药学学报

白藜芦醇抑制单钠尿酸盐诱导RAW264.7巨噬细胞氧化损伤的机制

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冯佳 ¹ , 黄侠 ² , 李赫宇 ³ , 鞠单 ² , 杨年安 ¹ , 田瑞 ¹ , 夏燕 ¹ , 袁林 ¹^,^*

药学学报 | 研究论文 2020,55(10): 2368-2374

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药学学报 | 研究论文 2020, 55(10): 2368-2374

白藜芦醇抑制单钠尿酸盐诱导RAW264.7巨噬细胞氧化损伤的机制

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冯佳¹, 黄侠², 李赫宇³, 鞠单², 杨年安¹, 田瑞¹, 夏燕¹, 袁林¹^,^*

作者信息

1.湖北民族大学, 风湿性疾病发生与干预湖北省重点实验室, 湖北恩施 445000

2.湖北民族大学附属民大医院, 湖北恩施 445000

3.天津益倍生物科技集团有限公司, 天津 300000

通讯作者:

*袁林, Tel:86-718-8301984, E-mail:linyuanchina@126.com

Mechanism of resveratrol inhibiting monosodium urate induced oxidative damage of RAW264.7 macrophages

Jia FENG¹, Xia HUANG², He-yu LI³, Dan JU², Nian-an YANG¹, Rui TIAN¹, Yan XIA¹, Lin YUAN¹^,^*

Affiliations

1. Hubei Provincial Key Laboratory of Occurrence and Intervention of Rheumatic Diseases, Hubei University for Nationalities, Enshi 445000, China

2. University Hospital of Hubei University for Nationalities, Enshi 445000, China

3. Tianjin Ubasio Biotechnology Group Co. Ltd., Tianjin 300000, China

出版时间: 2020-10-12 doi: 10.16438/j.0513-4870.2020-0065

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摘要

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探讨白藜芦醇对单钠尿酸盐（monosodium urate，MSU）晶体诱导小鼠RAW264.7巨噬细胞的炎症因子、氧化应激指标及核因子E2相关因子2（nuclear factor erythroid-2-related factor 2，Nrf2）/血红素氧合酶1（heme oxygenase 1，HO-1）信号通路相关基因的作用机制，为急性痛风性关节炎（acute gouty arthritis，AGA）的治疗提供理论依据。使用不同浓度白藜芦醇作用于RAW264.7细胞5 h后，再加入MSU刺激24 h。采用CCK-8法检测白藜芦醇对RAW264.7细胞增殖的作用；ELISA法检测细胞分泌肿瘤坏死因子α（tumour necrosis factor-α， TNF-α）水平；应用2'，7'-二氯荧光素二乙酸酯（2'，7'-dichlorodi-hydrofluorescein diacetate，DCFH-DA）探针法检测细胞内活性氧自由基（reaction oxygen species，ROS）；测定细胞内超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）和丙二醛（malonaldehyde，MDA）含量；实时荧光定量PCR（real-time PCR）法检测Nrf2、Kelch样ECH相关蛋白1（Kelch-like ECH-associated protein 1，Keap1）、醌氧化还原酶1[NAD（P）H quinine oxidoreductase 1，NQO1]和HO-1 mRNA的表达。结果显示，白藜芦醇能够抑制RAW264.7细胞增殖；明显抑制MSU诱导RAW264.7细胞分泌的TNF-α水平；明显抑制MSU诱导RAW264.7细胞内的ROS、MDA表达，增加SOD表达；降低MSU诱导RAW264.7细胞内的Keap1 mRNA表达，增高Nrf2、NQO1和HO-1 mRNA的表达。综上，白藜芦醇能够抑制MSU诱导RAW264.7巨噬细胞产生的炎症反应，并通过调节Nrf2/HO-1信号通路提高巨噬细胞抗氧化能力。

关键词

白藜芦醇 / 痛风性关节炎 / 巨噬细胞 / 核因子E2相关因子2/血红素氧合酶1 / 氧化应激

Abstract

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The aim of this research is to investigate the effects of resveratrol on the inflammatory factors, oxidative stress indexes and the related genes of nuclear factor erythroid-2-related factor 2 (Nrf2)/heme oxygenase-1 (HO-1) signaling pathway in RAW264.7 macrophages induced by monosodium urate (MSU) and to provide a theoretical basis for the treatment of acute gouty arthritis (AGA). Different concentrations of resveratrol were used to treat RAW264.7 cells for 5 hours, then MSU was added to stimulate them for 24 hours. The proliferation of RAW264.7 cells were detected by CCK-8 method. The level of tumor necrosis factor α secreted by cells were detected by ELISA method. The content of reaction oxygen species (ROS) in cells were detected by 2', 7'-dichlorodi-hydrofluorescein diacetate (DCFH-DA) probe method. The contents of superoxide dismutase (SOD) and malonaldehyde (MDA) in cells were detected by the kits. The expression of Nrf2, Kelch like ECH related protein 1 (Keap1), NAD(P)H quinone oxidoreductase 1 (NQO1), HO-1 mRNA were detected by real time PCR method. The results showed that resveratrol could inhibit the proliferation of RAW264.7 cells, significantly inhibit the TNF-α level of RAW264.7 cells induced by MSU, significantly inhibit the expression of ROS and MDA, and increase the expression of SOD in RAW264.7 cells induced by MSU. Resveratrol could reduce the expression of Keap1 mRNA in RAW264.7 cells induced by MSU, and increase the expression of Nrf2, NQO1, HO-1 mRNA. It is suggested that resveratrol can inhibit the inflammatory response of RAW264.7 macrophages induced by MSU, and improve the antioxidant capacity of macrophages by regulating Nrf2/HO-1 signal pathway.

Key words

resveratrol / gouty arthritis / macrophage / nuclear factor erythroid 2-related factor 2/heme oxygenase-1 / oxidative stress

引用本文

冯佳, 黄侠, 李赫宇, 鞠单, 杨年安, 田瑞, 夏燕, 袁林. 白藜芦醇抑制单钠尿酸盐诱导RAW264.7巨噬细胞氧化损伤的机制. 药学学报, 2020 , 55 (10) : 2368 -2374 . DOI: 10.16438/j.0513-4870.2020-0065

Jia FENG, Xia HUANG, He-yu LI, Dan JU, Nian-an YANG, Rui TIAN, Yan XIA, Lin YUAN. Mechanism of resveratrol inhibiting monosodium urate induced oxidative damage of RAW264.7 macrophages[J]. Acta Pharmaceutica Sinica, 2020 , 55 (10) : 2368 -2374 . DOI: 10.16438/j.0513-4870.2020-0065

正文

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急性痛风性关节炎(acute gouty arthritis, AGA)是单钠尿酸盐(monosodium urate, MSU)晶体沉积于关节及关节周围组织引起的一种急性炎症性反应^[1]。目前认为巨噬细胞吞噬MSU是AGA炎症过程的核心^[2]。沉积于人体内的MSU能与巨噬细胞等多种细胞发生反应, 合成和分泌肿瘤坏死因子α (tumour necrosis factor-α, TNF-α)等多种炎性因子, 从而引起炎症反应和组织破坏, 同时抑制炎症细胞凋亡进一步影响AGA的发展^[3]。研究发现氧化应激在AGA急性炎症反应的发生发展过程中发挥重要作用^[4]。当机体受到氧化应激刺激时能够激活核因子E2相关因子2 (nuclear factor erythroid-2-related factor 2, Nrf2)信号通路, 激活下游靶蛋白表达^[5]。有研究证实MSU能够刺激RAW264.7巨噬细胞产生炎症因子, 还能诱导大鼠出现疼痛加剧的反应并产生白介素-1β (interleukin-1β, IL-1β)和TNF-α, 可能通过Nrf2途径激活氧化应激反应^[6]。白藜芦醇(resveratrol)又名茋三酚, 是一种存在于葡萄、虎杖、蓝莓和桑椹等植物中的多酚化合物, 是天然的抗氧化剂和自由基清除剂, 具有抗炎、抗氧化、抗菌、心脏保护和抗肿瘤等多种治疗作用^[7]。研究发现白藜芦醇能够明显减轻AGA小鼠足部肿胀, 并减少炎性细胞浸润^[8]; 能够通过Nrf2/血红素氧合酶1 (heme oxygenase 1, HO-1)信号通路发挥抗氧化作用^[9]。对于白藜芦醇能否通过Nrf2/HO-1信号通路抑制MSU诱导炎症模型的氧化损伤尚未见相关报道。本实验使用MSU诱导RAW264.7巨噬细胞建立炎症细胞模型, 观察不同浓度白藜芦醇对MSU诱导RAW264.7巨噬细胞的炎症因子、氧化应激指标及Nrf2/HO-1信号通路相关基因的影响, 探讨白藜芦醇的抗炎及抗氧化作用机制, 为AGA的治疗提供理论依据。

材料与方法

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材料小鼠RAW264.7巨噬细胞株购自北京北纳创联生物技术研究院; 白藜芦醇由天津益倍生物科技集团有限公司提供, 溶于二甲基亚砜, 储备液浓度400 mmol·L^-1, 使用时用培养基稀释至工作浓度; 0.25%胰酶(浙江森瑞生物科技有限公司, 批号: 1907190101); DMEM培养基(Gibco公司, 批号: 1927561);胎牛血清(澳洲CLARK公司, 批号: JC63483);活性氧自由基(reaction oxygen species, ROS)检测试剂盒(大连美仑生物技术有限公司, 批号: MA0219);鼠TNF-α ELISA试剂盒(Novus Biologicals公司, 批号: VAL609);超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)测定试剂盒(批号: A001-3)、细胞丙二醛(malonaldehyde, MDA)测试盒, 批号: A003-4) (南京建成生物工程有限公司); MSU (美国Sigma公司, 批号: BCBS7438); Cell counting kit-8 (CCK-8, 批号: CK04, 东仁化学科技有限公司); TRIzol Reagent (Ambion公司, 批号: 113605); Prime script RT reagent kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time) (批号: AK4401)及SYBR Premix Ex Taq (Tli RNase H Plus, 批号: AK8904) (TaKaRa公司); BCA蛋白浓度测定试剂盒(上海碧云天生物技术有限公司, 批号: P0012S); 引物购自上海生物工程技术服务有限公司。

仪器 OD-1000+超微量分光光度计(南京五义科技有限公司); 5810R高速冷冻离心机(德国Eppendorf公司); MULTISKAN GO酶标检测仪(德国Thermo公司); LC480实时荧光定量PCR仪(Roche公司); 电泳仪(美国Bio-Rad公司); IX71荧光倒置显微镜(日本Olympus公司)。

细胞培养 使用含10%胎牛血清的DMEM培养RAW264.7细胞, 置于37 ℃、5% CO₂培养箱中培养。实验共分5组:对照组、MSU组(MSU终浓度为100 μg·mL^-1)、白藜芦醇20 μmol·L^-1组、40 μmol·L^-1组和80 μmol·L^-1组, 每组重复3次。

MSU制备 参考文献^[10]方法将尿酸盐1 g和NaOH溶液(1 mol·L^-1) 6 mL加至194 mL蒸馏水中, 煮沸, 使尿酸盐完全溶解, 自然降温并搅拌, 滴入HCl (1 mol·L^-1)调pH值至7.2, 3 000 r·min^-1离心20 min, 取沉淀, 再3 000 r·min^-1离心至沉淀不再析出, 60 ℃烘干, 置4 ℃冰箱保存。实验前取MSU置于180 ℃干燥箱干燥2 h, 称取干燥MSU 100 mg, 高压灭菌烘干后, 加入DMEM培养液10 mL, 配制成质量浓度为10 mg·mL^-1的MSU溶液。

CCK-8法检测细胞增殖 用含10%胎牛血清的DMEM培养液将RAW264.7巨噬细胞数调整为5×10⁴个/mL, 接种于96孔板中每孔100 μL, 3个复孔, 细胞贴壁后加入不同浓度白藜芦醇(终浓度为10、20、40、80、120、160、200 μmol·L^-1)作用24及48 h后, 弃上清, 每孔加入含10 μL CCK-8溶液的DMEM 100 μL, 放置培养箱内孵育2 h。用酶标仪测定各组在450 nm波长处的吸光度值(OD), 计算细胞存活率(CV)。

(1)${\rm{CV}}\left( ％ \right) = \left( {{\rm{O}}{{\rm{D}}_{实验组}} - {\rm{O}}{{\rm{D}}_{空白孔}}} \right)/\left( {{\rm{O}}{{\rm{D}}_{{\rm{对照组}}}} - {\rm{O}}{{\rm{D}}_{{\rm{空白孔}}}}} \right) \times 100％ $

ELISA法检测细胞上清TNF-α水平 将RAW264.7巨噬细胞接种于96孔板中, 每孔5×10³个, 加入不同浓度白藜芦醇(终浓度为20、40、80 μmol·L^-1)作用5 h后, 加入MSU终浓度100 μg·mL^-1作用24 h, 收集细胞上清, 4 ℃、3 000 r·min^-1离心10 min后, 按鼠TNF-α ELISA检测试剂盒说明书检测细胞上清中TNF-α水平。

ROS检测 将RAW264.7巨噬细胞接种于96孔板, 上述5组细胞培养24 h后, 去除上清, 用无血清DMEM培养基清洗细胞1次, 加入10 μmol·L^-1 DCFH-DA稀释液100 μL, 37 ℃下培养箱中避光孵育30 min, 用无血清DMEM清洗细胞3次, 充分去除未进入细胞内的DCFH-DA, 在荧光显微镜下观察。

SOD和MDA检测 将RAW264.7巨噬细胞接种于6孔板, 上述5组细胞培养24 h后, 去除上清, 收集各组细胞并检测细胞蛋白浓度。按说明书检测, 计算SOD (U·mg^-1)、MDA (nmol·mg^-1)含量。

(2)${\rm{SOD活力 = }}\left[ {\left( {{\rm{SOD抑制率/50％ }}} \right) \times 反应体系稀释倍数} \right]/样本蛋白浓度$

(3)${\rm{MDA含量 = }}\left[ {\left( {{\rm{O}}{{\rm{D}}_{样本}} - {\rm{O}}{{\rm{D}}_{空白}}} \right)\left( {{\rm{O}}{{\rm{D}}_{标准}} - {\rm{O}}{{\rm{D}}_{空白}}} \right) \times 标准品浓度} \right]/样本蛋白浓度$

Real-time PCR法检测mRNA表达 收集各组细胞, 按照TRIzol Reagent说明书提取RNA, 测定RNA纯度及浓度, A260/A280比值为1.8~2.0。按逆转录试剂盒说明书合成cDNA, 反应条件: 42 ℃ 2 min、37 ℃ 15 min和85 ℃ 5 s。cDNA储存于-20℃。引物序列如下, Nrf2上游引物:5'-CCATTTACGGAGACCCAC-3', 下游引物: 5'-GGATTCACGCATAGGAGC-3';醌氧化还原酶1 [NAD(P)H quinoneoxidoreductase 1, NQO1]上游引物: 5'-GAGAAGAGCCCTGATTGT-3', 下游引物: 5'-AAAGGACCGTTGTCGTAC-3'; Kelch样ECH相关蛋白1 (Kelch-like ECH-associated protein 1, Keap1)上游引物: 5'-GGTCGCCCTGTGCCTCTAT-3', 下游引物: 5'-ACGCCAATCCTCCGTGTC-3'; HO-1上游引物: 5'-AGATGGCGTCACTTCGTC-3', 下游引物: 5'-GGC AAGATTCTCCCTTACAG-3'; GAPDH上游引物:5'-CCCTTCATTGACCTCAACTACATG-3', 下游引物:5'-TGGGATTTCCATTGATGACAAGC-3'。RT-RCP反应体系10 μL, 反应条件: 95 ℃预变性30 s、95 ℃变性5 s、58 ℃退火30 s和72 ℃延伸30 s, 40个循环。基因表达量以2^-△△CT表示实验组目的基因表达相对于对照组的变化倍数。

统计学方法 使用SPSS19.0统计软件分析数据, 计量资料以均数±标准差(x ± s)表示, 对符合正态分布满足方差齐性的采用单因素方差分析(ANOVA)进行组间两两比较, 不符合的采用非参数(秩和)检验, P < 0.05表示差异有统计学意义。

结果

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1 白藜芦醇对RAW264.7巨噬细胞增殖的影响

如图 1所示, 20、40、80和160 μmol·L^-1白藜芦醇作用于RAW264.7巨噬细胞24 h, 细胞存活率分别为101.08%、89.97%、72.81%和46.08%;作用48 h后, 细胞存活率均有所降低, 分别为89.01%、61.44%、36.31%和19.64%。结果说明, 白藜芦醇能够抑制RAW264.7巨噬细胞增殖, 在24和48 h的IC₅₀值分别为144.51和78.84 μmol·L^-1, 具有浓度及时间依赖性。为避免药物的细胞毒性影响, 本研究选择细胞存活率大于70%的白藜芦醇的浓度20、40和80 μmol·L^-1、作用时间为24 h, 进行后续实验。

2 白藜芦醇对MSU诱导RAW264.7巨噬细胞分泌TNF-α水平的影响

如图 2所示, 与对照组相比, MSU组细胞上清中TNF-α水平明显增高(P < 0.05);加入20、40和80 μmol·L^-1白藜芦醇后, TNF-α水平均降低; 与MSU组相比, 80 μmol·L^-1白藜芦醇降低最为明显(P < 0.05)。结果提示, MSU能够诱导RAW264.7巨噬细胞炎症反应的发生, 白藜芦醇能明显抑制MSU诱导RAW264.7巨噬细胞分泌TNF-α水平。

3 白藜芦醇对MSU诱导RAW264.7巨噬细胞内ROS、SOD和MDA含量的影响

如图 3所示, 与对照组相比, MSU组细胞内ROS和MDA含量明显增高(P < 0.05), SOD含量明显减少(P < 0.05);加入20、40和80 μmol·L^-1白藜芦醇后, ROS及MDA表达均有所降低, SOD含量均增高; 与MSU组相比, 80 μmol·L^-1白藜芦醇作用最为明显(P < 0.05)。结果提示, MSU能够促进RAW264.7巨噬细胞的氧化应激反应, 白藜芦醇能明显抑制MSU所诱导的氧化应激。

4 白藜芦醇对MSU诱导RAW264.7巨噬细胞内Nrf2、Keap1、NQO1和HO-1 mRNA表达量的影响

如图 4A~D所示, 与对照组相比, MSU组细胞内Keap1 mRNA表达量明显增高(P < 0.05), Nrf2、NQO1和HO-1 mRNA表达量均明显减少(P < 0.05);加入20、40和80 μmol·L^-1白藜芦醇后, Keap1 mRNA表达量降低, Nrf2、NQO1和HO-1 mRNA表达量均增高, 白藜芦醇80 μmol·L^-1组Keap1 mRNA表达量为MSU组的0.746倍(P < 0.05), Nrf2、NQO1和HO-1 mRNA表达量分别为MSU组的2.176、3.237和16.76倍(P < 0.05), 作用最为明显。结果提示, MSU能够激活Keap1/Nrf2信号通路, 白藜芦醇通过抑制Keap1 mRNA表达, 增加Nrf2、NQO1和HO-1 mRNA的表达起到抗氧化作用。

讨论

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痛风是由于嘌呤代谢紊乱所致的一组慢性炎症性疾病, AGA是痛风最常见的首发症状^[11]。MSU是AGA的关键诱导因素, 其诱导的炎症是痛风的病理基础^[12]。单核巨噬细胞系统在MSU触发的痛风炎症启动、进展及缓解中均起到核心作用^[13]。研究发现, MSU可直接刺激单核/巨噬细胞产生TNF-α, 从而促发痛风炎性反应^[14]。在MSU诱导的AGA模型中, 通过阻断TNF-α的产生能明显抑制内皮细胞的激活和多形核白细胞的募集, 从而抑制炎症的发生^[15]。说明TNF-α在AGA的发生、发展中起着极其重要的作用。本实验使用MSU刺激RAW264.7巨噬细胞, 发现细胞上清中TNF-α水平明显增高, 说明MSU能够通过诱导RAW264.7巨噬细胞炎症反应的发生, 建立炎症细胞模型。

白藜芦醇广泛存在于自然界植物中, 多项研究证明其具有治疗痛风的作用, 但具体机制尚未阐明^[16]。Xiao等^[17]认为白藜芦醇可能通过促进巨噬细胞M2极化, 抑制炎性因子产生, 缓解小鼠AGA。本实验使用不同浓度白藜芦醇作用于RAW264.7细胞, 发现白藜芦醇能抑制RAW264.7巨噬细胞增殖, 具有浓度和时间依赖性, 并发现白藜芦醇能明显抑制MSU诱导RAW264.7巨噬细胞分泌的TNF-α水平, 以80 μmol·L^-1作用最为明显, 说明白藜芦醇能抑制MSU所诱导的细胞炎症反应的发生。

氧化应激损伤主要由活性氧物质所致, 当机体受到外来刺激干扰, 会加速ROS形成, 并加剧脂质氧化反应。MDA是脂质过氧化产物, 含量的大小可反映机体内脂质过氧化的程度, 间接地反映出细胞损伤的程度^[18]。大量ROS和MDA的产生能够导致关节的损伤, 出现剧烈疼痛和功能障碍。SOD是抗氧化防御系统的重要组成部分, 能够清除机体内过多的ROS和MDA, 具有保护细胞和组织的作用, SOD活力的高低间接反映了机体抗氧化应激能力^[19]。本实验证实, MSU能明显增高RAW264.7巨噬细胞内ROS和MDA含量, 并显著降低SOD含量, 说明MSU能够促进RAW264.7巨噬细胞的氧化应激反应。研究发现, 使用过氧化氢(H₂O₂)诱导THP-1源性巨噬细胞氧化损伤模型, 白藜芦醇能使氧化损伤巨噬细胞MDA含量明显下降, SOD活力性显著升高, 并明显降低巨噬细胞的IL-1β、IL-6和TNF-α表达^[20]。还有研究发现佐剂性关节炎(AA)大鼠存在氧化应激, 白藜芦醇能够显著降低AA大鼠足肿胀度, 降低MDA含量, 提高SOD活性, 发挥抗氧化能力^[21]。本实验以RAW264.7巨噬细胞为研究对象, 发现白藜芦醇能明显抑制MSU诱导RAW264.7巨噬细胞内的ROS和MDA表达, 增加SOD表达, 以80 μmol·L^-1浓度作用最为明显。说明白藜芦醇能够明显抑制MSU所诱导的氧化应激。

Nrf2信号通路为重要的内源性抗氧化通路, Nrf2是调节体内氧化应激进行自我保护并与炎症相关的关键转录因子, 几乎在全身各组织器官中都有表达^[22]。静息状态下, Nrf2与胞质中的Keap1相结合, 处于非活性状态; 当机体受到其他亲核物质刺激或处于氧化应激状态时, Nrf2与Keap1解偶联后转入核内, 与抗氧化反应元件(ARE)结合, 激活NQO1和HO-1等下游Ⅱ相代谢酶及抗氧化蛋白基因的表达, 以减少氧化损伤, 发挥保护细胞的作用^[23]。HO-1是血红素降解的限速酶, 在抗炎和抗氧化性组织损伤中具有重要作用^[24]。NQO1在胞浆内属于Ⅱ相抗氧化解毒酶, 能阻止氧化应激反应, 并减少ROS的产生, 使细胞免受氧化损伤^[25]。研究发现, 白藜芦醇能够抑制脂多糖(LPS)诱导RAW264.7巨噬细胞所产生的炎症因子, 并促进HO-1表达^[26]。白藜芦醇还能抑制黄曲霉毒素B1诱导的MAC-T牛乳腺上皮细胞ROS升高, 并通过Nrf2信号通路发挥抗氧化作用^[27]。本实验使用MSU刺激RAW264.7巨噬细胞, 明显增高细胞内Keap1mRNA表达, 明显减少Nrf2、NQO1和HO-1mRNA表达量。说明MSU能够激活RAW264.7巨噬细胞Keap1/Nrf2信号通路。白藜芦醇干预后, Keap1 mRNA表达量降低, Nrf2、NQO1和HO-1 mRNA表达量均增高, 以80 μmol·L^-1浓度作用最为明显。说明白藜芦醇能够通过Keap1/Nrf2信号通路起到抗氧化作用。

综上, 白藜芦醇能抑制MSU诱导RAW264.7巨噬细胞产生的炎症反应, 并通过调节Nrf2/HO-1信号通路提高巨噬细胞抗氧化能力, 为白藜芦醇防治AGA提供了实验依据。

作者贡献:冯佳、袁林负责提出研究选题及设计研究方案; 冯佳、黄侠、鞠单负责实施研究过程; 李赫宇负责材料支持; 杨年安、田瑞负责采集整理数据; 冯佳、夏燕负责起草、修改论文; 袁林负责技术指导

利益冲突:本研究不存在研究者与公开研究成果有关的利益冲突

基金

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湖北省重点实验室开放基金项目(OIR19002A)
湖北省教育厅科学研究计划资助项目(Q20191901)

参考文献

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文献

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参考文献引证文献

排序方式：

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2020年第55卷第10期

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doi: 10.16438/j.0513-4870.2020-0065

接收时间：2020-01-17
首发时间：2026-01-23
出版时间：2020-10-12

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作者

出版历史

收稿日期：2020-01-17
修回日期：2020-05-07

基金

湖北省重点实验室开放基金项目(OIR19002A)

湖北省教育厅科学研究计划资助项目(Q20191901)

作者信息

1.湖北民族大学, 风湿性疾病发生与干预湖北省重点实验室, 湖北恩施 445000

2.湖北民族大学附属民大医院, 湖北恩施 445000

3.天津益倍生物科技集团有限公司, 天津 300000

通讯作者:

*袁林, Tel:86-718-8301984, E-mail:linyuanchina@126.com

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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