药学学报

Position	1		2
1	4.54 (1H, d, J = 4.3 Hz)	71.3		3.78 (1H, m)	71.3
2α	1.80 (1H, m)	37.0	1.98 (1H, m)	32.9
2β	2.69 (1H, m)		2.06 (1H, m)
3	5.11 (1H, d, J = 3.9 Hz)	75.3	4.84 (1H, m)	75.3
4	-	40.8	-	47.3
5	2.76 (1H, m)	29.2	2.93 (1H, dd, J = 13.7, 3.6 Hz)	28.9
6α	1.70 (1H, m)	24.2	1.68 (1H, m)	27.3
6β	2.09 (1H, m)		1.84 (1H, m)
7	4.06 (1H, br s)	70.6	3.93 (1H, br s)	69.7
8	-	42.7	-	47.5
9	3.67 (1H, s)	49.0	4.08 (1H, s)	48.3
10	-	43.7	-	40.8
11	-	214.0	-	209.9
12	4.23 (1H, s)	78.8	4.84 (1H, s)	80.1
13	-	47.5	-	49.7
14	3.40 (1H, br s)	59.4	3.44 (1H, s)	59.9
15	-	220.6	-	218.9
16α	2.52 (1H, dd, J = 10.9, 2.0 Hz)	46.3	2.60 (1H, d, J = 8.9 Hz)	44.6
16β	2.70 (1H, m)		2.67 (1H, d, J = 10.3 Hz)
17	3.45 (1H, m)	39.7	3.37 (1H, t, J = 9.5 Hz)	38.8
18	0.91 (3H, s)	22.2	1.03 (3H, s)	21.6
19α	3.43 (1H, d, J = 10.6 Hz)	64.9	4.47 (1H, d, J = 14.1 Hz)	74.2
19β	4.14 (1H, d, J = 10.6 Hz)		5.07 (1H, d, J = 14.0 Hz)
20	-	126.4	-	123.8
21	7.35 (1H, s)	141.5	7.48 (1H, s)	144.6
22	6.36 (1H, s)	111.9	6.42 (1H, s)	111.8
23	7.43 (1H, s)	144.2	7.45 (1H, s)	142.2
28	0.83 (3H, s)	19.8	1.13 (3H, s)	20.0
29	4.57 (1H, s)	103.5	-	175.9
30	1.13 (3H, s)	22.0	1.20 (3H, s)	20.0
	2.04 (3H, s)	21.3	2.09 (3H, s)	20.7
3-OCOCH₃	-	172.8	-	172.0
	-	-	2.10 (3H, s)	21.0
12-OCOCH₃	-	-	-	172.2
	3.46 (1H, dd, J = 9.3, 7.1 Hz)	66.1	-	-
	3.82 (1H, dd, J = 9.7, 7.1 Hz)		-	-
	1.17 (3H, t, J = 7.1 Hz)	15.5	-	-

Position	1		2
1	4.54 (1H, d, J = 4.3 Hz)	71.3		3.78 (1H, m)	71.3
2α	1.80 (1H, m)	37.0	1.98 (1H, m)	32.9
2β	2.69 (1H, m)		2.06 (1H, m)
3	5.11 (1H, d, J = 3.9 Hz)	75.3	4.84 (1H, m)	75.3
4	-	40.8	-	47.3
5	2.76 (1H, m)	29.2	2.93 (1H, dd, J = 13.7, 3.6 Hz)	28.9
6α	1.70 (1H, m)	24.2	1.68 (1H, m)	27.3
6β	2.09 (1H, m)		1.84 (1H, m)
7	4.06 (1H, br s)	70.6	3.93 (1H, br s)	69.7
8	-	42.7	-	47.5
9	3.67 (1H, s)	49.0	4.08 (1H, s)	48.3
10	-	43.7	-	40.8
11	-	214.0	-	209.9
12	4.23 (1H, s)	78.8	4.84 (1H, s)	80.1
13	-	47.5	-	49.7
14	3.40 (1H, br s)	59.4	3.44 (1H, s)	59.9
15	-	220.6	-	218.9
16α	2.52 (1H, dd, J = 10.9, 2.0 Hz)	46.3	2.60 (1H, d, J = 8.9 Hz)	44.6
16β	2.70 (1H, m)		2.67 (1H, d, J = 10.3 Hz)
17	3.45 (1H, m)	39.7	3.37 (1H, t, J = 9.5 Hz)	38.8
18	0.91 (3H, s)	22.2	1.03 (3H, s)	21.6
19α	3.43 (1H, d, J = 10.6 Hz)	64.9	4.47 (1H, d, J = 14.1 Hz)	74.2
19β	4.14 (1H, d, J = 10.6 Hz)		5.07 (1H, d, J = 14.0 Hz)
20	-	126.4	-	123.8
21	7.35 (1H, s)	141.5	7.48 (1H, s)	144.6
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29	4.57 (1H, s)	103.5	-	175.9
30	1.13 (3H, s)	22.0	1.20 (3H, s)	20.0
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3-OCOCH₃	-	172.8	-	172.0
	-	-	2.10 (3H, s)	21.0
12-OCOCH₃	-	-	-	172.2
	3.46 (1H, dd, J = 9.3, 7.1 Hz)	66.1	-	-
	3.82 (1H, dd, J = 9.7, 7.1 Hz)		-	-
	1.17 (3H, t, J = 7.1 Hz)	15.5	-	-

Compound	HepG-2	Hep3B
1	38.67 ± 1.336	47.36 ± 1.008
2	28.21 ± 1.028	35.69 ± 1.217
3	8.21 ± 1.231	15.10 ± 1.017
Cisplatin	8.97 ± 1.062	5.36 ± 1.158

Compound	HepG-2	Hep3B
1	38.67 ± 1.336	47.36 ± 1.008
2	28.21 ± 1.028	35.69 ± 1.217
3	8.21 ± 1.231	15.10 ± 1.017
Cisplatin	8.97 ± 1.062	5.36 ± 1.158

苦楝皮中一个新的柠檬苦素类化合物及其抗肝癌活性

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黄园园 ¹^,²^,³ , 高尔建 ¹^,²^,³ , 袁经权 ⁴ , 吴燕春 ⁴ , 饶小平 ¹^,²^,³^,^* , 王微 ¹^,²^,³^,^*

药学学报 | 研究论文 2026,61(2): 547-552

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药学学报 |研究论文 2026 , 61 (2) : 547 -552

苦楝皮中一个新的柠檬苦素类化合物及其抗肝癌活性

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黄园园¹^,²^,³, 高尔建¹^,²^,³, 袁经权⁴, 吴燕春⁴, 饶小平¹^,²^,³^,^*, 王微¹^,²^,³^,^*

作者信息

¹华侨大学先进碳转化技术研究院, 福建厦门 361021

²华侨大学, 生物质低碳转化福建省高校重点实验室, 福建厦门 361021

³华侨大学化工学院, 福建厦门 361021

⁴广西中医药大学中医药壮瑶医药研究院, 广西南宁 530200

通讯作者:

饶小平, E-mail: raoxp@hqu.edu.cn

王微, E-mail: wangwei1978@hqu.edu.cn

作者简介:

作者贡献:

黄园园负责成分分离、结构鉴定和论文撰写; 高尔建协助中药提取; 袁经权和吴燕春负责实验指导和稿件修改; 饶小平和王微参与实验设计和课题管理。

A new limonoid compound from the bark of Melia azedarach and its anti-hepatocarcinoma activity

Yuan-yuan HUANG¹^,²^,³, Er-jian GAO¹^,²^,³, Jing-quan YUAN⁴, Yan-chun WU⁴, Xiao-ping RAO¹^,²^,³^,^*, Wei WANG¹^,²^,³^,^*

Affiliations

¹Institute of Advanced Carbon Conversion Technology, Huaqiao University, Xiamen 361021, China

²Fujian Provincial Key Laboratory of Biomass Low-Carbon Conversion, Huaqiao University, Xiamen 361021, China

³College of Chemical Engineering, Huaqiao University, Xiamen 361021, China

⁴Institute of Traditional Chinese and Zhuang-Yao Ethnic Medicine, Guangxi University of Chinese Medicine, Nanning 530200, China

出版时间: 2026-02-12 doi: 10.16438/j.0513-4870.2025-1252

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摘要

收起

采用硅胶、SephadexLH-20、MCI、制备型高效液相等色谱技术对苦楝(Melia azedarach L.) 树皮95%、85%乙醇提取物进行分离纯化, 从中分离得到了3个柠檬苦素类化合物, 根据其理化性质及其波谱数据分别鉴定为29-O-ethyl neoazedarachin D (1)、29-O-meliarachin G (2)、toosendanin (3), 其中化合物1为新化合物, 化合物2为新的天然产物, 首次从植物中分离得到。采用MTT法评价化合物1~3体外抗肝癌活性, 结果表明化合物1~3对HepG-2、Hep3B细胞都具有不同程度的抑制作用, 其中化合物3对HepG-2细胞的抑制作用与阳性药顺铂相当。此外, 化合物1~3抗HepG-2细胞的IC₅₀值分别为38.67 ± 1.336、28.21 ± 1.028、8.21 ± 1.231 μg·mL^-1, 抗Hep3B细胞的IC₅₀值分别为47.36 ± 1.008、35.69 ± 1.217、15.10 ± 1.017 μg·mL^-1。

关键词

苦楝 / 柠檬苦素类 / 四环三萜 / 结构鉴定 / 肝癌

Abstract

收起

Three limonoids were isolated and purified from the 95%, 85% ethanol extracts of Melia azedarach using silica gel column chromatography, Sephadex LH-20 column chromatography, MCI column chromatography, and preparative RP-HPLC. Their structures were determined based on physicochemical properties and spectral data, and they were identified as 29-O-ethyl neoazedarachin D (1), 29-O-meliarachin G (2), toosendanin (3). Compound 1 is a new limonoid, while compound 2 is a new natural product isolated from plants for the first time. The in vitro anti-hepatocarcinoma activities of compounds 1-3 were evaluated by MTT assay. The results showed that compounds 1-3 exhibited different degrees of inhibitory effects on both HepG-2 and Hep3B cell lines, and the inhibitory effect of compound 3 on HepG-2 cells was comparable to that of the positive drug cisplatin. In addition, compounds 1-3 exhibited IC₅₀ values of 38.67 ± 1.336, 28.21 ± 1.028 and 8.21 ± 1.231 μg·mL^-1 against HepG-2 cells, and 47.36 ± 1.008, 35.69 ± 1.217 and 15.10 ± 1.017 μg·mL^-1 against Hep3B cells, respectively.

Key words

Melia azedarach / limonoid / tetracyclic triterpenoid / structural identification / hepatocarcinoma

引用本文

黄园园, 高尔建, 袁经权, 吴燕春, 饶小平, 王微. 苦楝皮中一个新的柠檬苦素类化合物及其抗肝癌活性. 药学学报, 2026 , 61 (2) : 547 -552 . DOI: 10.16438/j.0513-4870.2025-1252

Yuan-yuan HUANG, Er-jian GAO, Jing-quan YUAN, Yan-chun WU, Xiao-ping RAO, Wei WANG. A new limonoid compound from the bark of Melia azedarach and its anti-hepatocarcinoma activity[J]. Acta Pharmaceutica Sinica, 2026 , 61 (2) : 547 -552 . DOI: 10.16438/j.0513-4870.2025-1252

正文

收起

苦楝(Melia azedarach L.) 为楝科(Meliaceae) 楝属(Melia) 植物, 在中国具有非常悠久的种植历史。据《周礼·考工记》记载, 在春秋时期, 人们就已掌握用楝叶灰漂白丝织品。苦楝广泛分布于中国黄河以南各省区, 如四川省、两广、湖南、河北等地, 由于其树冠如伞盖绿荫生凉, 且耐烟尘, 也是江南地区绿化常用优良树种^{[1, 2]}; 此外, 苦楝具有悠久的药用历史, 古籍记载其树皮、叶、花、果实均可入药: 树皮性寒有毒, 可杀虫疗癣; 叶清热燥湿、杀虫止痒; 果实行气止痛、驱虫; 花清热祛湿、止痒等^{[3, 4]}。现代研究表明, 该植物含萜类(倍半萜类、齐墩果烷型三萜、达玛烷型三萜、柠檬苦素类等)、甾体类、木脂素类、黄酮类等化学成分, 其中, 柠檬苦素类为主要活性成分; 药理研究表明, 苦楝具有杀虫、抗肿瘤、抗病毒等生物活性。目前, 国内外学者从苦楝中分离得到160多个柠檬苦素类化合物, 具有抗炎、抗病毒、抗肿瘤等生物活性^[5]。因此, 本研究初步开展了苦楝树皮中柠檬苦素类化学成分研究, 从中分离得到了3个柠檬苦素类化学成分(图1), 分别鉴定为29-O-ethyl neoazedarachin D (1), 29-O-meliarachin G (2), toosendanin (3), 其中化合物1为新化合物, 化合物2为新的天然产物, 首次从植物中分离得到。同时, 采用MTT法评价化合物1~3体外抗肝癌活性, 实验结果表明化合物1~3对人肝癌细胞(HepG-2、Hep3B) 都具有不同程度的抑制作用, 其中化合物3具有显著的抗肝癌活性, 其对HepG-2细胞的抑制作用与阳性药顺铂相当。化合物1~3抗HepG-2细胞的IC₅₀值分别为38.67 ± 1.336、28.21 ± 1.028、8.21 ± 1.231 μg·mL^-1, 抗Hep3B细胞的IC₅₀值分别为47.36 ± 1.008、35.69 ± 1.217、15.10 ± 1.017 μg·mL^-1。

结果与讨论

收起

1　结构鉴定

化合物1 白色粉末, TLC薄层色谱喷10%的香草醛-硫酸乙醇溶液, 加热显色呈紫色, 提示其可能为萜类化合物。红外光谱IR显示化合物结构中存在羟基官能团(3 443 cm^-1)、甲基官能团(2 963、2 930 cm^-1), 在1 730 cm^-1处有碳氧双键伸缩振动, 再结合1 257 cm^-1提示有羰基及酯基的存在, 在1 644 cm^-1处有碳碳双键的伸缩振动。HR-ESI-MS显示准分子离子峰m/z 559.255 3 [M-H]^- (计算值: 559.254 9), 确定分子式为C₃₀H₄₀O₁₀, 不饱和度为11。在¹H NMR谱中, 高场区显示5个甲基氢质子单峰信号δ_H 0.83 (3H, s), 0.91 (3H, s), 1.13 (3H, s), 1.17 (3H, t, J = 7.1 Hz), 2.04 (3H, s), 低场区显示14个连电负性基团碳上的氢质子信号δ_H 2.52 (1H, dd, J = 10.9, 2.0 Hz), 2.70 (1H, m), 3.40 (1H, br s), 3.44 (1H, d, J = 10.6 Hz), 3.45 (1H, m), 3.46 (1H, dd, J = 9.3, 7.1 Hz), 3.67 (1H, s), 3.82 (1H, dd, J = 9.7, 7.1 Hz), 4.06 (1H, br s), 4.14 (1H, d, J = 10.6 Hz), 4.23 (1H, s), 4.54 (1H, d, J = 4.3 Hz), 4.57 (1H, s), 5.11 (1H, d, J = 3.9 Hz), 以及3个呋喃环上氢质子单峰信号δ_H 6.36 (1H, s), 7.35 (1H, s), 7.43 (1H, s)。结合¹³C NMR和DEPT135°谱表明该化合物共有30个碳信号, 其中包括5个伯碳、5个仲碳、12个叔碳、8个季碳。在高场区显示5个甲基碳信号δ_C 15.5、19.8、21.3、22.0、22.2, 低场区显示7个连氧碳信号δ_C 64.9、66.1、70.6、71.3、75.3、78.8、103.5, 1组呋喃环上碳信号δ_C 111.9、126.4、141.5、144.2, 1个酯基碳信号δ_C 172.8以及2个羰基碳信号δ_C 214.0、220.6。通过HSQC图谱对化合物1碳氢直接相关进行了准确的归属, 发现其核磁数据与文献^{[6, 7]}报道的已知化合物neoazedarachin D的核磁数据相似, 不同之处在于化合物1多了一个亚甲基。通过HMBC谱中H-19 [4.14 (1H, d, J = 10.6 Hz)]、H-28 [δ_H 0.83 (3H, s)] 与C-29 (δ_C 103.5) 相关, H-29 [4.57 (1H, s)] 和δ_H 1.17与δ_C 66.1相关, 说明化合物1的29位为乙氧基取代。

此外, 在HMBC谱中(图2), H-9 [δ_H 3.67 (1H, s)] 和H-19α [δ_H 4.14 (1H, m)] 与C-1 (δ_C 71.3) 相关, 提示1位有羟基取代; H-28 [δ_H 0.83 (3H, s)] 与C-3 (δ_C 75.3)、C-4 (δ_C 40.8)、C-5 (δ_C 29.2) 相关以及δ_H 2.04 (3H, s) 与δ_C 172.8相关, 提示3位有乙酰氧基取代; H-30 [δ_H 1.13 (3H, s)] 与C-7 (δ_C 70.6)、C-8 (δ_C 42.7)、C-9 (δ_C 49.0)、C-14 (δ_C 59.4) 相关, 提示7位有羟基取代; H-18 [δ_H 0.91 (3H, s)] 与C-12 (δ_C 78.8)、C-13 (δ_C 47.5)、C-14 (δ_C 59.4)、C-17 (δ_C 39.7) 相关, 提示12位有羟基取代; H-12 [δ_H 4.23 (1H, s)] 和H-9 [δ_H 3.67 (1H, s)] 与δ_C 214.0相关以及H-14 [δ_H 3.39 (1H, s)] 和H-16α [δ_H 2.70 (1H, m)] 与δ_C 220.6相关, 提示12位和15位有羰基取代; 在¹H-¹H COSY谱中(图2), H-2分别与H-1、H-3相关, H-6分别与H-5、H-7相关, H-16与H-17相关, H-22与H-23相关以及29-OCH₂CH₃与29-OCH₂CH₃相关。同时通过NOESY谱(图3) 确定取代基的相对构型, H-19 [δ_H 4.14 (1H, m)] 与H_β-30、H-1相关, H-2 [δ_H 2.69 (1H, m)] 与H-1、H-3相关, 以及H-7和H-12与H_β-30相关, 说明C-3位上的乙酰基以及C-1、C-7、C-12位上取代的羟基都为α构型。此外, H-3的化学位移为5.11 (1H, d, J = 3.9 Hz), 表明C-29位的取代基为endo构型^{[7, 8]}。此外, 化合物1与已知化合物neoazedarachin D有相似的碳化学位移、质子耦合常数和NOESY相关, 以及参考这类trichilin-type柠檬苦素在自然界中的生物合成途径^{[9, 10]}, 推测化合物的绝对构型为1S, 3R, 4R, 5R, 7R, 8S, 9S, 10S, 12R, 13S, 14S, 17R。

综上所述, 化合物1的结构鉴定为(1S, 3R, 4R, 5R, 7R, 8S, 9S, 10S, 12R, 13S, 14S, 17R)-29(endo)-19, 29-epoxy-29-O-ethyl-1α, 7α, 12α-trihydroxytetra-3α-O-acetyl-meliacane-11, 15-dione, 经文献检索未见报道, 为一个新化合物, 命名为29-O-ethyl neoazedarachin D。波谱数据归属见表1。

化合物2 白色粉末, TLC薄层色谱喷10%的香草醛-硫酸乙醇溶液, 加热显色呈紫色, 提示其可能为萜类化合物。红外光谱IR显示化合物结构中存在羟基官能团(3 456 cm^-1)、甲基官能团(2 985、2 943 cm^-1), 在1 730 cm^-1处有碳氧双键伸缩振动, 再结合1 241 cm^-1提示有羰基及酯基的存在, 在1 639 cm^-1处有碳碳双键的伸缩振动。HR-ESI-MS显示准分子离子峰m/z 573.233 1 [M+H]⁺ (计算值: 573.232 0), 确定分子式为C₃₀H₃₆O₁₁, 不饱和度为13。在¹H NMR谱中, 高场区显示5个甲基氢质子单峰信号δ_H 1.03 (3H, s), 1.13 (3H, s), 1.20 (3H, s), 2.09 (3H, s), 2.10 (3H, s), 低场区显示11个连电负性基团碳上的氢质子信号δ_H 2.60 (1H, d, J = 8.9 Hz), 2.67 (1H, d, J = 10.3 Hz), 3.37 (1H, t, J = 9.5 Hz), 3.44 (1H, s), 3.78 (1H, m), 3.93 (1H, br s), 4.08 (1H, s), 4.47 (1H, d, J = 14.1 Hz), 4.84 (1H, m), 4.84 (1H, s), 5.07 (1H, d, J = 14.0 Hz), 以及3个呋喃环上氢质子单峰信号δ_H 6.42 (1H, s), 7.45 (1H, s), 7.48 (1H, s)。结合¹³C NMR和DEPT135°谱表明, 该化合物共有30个碳信号, 其中包括5个伯碳、4个仲碳、11个叔碳、10个季碳。在高场区显示5个甲基碳信号δ_C 19.9、20.0、20.7、21.1、21.6, 低场区显示5个连氧碳信号δ_C 69.7、71.3、74.2、75.3、80.1, 1组呋喃环上碳信号δ_C 111.8、123.8、142.2、144.6, 3个酯基碳信号δ_C 172.0、172.2、175.9以及2个羰基碳信号δ_C 209.9、218.9。通过HSQC图谱对化合物2碳氢直接相关进行了准确的归属, 发现其核磁数据与文献^{[7, 11]}报道的已知化合物meliarachin G的核磁数据相似, 不同之处在于化合物2少了一个甲基, 通过HMBC谱中H-19 [δ_H 4.47 (1H, d, J = 14.1 Hz), 5.07 (1H, d, J = 14.0 Hz)]、H-28 [δ_H 1.13 (3H, s)] 与C-29 (δ_C 175.9) 相关, 说明化合物2的29位为酯基取代。

此外, 在HMBC谱中(图2), H-9 [δ_H 4.08 (1H, s)] 和H-19 [δ_H 4.47 (1H, d, J = 14.1 Hz), 5.07 (1H, d, J = 14.0 Hz)] 与C-1 (δ_C 71.3) 相关, 提示1位有羟基取代; H-30 [δ_H 1.20 (3H, s)] 与C-7 (δ_C 69.7)、C-8 (δ_C 47.5)、C-9 (δ_C 48.3)、C-14 (δ_C 59.9) 相关, 提示7位有羟基取代; H-18 [δ_H 1.03 (3H, s)] 与C-12 (δ_C 80.1)、C-13 (δ_C 49.7)、C-14 (δ_C 59.9)、C-17 (δ_C 38.8) 相关, H-12 [δ_H 4.84 (1H, s)] 和δ_H 2.10 (3H, s) 与δ_C 172.0相关以及H-28 [δ_H 1.13 (3H, s)] 与C-3 (δ_C 75.3)、C-4 (δ_C 47.3)、C-5 (δ_C 28.9), H-3 [δ_H 4.84 (1H, m)] 和δ_H 2.09 (3H, s) 与δ_C 172.2相关, 提示3位和12位有乙酰氧基取代; H-9 [δ_H 4.08 (1H, s)] 和H-12 [δ_H 4.84 (1H, s)] 与δ_C 209.9相关, H-14 [δ_H 3.44 (1H, s)] 和H-16 [δ_H 2.60 (1H, d, J = 8.9 Hz), 2.67 (1H, d, J = 10.3 Hz)] 与δ_C 218.9相关, 提示C-11和C-15为羰基取代。在¹H-¹H COSY谱中(图2), H-2分别与H-1、H-3相关, H-6分别与H-5、H-7相关, H-16与H-17相关以及H-22与H-23相关。同时通过NOESY谱(图3) 确定取代基的相对构型, H-19 [δ_H 5.07 (1H, d, J = 14.0 Hz)] 与H_β-30相关, H-19 [δ_H 4.47 (1H, d, J = 14.1 Hz)] 与H-2 [δ_H 1.98 (1H, m)] 相关, H-2 [δ_H 2.06 (1H, m)] 与H-1、H-3相关以及H-7和H-12与H_β-30相关, 说明C-3、C-12位上的乙酰基以及C-1、C-7位上取代的羟基都为α构型。经文献^[12]检索发现, 化合物2在2023年被报道是由川楝素结构修饰后得到的产物, 进一步比对核磁数据, 判断化合物的绝对构型为1S, 3R, 4R, 5R, 7R, 8S, 9S, 10S, 12R, 13S, 14S, 17R。

综上所述, 化合物2的结构鉴定为(1S, 3R, 4R, 5R, 7R, 8S, 9S, 10S, 12R, 13S, 14S, 17R)-19, 29-epoxy-29-ester-1α, 7α-dihydroxy-3α, 12α-O-diacetyl-meliacane-11, 15-dione, 为一个新的天然产物。命名为29-O-meliarachin G。本文对该化合物的波谱数据进行了较为详细的归属, 见表1。

2　化合物的抗肝癌活性

采用MTT法对化合物1~3进行人肝癌细胞(HepG-2、Hep3B) 的细胞毒活性实验, 并以顺铂为阳性对照进行评价。结果表明化合物1~3对人肝癌细胞都具有不同程度的抑制作用, 其中化合物3对HepG-2细胞的抑制作用与阳性药顺铂相当(表2)。

3　讨论

苦楝具有悠久的药用历史, 其柠檬苦素类成分是一种含17β-呋喃环的四环三萜结构, 它们因其骨架的高度氧化和重排, 具有结构的多样性和广泛的生物活性, 也是苦楝中的特征化学成分和主要药效物质基础^[13]。本研究从苦楝树皮中分离得到3个柠檬苦素类成分, 其中化合物1为新化合物, 化合物2为新的天然产物, 并探讨了其抗肝癌活性。药理结果表明化合物1~3对肝癌细胞(HepG-2、Hep3B) 都具有不同的抑制作用。从表2中可以看出3个化合物的抗肝癌活性强弱顺序为: 化合物3 > 化合物2 > 化合物1, 造成其活性差异的原因推测可能为化合物C-12上的-OAc取代使细胞毒活性优于-OH取代; C-29上引入-OH时活性优于=O, 而=O取代则优于-OCH₂CH₃取代; C-14/C-15上的环氧环也有利于活性的增加。已有研究也验证了这一推测^[12]。此外, 该研究还表明当化合物C-1和C-7上为-OH取代时是提高活性的关键, 这也侧面说明了化合物1~3都具有抗肝癌活性的原因。而当C-15为=O取代时活性降低。基于以上分析及药理结果表明, 化合物3具有显著的抗肝癌活性, 且对HepG-2细胞的抑制作用与阳性药顺铂相当。

实验部分

收起

Bruker AV Ⅲ 600型核磁共振波谱仪(德国Bruker公司); Agilent 1260 InfinityⅡ制备型高效液相色谱仪(美国Agilent公司); SCIEX/AB Sciex X500R高分辨液质联用仪[新加坡AB SCIEX (Distribution) Pte. Ltd.]; EYELA型旋转蒸发仪(上海爱朗仪器有限公司); Spectrum TWO傅里叶红外光谱仪(美国PerkinElmer公司); 酶标仪、二氧化碳培养箱、Sorvall ST 16低速离心机(美国Thermo Fisher Scientific公司); OLYMPUS CKX41倒置显微镜(日本Olympus公司); ESCO生物安全柜(新加坡艺思高科技有限公司); HH-6数显恒温水浴锅(常州国华电器有限公司); 细胞株(HepG-2、Hep3B, 中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心); COSMOSIL Packed Column 5C₁₈-MS-Ⅱ色谱柱(10 mm × 250 mm, 5 μm, 日本COSMOSIL公司); MCI GEL (CHP20/P120) (日本Mitsubishi Chemical Corporation); Sephadex LH-20 (美国Cytiva公司); 柱色谱硅胶、薄层色谱硅胶(青岛海洋化工); 乙腈、甲醇(色谱纯, 上海阿拉丁生化科技股份有限公司), 其余试剂均为国产分析纯; FBS、DMEM培养基、Pen Strep (青霉素-链霉素双抗溶液, 美国Gibco公司); 3-(4, 5-二甲基噻唑-2)-2, 5-二苯基四氮唑溴盐(MTT, 索莱宝公司)。

苦楝于2024年5月购于广西桂林, 由桂林三金股份有限公司钟小清副主任药师鉴定为苦楝Melia azedarach L.的树皮。植物样本(202405MA) 存放于广西中医药大学中医药壮瑶医药研究院。

1　提取与分离

苦楝树皮(45 kg) 干燥药材, 粉碎成粗块, 用95%乙醇加热回流提取2次, 每次2 h, 后再用85%乙醇提取1次, 每次2 h, 合并提取液并减压浓缩得到总浸膏(2.5 kg)。总浸膏用水分散后, 依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯进行萃取, 减压回收溶剂, 得到三个不同极性段部位: 石油醚部位(450 g)、二氯甲烷部位(75 g)、乙酸乙酯部位(290 g)。

取二氯甲烷部位经硅胶(100~200目) 柱色谱分离, 二氯甲烷-甲醇(100∶0、100∶1、80∶1、50∶1、30∶1、20∶1、10∶1、5∶1、2∶1、0∶1) 梯度洗脱, 得10个流分Fs. A~J; Fs. D流分通过硅胶(200~300目) 柱色谱分离, 石油醚-乙酸乙酯(20∶1、10∶1、5∶1、2∶1、1∶1、0∶1) 梯度洗脱, 得6个流分Fs. D.1~6; Fs. D.5流分经MCI柱色谱分离, 30%、50%、70%、80%、90%、100%乙醇水梯度洗脱, 得到6个流分Fs. D.5.1~5.6; 流分Fs. D.5.2经Sephadex LH-20柱色谱分离, 以甲醇作为洗脱剂, 所得流分通过TLC合并相同极性段, 得到7个流分Fs. D.5.2.1~5.2.7; Fs. D.5.2.2流分经制备型HPLC (COSMOSIL Packed Column 5C₁₈-MS-Ⅱ, 10 mm × 250 mm, 5 μm; 流动相为甲醇-水, 30∶70, 流速3 mL·min^-1) 分离纯化, 分离得到化合物1 (t_R = 52.51 min, 4.5 mg)、2 (t_R = 46.59 min, 6.5 mg)、3 (t_R = 43.47 min, 21.0 mg)。

2　结构鉴定

化合物1 白色粉末; IR (KBr) ν_max: 3 443, 2 963, 2 930, 1 730, 1 644, 1 382, 1 257, 1 179, 1 068, 1 025 cm^-1; ¹H NMR (CD₃OD, 500 MHz) 和¹³C NMR (CD₃OD, 125 MHz) 数据见表1; HR-ESI-MS m/z 559.255 3 [M-H]^- (计算值559.254 9, C₃₀H₄₀O₁₀)。

化合物2 白色粉末; IR (KBr) ν_max: 3 456, 2 985, 2 943, 1 730, 1 639, 1 385, 1 241, 1 175, 1 058, 1 027 cm^-1; ¹H NMR (CD₃OD, 500 MHz) 和¹³C NMR (CD₃OD, 125 MHz) 数据见表1; HR-ESI-MS m/z 573.233 1 [M+H]⁺ (计算值573.232 0, C₃₀H₃₆O₁₁)。

化合物3 白色粉末; ¹H NMR (500 MHz, CD₃OD) δ 7.40 (1H, s, H-21), 7.19 (1H, s, H-23), 6.16 (1H, s, H-22), 5.33 (1H, s, H-12), 5.18 (1H, t, J = 9.4 Hz, H-3), 4.83 (1H, s, H-29), 4.70 (1H, s, H-9), 4.31 (1H, d, J = 12.6 Hz, H-19β), 4.26 (1H, d, J = 12.6 Hz, H-19α), 4.26 (1H, m, H-1), 3.81 (1H, br s, H-15), 3.55 (1H, m, H-7), 2.88 (1H, m, H-17), 2.78 (1H, m, H-5), 2.06 (3H, s, 3-OAc), 1.95 (3H, s, 12-OAc), 1.38 (3H, s, H-18), 1.12 (3H, s, H-30), 0.84 (3H, s, H-28); ¹³C NMR (125 MHz, CD₃OD) δ 70.9 (C-1), 37.2 (C-2), 74.8 (C-3), 41.2 (C-4), 29.6 (C-5), 26.2 (C-6), 70.8 (C-7), 42.9 (C-8), 50.1 (C-9), 43.9 (C-10), 209.1 (C-11), 79.7 (C-12), 46.9 (C-13), 73.6 (C-14), 59.9 (C-15), 34.8 (C-16), 39.8 (C-17), 20.9 (C-18), 65.4 (C-19), 124.2 (C-20), 143.7 (C-21), 113.0 (C-22), 142.0 (C-23), 20.0 (C-28), 97.3 (C-29), 15.8 (C-30), 172.8 (3-OAc), 23.1 (3-OAc), 172.2 (12-OAc), 21.4 (12-OAc)。以上数据与文献^[14]报道的基本一致, 故鉴定化合物为川楝素(toosendanin)。

3　抗肝癌活性筛选

采用MTT法进行人肝癌细胞增殖抑制活性测定, 分别将HepG-2、Hep3B细胞培养于含10%胎牛血清、1%青霉素和链霉素的DMEM培养基中。将生长状态良好且处于对数生长期的细胞以每毫升1×10⁵的密度接种于96孔板(每孔100 μL) 中, 于37 ℃、5% CO₂培养箱中孵育24 h后加入待测样品(终质量浓度为200、100、50、25、12.5、6.25、3.125 μg·mL^-1), 继续培养48 h后, 每孔加入10 μL MTT (浓度为5 mg·mL^-1) 溶液, 继续在37 ℃、5% CO₂培养箱中孵育4 h后小心吸弃去上清液, 每孔加入150 μL DMSO, 摇床振荡10 min, 用酶标仪在570 nm波长处检测吸光度(OD) 值, 使用GraphPad Prism 8软件计算其半数存活浓度(IC₅₀)^{[15, 16]}。

参考文献

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文献

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参考文献引证文献

排序方式：

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2026年第61卷第2期

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225

112

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doi: 10.16438/j.0513-4870.2025-1252

接收时间：2025-10-21
首发时间：2026-09-21
出版时间：2026-02-12

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出版历史

收稿日期：2025-10-21
修回日期：2025-11-21

基金

作者信息

¹华侨大学先进碳转化技术研究院, 福建厦门 361021

²华侨大学, 生物质低碳转化福建省高校重点实验室, 福建厦门 361021

³华侨大学化工学院, 福建厦门 361021

⁴广西中医药大学中医药壮瑶医药研究院, 广西南宁 530200

通讯作者:

饶小平, E-mail: raoxp@hqu.edu.cn

王微, E-mail: wangwei1978@hqu.edu.cn

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https://castjournals.cast.org.cn/joweb/yxxb/CN/10.16438/j.0513-4870.2025-1252

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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TxT

Position	1		2
1	4.54 (1H, d, J = 4.3 Hz)	71.3		3.78 (1H, m)	71.3
2α	1.80 (1H, m)	37.0	1.98 (1H, m)	32.9
2β	2.69 (1H, m)		2.06 (1H, m)
3	5.11 (1H, d, J = 3.9 Hz)	75.3	4.84 (1H, m)	75.3
4	-	40.8	-	47.3
5	2.76 (1H, m)	29.2	2.93 (1H, dd, J = 13.7, 3.6 Hz)	28.9
6α	1.70 (1H, m)	24.2	1.68 (1H, m)	27.3
6β	2.09 (1H, m)		1.84 (1H, m)
7	4.06 (1H, br s)	70.6	3.93 (1H, br s)	69.7
8	-	42.7	-	47.5
9	3.67 (1H, s)	49.0	4.08 (1H, s)	48.3
10	-	43.7	-	40.8
11	-	214.0	-	209.9
12	4.23 (1H, s)	78.8	4.84 (1H, s)	80.1
13	-	47.5	-	49.7
14	3.40 (1H, br s)	59.4	3.44 (1H, s)	59.9
15	-	220.6	-	218.9
16α	2.52 (1H, dd, J = 10.9, 2.0 Hz)	46.3	2.60 (1H, d, J = 8.9 Hz)	44.6
16β	2.70 (1H, m)		2.67 (1H, d, J = 10.3 Hz)
17	3.45 (1H, m)	39.7	3.37 (1H, t, J = 9.5 Hz)	38.8
18	0.91 (3H, s)	22.2	1.03 (3H, s)	21.6
19α	3.43 (1H, d, J = 10.6 Hz)	64.9	4.47 (1H, d, J = 14.1 Hz)	74.2
19β	4.14 (1H, d, J = 10.6 Hz)		5.07 (1H, d, J = 14.0 Hz)
20	-	126.4	-	123.8
21	7.35 (1H, s)	141.5	7.48 (1H, s)	144.6
22	6.36 (1H, s)	111.9	6.42 (1H, s)	111.8
23	7.43 (1H, s)	144.2	7.45 (1H, s)	142.2
28	0.83 (3H, s)	19.8	1.13 (3H, s)	20.0
29	4.57 (1H, s)	103.5	-	175.9
30	1.13 (3H, s)	22.0	1.20 (3H, s)	20.0
	2.04 (3H, s)	21.3	2.09 (3H, s)	20.7
3-OCOCH₃	-	172.8	-	172.0
	-	-	2.10 (3H, s)	21.0
12-OCOCH₃	-	-	-	172.2
	3.46 (1H, dd, J = 9.3, 7.1 Hz)	66.1	-	-
	3.82 (1H, dd, J = 9.7, 7.1 Hz)		-	-
	1.17 (3H, t, J = 7.1 Hz)	15.5	-	-

Position

δ_H

δ_C

δ_H

δ_C

4.54 (1H, d, J = 4.3 Hz)

71.3

3.78 (1H, m)

71.3

2α

1.80 (1H, m)

37.0

1.98 (1H, m)

32.9

2β

2.69 (1H, m)

2.06 (1H, m)

5.11 (1H, d, J = 3.9 Hz)

75.3

4.84 (1H, m)

75.3

40.8

47.3

2.76 (1H, m)

29.2

2.93 (1H, dd, J = 13.7, 3.6 Hz)

28.9

6α

1.70 (1H, m)

24.2

1.68 (1H, m)

27.3

6β

2.09 (1H, m)

1.84 (1H, m)

4.06 (1H, br s)

70.6

3.93 (1H, br s)

69.7

42.7

47.5

3.67 (1H, s)

49.0

4.08 (1H, s)

48.3

43.7

40.8

214.0

209.9

4.23 (1H, s)

78.8

4.84 (1H, s)

80.1

47.5

49.7

3.40 (1H, br s)

59.4

3.44 (1H, s)

59.9

220.6

218.9

16α

2.52 (1H, dd, J = 10.9, 2.0 Hz)

46.3

2.60 (1H, d, J = 8.9 Hz)

44.6

16β

2.70 (1H, m)

2.67 (1H, d, J = 10.3 Hz)

3.45 (1H, m)

39.7

3.37 (1H, t, J = 9.5 Hz)

38.8

0.91 (3H, s)

22.2

1.03 (3H, s)

21.6

19α

3.43 (1H, d, J = 10.6 Hz)

64.9

4.47 (1H, d, J = 14.1 Hz)

74.2

19β

4.14 (1H, d, J = 10.6 Hz)

5.07 (1H, d, J = 14.0 Hz)

126.4

123.8

7.35 (1H, s)

141.5

7.48 (1H, s)

144.6

6.36 (1H, s)

111.9

6.42 (1H, s)

111.8

7.43 (1H, s)

144.2

7.45 (1H, s)

142.2

0.83 (3H, s)

19.8

1.13 (3H, s)

20.0

4.57 (1H, s)

103.5

175.9

1.13 (3H, s)

22.0

1.20 (3H, s)

20.0

2.04 (3H, s)

21.3

2.09 (3H, s)

20.7

3-OCOCH₃

172.8

172.0

2.10 (3H, s)

21.0

12-OCOCH₃

172.2

3.46 (1H, dd, J = 9.3, 7.1 Hz)

66.1

3.82 (1H, dd, J = 9.7, 7.1 Hz)

1.17 (3H, t, J = 7.1 Hz)

15.5

Compound	HepG-2	Hep3B
1	38.67 ± 1.336	47.36 ± 1.008
2	28.21 ± 1.028	35.69 ± 1.217
3	8.21 ± 1.231	15.10 ± 1.017
Cisplatin	8.97 ± 1.062	5.36 ± 1.158

Compound

HepG-2

Hep3B

38.67 ± 1.336

47.36 ± 1.008

28.21 ± 1.028

35.69 ± 1.217

8.21 ± 1.231

15.10 ± 1.017

Cisplatin

8.97 ± 1.062

5.36 ± 1.158