药物分析杂志

成分（compound）	线性范围（linear range）/(μg·mL^-1）	线性方程（regression equation）	r	校正因子（correction factor）	LOQ/（μg·mL^-1）	LOD/（μg·mL^-1）
氢溴酸高乌甲素（lappaconitine hydrobromide）	0.951 7~38.07	Y=11 214X+420.92	1.000	1.00	0.32	0.095
N-去乙酰高乌甲素（N-deacetyllappaconitine）	1.047~41.87	Y=8 905.9X+392.73	1.000	1.26	0.35	0.10
冉乌头碱（ranaconitine）	1.001~40.02	Y=12 060X+411.33	1.000	0.93	0.33	0.10

成分（compound）	线性范围（linear range）/(μg·mL^-1）	线性方程（regression equation）	r	校正因子（correction factor）	LOQ/（μg·mL^-1）	LOD/（μg·mL^-1）
氢溴酸高乌甲素（lappaconitine hydrobromide）	0.951 7~38.07	Y=11 214X+420.92	1.000	1.00	0.32	0.095
N-去乙酰高乌甲素（N-deacetyllappaconitine）	1.047~41.87	Y=8 905.9X+392.73	1.000	1.26	0.35	0.10
冉乌头碱（ranaconitine）	1.001~40.02	Y=12 060X+411.33	1.000	0.93	0.33	0.10

成分（compound）	加入量（added）/μg	检出量（found）/μg	回收率（recovery）/%	平均回收率（average recovery）/%	RSD/%
氢溴酸高乌甲素(lappaconitine hydrobromide)	47.58	46.76	98.3	99.3	1.9
	47.58	46.78	98.3
	47.58	48.26	101.4
	95.16	95.38	100.2	100.4	0.26
	95.16	95.86	100.7
	95.16	95.52	100.4
	142.76	142.70	100.0	101.0	1.0
	142.76	144.24	101.0
	142.76	145.50	101.9
N-去乙酰高乌甲素（N-deacetyllappaconitine）	52.34	51.80	99.0	100.2	1.2
	52.34	52.44	100.2
	52.34	53.06	101.4
	104.66	103.94	99.3	100.1	1.0
	104.66	105.84	101.1
	104.66	104.62	100.0
	157.00	157.38	100.2	101.1	0.79
	157.00	159.16	101.4
	157.00	159.62	101.7
冉乌头碱（ranaconitine）	50.02	48.98	97.9	99.9	1.9
	50.02	50.18	100.3
	50.02	50.78	101.5
	100.06	99.86	99.8	100.4	0.67
	100.06	101.12	101.1
	100.06	100.30	100.2
	150.08	150.50	100.3	101.2	0.89
	150.08	151.82	101.2
	150.08	153.20	102.1

成分（compound）	加入量（added）/μg	检出量（found）/μg	回收率（recovery）/%	平均回收率（average recovery）/%	RSD/%
氢溴酸高乌甲素(lappaconitine hydrobromide)	47.58	46.76	98.3	99.3	1.9
	47.58	46.78	98.3
	47.58	48.26	101.4
	95.16	95.38	100.2	100.4	0.26
	95.16	95.86	100.7
	95.16	95.52	100.4
	142.76	142.70	100.0	101.0	1.0
	142.76	144.24	101.0
	142.76	145.50	101.9
N-去乙酰高乌甲素（N-deacetyllappaconitine）	52.34	51.80	99.0	100.2	1.2
	52.34	52.44	100.2
	52.34	53.06	101.4
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	157.00	159.16	101.4
	157.00	159.62	101.7
冉乌头碱（ranaconitine）	50.02	48.98	97.9	99.9	1.9
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	150.08	153.20	102.1

仪器（instrument）	色谱柱（column）	相对保留时间（relative retention time）	校正因子（correction factor）
LC-2040C HPLC	Kromasil 300-5-C₁₈（4.6 mm×250 mm，5 μm）	1.23	1.32	1.259	0.930
Ailent 1200 HPLC	Shim-pack VP-ODS（4.6 mm×250 mm，5 μm）	1.19	1.41	1.217	0.938
Shimadzu Z020 HPLC	Agilent Poroshell HPH-C₁₈（4.6 mm×150 mm，5 μm）	1.18	1.44	1.227	0.937
	均值(mean)	1.20	1.39	1.23	0.94
	RSD/%	2.3	4.7	1.8	0.47

仪器（instrument）	色谱柱（column）	相对保留时间（relative retention time）	校正因子（correction factor）
LC-2040C HPLC	Kromasil 300-5-C₁₈（4.6 mm×250 mm，5 μm）	1.23	1.32	1.259	0.930
Ailent 1200 HPLC	Shim-pack VP-ODS（4.6 mm×250 mm，5 μm）	1.19	1.41	1.217	0.938
Shimadzu Z020 HPLC	Agilent Poroshell HPH-C₁₈（4.6 mm×150 mm，5 μm）	1.18	1.44	1.227	0.937
	均值(mean)	1.20	1.39	1.23	0.94
	RSD/%	2.3	4.7	1.8	0.47

生产企业 (manufacture)	批号 (batch No.)	规格（specification）	含量(content)/%
G	2209316	2 mL:4 mg	0.57	-	0.55	-
	2209317	2 mL:4 mg	0.74	-	0.72	-
	2301325	2 mL:4 mg	0.80	0.06	0.78	0.05
	2301326	2 mL:4 mg	0.82	0.06	0.80	0.06
	2304323	2 mL:4 mg	0.56	<LOQ	0.55	<LOQ
	2304324	2 mL:4 mg	0.31	-	0.30	-
R	22048012	2 mL:4 mg	0.72	<LOQ	0.71	<LOQ
	22080411	2 mL:4 mg	0.74	<LOQ	0.73	<LOQ
	22090911	2 mL:4 mg	0.56	0.06	0.55	0.05
	22103112	2 mL:4 mg	0.40	0.08	0.39	0.07
	23020412	2 mL:4 mg	0.39	0.09	0.38	0.08
	23050811	2 mL:4 mg	0.40	0.08	0.38	0.07
	22042811	2 mL:8 mg	0.73	<LOQ	0.71	<LOQ
	22093012	2 mL:8 mg	0.48	0.08	0.47	0.07
	22103111	2 mL:8 mg	0.47	0.09	0.45	0.08
	23020411	2 mL:8 mg	0.39	0.09	0.38	0.08
	23050812	2 mL:8 mg	0.42	0.09	0.41	0.08
F	22090441	2 mL:4 mg	0.53	0.06	0.52	0.05
	23010442	2 mL:4 mg	0.66	0.04	0.65	<LOQ
	23030941	2 mL:4 mg	0.72	<LOQ	0.71	<LOQ
	23030942	2 mL:4 mg	0.72	<LOQ	0.71	<LOQ
S	72209171	2 mL:4 mg	0.49	-	0.48	-
	72301041	2 mL:4 mg	0.38	-	0.37	-
	72301042	2 mL:4 mg	0.39	-	0.37	-
	72301042 32	2 mL:4 mg	0.38	-	0.37	-

生产企业 (manufacture)	批号 (batch No.)	规格（specification）	含量(content)/%
G	2209316	2 mL:4 mg	0.57	-	0.55	-
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	2301325	2 mL:4 mg	0.80	0.06	0.78	0.05
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	23020412	2 mL:4 mg	0.39	0.09	0.38	0.08
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	72301042 32	2 mL:4 mg	0.38	-	0.37	-

HPLC加校正因子的主成分自身对照法测定氢溴酸高乌甲素注射液中2个有关物质的含量^*

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徐树娟 , 张磊 ^** , 马淑凤 , 付霞 , 卢娜 , 吴传立

药物分析杂志 | 安全监测 2024,44(11): 1967-1974

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药物分析杂志 | 安全监测 2024, 44(11): 1967-1974

HPLC加校正因子的主成分自身对照法测定氢溴酸高乌甲素注射液中2个有关物质的含量^*

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徐树娟, 张磊^**, 马淑凤, 付霞, 卢娜, 吴传立

作者信息

临沂市检验检测中心，临沂 276000

Tel：（0539）8056533；E-mail：junyingcaoxsj@163.com

通讯作者:

**Tel：(0539)8056533；E-mail：lei0528@126.com

Determination of two related substances in lappaconitine hydrobromide injection by HPLC-principal component self-compare with correction factor^*

Shu-juan XU, Lei ZHANG^**, Shu-feng MA, Xia FU, Na LU, Chuan-li WU

Affiliations

Linyi Inspection and Testing Center，Linyi 276000，China

出版时间: 2024-12-01 doi: 10.16155/j.0254-1793.2024-0149

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摘要

收起

目的：

建立HPLC加校正因子的主成分自身对照法测定氢溴酸高乌甲素注射液中2个有关物质（N-去乙酰高乌甲素和冉乌头碱）的含量。

方法：

采用Kromasil 300-5-C₁₈（250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱，以0.04 mol·L^-1磷酸二氢钾溶液-甲醇-乙腈（68:17:15）为流动相，检测波长252 nm，流速0.8 mL·min^-1，柱温37 ℃，进样体积10 μL。绘制氢溴酸高乌甲素和2个杂质的线性方程，分别以斜率计算各杂质相对于氢溴酸高乌甲素的校正因子，用相对保留时间确定各杂质的位置。测定4家企业共25批氢溴酸高乌甲素注射液中2个杂质含量，并与外标法测得结果进行比较。

结果：

本方法能较好地分离氢溴酸高乌甲素与2个杂质。N-去乙酰高乌甲素和冉乌头碱的相对保留时间分别为1.20和1.39，校正因子分别为1.23和0.94。氢溴酸高乌甲素、N-去乙酰高乌甲素和冉乌头碱质量浓度分别在0.951 7~38.07、1.047~41.87和1.001~40.02 μg·mL^-1的范围内与峰面积呈良好的线性关系（r均为1.000），平均回收率分别为100.2%、100.5%和100.5%，RSD均小于2.0%，检测限分别为0.095、0.10和0.10 μg·mL^-1，定量限分别为0.32、0.35和0.33 μg·mL^-1。加校正因子的主成分自身对照法测得25批氢溴酸高乌甲素注射液中N-去乙酰高乌甲素的含量为0.31%~0.82%，冉乌头碱的含量为0~0.09%，与外标法测定结果一致。

结论：

经方法学验证，所建立的方法简便、快速，可准确测定氢溴酸高乌甲素注射液中有关物质的含量。

关键词

氢溴酸高乌甲素注射液 / 高效液相色谱法 / 加校正因子的主成分自身对照法 / 有关物质 / N-去乙酰高乌甲素 / 冉乌头碱

Abstract

收起

Objective:

To establish an HPLC-principal component self-compare with correction factor method for quantification of two related substances (N-deacetyllappaconitine and ranaconitine) in lappaconitine hydrobromide injection.

Methods:

The analysis was performed on a Kromasil 300-5-C₁₈ (250 mm×4.6 mm，5 μm) column with a mobile phase composed of 0.04 mol·L^-1 potassium dihydrogen phosphate solution，methanol and acetonitrile (68:17:15). The detection wavelength was 252 nm，the flow rate was 0.8 mL·min^-1，the column temperature was 37 ℃，and the injection volume was 10 μL. The slope of linear equation was used to determine the relative correction factor between the two impurities and lappaconitine hydrobromide. The relative retention time was used to determine the position of related substances. The contents of two impurities in 25 batches of lappaconitine hydrobromide injection produced by four pharmaceutical companies were determined and compared with the results of the external standard method.

Results:

Lappaconitine hydrobromide and the impurities were separated well by this method. The relative retention time of N-deacetyllappaconitine and ranaconitine were 1.20 and 1.39，and the correction factors were 1.23 and 0.94，respectively. Lappaconitine hydrobromide，N-deacetyllappaconitine and ranaconitine showed good linearity in the mass concentration ranges of 0.951 7-38.07 μg·mL^-1，1.047-41.87 μg·mL^-1 and 1.001-40.02 μg·mL^-1 with r=1.000，respectively. The average recovery rates of lappaconitine hydrobromide，N-deacetyllappaconitine and ranaconitine were 100.2%，100.5% and 100.5% respectively，with RSD less than 2.0%. The limits of detection (LOD) of lappaconitine hydrobromide，N-deacetyllappaconitine and ranaconitine were 0.095，0.10，0.10 μg·mL^-1 and the limits of quantitation (LOQ) were 0.32，0.35 and 0.33 μg·mL^-1，respectively. The content of N-deacetyllappaconitine in 25 batches of lappaconitine hydrobromide injection was in the range of 0.31%-0.82% and the content of ranaconitine was in the range of 0%-0.09%. It was consistent with the determination result of the external standard method.

Conclusion:

The method is proved to be simple，rapid，and accurate for the determination of related substances in lappaconitine hydrobromide injection.

Key words

lappaconitine hydrobromide injection / HPLC / the principal component self-compare with correction factor method / related substances / N-deacetyllappaconitine / ranaconitine

引用本文

徐树娟, 张磊, 马淑凤, 付霞, 卢娜, 吴传立. HPLC加校正因子的主成分自身对照法测定氢溴酸高乌甲素注射液中2个有关物质的含量^*. 药物分析杂志, 2024 , 44 (11) : 1967 -1974 . DOI: 10.16155/j.0254-1793.2024-0149

Shu-juan XU, Lei ZHANG, Shu-feng MA, Xia FU, Na LU, Chuan-li WU. Determination of two related substances in lappaconitine hydrobromide injection by HPLC-principal component self-compare with correction factor^*[J]. Chinese Journal of Pharmaceutical Analysis, 2024 , 44 (11) : 1967 -1974 . DOI: 10.16155/j.0254-1793.2024-0149

正文

收起

氢溴酸高乌甲素是从毛茛科植物高乌头根中提取的拉巴乌头碱的氢溴酸盐^[1]，是国内首创的非成瘾性中枢神经系统镇痛药^[2]，具有中枢镇痛、抗风湿性关节炎、抗心律失常、抗氧化、抗癌、免疫调节等生物活性^[3-4]，临床上用于中度以上疼痛的治疗^[5-6]。氢溴酸高乌甲素原料及其制剂尚未被收载到各国药典标准中。目前，氢溴酸高乌甲素注射液的执行标准为《中华人民共和国卫生部药品标准》二部第五册^[7]及各企业的注册标准^[8-9]，仅注册标准YBH22682005对有关物质进行了检查，但只规定了杂质总和的限度，未对单一杂质及已知杂质进行控制。

由于氢溴酸高乌甲素原料是从高乌头根中提取获得的，常含有冉乌头碱、N-去乙酰高乌甲素等其他生物碱杂质，严重影响了其质量和安全性^[10-12]。当前报道的关于氢溴酸高乌甲素有关物质的文献多数关注的是未知杂质的检测^[13-15]，并没有对2个已知杂质进行单独研究。由于杂质与氢溴酸高乌甲素在紫外检测器的响应强度不同，杂质峰面积不经校正难免会产生误差。此外，杂质对照品较难获得且价格较贵。因此，本文建立HPLC加校正因子的主成分自身对照法对氢溴酸高乌甲素注射液中2个已知有关物质进行检查，提高该药品分析方法的准确性、可靠性，以期为该制剂的质量控制提供参考。2个已知有关物质的结构式见图1。

1　仪器与试药

收起

LC-2040C高效液相色谱仪（Shimadzu公司）；Mettler XP205十万分之一电子分析天平（Mettler Toledo公司）。

氢溴酸高乌甲素对照品（批号100289-201904，纯度94.6%），中国食品药品检定研究院；对照品N-去乙酰高乌甲素（批号HR1873S1，纯度98%）、冉乌头碱（批号HR18729S1，纯度98%），宝鸡辰光生物科技有限公司；乙腈和甲醇为色谱纯，默克股份两合公司；磷酸二氢钾（分析纯），国药集团化学试剂有限公司；氢溴酸高乌甲素注射液（规格为2 mL:4 mg和2 mL:8 mg），山东省药品质量风险监测抽检样品。

2　溶液的制备

收起

2.1　供试品溶液

精密量取氢溴酸高乌甲素注射液适量，用流动相稀释制成每1 mL中约含氢溴酸高乌甲素1 mg的溶液，即得。

2.2　对照溶液

精密量取供试品溶液1 mL，置于100 mL量瓶中，用流动相[0.04 mol·L^-1磷酸二氢钾溶液-甲醇-乙腈（68:17:15）]稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3　混合对照品溶液

取氢溴酸高乌甲素、N-去乙酰高乌甲素及冉乌头碱的对照品各约10 mg，精密称定，置于100 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得混合对照品储备液；精密量取混合对照品储备液1.0 mL，置于10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

2.4　空白样品溶液

将收集到的辅料（厂家提供），参照提供的处方配制后，按照“2.1”项下方法制备空白样品溶液。

3　色谱条件

收起

采用Kromasil 300-5-C₁₈（250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱，以0.04 mol·L^-1磷酸二氢钾溶液-甲醇-乙腈（68:17:15）为流动相，检测波长252 nm，流速0.8 mL·min^-1，柱温37 ℃，进样体积10 μL。

分别取空白样品溶液、混合对照品溶液、供试品溶液，按照上述色谱条件进样测定。结果如图2所示，出峰顺序依次为氢溴酸高乌甲素、N-去乙酰高乌甲素和冉乌头碱，各峰间的分离度依次为5.7和2.0，均达到完全分离。空白样品溶液在与杂质对照品相应的保留时间处无色谱峰出现，表明处方辅料不干扰杂质的测定。

4　方法与结果

收起

4.1　专属性考察

精密量取氢溴酸高乌甲素注射液（批号为23020412）5 mL，分别置10 mL量瓶中，共4份，进行不同条件下的降解试验：①加1 mol·L^-1的盐酸1 mL，摇匀，室温放置5 h，加入1 mol·L^-1的氢氧化钠溶液1 mL中和，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得强酸破坏样品溶液；②加1 mol·L^-1的氧化钠溶液0.1 mL，摇匀，室温放置30 min，加入1 mol·L^-1的盐酸0.1 mL中和，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得强碱破坏样品溶液；③100 ℃水浴加热5 h，冷却后，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得加热破坏样品溶液；④加30%双氧水溶液1 mL，摇匀，于室温下放置2 h，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得氧化破坏样品溶液；⑤将去掉外包装的氢溴酸高乌甲素注射液分别置强光(4 500 lx±500 lx)下照射5 d，精密量取5 mL，置10 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得光照破坏样品溶液。将上述溶液过滤后，按本文色谱条件进样，记录色谱图，各降解杂质峰均能与主峰实现良好的分离，见图3。

4.2　线性关系试验

精密量取混合对照品储备液0.1、0.5、1.0、2.0、4.0 mL，分别置10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得质量浓度为1、5、10、20、40 μg·mL^-1的混合对照品系列溶液，进样测定，以峰面积Y为纵坐标、对照品溶液的质量浓度X为横坐标进行线性回归，绘制标准曲线，结果见表1，表明本方法线性关系良好。

4.3　检测限和定量限

取“2.3”项下的1 μg·mL^-1的混合对照品溶液，用流动相逐步稀释后，进样测定，以信噪比S/N=3时对应的质量浓度为检测限（LOD），以信噪比S/N=10时对应的质量浓度为定量限（LOQ）。结果见表1。

4.4　回收率试验

分别精密量取混合对照品储备液适量，置10 mL量瓶中，加流动相配成质量浓度约为5、10、15 μg·mL^-1的溶液各3份，同时加入企业提供处方量的空白辅料，配制成回收率供试溶液。再按本文色谱条件进样测定，计算氢溴酸高乌甲素及2个已知杂质的回收率，结果见表2。

4.5　精密度与重复性试验

取混合对照品溶液，连续进样6次，计算混合对照品溶液中各色谱峰面积的RSD均在0.42%以下，表明仪器精密度良好。

取氢溴酸高乌甲素注射液（批号为23020412）适量，按“2.1”项下方法平行制备6份供试品溶液，按照本文色谱条件进样，记录峰面积并计算含量，N-去乙酰高乌甲素和冉乌头碱的平均含量分别为0.40%和0.08%，RSD分别为1.6%和1.7%，表明方法重复性良好。

4.6　稳定性试验

取氢溴酸高乌甲素注射液（批号为23020412）适量，按“2.1”项下方法制备供试品溶液，分别在第0、6、12、24 h进样测定，测得N-去乙酰高乌甲素和冉乌头碱峰面积的RSD分别为1.5%和1.2%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

4.7　校正因子及相对保留时间

按照2020年版《中华人民共和国药典》四部通则中校正因子测定方法，分别测定2个杂质相对氢溴酸高乌甲素的校正因子。以氢溴酸高乌甲素和杂质的回归方程斜率(k)计算校正因子（f）

N-去乙酰高乌甲素和冉乌头碱的校正因子分别为1.26和0.93（表1）。N-去乙酰高乌甲素和冉乌头碱相对氢溴酸高乌甲素的保留时间分别为1.23和1.32。

4.8　校正因子耐用性考察

采用3台不同的液相色谱仪，3根不同的色谱柱，在相同的条件下，分别取“2.2”项下混合对照品系列溶液进行分析，记录氢溴酸高乌甲素与各杂质的相对保留时间，并测定氢溴酸高乌甲素与各杂质的标准曲线，计算各杂质的校正因子，结果见表3。从表3中可以看出，在不同仪器不同色谱柱上，2个杂质的相对保留时间和校正因子较稳定。N-去乙酰高乌甲素的平均相对保留时间为1.20，平均校正因子为1.23；冉乌头碱的平均相对保留时间为1.39，平均校正因子为0.94。因冉乌头碱的校正因子在0.9~1.1，而N-去乙酰高乌甲素的校正因子不在此范围内，故冉乌头碱采用不加校正因子的主成分自身对照法定量，而N-去乙酰高乌甲素需采用加校正因子的主成分自身对照法定量，校正因子为1.23。

4.9　样品测定

取25批样品，分别采用加校正因子的主成分自身对照法和外标法测定2个杂质的含量，结果如表4所示。采用加校正因子的主成分自身对照法与外标法的测定结果基本一致。

5　讨论

收起

参照国家食品药品监督管理局标准YBH22682005^[9]的有关物质色谱条件进行试验，采用0.1 mol·L^-1的磷酸二氢钠-甲醇（30:70）为流动相，结果发现主成分与杂质出峰时间较早，部分杂质之间未能得到有效分离，后将流动相调整为0.04 mol·L^-1磷酸二氢钾溶液-甲醇-乙腈（68:17:15），各杂质之间分离度良好。

由破坏性试验结果可知，氢溴酸高乌甲素注射液在强碱、高温、光照条件下不稳定，相对保留时间0.41处的杂质含量明显增加；在强酸条件下，N-去乙酰高乌甲素含量明显增加；氧化条件下各杂质没有明显的变化。提示该制剂在生产、使用过程中应注意遮光和控制温度，此外，还应关注处方中的pH。

待测成分色谱峰的准确定位是建立加校正因子的主成分自身对照法的关键^[16]，本研究采用相对保留时间法，分别考察了2个杂质在不同仪器和不同色谱柱中的相对保留时间，结果发现2个杂质的相对保留时间RSD均小于5%，可作为这2个杂质的定位参数。

6　结论

收起

本研究采用相对保留时间对2个已知杂质进行定位，采用加校正因子的主成分自身对照法进行定量分析，消除了因杂质相对于主成分响应因子不同而引起的测定误差。所得结果与外标法无明显差异，表明该方法更加实用可行，可避免使用杂质对照品，对建立氢溴酸高乌甲素注射液有关物质的检测方法具有一定的参考意义。

基金

收起

^*2023年山东省药品质量风险监测工作专项(鲁食药检业[2023]187号)

参考文献

收起

文献

收起

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2024年第44卷第11期

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doi: 10.16155/j.0254-1793.2024-0149

接收时间：2024-03-07
首发时间：2026-03-18
出版时间：2024-12-01

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收稿日期：2024-03-07

基金

^*2023年山东省药品质量风险监测工作专项(鲁食药检业[2023]187号)

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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TxT

成分（compound）	线性范围（linear range）/(μg·mL^-1）	线性方程（regression equation）	r	校正因子（correction factor）	LOQ/（μg·mL^-1）	LOD/（μg·mL^-1）
氢溴酸高乌甲素（lappaconitine hydrobromide）	0.951 7~38.07	Y=11 214X+420.92	1.000	1.00	0.32	0.095
N-去乙酰高乌甲素（N-deacetyllappaconitine）	1.047~41.87	Y=8 905.9X+392.73	1.000	1.26	0.35	0.10
冉乌头碱（ranaconitine）	1.001~40.02	Y=12 060X+411.33	1.000	0.93	0.33	0.10

成分
（compound）

线性范围
（linear range）/(μg·mL^-1）

线性方程
（regression equation）

校正因子
（correction factor）

LOQ/（μg·mL^-1）

LOD/（μg·mL^-1）

氢溴酸高乌甲素（lappaconitine hydrobromide）

0.951 7~38.07

Y=11 214X+420.92

1.000

1.00

0.32

0.095

N-去乙酰高乌甲素（N-deacetyllappaconitine）

1.047~41.87

Y=8 905.9X+392.73

1.000

1.26

0.35

0.10

冉乌头碱（ranaconitine）

1.001~40.02

Y=12 060X+411.33

1.000

0.93

0.33

0.10

成分（compound）	加入量（added）/μg	检出量（found）/μg	回收率（recovery）/%	平均回收率（average recovery）/%	RSD/%
氢溴酸高乌甲素(lappaconitine hydrobromide)	47.58	46.76	98.3	99.3	1.9
	47.58	46.78	98.3
	47.58	48.26	101.4
	95.16	95.38	100.2	100.4	0.26
	95.16	95.86	100.7
	95.16	95.52	100.4
	142.76	142.70	100.0	101.0	1.0
	142.76	144.24	101.0
	142.76	145.50	101.9
N-去乙酰高乌甲素（N-deacetyllappaconitine）	52.34	51.80	99.0	100.2	1.2
	52.34	52.44	100.2
	52.34	53.06	101.4
	104.66	103.94	99.3	100.1	1.0
	104.66	105.84	101.1
	104.66	104.62	100.0
	157.00	157.38	100.2	101.1	0.79
	157.00	159.16	101.4
	157.00	159.62	101.7
冉乌头碱（ranaconitine）	50.02	48.98	97.9	99.9	1.9
	50.02	50.18	100.3
	50.02	50.78	101.5
	100.06	99.86	99.8	100.4	0.67
	100.06	101.12	101.1
	100.06	100.30	100.2
	150.08	150.50	100.3	101.2	0.89
	150.08	151.82	101.2
	150.08	153.20	102.1

成分
（compound）

加入量
（added）/μg

检出量
（found）/μg

回收率
（recovery）/%

平均回收率
（average recovery）/%

RSD/%

氢溴酸高乌甲素(lappaconitine hydrobromide)

47.58

46.76

98.3

99.3

1.9

47.58

46.78

98.3

47.58

48.26

101.4

95.16

95.38

100.2

100.4

0.26

95.16

95.86

100.7

95.16

95.52

100.4

142.76

142.70

100.0

101.0

1.0

142.76

144.24

101.0

142.76

145.50

101.9

N-去乙酰高乌甲素（N-deacetyllappaconitine）

52.34

51.80

99.0

100.2

1.2

52.34

52.44

100.2

52.34

53.06

101.4

104.66

103.94

99.3

100.1

1.0

104.66

105.84

101.1

104.66

104.62

100.0

157.00

157.38

100.2

101.1

0.79

157.00

159.16

101.4

157.00

159.62

101.7

冉乌头碱（ranaconitine）

50.02

48.98

97.9

99.9

1.9

50.02

50.18

100.3

50.02

50.78

101.5

100.06

99.86

99.8

100.4

0.67

100.06

101.12

101.1

100.06

100.30

100.2

150.08

150.50

100.3

101.2

0.89

150.08

151.82

101.2

150.08

153.20

102.1

仪器（instrument）	色谱柱（column）	相对保留时间（relative retention time）	校正因子（correction factor）
LC-2040C HPLC	Kromasil 300-5-C₁₈（4.6 mm×250 mm，5 μm）	1.23	1.32	1.259	0.930
Ailent 1200 HPLC	Shim-pack VP-ODS（4.6 mm×250 mm，5 μm）	1.19	1.41	1.217	0.938
Shimadzu Z020 HPLC	Agilent Poroshell HPH-C₁₈（4.6 mm×150 mm，5 μm）	1.18	1.44	1.227	0.937
	均值(mean)	1.20	1.39	1.23	0.94
	RSD/%	2.3	4.7	1.8	0.47

仪器
（instrument）

色谱柱
（column）

相对保留时间
（relative retention time）

校正因子
（correction factor）

N-去乙酰高乌甲素
（N-deacetyllappaconitine）

冉乌头碱
（ranaconitine）

N-去乙酰高乌甲素
（N-deacetyllappaconitine）

冉乌头碱
（ranaconitine）

LC-2040C HPLC

Kromasil 300-5-C₁₈（4.6 mm×250 mm，5 μm）

1.23

1.32

1.259

0.930

Ailent 1200 HPLC

Shim-pack VP-ODS（4.6 mm×250 mm，5 μm）

1.19

1.41

1.217

0.938

Shimadzu Z020 HPLC

Agilent Poroshell HPH-C₁₈（4.6 mm×150 mm，5 μm）

1.18

1.44

1.227

0.937

均值(mean)

1.20

1.39

1.23

0.94

RSD/%

2.3

4.7

1.8

0.47

生产企业 (manufacture)	批号 (batch No.)	规格（specification）	含量(content)/%
G	2209316	2 mL:4 mg	0.57	-	0.55	-
	2209317	2 mL:4 mg	0.74	-	0.72	-
	2301325	2 mL:4 mg	0.80	0.06	0.78	0.05
	2301326	2 mL:4 mg	0.82	0.06	0.80	0.06
	2304323	2 mL:4 mg	0.56	<LOQ	0.55	<LOQ
	2304324	2 mL:4 mg	0.31	-	0.30	-
R	22048012	2 mL:4 mg	0.72	<LOQ	0.71	<LOQ
	22080411	2 mL:4 mg	0.74	<LOQ	0.73	<LOQ
	22090911	2 mL:4 mg	0.56	0.06	0.55	0.05
	22103112	2 mL:4 mg	0.40	0.08	0.39	0.07
	23020412	2 mL:4 mg	0.39	0.09	0.38	0.08
	23050811	2 mL:4 mg	0.40	0.08	0.38	0.07
	22042811	2 mL:8 mg	0.73	<LOQ	0.71	<LOQ
	22093012	2 mL:8 mg	0.48	0.08	0.47	0.07
	22103111	2 mL:8 mg	0.47	0.09	0.45	0.08
	23020411	2 mL:8 mg	0.39	0.09	0.38	0.08
	23050812	2 mL:8 mg	0.42	0.09	0.41	0.08
F	22090441	2 mL:4 mg	0.53	0.06	0.52	0.05
	23010442	2 mL:4 mg	0.66	0.04	0.65	<LOQ
	23030941	2 mL:4 mg	0.72	<LOQ	0.71	<LOQ
	23030942	2 mL:4 mg	0.72	<LOQ	0.71	<LOQ
S	72209171	2 mL:4 mg	0.49	-	0.48	-
	72301041	2 mL:4 mg	0.38	-	0.37	-
	72301042	2 mL:4 mg	0.39	-	0.37	-
	72301042 32	2 mL:4 mg	0.38	-	0.37	-

生产企业
(manufacture)

批号
(batch No.)

规格
（specification）

含量(content)/%

主成分自身对照法
(principal component self-compare method)

外标法
(external standard method)

N-去乙酰高乌甲素
(N-deacetyllappaconitine)

冉乌头碱
(ranaconitine)

N-去乙酰高乌甲素
(N-deacetyllappaconitine)

冉乌头碱
(ranaconitine)

2209316

2 mL:4 mg

0.57

0.55

2209317

2 mL:4 mg

0.74

0.72

2301325

2 mL:4 mg

0.80

0.06

0.78

0.05

2301326

2 mL:4 mg

0.82

0.06

0.80

0.06

2304323

2 mL:4 mg

0.56

<LOQ

0.55

<LOQ

2304324

2 mL:4 mg

0.31

0.30

22048012

2 mL:4 mg

0.72

<LOQ

0.71

<LOQ

22080411

2 mL:4 mg

0.74

<LOQ

0.73

<LOQ

22090911

2 mL:4 mg

0.56

0.06

0.55

0.05

22103112

2 mL:4 mg

0.40

0.08

0.39

0.07

23020412

2 mL:4 mg

0.39

0.09

0.38

0.08

23050811

2 mL:4 mg

0.40

0.08

0.38

0.07

22042811

2 mL:8 mg

0.73

<LOQ

0.71

<LOQ

22093012

2 mL:8 mg

0.48

0.08

0.47

0.07

22103111

2 mL:8 mg

0.47

0.09

0.45

0.08

23020411

2 mL:8 mg

0.39

0.09

0.38

0.08

23050812

2 mL:8 mg

0.42

0.09

0.41

0.08

22090441

2 mL:4 mg

0.53

0.06

0.52

0.05

23010442

2 mL:4 mg

0.66

0.04

0.65

<LOQ

23030941

2 mL:4 mg

0.72

<LOQ

0.71

<LOQ

23030942

2 mL:4 mg

0.72

<LOQ

0.71

<LOQ

72209171

2 mL:4 mg

0.49

0.48

72301041

2 mL:4 mg

0.38

0.37

72301042

2 mL:4 mg

0.39

0.37

72301042 32

2 mL:4 mg

0.38

0.37