 0.91 (3H, s, H₃-30), 0.86 (3H, d, J = 6.6 Hz, H₃-27), 0.66 (3H, s, H₃-18), 0.45 (1H, dd, J = 9.1, 4.3 Hz, H-29a), -0.13 (1H, dd, J = 5.9, 4.3 Hz, H-29b); ¹³C NMR (150 MHz, CDCl₃) δ_C: 36.9 (C-1), 31.5 (C-2), 71.6 (C-3), 42.4 (C-4), 149.1 (C-5), 120.0 (C-6), 78.7 (C-7), 37.3 (C-8), 43.7 (C-9), 37.6 (C-10), 21.1 (C-11), 39.2 (C-12), 42.9 (C-13), 49.1 (C-14), 24.8 (C-15), 28.4 (C-16), 57.7 (C-17), 11.5 (C-18), 18.4 (C-19), 35.6 (C-20), 21.3 (C-21), 32.2 (C-22), 26.0 (C-23), 51.0 (C-24), 32.4 (C-25), 22.3 (C-26), 21.7 (C-27), 15.6 (C-28), 21.5 (C-29), 14.5 (C-30)。以上数据与文献^[24]报道一致, 故鉴定化合物9为gorgosterol。

化合物10: 无色粉末, 分子式C₂₉H₅₀O, ESI-MS m/z 415 [M+H]⁺。¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ_H: 5.35 (1H, m, H-6), 3.51 (1H, m, H-3), 1.25 (3H, s, H₃-19), 1.00 (3H, s, H₃-21), 0.91 (3H, d, J = 3.8 Hz, H₃-29), 0.89 (3H, d, J = 6.9 Hz, H₃-27), 0.86 (3H, d, J = 6.8 Hz, H₃-26), 0.64 (3H, s, H₃-18); ¹³C NMR (150 MHz, CDCl₃) δ_C: 37.4 (C-1), 28.7 (C-2), 72.0 (C-3), 42.8 (C-4), 140.9 (C-5), 121.9 (C-6), 31.8 (C-7), 31.8 (C-8), 50.3 (C-9), 36.7 (C-10), 20.9 (C-11), 40.3 (C-12), 42.5 (C-13), 57.7 (C-14), 24.2 (C-15), 25.5 (C-16), 56.6 (C-17), 11.9 (C-18), 18.7 (C-19), 33.0 (C-20), 19.4 (C-21), 32.1 (C-22), 39.9 (C-23), 45.1 (C-24), 24.7 (C-25), 15.9 (C-26), 19.6 (C-27), 21.3 (C-28), 10.6 (C-29)。以上数据与文献^[25]报道一致, 故鉴定化合物10为β-sitosterol。

化合物11: 白色粉末, 分子式C₂₈H₄₆O, ESI-MS m/z 399 [M+H]⁺。¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ_H: 5.35 (1H, m, H-6), 4.67 (2H, m, H₂-28), 3.52 (1H, m, H-3), 1.03 (3H, d, J = 3.2 Hz, H₃-26), 1.02 (3H, s, H₃-27), 1.01 (3H, s, J = 4.1 Hz, H₃-19), 0.95 (3H, d, J = 6.6 Hz, H₃-21), 0.68 (3H, s, H₃-18); ¹³C NMR (150 MHz, CDCl₃) δ_C: 37.4 (C-1), 31.8 (C-2), 72.0 (C-3), 42.4 (C-4), 140.9 (C-5), 121.9 (C-6), 32.1 (C-7), 32.1 (C-8), 50.3 (C-9), 36.7 (C-10), 21.23 (C-11), 39.9 (C-12), 42.5 (C-13), 56.9 (C-14), 24.4 (C-15), 28.4 (C-16), 56.1 (C-17), 12.0 (C-18), 19.5 (C-19), 35.9 (C-20), 18.9 (C-21), 34.8 (C-22), 31.1 (C-23), 157.0 (C-24), 33.6 (C-25), 22.0 (C-26), 22.6 (C-27), 106.1 (C-28)。以上数据与文献^[26]报道一致, 故鉴定化合物11为24-methylenecholesterol。

3　生物活性测试

3.1　细胞活力检测

将Ac2F细胞以每孔2×10⁴个接种于96孔板, 培养12 h后加入待测化合物或等体积DMSO (空白对照), 继续培养24 h。每孔加入20 μL MTT (5 mg·mL^-1), 37 ℃避光孵育4 h后弃上清, 加入150 μL DMSO振荡溶解, 于560 nm测定吸光度。选取无显著细胞毒性的浓度进行后续生物学实验检测。

3.2　荧光素酶报告基因法

将Ac2F细胞以每孔1×10⁵个密度接种于48孔板, 贴壁后更换无血清培养基。使用Lipofectamine^TM 2000转染试剂进行转染。空白组转染3×AOX-TK-荧光素酶报告质粒与pcDNA3空载体; 转染组转染该报告质粒及pFlag-PPAR-α、PPAR-β或PPAR-γ质粒。转染6 h后, 更换为含10%胎牛血清的完全培养基, 继续培养过夜。次日, 向转染组分别加入待测化合物; 同时设置WY14643、GW501516及ROSI分别作为PPAR-α、PPAR-β及PPAR-γ的阳性对照, 并以等体积DMSO作为阴性对照。继续培养7 h后, PBS洗涤细胞, 裂解并收集上清液。使用荧光素酶报告基因检测试剂盒, 通过多功能酶标仪测定化学发光信号。

3.3　分子对接

从RCSB Protein Data Bank获取PPAR-α (PDB ID: 4BCR) 与PPAR-β (PDB ID: 2Q5G) 的晶体结构, 并采用PyMOL 3.9软件对其进行了加氢和去除水分子的预处理。随后, 将化合物5、8、9的分子结构转换为PDB格式, 利用AutoDock1.5.7软件进行分子对接分析。最终的对接结果通过PyMOL 3.9进行可视化与图像生成。

3.4　抗炎活性测试

Griess法检测NO生成量: 取对数生长期RAW264.7细胞, 以每孔1×10⁴个接种于96孔板(每孔100 µL), 37 ℃培养12 h。药物组加入待测化合物, 空白组与模型组加入等体积DMSO, 孵育1 h后, 除空白组外各孔加入LPS (终浓度500 ng·mL^-1), 继续培养24 h。吸取70 µL细胞培养上清至新96孔板, 加入70 µL Griess试剂, 37 ℃避光孵育1 h, 于540 nm测定OD值。

Western blot法检测炎症蛋白表达: 将RAW264.7细胞按每孔4×10⁵个接种于6孔板, 培养12 h后, 分别加入待测化合物或DMSO预处理1 h。除空白组外, 其余各组加入LPS (1 μg·mL^-1) 诱导12 h。细胞经预冷裂解液(含PMSF及磷酸酶抑制剂) 裂解30 min后, 离心取上清, BCA法定量蛋白。取35 μg蛋白进行SDS-PAGE电泳, 转膜至PVDF膜, 5% BSA封闭2 h, 依次孵育一抗(iNOS或COX-2, 1∶1 000, 4 ℃过夜) 及HRP标记二抗(1∶7 000, 室温2 h), ECL显影后用凝胶成像系统采集图像, ImageJ软件分析条带灰度值。

3.5　统计学分析

所有数据均以均值±标准差表示, 并通过单因素方差分析进行统计分析(ANOVA)。以P < 0.05为差异具有统计学意义。

参考文献

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文献

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参考文献引证文献

排序方式：

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2026年第61卷第6期

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doi: 10.16438/j.0513-4870.2026-0278

接收时间：2026-03-13
首发时间：2026-09-21
出版时间：2026-06-12

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出版历史

收稿日期：2026-03-13
修回日期：2026-04-09

基金

作者信息

¹佳木斯大学药学院, 黑龙江佳木斯 154007

²烟台新药创制山东省实验室/中科环渤海 (烟台) 药物高等研究院, 山东烟台 264117

³上海大学医学院, 上海 200444

通讯作者:

王丽红, E-mail: wanglihong@jmsu.edu.cn

苏明智, E-mail: mzsu@baridd.ac.cn

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https://castjournals.cast.org.cn/joweb/yxxb/CN/10.16438/j.0513-4870.2026-0278

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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