药学学报

Sample ID	Manufacturer	Batch No.	Price (Yuan)	Specification
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CPM014	Company 6	180206	5.9	69 tablets
CPM015	Company 7	2180903	16.0	0.57g*60 tablets
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Marker	Primer	5′-3′ sequence
ITS2	ITS2F	ATGCGATACTTGGTGTGAAT
	ITS3R	GACGCTTCTCCAGACTACAAT
COI	LCO1490	GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG
	HCO2198	TAAACTTTCAGGGTGACCAAAAAATCA
	LCO282	TTTGATTACTTCCTCCCTC
	HCO595	TTGCTCCAGCTAATACAGG
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Marker	Primer	5′-3′ sequence
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Sample ID	Plant Genomic DNA Extraction Kit		Animal Genomic DNA Extraction Kit
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普乐安片DNA条形码分子鉴定研究

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魏妙洁 ¹^,³ , 刘金欣 ² , 赵晴 ² , 徐晓兰 ⁴ , 任萍 ⁵ , 李明玥 ² , 石林春 ¹^,²^,^* , 孙伟 ¹^,^*

药学学报 | 研究论文 2020,55(6): 1327-1333

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药学学报 | 研究论文 2020, 55(6): 1327-1333

普乐安片DNA条形码分子鉴定研究

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魏妙洁¹^,³, 刘金欣², 赵晴², 徐晓兰⁴, 任萍⁵, 李明玥², 石林春¹^,²^,^*, 孙伟¹^,^*

作者信息

1.中国中医科学院中药研究所, 北京 100700

2.中国医学科学院、北京协和医学院药用植物研究所, 北京 100193

3.中央民族大学药学院, 北京 100081

4.福建农林大学动物科学学院 (蜂学学院), 福建福州 350002

5.中国农业科学院农业资源与农业区划研究所, 北京 100081

通讯作者:

*石林春, Tel:86-10-57833194, E-mail:linchun_shi@163.com;

孙伟, Tel:86-10-84017374, E-mail:wsun@icmm.ac.cn

Identification of Pule'an Tablets based on DNA barcoding molecular technology

Miao-jie WEI¹^,³, Jin-xin LIU², Qing ZHAO², Xiao-lan XU⁴, Ping REN⁵, Ming-yue LI², Lin-chun SHI¹^,²^,^*, Wei SUN¹^,^*

Affiliations

1. Institute of Chinese Materia, China Academy of Chinese Medical Sciences, Beijing 100700, China

2. Institute of Medicinal Plant Development, Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College, Beijing 100193, China

3. School of Pharmacy, Minzu University of China, Beijing 100081, China

4. College of Animal Science(College of Bee Science), Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou 350002, China

5. Institute of Agricultural Resources and Regional Planning, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100081, China

出版时间: 2020-06-12 doi: 10.16438/j.0513-4870.2019-1005

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摘要

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建立基于DNA条形码技术的普乐安片处方成分鉴定方法。共收集8个厂家的16份普乐安片样品，分别采用植物和动物基因组DNA提取试剂盒提取样品DNA，所获DNA的ITS2序列扩增成功率均为100%，细胞色素C氧化酶亚基I(COI)序列扩增成功率分别为43.75%和56.25%。对于ITS2序列，12份样品可获得高质量测序峰图，鉴定结果为油菜Brassica campestris，4份样品存在较严重套峰，经克隆测序鉴定为油菜和黑芥B.nigra。对于COI序列通用引物获得的9份PCR产物，其中2份样品可直接进行PCR产物测序，鉴定结果为蚜虫类，7份样品经克隆测序获得82条序列，其中5份样品可检测到意大利蜜蜂Apis mellifera，7份样品均可检测到病原菌或病虫害。为解决COI通用引物因外源污染导致的蜜蜂源检测失败问题，新设计2对蜜蜂属Apis的COI引物，扩增效率均为43.75%，7份PCR产物直接测序的鉴定结果均为意大利蜜蜂A.mellifera。9份未检测到蜜蜂源的普乐安片来自同一厂家生产的3个不同批次，且每个批次含3份样品，推测原料花粉非蜜蜂采集所得。本研究基于ITS2和COI序列建立了普乐安片处方成分的鉴定方法，将为普乐安片的质量控制和市场监管提供科学依据和技术保障。

关键词

普乐安片 / 油菜花粉 / ITS2 / COI / 鉴定

Abstract

收起

This study aimed to establish a method for identification of the prescription components of Pule'an Tablet based on DNA barcoding technology. Sixteen samples have been collected from 8 different companies, and their DNA were purified using Plant and Animal Genomic Kits. The amplification rates of ITS2 were both 100%, and the amplification rates of COI were 43.75% and 56.25% for these samples' DNA purified using plant and animal kits, respectively. For ITS2, 12 samples obtained high-quality sequencing traces and then were identified as containing Brassica campestris. The other 4 samples showed crucial SNP peaks in the sequencing traces, which were assigned to be B. campestris and B. nigra on the basis of cloning and sequencing experiments. For the PCR products of 9 samples from COI universal primers, two samples were directly sequenced and identified as aphids, and 7 other samples were subjected to cloning and sequencing experiments. Finally, we obtained 82 clone sequences and found that Apis mellifera was detected only in 5 of the remaining 7 samples, and pathogens or pests were detected in all these 7 samples. To solve the failure of bee source detection caused by exogenous contaminations based on COI universal primers, we designed two new COI primer pairs of Apis genus. The amplification rates of both primer pairs were 43.75%, and they were identified as A. mellifera. A total of 9 bee source-free Pule'an Tablet samples from 3 different batches were produced by the same company, and each batch contained 3 replicates. Thus, we speculated that raw rape pollen materials for these 9 samples was not collected by bees. This study proposes an identification method for the prescription components of Pule'an Tablets based on ITS2 and COI sequences, which will provide scientific basis and technical guidance for quality control and market regulation of Pule'an Tablets.

Key words

Pule'an Tablets / rape pollen / ITS2 / COI / identification

引用本文

魏妙洁, 刘金欣, 赵晴, 徐晓兰, 任萍, 李明玥, 石林春, 孙伟. 普乐安片DNA条形码分子鉴定研究. 药学学报, 2020 , 55 (6) : 1327 -1333 . DOI: 10.16438/j.0513-4870.2019-1005

Miao-jie WEI, Jin-xin LIU, Qing ZHAO, Xiao-lan XU, Ping REN, Ming-yue LI, Lin-chun SHI, Wei SUN. Identification of Pule'an Tablets based on DNA barcoding molecular technology[J]. Acta Pharmaceutica Sinica, 2020 , 55 (6) : 1327 -1333 . DOI: 10.16438/j.0513-4870.2019-1005

正文

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普乐安片为2015版《中国药典》收载品种, 具有补肾固本作用, 主要用于治疗肾气不固所致的腰膝酸软、排尿不畅、尿后余沥或失禁; 慢性前列腺炎及前列腺增生症见上述证候者^[1]。普乐安片为国内前列腺治疗的一线临床用药, 收录于《国家基本医疗保险、工伤保险和生育保险药品目录》 (甲类)。普乐安片的处方成分为十字花科Brassicaceae芸苔属Brassica油菜B. Campestis的花粉, 经蜜蜂科Apidae昆虫中华蜜蜂A. cerana等工蜂采集所得, 在医药、食品保健品以及化妆品等领域有广泛的应用^[2], 在我国分布范围广、产量大^[3]。现代研究表明, 油菜花粉中含有多种生物活性成分, 如蛋白质、氨基酸、维生素、酚酸类物质、胡萝卜素和脂肪酸等^[4], 具有抗炎、抗氧化、抗过敏、保护心脏, 抑制前列腺增生、抗肿瘤等多种药理作用^{[5, 6]}。2015版《中国药典》收载了普乐安片的显微鉴别法和薄层鉴别法, 用于鉴别普乐安片中的油菜花粉药材, 未提供花粉药材中蜜蜂源的鉴别方法。

中药材DNA条形码分子鉴定法是利用基因组中一段公认的、相对较短的DNA序列来进行物种鉴定的一种分子生物学技术, 是传统形态鉴别方法的有效补充^[7], 已纳入中国^[1]、英国^[8]、日本^[9]等国家药典, 成功应用于药用动植物^{[10, 11]}、中药材^{[12, 13]}、部分饮片^[14], 以及中药材种子种苗^{[15, 16]}和中成药^[17]的鉴别。中药材DNA条形码分子鉴定体系包含以ITS2为核心、psbA-trnH为补充序列的植物类药材鉴定和以COI为核心、ITS2为辅助序列的动物类药材鉴定, 推动了中药鉴定学的发展, 被称为中药鉴定学的“文艺复兴”^[18]。当前, 中成药DNA条形码分子鉴定研究已成为中药鉴定学领域的新热点, 贾静等^[19]基于SMRT测序和DNA条形码技术应用于中成药益母丸的质量控制, 辛天怡等^[20]建立了基于DNA宏条形码和SMRT测序技术的生物监测方法, 并已在市售样品(九味羌活丸)中进行了验证。

本研究收集8个厂家的16份普乐安片样品, 尝试基于ITS2序列对普乐安片的植物源成分进行物种鉴定, 通过COI序列鉴定蜜蜂源, 为普乐安片的质量控制提供科学依据, 以保障其临床用药安全。

材料与方法

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材料共收集8个厂家的16份普乐安片作为待检样品, 其中生产厂家1的9份样品包含3个批次, 每个批次包含3个重复, 样品信息见表 1。油菜样品由中国农业科学院农业资源与农业区划研究所任萍副研究提供和鉴定, 样品号为HS2604~HS2606, ITS2序列登录号为MT062831~MT062833。黑芥的ITS2序列从已发表文献下载, 登录号为AF128102^[21]、AF128102^[21]和DQ340645^[22]。意大利蜂样品由福建农林大学蜂学学院徐晓兰博士提供, 样品号为HS2601-HS2603, COI序列登录号为MT062511~MT062513。

DNA提取及浓度测定 取普乐安片100 mg, 使用球磨仪(Retsch MM400, Germany)研磨2 min (30次/秒), 利用植物基因组DNA提取试剂盒(Tiangen Biotech Co., China)和动物基因组DNA提取试剂盒(Tiangen Biotech Co., China)进行DNA提取, 采用超微量分光光度计(Thermo NanoDrop 2000, USA)进行OD值及A₂₆₀/A₂₈₀比值测定。另取一不含样品的空管按照DNA提取的方法步骤进行操作, 以排除实验室环境中的外源污染。

PCR扩增、克隆及测序 ITS2序列扩增采用通用引物ITS2F/ITS3R^[23], COI序列扩增采用通用引物LCO1490/HCO2198^[23], 以及新设计的两对蜜蜂属COI序列引物LCO282/HCO595和LCO1490-APF/HCO2198-APR, 引物序列详见表 2, ITS2和COI通用引物的扩增条件参照2015版《中国药典》^[23], 新设计的蜜蜂属COI序列引物PCR扩增条件为: 94 ℃ 1 min; 94 ℃ 1 min, 52 ℃ 1.5 min, 72 ℃ 1 min, 40个循环; 72 ℃ 5 min。PCR反应体系为25 μL: 2×PCR mix (Aidlab Biotechnologies Co., China) 12.5 μL, 2.5 mmol·L^-1正反向引物各1 μL, 模板DNA 2 μL, 加灭菌双蒸水至25 μL, 设置未加模板DNA的PCR反应为阴性对照。采用1.5%的琼脂糖凝胶电泳对PCR产物进行检测。

扩增产物经纯化后使用ABI 3730XL (Applied Biosystems Co., USA)测序仪进行双向测序, 直接测序成功的样品提交至GenBank。测序失败的PCR产物进行克隆测序, 具体方法为: PCR产物采用AxyPrep DNA凝胶回收试剂盒(Axygen Biosciences Co., USA)进行胶回收, 回收产物使用pEASY^®-Blunt Cloning Kit (Beijing TransGen Biotech Co., China)与载体进行克隆、连接和转化, 转化菌液在含抗生素培养基的平板上进行过夜培养, 挑选单菌落白斑加入LB液体培养基培养过夜(187 r·min^-1, 37 ℃), 采用AxyPrep质粒DNA小量试剂盒(Axygen Biosciences Co., USA)进行质粒DNA提取并测序。

数据分析 利用CodonCode Aligner V 9.0.1 (CodonCode Co., USA)软件进行序列校对、拼接, 去除低质量序列及引物区。基于隐马尔可夫模型(Hidden Markov model, HMM)去除5.8S rRNA和28S rRNA基因区^[24]。油菜、黑芥和意大利蜂的物种鉴定使用“中药材DNA条形码鉴定系统” (www.tcmbarcode.cn)和参考序列比对完成。病原菌或昆虫等的鉴定使用NCBI的BLAST功能完成(https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)。采用MEGA X软件对得到的ITS2序列进行多序列比对和NJ (Neighbor-Joining)系统发育树构建, 利用Bootstrap (1 000次重复)检验各分支的支持率。

显微鉴别和薄层色谱鉴别 油菜花粉对照药材、β-谷甾醇对照品购自中国食品药品检定研究院。显微鉴别和薄层色谱鉴别方法(通则0502)分别依照2015版《中国药典》I部^[1]和2015版《中国药典》IV部^[23]操作。

结果

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1 普乐安片DNA提取、PCR扩增成功率与测序结果

利用植物基因组DNA提取试剂盒和动物基因组DNA提取试剂盒分别对16份普乐安片样品进行DNA提取, 两类基因组DNA提取试剂盒获得的DNA质量均可满足常规PCR扩增要求, DNA浓度的平均值分别为955和1 200 ng·μL^-1, A₂₆₀/A₂₈₀的平均值分别为1.94和1.99;两类试剂盒提取得到的DNA均可利用ITS2序列的通用引物ITS2F/ITS3R进行PCR扩增, 成功率为100%;对于COI序列通用引物LCO1490/HCO2198, 利用针对植物的基因组DNA提取试剂盒提取得到的DNA可对其中7份样品(CPM010~CPM016)成功进行PCR扩增, 利用动物基因组DNA提取试剂盒提取得到的DNA可对其中9份样品(CPM004、CPM009、CPM010~CPM016)成功进行PCR扩增, 具体结果见表 3, 成功率分别为43.75%和56.25%;对于COI序列的蜜蜂属特异性引物LCO1490-APF/HCO2198-APR和LCO282/HCO595, 利用两类试剂盒提取得到的DNA均仅能对其中7份样品(CPM010-CPM016)成功进行PCR扩增, 见表 3, 成功率为43.75%。此外选取一个不含样品的空管, 按照DNA提取及PCR扩增的方法步骤操作, PCR扩增结果的电泳图显示无条带, 可以排除实验室环境对样品提取可能造成的外源污染。

2 普乐安片植物源成分的基原物种鉴定

采用ITS2序列对普乐安片的植物源成分进行基原物种鉴定, 其中12份(CPM002、CPM003、CPM007~CPM016)普乐安片样品可获得干净的双向测序峰图, 经拼接、注释后可获得一致的ITS2序列, 长度均为191 bp, 无变异位点, 鉴定为油菜B. campestris, GenBank登录号为: MN737602~MN737613; 4份样品(CPM001、CPM004~CPM006)的双向测序峰图存在较为严重的SNP套峰, 拼接后存在11个主要的SNP位点详见图 1。选取可覆盖所有SNP套峰的CPM004进行克隆测序、显微鉴别和薄层色谱鉴别分析, 共获得9条克隆序列, 包含7个单倍型, 鉴定结果显示, 除油菜外还存在黑芥B. nigra, 详见图 2, GenBank登录号为: MN736617~MN736625。显微鉴别和薄层色谱鉴别结果均符合2015版《中国药典》。

3 基于COI序列通用引物的普乐安片蜜蜂源成分鉴定

利用植物和动物两种DNA提取试剂盒, 从16份普乐安片样品中提取DNA, 采用COI序列通用引物LCO1490/HCO2198共获得9份扩增产物, 其中两份样品(CPM004、CPM009)可直接测序获得COI序列, 经NCBI BLAST样品CPM004为铁倍蚜属Kaburagia蚜虫, 样品CPM009为圆角倍蚜属Nurudea蚜虫。对于7份不能直接测序获得COI序列的样品, 采用克隆测序方法进行分析, 共获得82条克隆测序结果, 物种鉴定结果表明: 5份样品(CPM011~CPM014、CPM016)可检测到意大利蜜蜂, 2份样品(CPM010、CPM015)未检测到意大利蜜蜂或其他蜂种; 7份样品均可检测到病原菌和病害虫的COI序列, 其中病原菌主要来自于:盘梗霉属Bremia、疫霉属Phytophthora、霜霉属Peronospora、白锈菌属Albugo。昆虫主要为:蓟马属Thrips、施密摇蚊属Smittia、中国瘤瘿螨属Aceria。

4 基于COI序列的蜂属特异性引物对普乐安片中蜜蜂源成分鉴定

由于使用COI序列通用引物LCO1490/HCO2198无法直接获得测序结果, 因此设计两对蜜蜂属的特异COI序列引物LCO1490-APF/HCO2198-APR和LCO282/HCO595以检测样品中是否存在蜜蜂的COI序列。两对COI特异性引物的PCR扩增结果表明, 均仅有7份样品(CPM010~CPM016)可成功进行PCR扩增, 用1.5%的琼脂糖凝胶电泳检测可在相应位置获得单一且明亮的条带。利用LCO1490-APF/HCO2198-APR引物获得的PCR产物的测序结果显示, 7份样品的COI序列长度均为658 bp, 其中2份样品分别存在18和13个正反向测序峰图不一致的位点, 拼接结果需进行人工矫正, GenBank登录号为: MN756615~MN756621;通过LCO282/HCO595引物获得的PCR产物进行双向测序, 7份样品均可获得高质量的双向测序峰图, 序列长度均为274 bp, 无变异位点, 由两对引物获得的序列经“中药材DNA条形码鉴定系统”鉴定和参考序列比对均为意大利蜜蜂。

讨论

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2015版《中国药典》^[1]收载的普乐安片鉴定方法包括显微鉴别法、薄层色谱法和基于高效液相色谱法的含量检查, 显微鉴别法根据花粉粒的形状、直径、萌发沟、表面纹理等特征鉴定油菜花粉, 薄层色谱法和高效液相色谱法对油菜花粉及其化学成分β-谷甾醇、槲皮素和山柰素进行检测, 难以有效甄别是否有其他花粉如茶花粉、荞麦花粉、向日葵花粉、玉米花粉等的投料^[25]。另外, 尚未有方法鉴定普乐安片的油菜花粉原料是否为蜜蜂采集所得, 因此需进一步建立专属性更强的质量控制方法以提高普乐安片的质量标准。

本研究基于DNA条形码技术对普乐安片处方成分进行鉴定, ITS2序列鉴定结果表明4份普乐安片的植物源物种包含油菜和黑芥, 但无法进一步证明是原料中掺了黑芥花粉, 还是油菜花粉的原植物具有黑芥的遗传背景。油菜和黑芥同属十字花科芸苔属, 该属亲缘进化关系较为复杂, 其栽培种包括蔓菁B. rapa (AA)、黑芥B. nigra (BB)和野甘蓝B. oleracea (CC) 3个二倍体基本种, 以及欧洲油菜B. napus (AACC)、芥菜B. juncea (AABB)和埃塞俄比亚芥B. carinata (BBCC) 3个四倍体复合种^{[26, 27]}, 芸苔属物种间的进化关系通过禹氏三角(U Triangle)模型描述^[28]。1833年, Johann Metzger首次将蔓菁和油菜两个物种联合命名, 并采用蔓菁作为两个物种的合并种名称^[29]。但其实油菜和蔓菁存在区别, 油菜属一年生植物具非肉质主根, 蔓菁是二年生植物具肉质主根, 中国植物志英文版将油菜作为蔓菁变种B. nigra var. oleifera^[30]的异名。通常所说的油菜一般为芸苔的统称^[31], 广泛种植于亚洲, 种子被用作油料, 而黑芥广泛种植于西方, 种子常作为调味品使用。采用不同遗传背景的油菜花粉制作的普乐安片是否具有临床疗效差异尚缺乏系统研究。

采用COI序列进行鉴定表明LCO1490/HCO2198通用引物直接测序失败, 经克隆测序发现存在蓟马等以花粉为食的害虫。为解决因外源污染导致的蜜蜂源检测失败, 本研究针对蜜蜂属序列设计了两对COI特异性引物并成功在7个厂家的样品中检测到意大利蜜蜂, 1个厂家的样品未检测到蜜蜂源, 进一步收集该厂家3个批次的9份样品进行重复性验证, 结果均未检测到蜜蜂源, 推测该厂家普乐安片的原料油菜花粉非由蜜蜂采集所得。两对新的COI引物中引物LCO1490-APF/HCO2198-APR与COI通用引物LCO1490/HCO2198扩增区间相同, 目的片段长度均为658 bp, 测序峰图基线有轻微的杂峰, 表明存在一定程度的外源污染干扰, 但不影响后续序列分析和结果判定。引物LCO282/HCO595扩增目的片段为274 bp, 测序峰图噪声低、基线平, 对蜜蜂的鉴定具有更好的特异性。Meusnier等^[32]研究表明长度约150 bp的COI区间即可获得足够的物种鉴定效率; Bhattacharjee等^[33]设计了一个119 bp的COI短序列, 可准确鉴定现存鲶鱼的3 000个物种。因此, 本研究推荐采用扩增目的片段较短的引物LCO282/HCO595作为普乐安片蜜蜂源物种鉴定的COI引物使用。

中成药是在中医药理论指导下, 以中药材为原料, 按规定的处方和工艺生产的具有确切疗效和可控的质量标准, 可以直接供临床辩证使用的制剂, 包括复方制剂和单味制剂, 其中单味制剂是指单味中药通过现代化研究、生产的中成药^[34]。单味制剂疗效确切^[35], 早期医药文献的治疗也以单方居多, 利用现代技术生产的单味制剂如银杏叶片已广泛用于心血管疾病、脑缺血疾病等, 是目前世界上治疗心脑血管疾病疗效确切的天然药物^[36-39]。此外, 单味制剂生产工艺较为简单, 可变因素较少, 易于被国际社会接受, 可以作为中成药国际化的开端。2015版《中国药典》共收录的单味制剂有70余种, 除了普乐安片外, 还有宫血宁胶囊、板蓝根颗粒、诺迪康片、穿心莲片、益母草膏等常用中成药。因此, 单味制剂可以作为中成药DNA条形码鉴定的切入点, 同时DNA条形码技术也有助于单味制剂质量标准的提升, 进一步推进其现代化、标准化和国际化进程。

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北京市自然科学基金(7202136)
国家自然科学基金项目(81703659)
中国博士后科学基金面上项目(2017M610815)

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2020年第55卷第6期

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doi: 10.16438/j.0513-4870.2019-1005

接收时间：2019-12-09
首发时间：2026-01-21
出版时间：2020-06-12

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收稿日期：2019-12-09
修回日期：2020-02-20

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北京市自然科学基金(7202136)

国家自然科学基金项目(81703659)

中国博士后科学基金面上项目(2017M610815)

作者信息

1.中国中医科学院中药研究所, 北京 100700

2.中国医学科学院、北京协和医学院药用植物研究所, 北京 100193

3.中央民族大学药学院, 北京 100081

4.福建农林大学动物科学学院 (蜂学学院), 福建福州 350002

5.中国农业科学院农业资源与农业区划研究所, 北京 100081

通讯作者:

*石林春, Tel:86-10-57833194, E-mail:linchun_shi@163.com;

孙伟, Tel:86-10-84017374, E-mail:wsun@icmm.ac.cn

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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Marker

Primer

5′-3′ sequence

ITS2

ITS2F

ATGCGATACTTGGTGTGAAT

ITS3R

GACGCTTCTCCAGACTACAAT

COI

LCO1490

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LCO1490-APF

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TAAATCTCTGGATGACCAAAAAATCA

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Sample ID

Plant Genomic DNA Extraction Kit

Animal Genomic DNA Extraction Kit

LCO1490/ HCO2198

LCO1490-APF/ HCO2198-APR

LCO282/ HCO595

LCO1490/ HCO2198

LCO1490-APF/ HCO2198-APR

LCO282/ HCO595

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