药学学报

CDK抑制剂夫拉平度抗冠状病毒作用机制研究

PDF下载

王丽丹 , 郭赛赛 , 岑山 ^*

药学学报 | 研究论文 2024,59(5): 1280-1285

收起

药学学报 | 研究论文 2024, 59(5): 1280-1285

CDK抑制剂夫拉平度抗冠状病毒作用机制研究

全屏

王丽丹, 郭赛赛, 岑山^*

作者信息

中国医学科学院、北京协和医学院医药生物技术研究所, 北京 100050

通讯作者:

^*岑山, Tel: 86-10-63037279, E-mail: shancen@imb.pumc.edu.cn

The mechanism of anticoronaviral action of CDK inhibitor flavopiridol

Li-dan WANG, Sai-sai GUO, Shan CEN^*

Affiliations

Institute of Medicinal Biotechnology, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College, Beijing 100050, China

出版时间: 2024-05-12 doi: 10.16438/j.0513-4870.2024-0039

文章导航

摘要

收起

冠状病毒属冠状病毒包含多种人类致病病毒, 抗冠状病毒药物研发具有重要价值。开发靶向宿主细胞的抗病毒药物不仅有助于发展新的抗病毒策略, 同时有利于解决病毒突变而带来的耐药性等问题。本课题组前期研究发现, 细胞周期依赖性蛋白激酶(cell cycle-dependent protein kinases, CDKs) 参与冠状病毒的复制, 成为潜在的抗病毒靶点。本研究发现广谱CDK抑制剂夫拉平度显著抑制严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2 (severe acute respiratory syndrome coronavirus 2, SARS-CoV-2) RNA依赖性RNA聚合酶(RNA dependent RNA polymerase, RdRp) 活性。进一步研究表明, 夫拉平度抑制SARS-CoV-2 RdRp的RNA合成效率。此外, 夫拉平度能够有效抑制人类冠状病毒OC43 (human coronavirus OC43, HCoV-OC43) 的复制。本研究表明, CDK抑制剂夫拉平度可能是潜在的抗冠状病毒药物。

关键词

夫拉平度 / CDK抑制剂 / 冠状病毒 / 抗病毒 / RNA依赖性RNA聚合酶

Abstract

收起

Coronaviruses of the genus Coronavirus contain a variety of human pathogenic viruses, and the development of anti-coronavirus drugs is of great value. The development of antiviral drugs targeting host cells is not only helpful for the development of new antiviral strategies, but also for solving problems such as drug resistance due to viral mutations. Our preliminary study identified that cell cycle-dependent protein kinases (CDKs) involved in coronavirus replication, for which they would be potential anticoronaviral targets. In this study, we found that the broad-spectrum CDK inhibitor flavopiridol significantly inhibited severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) RNA dependent RNA polymerase (RdRp) activity. Further studies showed that flavopiridol suppressed the RNA synthesis efficiency of SARS-CoV-2 RdRp. In addition, flavopiridol effectively restricted the replication of human coronavirus OC43 (HCoV-OC43). Therefore, our study suggested that the CDK inhibitor flavopiridol may be a potential anticoronaviral drug.

Key words

flavopiridol / CDK inhibitor / coronavirus / antiviral / RNA dependent RNA polymerase

引用本文

王丽丹, 郭赛赛, 岑山. CDK抑制剂夫拉平度抗冠状病毒作用机制研究. 药学学报, 2024 , 59 (5) : 1280 -1285 . DOI: 10.16438/j.0513-4870.2024-0039

Li-dan WANG, Sai-sai GUO, Shan CEN. The mechanism of anticoronaviral action of CDK inhibitor flavopiridol[J]. Acta Pharmaceutica Sinica, 2024 , 59 (5) : 1280 -1285 . DOI: 10.16438/j.0513-4870.2024-0039

正文

收起

冠状病毒属于冠状病毒科冠状病毒属病毒, 其基因组为单股正链RNA。根据系统发育树可分为α、β、γ、δ四个属。其中β冠状病毒属包括多种可感染人的冠状病毒, 如人类冠状病毒OC43 (human coronavirus OC43, HCoV-OC43)、中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus, MERS-CoV) 和严重急性呼吸综合征冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus, SARS-CoV)。MERS-CoV和SARS-CoV是对人类具有高致病性的冠状病毒^{[1, 2]}。于2019年暴发的严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2 (severe acute respiratory syndrome coronavirus 2, SARS-CoV-2) 引发冠状病毒大流行病^[3], 导致全球超过690万人死亡, 对人类健康和经济造成巨大负担^[4]。由于病毒变异快速且频繁, 使得已有的防控冠状病毒感染的药物或疫苗作用效果减弱^[5-7], 提示研究者寻找更加有效且作用范围广泛的潜在抗冠状病毒药物或疫苗的必要性。

近年来, 靶向宿主的抗病毒药物因其抗病毒活性强、耐药性低及受病毒变异影响较小等优点, 日益成为开发新型靶点的抗病毒新疗法^[8-10]。细胞周期依赖性蛋白激酶(cyclin-dependent kinases, CDKs) 是真核细胞中推动细胞周期进程的核心宿主因子, 在细胞分裂和转录调节等方面发挥重要功能^[11]。大量研究表明, 病毒感染能够利用宿主细胞内CDKs, 引发细胞周期失调和克服宿主限制因素, 从而促进多种病毒复制^[12]。已报道, 人类免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type 1, HIV-1)^[13]、单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus type 1, HSV-1)^[14]和甲型流感病毒(influenza A virus, IAV)^[15]均能通过CDKs调控病毒复制。此前, 本课题组的研究发现宿主因子CDK2与SARS-CoV-2非结构蛋白12 (non-structural protein 12, nsp12) 结合, 诱导nsp12的磷酸化, 促进病毒聚合酶复合物的组装, 从而保证病毒RNA合成^[16], 因此, CDK抑制剂可有效抑制SARS-CoV-2复制^{[16, 17]}, 有望被开发成为新的抗病毒药物。

夫拉平度(flavopiridol) 是一种半合成的黄酮类化合物, 来源于植物生物碱。其作为广谱CDK抑制剂, 可抑制HIV-1^[18]、IAV^[19]等病毒复制, 是一种富有前景的广谱抗病毒药物。前期研究发现, 夫拉平度是潜在的SARS-CoV-2抗感染药物^[16]。为进一步研究夫拉平度抑制冠状病毒复制的作用机制, 发展冠状病毒治疗策略, 本研究利用SARS-CoV-2 RNA聚合酶药物评价系统证明夫拉平度显著抑制SARS-CoV-2 RNA合成。夫拉平度抑制SARS-CoV-2 RNA聚合酶活性半数效应浓度(concentration for 50% of maximal effect, EC₅₀) 为0.1 μmol·L^-1, 并且表现出较强的抑制HCoV-OC43活性及低细胞毒性。该研究表明, 夫拉平度是潜在的抗冠状病毒药物。

材料与方法

收起

细胞、病毒与试剂 人胚肾细胞HEK293T和仓鼠肾成纤维细胞BHK21细胞系为本实验室冻存, 维持于含10%胎牛血清DMEM培养基, 于5% CO₂条件下37 ℃恒温培养; 重组人冠状病毒HCoV-OC43病毒获赠于中国疾病预防控制中心, 扩增于BHK21细胞系; 胎牛血清、DMEM培养基均购自于美国赛默飞公司; 夫拉平度(货号: HY-10005)、瑞德西韦(货号: HY-104077) (MedChemExpress公司) 溶解于二甲基亚砜溶液; 腔肠素h (货号: 50909-86-9, 上海翌圣生物科技有限公司); 细胞总RNA提取试剂盒(货号: RC101-01)、荧光定量PCR反应试剂盒Taq Pro Universal SYBR qPCR Master Mix (货号: Q712-02) 均购自南京诺维赞公司; 细胞增殖及毒性检测试剂盒CCK-8 (货号: MA0218, 大连美仑生物公司); 反转录酶MMLV (货号: 639574, 日本Takara公司); Flag标签一抗DYKDDDDK Tag antibody (货号: 8146)、β-actin一抗(货号: 4967) 购自于Cell Signaling Technology公司; 辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG (货号: ZB-2305)、辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG (货号: ZB-2301) 购自于北京中杉金桥公司。

质粒 SARS-CoV-2 RdRp质粒和高斯荧光素酶报告基因(Guassia luciferase, GLuc) 质粒依据报道文献^[20]构建。SARS-CoV-2 nsp7、nsp8和nsp12分别在C端带有Flag标签。GLuc报告基因质粒由CMV启动子驱动, GLuc正链两侧为SARS-CoV-2 5′非翻译区和3′非翻译区序列。

细胞总RNA提取和荧光定量PCR反应 取每毫升细胞数为2×10⁵个细胞铺板于含10%胎牛血清DMEM培养基的6孔板中, 至完全贴壁后进行转染, 加入阳性对照5 μmol·L^-1瑞德西韦或不同浓度的夫拉平度培养至24 h, 收集细胞, 根据说明书使用细胞总RNA提取试剂盒裂解细胞并提取RNA。在进行反转录时, 根据说明书使用反转录酶MMLV将RNA反转录为cDNA, 所使用的特异性引物序列, 正链-Gluc-RT: 5′-TGGATCTTGCTGGCGAATGT-3′; 负链-Gluc-RT: 5′-ACTGTCGTTGACAGGACACG-3′。使用Taq Pro Universal SYBR qPCR Master Mix试剂盒进行荧光定量PCR反应, PCR反应的引物和内参基因引物为GLuc-F: 5′-CGGGTGTGACCGAAAGGTAA-3′; GLuc-R: 5′-TGGATCTTGCTGGCGAATGT-3′; GAPDH-F: 5′-GTCCACTGGCGTCTTCACCA-3′; GAPDH-R: 5′-GTGGCAGTGATGGCATGGAC-3′。

GLuc活性检测 腔肠素h粉末溶解于无水乙醇中, 配成浓度为1.022 mmol·L^-1腔肠素储存液。使用时, 利用PBS溶液将储存液稀释为16.7 μmol·L^-1底物, 并在暗处放置30 min。取10 μL细胞上清于白色非透明96孔板中, 加入60 μL底物混合, 使用Berthold Centro XS3 LB 960微孔板发光计, 检测时间为0.5 s, 读取荧光强度值。

细胞毒性检测 使用细胞增殖及毒性检测试剂盒CCK-8评价夫拉平度在BHK21细胞上的细胞毒性。细胞铺板于96孔板中至完全贴壁, 加入1 μL起始终浓度为10 μmol·L^-1, 3倍浓度梯度稀释的夫拉平度, 孵育48 h, 加入10 μL CCK-8试剂于37 ℃、5% CO₂条件下孵育90 min, 于450 nm处测量吸光度值。

蛋白免疫印迹 使用蛋白上样缓冲液于100 ℃下裂解细胞, 并通过10% SDS-PAGE分离目的蛋白。将目的蛋白转印至PVDF膜上, 5%脱脂牛奶封闭, 依次进行一抗、二抗孵育, 使用ECL显影液于Gel Doc XR+分子成像仪成像。

抗冠状病毒活性检测 根据文献^[21]进行夫拉平度抗人冠状病毒HCoV-OC43活性检测。该病毒为海肾荧光素酶(renilla luciferase, RLuc) 基因替换病毒nsp2构成的重组人冠状病毒, 检测RLuc荧光强度即可表征HCoV-OC43复制水平。BHK21 (每毫升1×10⁵个) 铺板于平底96孔板至完全贴壁, 加入1 μL起始终浓度为10 μmol·L^-1, 3倍浓度梯度稀释的夫拉平度, 以病毒感染复数(multiplicity of infection, MOI) 为0.1的HCoV-OC43进行细胞感染, 孵育48 h, 使用细胞裂解液于37 ℃暗处裂解细胞30 min, 取10 μL细胞裂解上清, 腔肠素h测量RLuc荧光强度。

统计学分析 使用GraphPad Prism 8.0软件进行数据统计学分析, 采用单因素方差分析和t检验进行差异分析, P < 0.01、P < 0.001、P < 0.000 1表示具有显著性差异。

结果

收起

1 夫拉平度抑制SARS-CoV-2 RdRp活性

在前期研究中, 本课题组已建立了一个基于细胞水平的SARS-CoV-2 RNA依赖性RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase, RdRp) 抑制剂的筛选系统^[20], 并筛选出一系列SARS-CoV-2 RdRp抑制剂, 其中包括CDK2抑制剂SNS-032^{[16, 20]}。该系统由两部分组成: 荧光素酶GLuc报告质粒和表达SARS-CoV-2 RdRp的nsp7、nsp8和nsp12质粒。在CMV启动子驱动下, 插入到SARS-CoV-2病毒RNA序列5′非翻译区和3′非翻译区之间的GLuc被RdRp识别并扩增, 使得GLuc表达水平大幅增加, 因此检测的GLuc水平可代表SARS-CoV-2 RdRp的活性。本研究利用该系统探究了CDK抑制剂——夫拉平度对SARS-CoV-2 RdRp活性的影响。在HEK293T细胞中, 共同转染荧光素酶GLuc报告质粒和SARS-CoV-2 RdRp Flag-nsp7、Flag-nsp8和Flag-nsp12质粒, 持续24 h, 检测细胞上清中GLuc表达。DMSO设置为空白对照组, 以瑞德西韦作为该实验的阳性对照。结果表明, 0.5 μmol·L^-1夫拉平度显著抑制SARS-CoV-2 RdRp的活性(图 1)。

2 夫拉平度以剂量依赖方式抑制SARS-CoV-2 RdRp

接下来, 本研究测定了夫拉平度抑制SARS-CoV-2 RdRp的EC₅₀以及对实验细胞50%细胞毒性浓度值(concentration of cytotoxicity 50%, CC₅₀), 以瑞德西韦作为阳性对照组。结果表明(图 2), 夫拉平度以剂量依赖方式抑制SARS-CoV-2 RdRp, EC₅₀为0.10 μmol·L^-1, CC₅₀为0.91 μmol·L^-1。阳性对照瑞德西韦EC₅₀为2.62 μmol·L^-1, CC₅₀大于10 μmol·L^-1。研究表明, 夫拉平度体外抑制SARS-CoV-2 RdRp优于瑞德西韦, 且其抑制活性并非源于细胞毒性。

3 夫拉平度抑制SARS-CoV-2正链和负链RNA合成

为了进一步验证夫拉平度抑制SARS-CoV-2 RdRp从而抑制SARS-CoV-2 RNA合成, 本研究分别以细胞内合成的荧光素酶报告基因GLuc正链和负链特异性引物合成GLuc基因的正链和负链。由于在SARS-CoV-2 5′非翻译区和3′非翻译区之间, GLuc基因序列代替了SARS-CoV-2的保守区域序列(conserved domain sequences, CDS), 因此合成的GLuc正链和负链即可代表SARS-CoV-2核酸序列的正链和负链。首先, 在不同的药物浓度下, 细胞共同转染GLuc质粒和SARS-CoV-2 RdRp质粒, 24 h后, 收集细胞并提取总RNA, 通过qRT-PCR法检测SARS-CoV-2正链和负链RNA表达水平, 并进行相对定量, 同时, 利用蛋白免疫印迹检测SARS-CoV-2 RdRp的表达水平, 设置DMSO为空白对照组, 瑞德西韦为阳性对照组。结果表明, 夫拉平度显著抑制SARS-CoV-2正链和负链RNA的合成。与空白对照组相比, 0.3 μmol·L^-1夫拉平度抑制SARS-CoV-2 RNA合成约为80%, 0.1 μmol·L^-1夫拉平度抑制SARS-CoV-2 RNA合成约60%, 与阳性对照5 μmol·L^-1瑞德西韦相当(图 3)。

4 夫拉平度对人冠状病毒HCoV-OC43抗病毒活性评价

为了评价夫拉平度是否对冠状病毒复制产生抑制作用, 本研究利用重组人类冠状病毒HCoV-OC43, 测量夫拉平度对HCoV-OC43复制的影响^[21]。在药物不同的浓度下, 利用MOI为0.1的HCoV-OC43病毒感染其宿主细胞BHK21, 48 h后分析HCoV-OC43病毒复制水平, 同时测试各浓度下药物对细胞毒性作用的影响, 以瑞德西韦作为阳性对照。结果显示, 夫拉平度以剂量依赖方式抑制HCoV-OC43病毒复制, EC₅₀为0.12 μmol·L^-1, CC₅₀大于10 μmol·L^-1, 治疗指数(therapeutic index, TI) 大于83.33 (图 4A), 阳性对照瑞德西韦抑制HCoV-OC43病毒复制EC₅₀为1.09 μmol·L^-1, CC₅₀大于20 μmol·L^-1, TI大于18.35 (图 4B)。上述实验结果表明, 夫拉平度抑制HCoV-OC43病毒复制的能力优于瑞德西韦。

讨论

收起

病毒感染引发宿主细胞周期调控从而使宿主环境往有利于病毒复制的方向发展^[22], CDKs作为细胞周期调节蛋白在其中发挥重要作用^[16]。CDK抑制剂通过ATP竞争性或非竞争性与CDKs结合从而产生药理学活性^[12]。自上世纪以来, 已有多种CDK抑制剂获批进入临床试验, 包括夫拉平度和瑞博西尼^{[23, 24]}, 但是目前针对CDK抑制剂的药理活性研究大多集中在抗肿瘤活性上^[24]。近年来, 靶向宿主的CDK抑制剂因抗病毒活性强且耐药性低等优点, 在抗病毒研究中备受关注^[25]。本研究对夫拉平度影响人冠状病毒HCoV-OC43复制的能力进行了评估。结果显示, 夫拉平度在BHK21细胞上有效抑制HCoV-OC43, EC₅₀为0.12 μmol·L^-1, TI大于83.33, 其抗病毒活性优于阳性对照瑞德西韦, 并且兼具低细胞毒性(图 4)。

本研究发现, 夫拉平度显著抑制SARS-CoV-2 RNA聚合酶RdRp活性(图 2A) 以及病毒正链和负链RNA合成(图 3A)。基于前期研究结果, 课题组推测夫拉平度通过抑制CDK2活性, 阻断nsp12的磷酸化和病毒RNA合成。此外, 夫拉平度能够通过抑制CDK9/cyclin T (positive transcription elongation factor b, P-TEFb) 的活性, 从而阻止RNA聚合酶Ⅱ C端结构域的磷酸化, 进而导致转录抑制^[26]。HIV TAT蛋白^[27]、DENV C蛋白^[28]及IAV RdRp^[29]等多种病毒蛋白与P-TEFb相互作用, 促进自身基因组的转录和复制。目前, 尚不清楚P-TEFb是否也参与了冠状病毒RNA的合成, 因此也不排除夫拉平度通过抑制P-TEFb活性从而抑制病毒复制。

据文献报道, 夫拉平度对包括淋巴癌、前列腺癌、乳腺癌、白血病等多种癌症有效^[30]。夫拉平度在实体瘤的Ⅰ临床试验研究中发现其剂量限制性毒性是分泌性腹泻, 在50和78 mg·m^-2·d^-1时, 平均稳态血药浓度分别为278和390 nmol·L^-1[31]。本研究发现, 夫拉平度抑制SARS-CoV-2 RdRp活性的EC₅₀为100 nmol·L^-1 (图 2A), 抑制HCoV-OC43病毒复制的EC₅₀为120 nmol·L^-1 (图 4A), 提示夫拉平度应用于抗冠状病毒具有一定的可能性, 但仍需要体内实验证明。

总而言之, 本结果表明, 夫拉平度显著抑制SARS-CoV-2 RdRp活性, 同时, 其对HCoV-OC43复制表现出强烈抑制作用, 提示夫拉平度是一种潜在的抗冠状病毒药物。CDKs通过周期调控和转录抑制等方面对病毒复制产生影响, 成为一类极具潜力的抗病毒治疗靶点。本研究为夫拉平度治疗冠状病毒感染提供了理论依据, 将进一步推动夫拉平度抗病毒感染研究。

作者贡献: 王丽丹负责实验操作、数据处理和文章撰写; 郭赛赛负责实验设计与数据分析; 岑山负责研究课题监管、论文审阅与修改。

利益冲突: 所有作者均声明不存在利益冲突。

基金

收起

中国医学科学院医学与健康科技创新工程(2021-I2M-1-038)

参考文献

收起

文献

收起

参考文献引证文献

排序方式：

[1]

Cui J, Li F, Shi ZL. Origin and evolution of pathogenic coronaviruses [J]. Nat Rev Microbiol, 2019, 17: 181-192.

[2]

Wang XY, Peng C, Yang YQ, et al. Research progress on active compounds against pathogenic coronaviruses and their potential target proteins [J]. Acta Pharm Sin (药学学报), 2020, 55: 2340-2357.

[3]

Wu F, Zhao S, Yu B, et al. A new coronavirus associated with human respiratory disease in China [J]. Nature, 2020, 579: 265-269.

[4]

Weil AR. Public health during COVID-19 and more [J]. Health Aff (Millwood), 2023, 42: 309.

[5]

Parums DV. Editorial: the XBB. 1.5 ('Kraken') subvariant of Omicron SARS-CoV-2 and its rapid global spread [J]. Med Sci Monit, 2023, 29: e939580.

[6]

Wang Y, Long Y, Wang F, et al. Characterization of SARS-CoV-2 recombinants and emerging Omicron sublineages [J]. Int J Med Sci, 2023, 20: 151-162.

[7]

Liu QY, Wang XL. Strategies for the development of drugs targeting novel coronavirus 2019-nCoV [J]. Acta Pharm Sin (药学学报), 2020, 55: 181-188.

[8]

Hoffmann M, Kleine-Weber H, Schroeder S, et al. SARS-CoV-2 cell entry depends on ACE2 and TMPRSS2 and is blocked by a clinically proven protease inhibitor [J]. Cell, 2020, 181: 271-280.

[9]

Jeong JH, Choi JH, Kim BK, et al. Evaluating Z-FA-FMK, a host cathepsin L protease inhibitor, as a potent and broad-spectrum antiviral therapy against SARS-CoV-2 and related coronaviruses [J]. Antiviral Res, 2023, 216: 105669.

[10]

Huang TG, Sun L, Zhan P, et al. Recent advances in the research of broad-spectrum antiviral agents [J]. Acta Pharm Sin (药学学报), 2020, 55: 679-693.

[11]

Lim S, Kaldis P. CDKs, cyclins and CKIs: roles beyond cell cycle regulation [J]. Development, 2013, 140: 3079-3093.

[12]

Gutierrez-Chamorro L, Felip E, Ezeonwumelu IJ, et al. Cyclin-dependent kinases as emerging targets for developing novel antiviral therapeutics [J]. Trends Microbiol, 2021, 29: 836-848.

[13]

Cribier A, Descours B, Valadão AL, et al. Phosphorylation of SAMHD1 by cyclin A2/CDK1 regulates its restriction activity toward HIV-1 [J]. Cell Rep, 2013, 3: 1036-1043.

[14]

Zhao ZY, Tang KW, Muylaert I, et al. CDK9 and SPT5 proteins are specifically required for expression of herpes simplex virus 1 replication-dependent late genes [J]. J Biol Chem, 2017, 292: 15489-15500.

[15]

He Y, Xu K, Keiner B, et al. Influenza A virus replication induces cell cycle arrest in G0/G1 phase [J]. J Virol, 2010, 84: 12832-12840.

[16]

Guo S, Lei X, Chang Y, et al. SARS-CoV-2 hijacks cellular kinase CDK2 to promote viral RNA synthesis [J]. Signal Transduct Target Ther, 2022, 7: 400.

[17]

Schang LM. Advances on cyclin-dependent kinases (CDKs) as novel targets for antiviral drugs [J]. Curr Drug Targets Infect Disord, 2005, 5: 29-37.

[18]

Pumfery A, de la Fuente C, Berro R, et al. Potential use of pharmacological cyclin-dependent kinase inhibitors as anti-HIV therapeutics [J]. Curr Pharm Des, 2006, 12: 1949-1961.

[19]

Wang SX, Zhang JJ, Ye X. Protein kinase inhibitor flavopiridol inhibits the replication of influenza virus in vitro [J]. Acta Microbiol Sin (微生物学报), 2012, 52: 1137-1142.

[20]

Zhao J, Guo S, Yi D, et al. A cell-based assay to discover inhibitors of SARS-CoV-2 RNA dependent RNA polymerase [J]. Antiviral Res, 2021, 190: 105078.

[21]

Shen L, Yang Y, Ye F, et al. Safe and sensitive antiviral screening platform based on recombinant human coronavirus OC43 expressing the luciferase reporter gene [J]. Antimicrob Agents Chemother, 2016, 60: 5492-5503.

[22]

Martin CK, Samolej J, Olson AT, et al. Vaccinia virus arrests and shifts the cell cycle [J]. Viruses, 2022, 14: 431.

[23]

Asghar U, Witkiewicz AK, Turner NC, et al. The history and future of targeting cyclin-dependent kinases in cancer therapy [J]. Nat Rev Drug Discov, 2015, 14: 130-146.

[24]

Goel S, DeCristo MJ, McAllister SS, et al. CDK4/6 inhibition in cancer: beyond cell cycle arrest [J]. Trends Cell Biol, 2018, 28: 911-925.

[25]

Wild M, Hahn F, Brückner N, et al. Cyclin-dependent kinases (CDKs) and the human cytomegalovirus-encoded CDK ortholog pUL97 represent highly attractive targets for synergistic drug combinations [J]. Int J Mol Sci, 2022, 23: 2493.

[26]

Chen R, Keating MJ, Gandhi V, et al. Transcription inhibition by flavopiridol: mechanism of chronic lymphocytic leukemia cell death [J]. Blood, 2005, 106: 2513-2519.

[27]

Ali A, Ghosh A, Nathans RS, et al. Identification of flavopiridol analogues that selectively inhibit positive transcription elongation factor (P-TEFb) and block HIV-1 replication [J]. Chembiochem, 2009, 10: 2072-2080.

[28]

Li LL, Hu ST, Wang SH, et al. Positive transcription elongation factor b (P-TEFb) contributes to dengue virus-stimulated induction of interleukin-8 (IL-8) [J]. Cell Microbiol, 2010, 12: 1589-1603.

[29]

Zhang J, Li G, Ye X. Cyclin T1/CDK9 interacts with influenza A virus polymerase and facilitates its association with cellular RNA polymerase Ⅱ [J]. J Virol, 2010, 84: 12619-12627.

[30]

Joshi H, Tuli HS, Ranjan A, et al. The pharmacological implications of flavopiridol: an updated overview [J]. Molecules, 2023, 28: 7530.

[31]

Rudek MA, Bauer KS Jr, Lush RM 3rd, et al. Clinical pharmacology of flavopiridol following a 72-hour continuous infusion [J]. Ann Pharmacother, 2003, 37: 1369-1374.

2024年第59卷第5期

PDF下载

204

引用本文

BibTeX

文章信息

doi: 10.16438/j.0513-4870.2024-0039

接收时间：2024-01-12
首发时间：2025-11-27
出版时间：2024-05-12

补充材料

相关文章

文章信息

作者

出版历史

收稿日期：2024-01-12
修回日期：2024-02-22

基金

中国医学科学院医学与健康科技创新工程(2021-I2M-1-038)

作者信息

中国医学科学院、北京协和医学院医药生物技术研究所, 北京 100050

通讯作者:

^*岑山, Tel: 86-10-63037279, E-mail: shancen@imb.pumc.edu.cn

参考文献

分享链接

https://castjournals.cast.org.cn/joweb/yxxb/CN/10.16438/j.0513-4870.2024-0039

分享至

全文二维码

扫描看全文

引用本文

BibTeX

本文的引用情况

2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

关闭全屏

BibTeX
EndNote
RefWorks
TxT