药学学报

No.	δ_H	δ_C		No.	δ_H	δ_C
1	3.55 (2H, t, J = 6.3 Hz)	62.9		8		84.5
2	1.55 (2H, m)	33.6	9		66.0
3	1.43 (2H, m)	23.1	10		75.3
4	1.43 (2H, m)	38.1	11		74.0
5	3.61 (1H, dq, J = 8.3, 4.1 Hz)	71.0	12	5.75 (1H, dt, J = 16.0, 2.0 Hz)	109.1
6	1.68 (1H, m)	36.9	13	6.33 (1H, dt, J = 16.0, 4.8 Hz)	147.0
7	1.55 (1H, m)	16.6	14	4.11 (2H, dd, J = 4.8, 2.0 Hz)	62.7

No.

δ_H

δ_C

No.

δ_H

δ_C

3.55 (2H, t, J = 6.3 Hz)

62.9

84.5

1.55 (2H, m)

33.6

66.0

1.43 (2H, m)

23.1

75.3

1.43 (2H, m)

38.1

74.0

3.61 (1H, dq, J = 8.3, 4.1 Hz)

71.0

5.75 (1H, dt, J = 16.0, 2.0 Hz)

109.1

1.68 (1H, m)

36.9

6.33 (1H, dt, J = 16.0, 4.8 Hz)

147.0

1.55 (1H, m)

16.6

4.11 (2H, dd, J = 4.8, 2.0 Hz)

62.7

No.	δ_H	δ_C		No.	δ_H	δ_C
1	3.55 (2H, t, J = 6.3 Hz)	62.9		8		84.5
2	1.55 (2H, m)	33.6	9		66.0
3	1.43 (2H, m)	23.1	10		75.3
4	1.43 (2H, m)	38.1	11		74.0
5	3.61 (1H, dq, J = 8.3, 4.1 Hz)	71.0	12	5.75 (1H, dt, J = 16.0, 2.0 Hz)	109.1
6	1.68 (1H, m)	36.9	13	6.33 (1H, dt, J = 16.0, 4.8 Hz)	147.0
7	1.55 (1H, m)	16.6	14	4.11 (2H, dd, J = 4.8, 2.0 Hz)	62.7

No.

δ_H

δ_C

No.

δ_H

δ_C

3.55 (2H, t, J = 6.3 Hz)

62.9

84.5

1.55 (2H, m)

33.6

66.0

1.43 (2H, m)

23.1

75.3

1.43 (2H, m)

38.1

74.0

3.61 (1H, dq, J = 8.3, 4.1 Hz)

71.0

5.75 (1H, dt, J = 16.0, 2.0 Hz)

109.1

1.68 (1H, m)

36.9

6.33 (1H, dt, J = 16.0, 4.8 Hz)

147.0

1.55 (1H, m)

16.6

4.11 (2H, dd, J = 4.8, 2.0 Hz)

62.7

No.	2		3
1		134.7			129.2
2	7.84 (1H, d, J = 7.1 Hz)	131.7	6.62 (1H, s)	105.7
3	7.34 (1H, dd, J = 8.2, 6.3 Hz)	129.4		149.3
4	7.30 (1H, 7.0 Hz)	130.0		131.5
5	7.34 (1H, dd, J = 8.2, 6.3 Hz)	129.4		149.3
6	7.84 (1H, d, J = 7.1 Hz)	131.7	6.62 (1H, s)	105.7
7	6.96 (1H, s)	125.3	4.18 (1H, d, J = 6.4 Hz)	84.0
8		142.6	3.65 (1H, td, J = 6.4, 3.9 Hz)	77.1
9		165.6	3.46 (1H, m) 3.31 (1H, m)	64.0
1′	4.25 (2H, t, J = 6.6 Hz)	66.3	3.34 (2H, m)	69.7
2′	1.72 (2H, m)	31.8	1.39 (2H, m)	33.0
3′	1.48 (2H, dt, J = 15.0, 7.4 Hz)	20.3	1.57 (2H, m)	20.4
4′	0.99 (3H, t, J = 7.4 Hz)	14.1	0.88 (3H, t, J = 7.4 Hz)	14.2
1″	5.20 (1H, d, J = 7.7 Hz)	102.5
2″	3.48 (1H, dd, J = 9.1, 7.7 Hz)	75.6
3″	3.40 (1H, t, J = 8.9 Hz)	78.6
4″	3.34 (1H, t, J = 9.2 Hz)	71.4
5″	3.21 (1H, m)	78.1
6″	3.74 (1H, dd, J = 12.0, 2.4 Hz) 3.59 (1H, dd, J = 12.0, 5.5 Hz)	62.5
-OCH₃			3.83 (6H, s)	56.7

No.

δ_H

δ_C

δ_H

δ_C

134.7

129.2

7.84 (1H, d, J = 7.1 Hz)

131.7

6.62 (1H, s)

105.7

7.34 (1H, dd, J = 8.2, 6.3 Hz)

129.4

149.3

7.30 (1H, 7.0 Hz)

130.0

131.5

7.34 (1H, dd, J = 8.2, 6.3 Hz)

129.4

149.3

7.84 (1H, d, J = 7.1 Hz)

131.7

6.62 (1H, s)

105.7

6.96 (1H, s)

125.3

4.18 (1H, d, J = 6.4 Hz)

84.0

142.6

3.65 (1H, td, J = 6.4, 3.9 Hz)

77.1

165.6

3.46 (1H, m)
3.31 (1H, m)

64.0

1′

4.25 (2H, t, J = 6.6 Hz)

66.3

3.34 (2H, m)

69.7

2′

1.72 (2H, m)

31.8

1.39 (2H, m)

33.0

3′

1.48 (2H, dt, J = 15.0, 7.4 Hz)

20.3

1.57 (2H, m)

20.4

4′

0.99 (3H, t, J = 7.4 Hz)

14.1

0.88 (3H, t, J = 7.4 Hz)

14.2

1″

5.20 (1H, d, J = 7.7 Hz)

102.5

2″

3.48 (1H, dd, J = 9.1, 7.7 Hz)

75.6

3″

3.40 (1H, t, J = 8.9 Hz)

78.6

4″

3.34 (1H, t, J = 9.2 Hz)

71.4

5″

3.21 (1H, m)

78.1

6″

3.74 (1H, dd, J = 12.0, 2.4 Hz)
3.59 (1H, dd, J = 12.0, 5.5 Hz)

62.5

-OCH₃

3.83 (6H, s)

56.7

No.	2		3
1		134.7			129.2
2	7.84 (1H, d, J = 7.1 Hz)	131.7	6.62 (1H, s)	105.7
3	7.34 (1H, dd, J = 8.2, 6.3 Hz)	129.4		149.3
4	7.30 (1H, 7.0 Hz)	130.0		131.5
5	7.34 (1H, dd, J = 8.2, 6.3 Hz)	129.4		149.3
6	7.84 (1H, d, J = 7.1 Hz)	131.7	6.62 (1H, s)	105.7
7	6.96 (1H, s)	125.3	4.18 (1H, d, J = 6.4 Hz)	84.0
8		142.6	3.65 (1H, td, J = 6.4, 3.9 Hz)	77.1
9		165.6	3.46 (1H, m) 3.31 (1H, m)	64.0
1′	4.25 (2H, t, J = 6.6 Hz)	66.3	3.34 (2H, m)	69.7
2′	1.72 (2H, m)	31.8	1.39 (2H, m)	33.0
3′	1.48 (2H, dt, J = 15.0, 7.4 Hz)	20.3	1.57 (2H, m)	20.4
4′	0.99 (3H, t, J = 7.4 Hz)	14.1	0.88 (3H, t, J = 7.4 Hz)	14.2
1″	5.20 (1H, d, J = 7.7 Hz)	102.5
2″	3.48 (1H, dd, J = 9.1, 7.7 Hz)	75.6
3″	3.40 (1H, t, J = 8.9 Hz)	78.6
4″	3.34 (1H, t, J = 9.2 Hz)	71.4
5″	3.21 (1H, m)	78.1
6″	3.74 (1H, dd, J = 12.0, 2.4 Hz) 3.59 (1H, dd, J = 12.0, 5.5 Hz)	62.5
-OCH₃			3.83 (6H, s)	56.7

No.

δ_H

δ_C

δ_H

δ_C

134.7

129.2

7.84 (1H, d, J = 7.1 Hz)

131.7

6.62 (1H, s)

105.7

7.34 (1H, dd, J = 8.2, 6.3 Hz)

129.4

149.3

7.30 (1H, 7.0 Hz)

130.0

131.5

7.34 (1H, dd, J = 8.2, 6.3 Hz)

129.4

149.3

7.84 (1H, d, J = 7.1 Hz)

131.7

6.62 (1H, s)

105.7

6.96 (1H, s)

125.3

4.18 (1H, d, J = 6.4 Hz)

84.0

142.6

3.65 (1H, td, J = 6.4, 3.9 Hz)

77.1

165.6

3.46 (1H, m)
3.31 (1H, m)

64.0

1′

4.25 (2H, t, J = 6.6 Hz)

66.3

3.34 (2H, m)

69.7

2′

1.72 (2H, m)

31.8

1.39 (2H, m)

33.0

3′

1.48 (2H, dt, J = 15.0, 7.4 Hz)

20.3

1.57 (2H, m)

20.4

4′

0.99 (3H, t, J = 7.4 Hz)

14.1

0.88 (3H, t, J = 7.4 Hz)

14.2

1″

5.20 (1H, d, J = 7.7 Hz)

102.5

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3.48 (1H, dd, J = 9.1, 7.7 Hz)

75.6

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3.40 (1H, t, J = 8.9 Hz)

78.6

4″

3.34 (1H, t, J = 9.2 Hz)

71.4

5″

3.21 (1H, m)

78.1

6″

3.74 (1H, dd, J = 12.0, 2.4 Hz)
3.59 (1H, dd, J = 12.0, 5.5 Hz)

62.5

-OCH₃

3.83 (6H, s)

56.7

红花中一个炔类和两个苯丙素衍生物

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乔霖清 , 夏格格 , 李瑛杰 , 赵文萱 , 王彦志 ^*

药学学报 | 研究论文 2025,60(1): 185-190

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药学学报 | 研究论文 2025, 60(1): 185-190

红花中一个炔类和两个苯丙素衍生物

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乔霖清, 夏格格, 李瑛杰, 赵文萱, 王彦志^*

作者信息

河南中医药大学药学院, 河南郑州 450046

通讯作者:

^*王彦志, Tel: 86-371-65962746, E-mail: wangyz@hactcm.edu.cn

An alkyne and two phenylpropanoid derivants from Carthamus tinctorius L.

Lin-qing QIAO, Ge-ge XIA, Ying-jie LI, Wen-xuan ZHAO, Yan-zhi WANG^*

Affiliations

School of Pharmacy, Henan University of Chinese Medicine, Zhengzhou 450046, China

出版时间: 2025-01-12 doi: 10.16438/j.0513-4870.2024-0734

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摘要

收起

采用MCI Gel CHP-20、ODS、硅胶、Sephadex LH-20柱色谱柱以及半制备液相等方法对红花(Carthamus tinctorius L.) 乙醇提取物的正丁醇萃取部位的化学成分进行分离纯化, 得到1个炔烃和2个苯丙素类衍生物。运用现代波谱学方法(1D NMR、2D NMR、UV、IR和MS) 鉴定结构分别为(5R, E)-十四碳-12-烯-8, 10-二炔-1, 5, 14-三醇(1)、(E)-8-O-β-D-吡喃葡萄糖肉桂酸丁酯(2) 和(7S, 8S)-7-(4-羟基-3, 5-二甲氧基苯)-7-正丁基-8, 9-二醇(3)。1~3均为新化合物。对化合物1~3进行体外抗肾纤维化活性筛选, 均未表现出明显活性。

关键词

红花 / 菊科 / 化学成分 / 炔烃类 / 苯丙素衍生物 / 酶水解

Abstract

收起

The chemical constituents from the n-butanol fraction of ethanol extract of safflower (Carthamus tinctorius L.) were isolated and purified using chromatographic process including MCI Gel CHP-20, ODS, Sephadex LH-20 column chromatography, and semi-preparative HPLC method, and one alkyne and two phenylpropanoid derivants were obtained. Their structures were identified as (5R, E)-tetradecane-12-ene-8, 10-diyne-1, 5, 14-triol (1), (E)-8-O-β-D-glucopyranosyl n-butyl cinnamate (2), and (7S, 8S)-7-(4-hydroxy-3-methoxybenzene)-7-butyl-8, 9-diol (3) by modern spectroscopy methods (1D NMR, 2D NMR, UV, IR and MS). 1-3 are all new compounds. Compounds 1-3 were screened for their anti-renal fibrosis activities in vitro, and none of them showed obvious effect.

Key words

safflower / compositae / chemical constituent / alkyne / phenylpropanoid derivant / enzymatic hydrolysis

引用本文

乔霖清, 夏格格, 李瑛杰, 赵文萱, 王彦志. 红花中一个炔类和两个苯丙素衍生物. 药学学报, 2025 , 60 (1) : 185 -190 . DOI: 10.16438/j.0513-4870.2024-0734

Lin-qing QIAO, Ge-ge XIA, Ying-jie LI, Wen-xuan ZHAO, Yan-zhi WANG. An alkyne and two phenylpropanoid derivants from Carthamus tinctorius L.[J]. Acta Pharmaceutica Sinica, 2025 , 60 (1) : 185 -190 . DOI: 10.16438/j.0513-4870.2024-0734

正文

收起

红花为菊科(Compositae) 植物红花(Carthamus tinctorius L.) 的干燥管状花, 别名蓝红花、刺红花和菊红花等。主产于新疆、河南省, 另外四川、云南等省少量有产, 河南作为红花最悠久的道地产区之一, 集中于新乡市卫辉县和延津县以及商丘市的宁陵县和柘城县^[1], 称为卫红花。红花在历代本草均有记载, 具有通经活血、祛瘀止痛功效, 主治妇女病、跌打损伤^[2]。现代药理学研究表明, 红花不仅对心脑血管、免疫系统等有药理作用, 还有抗炎镇痛、抗肿瘤和抗氧化等多种生物活性^[3]。化学成分研究表明红花中含有醌式查尔酮苷、黄酮、生物碱、木脂素、甾醇、有机酸、烷基二醇及多炔等化合物^[4]。近年来, 红花的心脏保护作用被广泛关注, 但是其药效物质还不够明确。为寻找红花中新颖的天然产物, 为其应用开发提供依据, 本实验在课题组之前的研究基础上^{[5, 6]}, 对红花正丁醇部位的化学成分进行分离, 得到了1个新的炔类化合物(1) 和2个新的苯丙素衍生物(2和3, 图 1), 2和3可能为已知化合物在提取分离过程和正丁醇反应生成的产物。

结果与讨论

收起

1 结构鉴定

化合物1, 白色固体, [α]

$ {}_{\mathrm{D}}^{20} $

-9.47 (c 0.15, MeOH); HR-ESI-MS给出准分子离子峰m/z 259.129 6 [M+Na]⁺, 计算值为259.130 5 [M+Na]⁺, 推测分子式为C₁₄H₂₀O₃。¹H NMR (500 MHz, CD₃OD) 谱(表 1) 显示存在双键氢信号[δ_H 5.75 (1H, dt, J = 16.0, 2.0 Hz, H-12), 6.33 (1H, dt, J = 16.0, 4.8 Hz, H-13)], 2个连氧仲碳氢信号[δ_H 3.55 (2H, t, J = 6.3 Hz, H₂-1), 4.11 (2H, dd, J = 4.8, 2.0 Hz, H₂-14)], 1个连氧叔碳氢信号[δ_H 3.61 (1H, dq, J = 8.3, 4.1 Hz, H-5)]; ¹³C NMR (125 MHz, CD₃OD) 谱显示14个碳信号, 其中δ_C 147.0 (C-13)、109.1 (C-12) 为双键碳, δ_C 84.5 (C-8)、66.0 (C-9)、75.3 (C-10)、74.0 (C-11) 为2组炔键, δ_C 62.9 (C-1)、62.7 (C-14) 为2个连氧仲碳, 还有1个连氧叔碳[δ_C 71.0 (C-5)], 5个亚甲基碳[δ_C 33.6 (C-2)、23.1 (C-3)、38.1 (C-4)、36.9 (C-6)、16.6 (C-7)]。其NMR数据与文献^[7]报道的(5S, E)-十四碳-6-烯-8, 10-二炔-1, 5, 14-三醇基本一致。¹H-¹H COSY谱(图 2) 中出现H₂-1 (δ_H 3.55) / H₂-2 (δ_H 1.55)、H₂-2 / H₂-3 (δ_H 1.43)、H₂-3 / H₂-4 (δ_H 1.43)、H₂-4 / H-5 (δ_H 3.61)、H-5 / H₂-6 (δ_H 1.68)、H₂-6 / H₂-7 (δ_H 1.55) 的相关信号推断出C₁-C₇片段的存在, 结合HMBC谱中H₂-6和H₂-7与C-8 (δ_C 84.5) 存在相关信号, H₂-7与C-5 (δ_C 71.0) 存在相关信号, 确定庚醇基片段与炔键相连。¹H-¹H COSY谱还显示H₂-14 (δ_H 4.11) 与H-13 (δ_H 6.33) 相关, 结合HMBC谱(图 2) 中H-13与C-11 (δ_C 74.0)、H-12 (δ_H 5.75) 和H-13与C-14均存在相关信号, 而与C-2 (δ_C 33.6)、C-3 (δ_C 23.1)、C-4 (δ_C 38.1) 和C-5 (δ_C 71.0) 均无相关信号, 证明了烯丙醇的存在并推测双键位于∆_{12, 13} (δ_C-12 109.1, δ_C-13 147.0), 另有一炔键位于∆_{10, 11}。δ_C 109.1 (C-12)、147.0 (C-13)、84.5 (C-8)、75.3 (C-10)、66.0 (C-9) 和74.0 (C-11) 一组数据, 证明存在一个双键和两个炔键相连的共轭结构^[7], 根据双键的耦合常数(J = 16.0 Hz) 推测为反式构型。综上所述, 确定化合物1的结构为(E)-十四碳-12-烯-8, 10-二炔-1, 5, 14-三醇。

C-5的构型采用计算NMR的方法确定为5R, 且概率达到100%。为了实验的严谨性, 采用Mosher实验, 用Mosher试剂将化合物1转化为对应的S酯和R酯, 再将S酯和R酯用氘代三氯甲烷溶解测得氢谱, 以H-7 [2.43 (2H, m)] 为参照, Δδ_SR [Δ(δ_S - δ_R)] < 0, 以H-1 [3.55 (2H, t, J = 6.3 Hz)]、H-2 [1.55 (2H, m)]、H-3 [1.43 (2H, m)] 和H-4 [1.44 (2H, m)] 为参照, Δδ_SR [Δ(δ_S - δ_R)] > 0, 根据文献^[8]报道, 判断化合物1中C-5的构型为R。由此确定化合物1的结构为(5R, E)-十四碳-12-烯-8, 10-二炔-1, 5, 14-三醇。

化合物2, 白色固体, [α]

$ {}_{\mathrm{D}}^{20} $

-33.82 (c 0.19, MeOH); HR-ESI-MS给出准分子离子峰m/z 405.150 9 [M+Na]⁺, 计算值为405.152 0 [M+Na]⁺, 推测分子式为C₁₉H₂₆O₈。化合物2的¹H NMR (500 MHz, CD₃OD) 谱(表 2) 显示存在一个单取代苯环[δ_H 7.84 (2H, d, J = 7.1 Hz, H-2, 6)、7.34 (2H, dd, J = 8.2, 6.3 Hz, H-3, 5)、7.30 (1H, d, J = 7.0 Hz, H-4)], 一个取代双键[δ_H 6.96 (1H, s, H-7)], 一个葡萄糖[δ_H 5.20 (1H, d, J = 7.7 Hz)、3.48 (1H, dd, J = 9.7, 7.7 Hz)、3.40 (1H, t, J = 8.9 Hz)、3.34 (1H, t, J = 9.2 Hz)、3.21 (1H, m)、3.74 (1H, dd, J = 12.0, 2.4 Hz)、3.59 (1H, dd, J = 12.0, 5.5 Hz)], 1个甲基[δ_H 0.99 (3H, t, J = 7.4 Hz, H₃-4′)], 3个亚甲基[δ_H 1.72 (2H, m, H₂-2′)、1.48 (2H, dt, J = 15.0, 7.4 Hz, H₂-3′)、4.25 (2H, t, J = 6.6 Hz, H₂-1′)]; ¹³C NMR (125 MHz, CD₃OD) 显示19个碳信号, 其中一组苯环碳[δ_C 134.7 (C-1)、131.7 (C-6)、129.4 (C-3)、130.0 (C-4)、129.4 (C-3, 5)、131.7 (C-6)], 一组双键碳[δ_C 125.3 (C-7)、142.6 (C-8)], δ_C 102.5、75.6、78.6、71.4、78.1和62.5为葡萄糖碳信号, δ_C 14.0 (C-4′) 为甲基碳, δ_C 66.3 (C-1′)、31.8 (C-2′) 和20.3 (C-3′) 为3个亚甲基碳。将其NMR数据与文献^[9]报道的(E)-8-O-β-D-glucopyrano-sylcinnamic acid进行对比, 推测化合物2多一个正丁基。¹H-¹H COSY谱(图 2) 中出现H₂-1′ (δ_H 4.25) / H₂-2′ (δ_H 1.72)、H₂-2′ / H₂-3′ (δ_H 1.48)、H₂-3′ / H₃-4′ (δ_H 0.99) 的相关信号, 结合HMBC谱(图 2) 中H₂-1′ (δ_H 4.25) 与C-2′ (δ_C 31.8)、C-3′ (δ_C 20.4) 存在相关信号, H₂-2′ (δ_H 1.72) 与C-1′ (δ_C 66.3)、C-3′ (δ_C 20.4) 存在相关信号, H₂-3′ (δ_H 1.5) 与C-2′ (δ_C 31.8)、C-4′ (δ_C 14.1) 存在相关信号, H₃-4′ (δ_H 0.99) 与C-2′ (δ_C 31.8)、C-3′ (δ_C 20.4) 存在相关信号, 证明结构中存在丁基片段; H₂-1′ (δ_H 4.25) 与C-9 (δ_C 165.6) 存在HMBC相关信号, 推断丁醇基与羧基成酯。HMBC谱中, H-7 (δ_H 6.96) 与C-1 (δ_C 134.7)、C-2 (δ_C 131.7) 和C-6 (δ_C 131.7) 存在相关信号, 说明双键与苯环相连; 葡萄糖端基氢H-1″ (δ_H 5.20) 与苯环碳不存在相关信号, 与C-8 (δ_C 142.6) 存在相关信号, 证明葡萄糖连接位置在C-8 (δ_C 142.6), 糖端基氢的耦合常数J = 7.7 Hz证明苷键为β构型。化合物2经酶水解后进行衍生化反应, 与标准品对照进行LC-MS分析, 通过对比供试品葡萄糖衍生物(t_R = 11.93 min, m/z 447.125 3 [M+H]⁺) 与D-葡萄糖标准品衍生物(t_R = 11.89 min, m/z 447.125 4 [M+H]⁺) 的保留时间和质谱数据, 确定化合物2中葡萄糖的绝对构型为D-型。综上所述, 确定化合物2为(E)-8-O-β-D-吡喃葡萄糖肉桂酸丁酯。

化合物3, 白色固体, [α]

$ {}_{\mathrm{D}}^{20} $

-7.58(c 0.13, MeOH); HR-ESI-MS给出准分子离子峰m/z 323.147 0 [M+Na]⁺, 计算值为323.146 5 [M+Na]⁺, 推测分子式为C₁₅H₂₄O₆。¹H NMR (500 MHz, CD₃OD) 谱(表 2) 显示存在1, 3, 4, 5-四取代苯环[δ_H 6.62 (2H, s, H-2, 6)], 2个甲氧基[δ_H 3.83 (6H, s)], 2个连氧亚甲基δ_H 3.46 (1H, m, H-9a)、3.31 (1H, m, H-9b) 和δ_H 3.34 (2H, m, H₂-1′), 2个连氧次甲基[δ_H 4.18 (1H, d, J = 6.4Hz, H-7)、δ_H 3.65 (1H, td, J = 6.4, 3.9 Hz, H-8)], 2个亚甲基[δ_H 1.39 (2H, m, H₂-2′)、δ_H 1.57 (2H, m, H₂-3′)], 1个甲基[δ_H 0.88 (3H, t, J = 7.4Hz, H₃-4′)]; ¹³C NMR (125 MHz, CD₃OD) 显示15个碳信号, 其中δ_C 129.2 (C-1)、105.7 (C-2, 6)、149.3 (C-3, 5) 和131.5 (C-4) 为苯环碳, δ_C 64.0 (C-9)、69.7 (C-1′)、77.1 (C-8)、84.0 (C-7) 为连氧叔碳或仲碳, δ_C 56.7为甲氧基碳, δ_C 14.2 (C-4′) 为甲基碳, δ_C 33.0 (C-2′)、20.4 (C-3′) 为亚甲基碳。以上NMR数据与文献^[10]报道的(2S, 3R)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯)-3-甲氧基丙烷-1, 2-二醇对比非常相近, 区别点是参考物C-7的甲氧基改为正丁基且苯环C-5位连接甲氧基。¹H-¹H COSY谱(图 2) 中H₂-1′ (δ_H 3.34) / H₂-2′ (δ_H 1.39)、H₂-2′ / H₂-3′ (δ_H 1.57)、H₂-3′ / H₃-4′ (δ_H 0.88)、H-7 (δ_H 4.18) / H-8 (δ_H 3.65)、H-8 / H-9 (δ_H 3.46) 的相关信号, 结合HBMC谱(图 2) 中苯环氢H-2 (δ_H 6.62) 和H-6 (δ_H 6.62) 与连氧碳C-7 (δ_C 84.0) 有相关信号, 推测C-7 (δ_C 84.0) 与C-1 (δ_C 129.2) 相连, H-7 (δ_H 4.18) 与C-8 (δ_C 77.1)、C-9 (δ_C 64.0)、C-1′ (δ_C 69.7) 具有相关信号, 证明正丁醇基在C-7成酯。据文献^[11]报道, 对于邻二醇手性中心的构型, 可以根据手性碳上H-7和H-8的耦合常数来判断相对构型, 苏式构型耦合常数为7.0 Hz左右, 赤式构型为3.5 Hz左右。化合物3的H-7 (δ_H 4.18, 1H, d, J = 6.4 Hz) 和H-8 (δ_H 3.65, 1H, dt, J = 6.4, 3.9 Hz), 耦合常数6.4 Hz与苏式构型较为接近。为了确定化合物3的绝对构型, 采用计算ECD的方法, 结果显示实验ECD曲线与构型(7S, 8S) 的曲线吻合较好(图 3), 故确定化合物3的绝对构型为(7S, 8S), 综上, 确定化合物3的结构为(7S, 8S)-7-(4-羟基-3, 5-二甲氧基苯)-7-正丁基-8, 9-二醇。

2 体外抗肾纤维化活性筛选

使用生长因子(TGF-β1) 诱导大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52e) 进行纤维化, 以模拟肾纤维化的情况。使用CCK-8试剂盒对被化合物处理过的细胞进行细胞活力测定, 结果显示所有化合物在20 μmol·L^-1浓度下均对细胞活力无影响或影响较小(图 4A)。通过Western blot实验结果显示, 化合物1~3在20 μmol·L^-1浓度下, 无明显的抑制纤维连接蛋白(fibronectin) 表达作用(图 4B)。

实验部分

收起

1 实验仪器与试剂

AM-500 MHz超导核磁共振仪(TMS做内标, 德国Bruker公司); Triple TOF 6600 UPLC/MS液质联用分析仪(美国AB SCIEX公司); LC-52型半制备液相色谱仪和半制备用色谱柱Basic C₁₈ (120 A 5 μm, 10 mm × 250 mm), 赛谱锐思北京科技有限公司; Anton Paar MCP 5100型旋光仪(奥地利Anton Paar公司); EVO300紫外分光光度计和Nicolet IS10红外光谱仪(美国Thermo Scientific公司); CA-2610冷却水循环装置(上海爱朗仪器有限公司), 1820C型纯水机(重庆摩尔水处理设备有限公司); ZF-90型暗箱式紫外投射仪(上海宝山顾村电光仪器厂); 5424R离心机(德国Eppendorf公司); SQP型精密分析天平(北京赛多利斯科学仪器有限公司); HH-4电热恒温水浴锅(上海比朗仪器有限公司); TH-Ⅱ型薄层色谱显色加热器(上海科哲生化科技有限公司); MCI Gel CHP-20柱色谱材料(日本三菱化学公司), Sephadex LH-20柱色谱材料(瑞典Parmacia Biotech公司); 硅藻土和正相200~300目硅胶柱色谱材料(青岛海洋化工厂); UPLC-MS用色谱柱Eclipse XDS-C₁₈ (3.5 μm, 3.0 mm × 150 mm, 美国Agilent公司); 色谱纯及分析纯试剂(天津四友精细化学品有限公司); GW788388 (美国Glpbio公司, 批号: GC11878); TGF-β (上海皓元生物医药科技有限公司, 批号: 318652); fibronectin (批号: AB268020) 和collagen (批号: AB270993), 英国Abcam公司; β-Tubulin (上海艾比玛特生物医药有限公司, 批号: M20005F); α-SMA (美国Sigma-Aldrich公司, 批号: A2547); CCK-8 (中国大连美仑生物技术有限公司, 批号: MA0218-Mar-12J)。

红花于2018年12月采自河南省延津县, 经河南中医药大学陈随清教授鉴定为菊科植物红花(C. tinctorius L.) 的干燥冠状花, 属于卫红花。药材标本(编号: 20181212A) 保存于河南中医药大学药学院中药化学实验室。

2 提取分离

18.0 kg干燥红花用70%含水丙酮组织破碎提取两次, 合并提取液, 低温减压浓缩得到总浸膏3.6 kg。浸膏用8 L的水混悬, 依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇萃取, 减压浓缩后得到石油醚部位(123.0 g)、二氯甲烷部位(78.5 g)、乙酸乙酯部位(280.0 g)、正丁醇部位(400.0 g) 和水部位。正丁醇部位采用MCI色谱柱乙醇/水溶剂体系进行洗脱, 得到水部位(57.6 g), 10%乙醇部位(44.2 g), 20%乙醇部位(42.6 g), 30%乙醇部位(65.7 g), 40%乙醇部位(35.5 g), 50%乙醇部位(37.6 g), 70%乙醇部位(23.4 g) 和95%乙醇部位(35.0 g)。40%乙醇部位采用ODS色谱柱分离, 甲醇-水(10%~100%) 系统梯度洗脱, 得到6个组分Fr.A1~Fr.A6。将Fr.A3 (6.7 g) 采用Sephadex LH-20柱色谱分离, 用甲醇洗脱, 得到4个组分Fr.A3.1~Fr.A3.4。将Fr.A3.2 (864.0 mg) 采用硅胶柱色谱分离, 二氯甲烷-甲醇(50∶1~1∶1) 系统梯度洗脱, 得到3个组分Fr.A3.2.1~Fr.A3.2.3, Fr.A3.2.1 (37.0 mg) 经半制备高效液相色谱分离纯化, 以甲醇-水(48∶52) 进行洗脱, 流速为3 mL·min^-1, 得到化合物3 (t_R = 20.66 min, 4.15 mg)。50%乙醇部位用MCI色谱柱分离, 乙醇-水系统梯度洗脱, 得到6个组分Fr.B1~Fr.B6。Fr.B4 (6.7 g) 采用Sephadex LH-20柱色谱分离, 100%甲醇进行洗脱, 得到4个组分Fr.B4.1~Fr.B4.4, Fr.B4.1 (1.9 g) 采用硅胶柱色谱(200~300目), 二氯甲烷-甲醇(50∶1~1∶1) 梯度洗脱, 得到3个组分(Fr.B4.1.1~Fr.B4.1.3), Fr.B4.1.3 (48.1 mg) 经半制备高效液相色谱分离纯化, 以甲醇-水(66∶34) 进行洗脱, 流速为3 mL·min^-1, 得到化合物1 (t_R = 10.90 min, 3.41 mg)。Fr.B6 (3.2 g) 采用Sephadex LH-20柱色谱分离, 用100%甲醇洗脱, 得到3个组分Fr.B6.1~Fr.B6.3, Fr.B6.1 (1.0 g) 采用硅胶柱色谱(200~300目), 二氯甲烷-甲醇(50∶1~1∶1) 梯度洗脱, 得到3个组分Fr.B6.1.1~Fr.B6.1.3, Fr.B6.1.3 (32.9 mg) 经半制备高效液相色谱分离纯化, 以甲醇-水(77∶23) 进行洗脱, 流速为3 mL·min^-1, 得到化合物2 (t_R = 16.40 min, 5.85 mg)。

3 酶水解和葡萄糖绝对构型的确定

化合物2约1 mg, 精密称定后, 加入2.1 mg蜗牛酶(上海源叶生物科技有限公司), 再加入3 mL蒸馏水, 置于37 ℃水浴加热48 h, 反应液吹干后加入1 mL蒸馏水, 然后加入乙酸乙酯(1 mL×3次) 进行萃取, 水层浓缩干燥得到葡萄糖。水层样品中加入1 mg L^-1半胱氨酸甲酯酸盐(上海麦克林生化科技股份有限公司), 再加入1 mL吡啶(MREDA), 60 ℃水浴加热1.5 h后, 加入20 μL邻甲苯异硫氰酸酯(上海麦克林生化科技股份有限公司), 在60 ℃水浴下加热1.5 h, 得到衍生化产物。同时各取1 mg D-和L-葡萄糖对照品进行上述衍生化过程, 将化合物2衍生物和两种葡萄糖标准品衍生物进行LC-MS分析。色谱条件: Agilent Eclipse XDS-C18 (3.5 μm, 3.0 mm × 150 mm); 等度洗脱: 水(A)-甲醇(B), 60∶40, 0~28 min; 柱温42 ℃, 流速0.3 mL·min^-1; 质谱条件: 正离子模式。D-葡萄糖对照品衍生物(t_R = 11.89 min, m/z 447.125 4 [M+H]⁺), L-葡萄糖对照品衍生物(t_R = 10.79 min, m/z 447.127 9 [M+H]⁺)^[12]。

4 Mosher实验

化合物1约1 mg两份, 干燥后各加入50 μL吡啶, 再分别加入15 μL的(S)-和(R)-(+)-α-甲氧基-α-(三氟甲基)苯乙酰氯。密封反应约6 h, 真空干燥后用半制备高效液相进行纯化, 色谱条件: 乙腈-水(9∶1), 流速3 mL·min^-1, R酯t_R = 13.27 min, S酯t_R = 14.97 min。将纯化后的化合物溶解于氘代三氯甲烷测试氢谱, 以H-1、H-2、H-3、H-4和H-7为参照, 计算Δδ_SR [Δ(δ_S - δ_R)], 所得结果与计算结果一致。

5 结构鉴定

化合物1, 白色固体, 易溶于甲醇, [α]

$ {}_{\mathrm{D}}^{20} $

-9.47 (c 0.15, MeOH); UV (MeOH) λ_max (log ε) 212 (2.45), 252 (0.73), 266 (1.00), 282 (0.83) nm; IR ν_max 3 376, 2 933, 1 682, 1 029 cm^-1; HR-ESI-MS m/z 259.129 6 [M+Na]⁺ (计算值为C₁₄H₂₀O₃Na⁺, 259.130 5)。

化合物2, 白色固体, 易溶于甲醇, [α]

$ {}_{\mathrm{D}}^{20} $

-33.82 (c 0.19, MeOH); UV (MeOH) λ_max (log ε) 203 (1.30), 217 (1.10), 281 (2.09) nm; IR ν_max 3 397, 2 962, 1 709, 1 640, 1 449, 1 257, 1 205, 1 071, 1 028 cm^-1; HR-ESI-MS m/z 405.150 9 [M+Na]⁺ (计算值为C₁₉H₂₆O₈Na⁺, 405.152 0)。

化合物3, 白色固体, 易溶于甲醇, [α]

$ {}_{\mathrm{D}}^{20} $

-7.58 (c 0.13, MeOH); UV (MeOH) λ_max (log ε) 213 (3.44) nm; IR ν_max 1 204, 1 118, 972 cm^-1; HR-ESI-MS m/z 323.147 0 [M+Na]⁺ (计算值为C₁₅H₂₄O₆Na⁺, 323.146 5)。

6 抗肾纤维化活性研究

活性评价实验方法与课题组之前发表的文章^[13]中描述一致。

作者贡献: 乔霖清负责化学实验实施、数据处理和论文撰写; 夏格格负责生物实验实施及数据处理; 李瑛杰、赵文萱参与实验实施; 王彦志负责实验设计、文章审阅和修改。

利益冲突: 作者声明无利益冲突。

参考文献

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文献

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参考文献引证文献

排序方式：

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2025年第60卷第1期

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202

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doi: 10.16438/j.0513-4870.2024-0734

接收时间：2024-07-30
首发时间：2025-11-07
出版时间：2025-01-12

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收稿日期：2024-07-30
修回日期：2024-10-26

基金

作者信息

河南中医药大学药学院, 河南郑州 450046

通讯作者:

^*王彦志, Tel: 86-371-65962746, E-mail: wangyz@hactcm.edu.cn

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https://castjournals.cast.org.cn/joweb/yxxb/CN/10.16438/j.0513-4870.2024-0734

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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