药学学报

No.	δ_H	δ_C
1		137.8
2	6.67 (1H, d, J=1.3 Hz)	110.9
3		154.5
4		138.1
5		152.1
6	6.55 (1H, d, J=1.3 Hz)	108.1
7	3.32 (2H, br s)	41.3
8	5.94 (1H, m)	138.7
9	5.08 (1H, dd, J = 17.0, 1.7 Hz) 5.03 (1H, dd, J = 17.0, 4.9 Hz)	116.2
1′	4.87 (1H, d, J = 7.4 Hz)	102.9
2′	3.38-3.86 (4H, m)	75.0
3′	78.2
4′	71.3
5′	78.0
6′	3.86 (1H, m) 3.68 (1H, m)	62.5
3-OCH₃	3.81 (3H, s)	56.5
4-OCH₃	3.78 (3H, s)	61.6

No.	δ_H	δ_C
1		137.8
2	6.67 (1H, d, J=1.3 Hz)	110.9
3		154.5
4		138.1
5		152.1
6	6.55 (1H, d, J=1.3 Hz)	108.1
7	3.32 (2H, br s)	41.3
8	5.94 (1H, m)	138.7
9	5.08 (1H, dd, J = 17.0, 1.7 Hz) 5.03 (1H, dd, J = 17.0, 4.9 Hz)	116.2
1′	4.87 (1H, d, J = 7.4 Hz)	102.9
2′	3.38-3.86 (4H, m)	75.0
3′	78.2
4′	71.3
5′	78.0
6′	3.86 (1H, m) 3.68 (1H, m)	62.5
3-OCH₃	3.81 (3H, s)	56.5
4-OCH₃	3.78 (3H, s)	61.6

Group	Dose/μmol·L^-1	Release of β-Hex/%
Normal	-	0.59 ± 0.06
Model	-	1.00 ± 0.08^##
1	10	1.08 ± 0.07
3	10	0.80 ± 0.03
4	10	0.69 ± 0.05^*
5	10	1.05 ± 0.06
6	10	0.90 ± 0.02
8	10	0.87 ± 0.12

Group	Dose/μmol·L^-1	Release of β-Hex/%
Normal	-	0.59 ± 0.06
Model	-	1.00 ± 0.08^##
1	10	1.08 ± 0.07
3	10	0.80 ± 0.03
4	10	0.69 ± 0.05^*
5	10	1.05 ± 0.06
6	10	0.90 ± 0.02
8	10	0.87 ± 0.12

中麻黄二氯甲烷萃取部位化学成分研究

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范锡玲 ¹^,² , 曹彦刚 ¹^,² , 郑晓珂 ¹^,²^,³ , 王振中 ⁴ , 肖伟 ⁴ , 冯卫生 ¹^,²^,³^,^*

药学学报 | 研究论文 2024,59(9): 2574-2580

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药学学报 | 研究论文 2024, 59(9): 2574-2580

中麻黄二氯甲烷萃取部位化学成分研究

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范锡玲¹^,², 曹彦刚¹^,², 郑晓珂¹^,²^,³, 王振中⁴, 肖伟⁴, 冯卫生¹^,²^,³^,^*

作者信息

1.河南中医药大学, 河南郑州 450046

2.河南省中药开发工程技术研究中心, 河南郑州 450046

3.呼吸疾病中医药防治省部共建协同创新中心, 河南郑州 450046

4.中药制药过程控制与智能制造技术全国重点实验室, 江苏连云港 222001

通讯作者:

^*冯卫生, E-mail: fwsh@hactcm.edu.cn

Chemical constituents of dichloromethane extract from the stems of Ephedra intermedia

Xi-ling FAN¹^,², Yan-gang CAO¹^,², Xiao-ke ZHENG¹^,²^,³, Zhen-zhong WANG⁴, Wei XIAO⁴, Wei-sheng FENG¹^,²^,³^,^*

Affiliations

1. Henan University of Chinese Medicine, Zhengzhou 450046, China

2. Engineering and Technology Center for Chinese Medicine Development of Henan Province, Zhengzhou 450046, China

3. Collaborative Innovation Center for Chinese Medicine and Respiratory Diseases by Henan Province and Ministry of Education of China, Zhengzhou 450046, China

4. State Key Laboratory on Technologies for Chinese Medicine Pharmaceutical Process Control and Intelligent Manufacture, Lianyungang 222001, China

出版时间: 2024-09-12 doi: 10.16438/j.0513-4870.2024-0168

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摘要

收起

采用各种柱色谱分离技术对中麻黄二氯甲烷萃取部位化学成分进行分离纯化得到10个化合物, 并通过波谱学方法(MS和NMR) 对其进行结构鉴定, 分别为1-allyl-3, 4-dimethoxy-benzene-5-O-β-D-glucopyranoside (1)、lyoniresinol (2)、开环异落叶松脂素(3)、4, 3′, 4′-trihydroxy-3-methoxylignan-9, 9′-diyldiacetate (4)、dehydroconiferyl alcohol (5)、isocubebin (6)、balanophonin B (7)、sesquipinsapol B (8)、crataegifin A (9) 以及1-(2-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-3-(hydroxymethyl)-7-methoxy-2, 3-dihydrobenzofuran-5-yl)ethan-1-one (10), 其中化合物1为新化合物, 化合物2~10为木脂素类化合物, 且均为首次从该植物中分离得到, 化合物3、4、8具有潜在的抗哮喘活性。

关键词

中麻黄 / 化学成分 / β-氨基己糖苷酶释放率

Abstract

收起

Ten compounds were isolated and purified from the dichloromethane extract of stems of Ephedra intermedia by various chromatographic methods. Based on the analysis of physicochemical properties and spectral data, the structures of the ten compounds were identified as 1-allyl-3, 4-dimethoxy-benzene-5-O-β-D-glucopyranoside (1), lyoniresinol (2), secoisolariciresinol (3), 4, 3′, 4′-trihydroxy-3-methoxylignan-9, 9′-diyldiacetate (4), dehydroconiferyl alcohol (5), isocubebin (6), balanophonin B (7), sesquipinsapol B (8), crataegifin A (9), 1-(2-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-3-(hydroxymethyl)-7-methoxy-2, 3-dihydrobenzofuran-5-yl)ethan-1-one (10). Compound 1 is a new compound, named as 1-allyl-3, 4-dimethhoxy-benzene-5-O-β-D-glucopyranosyl, compounds 2-10 are lignans and isolated from this plant for the first time. Compound 3, 4, 8 possess potentially anti-asthmatic activities.

Key words

Ephedra intermedia / chemical constituents / β-hexosaminidase release rate

引用本文

范锡玲, 曹彦刚, 郑晓珂, 王振中, 肖伟, 冯卫生. 中麻黄二氯甲烷萃取部位化学成分研究. 药学学报, 2024 , 59 (9) : 2574 -2580 . DOI: 10.16438/j.0513-4870.2024-0168

Xi-ling FAN, Yan-gang CAO, Xiao-ke ZHENG, Zhen-zhong WANG, Wei XIAO, Wei-sheng FENG. Chemical constituents of dichloromethane extract from the stems of Ephedra intermedia[J]. Acta Pharmaceutica Sinica, 2024 , 59 (9) : 2574 -2580 . DOI: 10.16438/j.0513-4870.2024-0168

正文

收起

麻黄为麻黄科(Ephedraceae) 麻黄属(Ephedra) 植物草麻黄(Ephedra sinica Stapf.)、中麻黄(Ephedra intermedia Schrenket C. A. Meyer.) 和木贼麻黄(Ephedra equisetina Bunge.) 的干燥草质茎^[1], 史载于《神农本草经》, 列为中品, 药用历史悠久。其味辛, 微苦, 归肺、膀胱经, 具有发汗散寒, 宣肺平喘, 利水消肿的功效^[2]。随着科学技术的不断发展, 后世医家对麻黄具有诸多记载, 如《素问·经脉别论篇》^[3]记载麻黄能“饮入于胃, 脾气散精, 上归于肺, 通调水道, 下输膀胱”。《本草经集注》^[4]称麻黄能“通腠理, 解肌”等。《本草纲目》^[5]在前人的基础上补充了麻黄能“散目赤肿痛, 水肿、风肿、产后血滞”等。同时现代药理学研究也表明, 麻黄具有利尿、镇咳平喘、兴奋神经中枢系统、抗肿瘤的丰富的药理活性^[6-10]。

查阅文献^[11-14]发现, 关于麻黄的药效物质基础研究多集中于草麻黄和木贼麻黄, 其化学成分主要有木脂素类、生物碱类、黄酮类、挥发油以及多糖类等化合物。但关于中麻黄的化学成分研究相对较少, 为进一步丰富中麻黄的化学成分, 明确其药效物质基础, 本研究对中麻黄二氯甲烷萃取部位进行化学成分研究, 得到10个化合物, 分别为: 1-allyl-3, 4-dimethoxy-benzene-5-O-β-D-glucopyranoside (1)、lyoniresinol (2)、开环异落叶松脂素(3)、4, 3′, 4′-trihydroxy-3-methoxylignan-9, 9′-diyldiacetate (4)、dehydroconiferyl alcohol (5)、isocubebin (6)、balanophonin B (7)、sesquipinsapol B (8)、crataegifin A (9) 以及1-(2-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-3-(hydroxymethyl)-7-methoxy-2, 3-dihydrobenzofuran-5-yl)ethan-1-one (10), 结构见图 1。其中化合物1为新化合物, 化合物2~10为首次从该植物中分离得到的木脂素类化合物; 并对所得单体化合物进行体外抗哮喘活性筛选, 结果表明, 化合物3、4、8能够通过抑制β-氨基己糖苷酶的释放, 改善RBL-2H3细胞脱颗粒现象, 发挥潜在的抗哮喘活性。

结果与讨论

收起

1 结构鉴定

化合物1 无定形粉末, 易溶于甲醇。[α]

$ {}_{\mathrm{D}}^{20} $

: -70.202 (c 0.040, CH₃OH), 经HR-ESI-MS测定得到准分子离子峰[M+Na]⁺ m/z: 379.136 3 (C₁₇H₂₄O₈Na计算值为379.138 9), 提示该化合物的分子式为C₁₇H₂₄O₈。UV (CH₃OH) λ_max(logε): 204 (1.927); IR光谱中显示该结构中含有羟基(3 367 cm^-1), 苯环(1 409 cm^-1) 等特征吸收峰。

在¹H NMR (CD₃OD, 500 MHz) 谱中, 在芳香区, δ_H: 6.67 (1H, d, J = 1.3 Hz, H-2), 6.55 (1H, d, J = 1.3 Hz, H-6)为苯环上的两个氢质子信号, δ_H: 5.94 (1H, m, H-8), 5.08 (1H, dd, J = 17.0, 1.7 Hz, H-9a), 5.03 (1H, dd, J = 17.0, 4.9 Hz, H-9b) 为一个反式双键氢质子信号, δ_H: 4.87 (1H, d, J = 7.4 Hz, H-1′) 以及3.38~3.86处的一系列多重峰, 结合HSQC及碳谱数据δ_C: 102.9 (C-1′), 75.0 (C-2′), 78.2 (C-3′), 71.3 (C-4′), 78.0 (C-5′), 62.5 (C-6′), 可推测该化合物含有一个葡萄糖片段, 通过酸水解确定葡萄糖的绝对构型为D-构型(t_R = 16.8 min), 同时根据端基氢的偶合常数J = 7.4 Hz推断为β-构型; δ_H: 3.32 (2H, br s, H-7) 为一个亚甲基氢信号, δ_H: 3.81 (3H, s, 3-OCH₃), 3.78 (3H, s, 4-OCH₃) 为两个甲氧基氢信号。

在¹³C NMR (CD₃OD, 125 MHz) 谱中, 共给出17个碳信号, 在芳香区, δ_C: 137.8 (C-1)、110.9 (C-2)、154.5 (C-3)、138.1 (C-4)、152.1 (C-5)、108.1 (C-6) 为苯环上的碳信号, δ_C: 138.7 (C-8)、116.2 (C-9) 为一个反式双键上的碳信号。结合DEPT 135谱可知, δ_C: 62.5 (C-7) 为一个亚甲基碳信号, δ_C: 56.5 (3-OCH₃)、61.6 (4-OCH₃) 为两个甲氧基碳信号。在¹H-¹H COSY谱中, H-8与H-9a、H-9b、H-7分别有相关关系, 即H-7/8/9为一个自旋偶合体系。在HMBC图谱中, H-1′与C-5具有远程相关关系, 提示葡萄糖片段的与苯环上的C-5位相连; H-7与C-1具有远程相关关系, 提示C₇-C₉片段通过C-7与苯环上的C-1位相连; δ_H: 3.81 (3-OCH₃)、3.78 (4-OCH₃) 分别与C-3、C-4具有远程相关关系, 提示δ_H: 3.81 (3-OCH₃)、3.78 (4-OCH₃) 分别连在苯环上的C-3和C-4位。综合以上分析, 可以确定该化合物的结构如图 2所示, 其主要¹H-¹H COSY和HMBC相关关系见图 3, 经Scifinder检索为一个新化合物, 命名为1-allyl-3, 4-dimethoxy-benzene-5-O-β-D-glucopyranoside, 其碳氢数据归属见表 1。

2 体外抗哮喘活性筛选

通过建立C48/80诱导RBL-2H3细胞脱颗粒体外模型, 对中麻黄二氯甲烷萃取部位得到的10个单体化合物进行活性筛选, 结果表明, 与模型组相比, 化合物4能够显著抑制β-氨基己糖苷酶的释放, 化合物3和8能够轻微抑制β-氨基己糖苷酶的释放, 化合物3、4、8均能不同程度改善RBL-2H3细胞脱颗粒现象(表 2)。

实验部分

收起

所用仪器分别为Bruker AVANCE Ⅲ 500型核磁共振仪、Bruker maxis HD型飞行时间质谱, 德国布鲁克公司; 赛谱锐思LC52型高压制备液相色谱仪(赛谱锐思北京科技有限公司); Thermo EVO300紫外分光光度计(Thermo Scientific, 美国) 型紫外检测器; Autopol Ⅳ全自动旋光仪(美国鲁道夫公司); N-1001型旋转蒸发仪、A-1000S型水流抽气机、N-1111型冷冻水循环装置(上海埃朗仪器有限公司); 电热鼓风干燥箱(上海一恒科学仪器有限公司)。

所用试剂分别为YMC-Pack ODS-A色谱柱(250 mm × 20 mm, 5 μm, 日本YMC有限公司); 柱色谱填料Sephadex LH-20 (瑞典Amersham Pharmacia Biotech公司); Toyopearl HW-40C (日本TOSOH公司); ODS (40~60 μm, 日本YMC有限公司); MCI gel CHP-20、大孔树脂Diaion HP-20 (日本三菱化学公司); 薄层色谱硅胶GF254、柱色谱硅胶(100~200目、200~300目, 青岛海洋化工厂); 甲醇(色谱纯, 天津四友精细化学品有限公司); 乙腈(色谱纯, 美国天地有限公司); 大鼠嗜碱性细胞白血病细胞株(RBL-2H3) (北纳创联生物科技有限公司); TrintonX-100 (批号: 1109F0518, 北京索莱宝科技有限公司); EMEM培养基(Gibco Invitrogen公司); 氨苄青霉素(批号: 3230426002)、链霉素(批号: 5220726003)、C48/80 (批号: 0000220011)、4-硝基苯基-N-乙酰基-β-D-氨基葡萄糖(批号: 102547763, 纯度≥ 99%), 美国Sigma公司; 所用其他分析纯试剂均为天津恒兴化学试剂有限公司。

中麻黄购自新疆西域漠草中药材开发有限公司, 经河南中医药大学药学院董诚明教授鉴定为麻黄科植物中麻黄的干燥草质茎, 植物标本(NO.20201111) 保存于河南中医药大学中药化学提取分离实验室。

1 提取与分离

取45.0 kg中麻黄的干燥草质茎, 切段, 用50%含水丙酮浸泡1周后, 组织破碎提取2次, 减压浓缩得到总浸膏11.1 kg, 加水分散, 依次用二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取15次后得到二氯甲烷部位(185.0 g)、乙酸乙酯部位(1.37 kg)、正丁醇部位(1.5 kg) 和水部位。

二氯甲烷部位(185.0 g) 上硅胶柱(100~200目), 用石油醚-乙酸乙酯(50∶1、20∶1、10∶1、4∶1、1∶1) 以及乙酸乙酯-甲醇(20∶1、10∶1、5∶1) 梯度洗脱, 薄层检识后合并相同流分得到10个组分(D1~10)。D5 (20.1 g) 经硅胶柱色谱(200~300目), 以二氯甲烷-甲醇(150∶1→10∶1) 梯度洗脱, 得到9个组分(D5-1~5-9)。D5-3 (3.7 g) 上MCI gel CHP-20柱, 以甲醇-水(10∶90→100∶0) 梯度洗脱得到6个组分(D5-3-1~5-3-6), 其中D5-3-2经半制备HPLC (甲醇-水44∶56) 分离纯化得到化合物5 (t_R = 28.6 min, 6.0 mg) 和化合物10 (t_R = 32.4 min, 2.5 mg); D5-3-3经硅胶柱色谱(200~300目), 以二氯甲烷-甲醇(250∶1→20∶1) 梯度洗脱后又经半制备HPLC (甲醇-水25∶75) 分离纯化得到化合物2 (t_R = 30.4 min, 3.1 mg); D6 (11.8 g) 经ODS反相色谱柱分离, 以甲醇-水(10∶90→100∶0) 梯度洗脱, 得到5个组分(D6-1~6-5), D6-4 (1.6 g) 经硅胶柱(200~300目), 以甲醇-水(35∶1→5∶1) 梯度洗脱得到7个组分, 其中D6-4-1和D6-4-6分别经半制备HPLC分离纯化得到化合物3 (乙腈-水22∶78, t_R = 37.8 min, 18.9 mg) 和化合物6 (乙腈-水45∶55, t_R = 30.0 min, 9.3 mg); D8 (12.0 g) 上MCI gel CHP-20柱, 以甲醇-水(10∶90→100∶0) 梯度洗脱, 得到6个组分(D8-1~8-6); D8-5 (1.4 g) 经硅胶柱色谱(200~300目), 以二氯甲烷-甲醇(130∶1→18∶1) 梯度洗脱得到4个组分(D8-5-1~8-5-4), 其中D8-5-2重复经半制备HPLC分离纯化得到化合物4 (乙腈-水34∶66, t_R = 30.2 min, 2.3 mg) 和化合物7 (乙腈-水31∶69, t_R = 31.2 min, 4.2 mg); D10 (24.2 g) 经ODS反相色谱柱分离, 以甲醇-水(10∶90→100∶0) 梯度洗脱得到10个组分, 其中D10-5 (5.9 g) 经硅胶柱(200~300目), 以二氯甲烷-甲醇(100∶1→15∶1) 梯度洗脱后得到8个组分(D10-5-1~10-5-8), 其中D10-5-1上Sephadex LH-20凝胶柱(甲醇-水70∶30) 以及经薄层制备色谱得到化合物8 (二氯甲烷-甲醇35∶1, 6.4 mg); D10-5-2上Sephadex LH-20凝胶柱, 以纯甲醇洗脱后经半制备HPLC (甲醇-水53∶47) 分离纯化得到化合物9 (t_R = 35.6 min, 2.3 mg); D10-5-5上Sephadex LH-20凝胶柱, 以纯甲醇洗脱后经薄层制备色谱得到化合物1 (二氯甲烷-甲醇25∶1, 3.2 mg)。

2 结构鉴定

化合物1 无定形粉末, 易溶于甲醇。[α]

$ {}_{\mathrm{D}}^{20} $

: -70.202 (c 0.040, CH₃OH), 经HR-ESI-MS测定得到准分子离子峰[M+Na]⁺ m/z: 379.136 3 (C₁₇H₂₄O₈Na计算值为379.138 9), 提示该化合物的分子式为C₁₇H₂₄O₈。UV (CH₃OH) λ_max (logε): 204 (1.927); IR ν_max 3 367、1 409、1 032 cm^-1等。¹H NMR (CD₃OD, 500 MHz) 和¹³C NMR (CD₃OD, 125 MHz) 数据见表 1。

化合物2 白色粉末, 易溶于甲醇, ESI-MS m/z: 443 [M+Na]⁺, 提示化合物分子式为C₂₂H₂₈O₈。¹H NMR (CD₃OD, 500 MHz), δ_H: 6.57 (1H, s, H-2), 6.37 (2H, s, H-2′, 6′), 4.30 (1H, d, J = 5.7 Hz, H-7′), 3.59 (1H, dd, J = 10.8, 5.0 Hz, H-9a), 3.48 (1H, dd, J = 10.8, 8.6 Hz, H-9b), 2.69 (1H, dd, J = 15.1, 4.7 Hz, H-7a), 2.56 (1H, dd, J = 15.1, 11.5 Hz, H-7b), 1.95 (1H, m, H-8′), 1.61 (1H, m, H-8), 3.85 (3H, s, 3-OCH₃), 3.73 (6H, s, 3′, 5′-OCH₃), 3.36 (3H, s, 5-OCH₃); ¹³C NMR (CD₃OD, 125 MHz), δ_C: 130.2 (C-1), 107.7 (C-2), 148.6 (C-3), 138.9 (C-4), 147.7 (C-5), 126.2 (C-6), 33.6 (C-7), 40.8 (C-8), 66.7 (C-9), 139.3 (C-1′), 106.8 (C-2′, 6′), 149.0 (C-3′, 5′), 134.5 (C-4′), 42.3 (C-7′), 64.1 (C-9′), 56.7 (3-OCH₃), 60.1 (5-OCH₃), 56.6 (3′, 5′-OCH₃)。结合以上数据并参考文献^[15], 确定化合物为lyoniresinol。

化合物3 白色粉末, 易溶于甲醇, ESI-MS m/z: 385 [M+Na]⁺, 提示化合物分子式为C₂₀H₂₆O₆。¹H NMR (CD₃OD, 500 MHz), δ_H: 6.65 (2H, d, J = 8.0 Hz, H-5, 5′), 6.58 (2H, d, J = 2.0 Hz, H-2, 2′), 6.53 (2H, dd, J = 8.0, 2.0 Hz, H-6, 6′), 3.59 (4H, m, H-9, 9′), 2.65 (2H, dd, J = 13.8, 6.9 Hz, H-7a, 7′a), 2.54 (2H, dd, J = 13.8, 7.8 Hz, H-7b, 7′b), 1.90 (2H, m, H-8, 8′), 3.73 (6H, s, 3, 3′-OCH₃); ¹³C NMR (CD₃OD, 125 MHz), δ_C: 133.9 (C-1, 1′), 113.4 (C-2, 2′), 148.8 (C-3, 3′), 145.5 (C-4, 4′), 115.8 (C-5, 5′), 122.7 (C-6, 6′), 36.0 (C-7, 7′), 44.1 (C-8, 8′), 62.1 (C-9, 9′), 56.2 (3, 3′-OCH₃)。结合以上数据并参考文献^[16], 确定化合物为开环异落叶松脂素。

化合物4 无色油状物, 易溶于甲醇, ESI-MS m/z: 455 [M+Na]⁺, 提示化合物分子式为C₂₃H₂₈O₈。¹H NMR (CD₃OD, 500 MHz), δ_H: 6.67 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-5), 6.64 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-5′), 6.59 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-2), 6.53 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-2′), 6.53 (1H, br s, H-6), 6.39 (1H, dd, J = 8.0 Hz, H-6′), 4.13 (2H, m, H-9′), 4.00 (2H, m, H-9), 2.67 (1H, dd, J = 13.9, 7.1 Hz, H-7a), 2.61 (1H, dd, J = 12.5, 5.9 Hz, H-7′a), 2.57 (1H, dd, J = 12.5, 6.8 Hz, H-7′b), 2.53 (1H, dd, J = 13.9, 7.8 Hz, H-7b), 2.13 (1H, m, H-8′), 2.08 (1H, m, H-8), 2.03 (6H, s, H-12, 12′), 3.77 (3H, s, 3-OCH₃); ¹³C NMR (CD₃OD, 125 MHz), δ_C: 132.8 (C-1), 113.3 (C-2), 148.9 (C-3), 146.2 (C-4), 116.0 (C-5), 122.5 (C-6), 35.8 (C-7), 41.5 (C-8), 65.7 (C-9), 173.0 (C-11, 11′), 20.9 (C-12, 12′), 132.7 (C-1′), 117.1 (C-2′), 145.8 (C-3′), 145.5 (C-4′), 116.3 (C-5′), 121.3 (C-6′), 35.5 (C-7′), 41.2 (C-8′), 65.7 (C-9′), 56.3 (3-OCH₃)。结合以上数据并参考文献^[8], 确定化合物为4, 3′, 4′-trihydroxy-3-methoxylignan-9, 9′-diyldiacetate。

化合物5 黄色无定形粉末, 易溶于甲醇, ESI-MS m/z: 385 [M+Na]⁺, 提示化合物分子式为C₂₀H₂₄O₆。¹H NMR (CD₃OD, 500 MHz), δ_H: 6.94 (1H, s, H-2), 6.81 (1H, overlap, H-6), 6.75 (1H, d, J = 8.1 Hz, H-5), 6.71 (2H, s, H-2′, 6′), 5.48 (1H, d, J = 6.3 Hz, H-7), 3.82 (1H, dd, J = 11.0, 9.2 Hz, H-9b), 3.74 (1H, dd, J = 11.0, 7.2 Hz, H-9a), 3.56 (2H, t, J = 6.4 Hz, H-9′), 3.46 (1H, dd, J = 12.4, 6.2 Hz, H-8), 2.61 (2H, m, H-7′), 1.81 (2H, m, H-8′), 3.84 (3H, s, 3′-OCH₃), 3.80 (3H, s, 3-OCH₃); ¹³C NMR (CD₃OD, 125 MHz), δ_C: 134.8 (C-1), 110.5 (C-2), 149.1 (C-3), 147.5 (C-2′, 4), 116.1 (C-5), 119.7 (C-6), 89.0 (C-7), 55.4 (C-8), 65.0 (C-9), 129.9 (C-1′), 145.2 (C-3′), 114.0 (C-4′), 136.9 (C-5′), 117.9 (C-6′), 32.9 (C-7′), 35.8 (C-8′), 62.2 (C-9′), 56.7 (3-OCH₃), 56.3 (3′-OCH₃)。结合以上数据并参考文献^[17], 确定化合物为dehydroconiferyl alcohol。

化合物6 浅黄色油状物, 易溶于甲醇, ESI-MS m/z 356 [M]⁺, 提示化合物分子式为C₂₀H₂₀O₆。¹H NMR (CD₃OD, 500 MHz), δ_H: 6.82 (1H, d, J = 1.2 Hz, H-2′), 6.78 (1H, dd, J = 8.0, 1.5 Hz, H-2), 6.75 (1H, dd, J = 8.0 Hz, H-5′), 6.72 (1H, br s, H-6), 6.71 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-5), 6.65 (1H, dd, J = 8.0, 1.2 Hz, H-6′), 5.91 (2H, s, 10-OCH₂O), 5.88 (2H, s, 10′-OCH₂O), 4.75 (1H, d, J = 6.6 Hz, H-7), 3.96 (1H, dd, J = 11.0, 6.5 Hz, H-9a), 3.80 (1H, dd, J = 11.0, 7.5 Hz, H-9b), 3.69 (1H, dd, J = 11.0, 6.2 Hz, H-9′a), 3.61 (1H, dd, J = 11.0, 6.6 Hz, H-9′b), 2.90 (1H, m, H-7′b), 2.68 (1H, m, H-8′), 2.50 (1H, dd, J = 13.5, 11.1 Hz, H-7′a), 2.30 (1H, m, H-8); ¹³C NMR (CD₃OD, 125 MHz), δ_C: 138.5 (C-1), 108.8 (C-2), 149.2 (C-3), 148.4 (C-4), 110.5 (C-5), 120.6 (C-6), 84.0 (C-7), 54.1 (C-8), 60.4 (C-9), 102.3 (C-10), 135.8 (C-1′), 107.3 (C-2′), 149.3 (C-3′), 147.4 (C-4′), 109.1 (C-5′), 120.4 (C-6′), 33.7 (C-7′), 43.8 (C-8′), 73.5 (C-9′), 102.1 (C-10′)。结合以上数据并参考文献^[18], 确定化合物为isocubebin。

化合物7 白色无定形粉末, 易溶于甲醇, ESI-MS m/z 373 [M+H]⁺, 提示化合物分子式为C₂₀H₂₀O₇。¹H NMR (CD₃OD, 500 MHz), δ_H: 6.96 (1H, br s, H-3′), 6.93 (1H, br s, H-3), 6.84 (1H, overlap, H-5′), 6.82 (1H, overlap, H-5), 6.81 (1H, br s, H-6′), 6.78 (1H, d, J = 8.1 Hz, H-6), 5.38 (1H, d, J = 3.8 Hz, H-7′), 5.22 (1H, d, J = 3.8 Hz, H-7), 4.28 (1H, m, H-9′a), 4.02 (1H, m, H-9′b), 3.65 (1H, m, H-8′), 3.34 (1H, m, H-8), 3.86 (3H, s, 2′-OCH₃), 3.85 (3H, s, 2-OCH₃); ¹³C NMR (CD₃OD, 125 MHz), δ_C: 147.5 (C-1), 149.2 (C-2), 110.6 (C-3), 132.4 (C-4), 119.5 (C-5), 116.2 (C-6), 85.1 (C-7), 51.0 (C-8), 179.7 (C-9), (C-1′), 149.4 (C-2′), 110.7 (C-3′), 133.2 (C-4′), 119.8 (C-5′), 116.4 (C-6′), 87.2 (C-7′), 54.5 (C-8′), 73.8 (C-9′), 56.4 (2-OCH₃), 56.5 (2′-OCH₃)。结合以上数据并参考文献^[19], 确定化合物为balanophonin B。

化合物8 白色无定形粉末, 易溶于甲醇, ESI-MS m/z 563 [M+Na]⁺, 提示化合物分子式为C₃₀H₃₆O₉。¹H NMR (CD₃OD, 500 MHz), δ_H: 6.96 (1H, d, J = 1.7 Hz, H-2), 6.83 (1H, dd, J = 8.2, 1.7 Hz, H-6), 6.78 (1H, d, J = 8.2 Hz, H-5), 6.65 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-5′′), 6.63 (1H, d, J = 1.6, H-2′′), 6.58 (1H, s, H-6′), 6.54 (1H, dd, J = 8.0, 1.6 Hz, H-6′′), 6.50 (1H, s, H-2′), 5.50 (1H, d, J = 6.4 Hz, H-7), 3.80 (1H, s, H-9a), 3.73 (1H, m, H-9b), 3.62 (2H, overlap, H-9′a, 9′′a), 3.57 (2H, overlap, H-9′b, 9′′b), 3.44 (1H, dd, J = 12.0, 6.3 Hz, H-8), 2.68 (2H, m, H-7′a, 7′′a), 2.57 (2H, m, H-7′b, 7′′b), 1.95 (1H, m, H-8′′), 1.92 (1H, m, H-8′), 3.80 (3H, s, 3-OCH₃), 3.76 (3H, s, 3′-OCH₃), 3.71 (3H, s, 3′′-OCH₃); ¹³C NMR (CD₃OD, 125 MHz), δ_C: 133.9 (C-1), 110.6 (C-2), 149.0 (C-3), 147.4 (C-4, 4′), 116.1 (C-5), 119.7 (C-6), 88.9 (C-7), 55.3 (C-8), 64.7 (C-9), 135.7 (C-1′), 114.3 (C-2′), 145.1 (C-3′), 134.7 (C-5′), 118.4 (C-6′), 44.2 (C-8′), 62.1 (C-9′, 9′′), 130.0 (C-1′′), 113.5 (C-2′′), 148.7 (C-3′′), 145.4 (C-4′′), 115.8 (C-5′′), 122.7 (C-6′′), 36.0 (C-7′′), 43.9 (C-8′′), 56.4 (3-OCH₃), 56.5 (3′-OCH₃), 56.2 (3′′-OCH₃)。结合以上数据并参考文献^[20], 确定化合物为sesquipinsapol B。

化合物9 无色油状物, 易溶于甲醇, ESI-MS m/z 425 [M+Na]⁺, 提示化合物分子式为C₂₂H₂₆O₇。¹H NMR (CD₃OD, 500 MHz), δ_H: 6.94 (1H, d, J = 1.6 Hz, H-2′), 6.82 (1H, dd, J = 8.1, 1.6 Hz, H-6′), 6.77 (1H, d, J = 8.1 Hz, H-5′), 6.74 (1H, s, H-2), 6.71 (1H, s, H-6), 5.43 (1H, d, J = 7.0 Hz, H-7′), 4.40 (1H, dd, J = 11.1, 5.2 Hz, H-9′a), 4.30 (1H, dd, J = 11.1, 7.6 Hz, H-9′b), 3.56 (2H, m, H-9), 1.99 (3H, s, H-11′), 3.84 (3H, s, 3-OCH₃), 3.81 (3H, s, 3′-OCH₃); ¹³C NMR (CD₃OD, 125 MHz), δ_C: 137.2 (C-1), 114.4 (C-2), 145.3 (C-3), 128.8 (C-4), 147.5 (C-5), 117.6 (C-6), 32.9 (C-7), 35.8(C-8), 62.2 (C-9), 133.9 (C-1′), 110.7 (C-2′), 149.2 (C-3′), 147.8 (C-4′), 116.2 (C-5′), 120.0 (C-6′), 89.6 (C-7′), 52.0 (C-8′), 66.8 (C-9′), 172.6 (C-10′), 20.7 (C-11′), 56.7 (3-OCH₃), 56.4 (3′-OCH₃)。结合以上数据并参考文献^[21], 确定化合物为crataegifin A。

化合物10 无色油状物, 易溶于甲醇, ESI-MS m/z 344 [M]⁺, 提示化合物分子式为C₁₉H₂₀O₆。¹H NMR (CD₃OD, 500 MHz), δ_H: 7.63 (1H, s, H-6′), 7.53 (1H, s, H-2′), 6.94 (1H, d, J = 1.8 Hz, H-2), 6.82 (1H, dd, J = 8.0, 1.8 Hz, H-6), 6.77 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-5), 5.63 (1H, d, J = 6.4 Hz, H-7), 3.85 (2H, dd, J = 5.9, 3.2 Hz, H-9), 3.57 (1H, q, J = 6.1 Hz, H-8), 2.56 (3H, s, H-8′), 3.90 (3H, s, 3′-OCH₃), 3.81 (3H, s, 3-OCH₃); ¹³C NMR (CD₃OD, 125 MHz), δ_C: 133.8 (C-1), 110.6 (C-2), 149.2 (C-3, 3′), 147.8 (C-4), 116.3 (C-5), 119.8 (C-6), 90.4 (C-7), 54.6 (C-8), 64.6 (C-9), 130.5 (C-1′), 113.8 (C-2′), 154.5 (C-4′), 132.6 (C-5′), 120.5 (C-6′), 199.3 (C-7′), 26.5 (C-8′), 56.4 (3-OCH₃), 56.7 (3′-OCH₃)。结合以上数据并参考文献^[22], 确定化合物为1-(2-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-3-(hydroxymethyl)-7-methoxy-2, 3-dihydrobenzofuran-5-yl)ethan-1-one。

3 体外抗哮喘活性筛选

参考文献^[11], 对所得化合物进行体外抗哮喘活性筛选。将RBL-2H3细胞置于含有15% FBS的EMEM培养基中, 于5% CO₂的37 ℃恒温培养箱培养至对数生长期, 按照细胞密度为每毫升3×10⁴个, 接种于96孔板中, 24 h后分为正常组(NC)、模型组(M, C48/80, 30 μg·mL^-1)、各给药组(10 μmol·L^-1 + C48/80, 30 μg·mL^-1) 以及总酶组(1% Trinton X-100)。刺激30 min后, 取50 μL细胞上清, 加入50 μL 1 mmol·L^-1的β-氨基己糖苷酶底物溶液, 37 ℃孵育1 h, 加入150 μL Na₂CO₃/NaHCO₃终止液终止反应, 酶标仪405 nm下检测吸光度, 计算β-氨基己糖苷酶释放率(R)。R = (A₁ - A₂) / (A₃ - A₂) × 100%, 式中, A₁: 实验组上清液吸光度; A₂: 空白孔上清液吸光度; A₃: 总酶孔上清液吸光度。

4 统计学分析

运用SPSS 26.0进行单因素方差分析(one-way ANOVA) 进行统计处理, 所有数据均以

$ \overline {x} $

± s表示。P < 0.05表示具有显著性差异, P < 0.01表示具有极显著差异。

作者贡献: 范锡玲是本文章的第一作者, 负责中麻黄药材的分离、鉴定以及文章的整理; 曹彦刚及时对实验中遇到的问题给予帮助和指导, 同时和王振中、肖伟负责相关稿件的修改; 郑晓珂负责文中体外抗哮喘活性实验的指导; 冯卫生负责实验设计、稿件修改以及最终定稿等工作。

利益冲突: 所有作者均声明不存在利益冲突。

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国家重点研发计划—中医药现代化研究重点专项(2019YFC1708800)

参考文献

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文献

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参考文献引证文献

排序方式：

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2024年第59卷第9期

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文章信息

doi: 10.16438/j.0513-4870.2024-0168

接收时间：2024-02-27
首发时间：2025-11-24
出版时间：2024-09-12

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收稿日期：2024-02-27
修回日期：2024-04-30

基金

国家重点研发计划—中医药现代化研究重点专项(2019YFC1708800)

作者信息

1.河南中医药大学, 河南郑州 450046

2.河南省中药开发工程技术研究中心, 河南郑州 450046

3.呼吸疾病中医药防治省部共建协同创新中心, 河南郑州 450046

4.中药制药过程控制与智能制造技术全国重点实验室, 江苏连云港 222001

通讯作者:

^*冯卫生, E-mail: fwsh@hactcm.edu.cn

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https://castjournals.cast.org.cn/joweb/yxxb/CN/10.16438/j.0513-4870.2024-0168

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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