药物分析杂志

样品名称（sample name）	数均分子量（M_n）/kDa	峰值分子量（M_p）/kDa	重均分子量（M_w）/kDa	均分子量（M_z）/kDa	聚合物分散性指数（PDI）
青翘多糖（Green Fructus Forsythiae polysaccharide）	7.84±0.67	6.26±0.94	13.04±0.42	22.93±0.74	1.62±0.79
连翘叶多糖（Folium Forsythiae polysaccharide）	486.20±0.13	372.24±0.15	587.49±0.10	797.21±0.18	1.21±0.16

样品名称（sample name）	数均分子量（M_n）/kDa	峰值分子量（M_p）/kDa	重均分子量（M_w）/kDa	均分子量（M_z）/kDa	聚合物分散性指数（PDI）
青翘多糖（Green Fructus Forsythiae polysaccharide）	7.84±0.67	6.26±0.94	13.04±0.42	22.93±0.74	1.62±0.79
连翘叶多糖（Folium Forsythiae polysaccharide）	486.20±0.13	372.24±0.15	587.49±0.10	797.21±0.18	1.21±0.16

单糖名称（type of monosaccharide）	摩尔比（molar ratio）/%	含量（content）/（μg · mL^-1）
Fuc	1.02	3.64
Ara	10.80	35.31
Rha	10.65	38.08
Gal	9.21	36.13
Glc	14.31	56.14
Xyl	1.84	6.01
Man	3.91	15.35
Gal-UA	47.15	199.29
Glc-UA	1.11	4.67

单糖名称（type of monosaccharide）	摩尔比（molar ratio）/%	含量（content）/（μg · mL^-1）
Fuc	1.02	3.64
Ara	10.80	35.31
Rha	10.65	38.08
Gal	9.21	36.13
Glc	14.31	56.14
Xyl	1.84	6.01
Man	3.91	15.35
Gal-UA	47.15	199.29
Glc-UA	1.11	4.67

单糖名称（type of monosaccharide）	摩尔比（molar ratio）/%	含量（content）/（μg · mL^-1）
Fuc	1.13	3.55
Ara	9.36	26.81
Rha	7.34	22.98
Gal	8.77	30.15
Glc	44.76	153.87
Xyl	2.38	6.82
Man	5.32	18.30
Gal-UA	20.95	77.60

单糖名称（type of monosaccharide）	摩尔比（molar ratio）/%	含量（content）/（μg · mL^-1）
Fuc	1.13	3.55
Ara	9.36	26.81
Rha	7.34	22.98
Gal	8.77	30.15
Glc	44.76	153.87
Xyl	2.38	6.82
Man	5.32	18.30
Gal-UA	20.95	77.60

连接方式（type of linkage）	部分甲基化糖醇乙酸酯（PMAAs）	保留时间（retention time）/min	m/z	相对摩尔比（molar ratio）/%
t-Rha(p)	1,5-di-O-acetyl-6-deoxy-2,3,4-tri-O-methyl rhamnitol	4.706	59,72,89,102,115,118,131,145,162,175	4.75
t-Ara(f)	1,4-di-O-acetyl-2,3,5-tri-O-methyl arabinitol	4.975	71,87,102,118,129,145,161	2.20
t-Xyl(p)	1,5-di-O-acetyl-2,3,4-tri-O-methyl xylitol	5.818	88,101,102,118,119,161,162	1.12
2-Rha(p)	1,2,5-tri-O-acetyl-6-deoxy-3,4-di-O-methyl rhamnitol	7.379	89,100,115,130,131,175,190	1.21
t-Glc(p)	1,5-di-O-acetyl-2,3,4,6-tetra-O-methyl glucitol	7.487	87,102,118,129,145,161,162,205	4.90
3-Ara(f)	1,3,4-tri-O-acetyl-2,5-di-O-methyl arabinitol	8.032	87,99,113,118,129,201,233	1.08
t-Gal(p)-UA	1,5-di-O-acetyl-2,3,4,6-tetra-O-methyl galactitol	8.391	73,89,102,118,147,162,163,207	10.10
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5-Ara(f)	1,4,5-tri-O-acetyl-2,3-di-O-methyl arabinitol	9.109	87,102,118,129,162,189	2.59
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4-Man(p)	1,4,5-tri-O-acetyl-2,3,6-tri-O-methyl mannitol	11.208	87,102,113,118,129,162,233	1.06
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4-Gal(p)	1,4,5-tri-O-acetyl-2,3,6-tri-O-methyl galactitol	12.037	87,102,113,118,129,162,233	9.44
4-Glc(p)	1,4,5-tri-O-acetyl-2,3,6-tri-O-methyl glucitol	12.303	87,102,113,118,129,162,233	8.54
6-Gal(p)	1,5,6-tri-O-acetyl-2,3,4-tri-O-methyl galactitol	13.627	87,99,102,118,129,162,189,233	1.14
3,4-Gal(p)-UA	1,3,4,5-tetra-O-acetyl-2,6-di-O-methyl galactitol	13.842	87,118,131,143,185,205,307	3.00
2,4-Glc(p)	1,2,4,5-tetra-O-acetyl-3,6-di-O-methyl glucitol	15.020	87,88,99,113,130,190,233	3.46
4,6-Glc(p)	1,4,5,6-tetra-O-acetyl-2,3-di-O-methyl glucitol	16.782	85,102,118,127,159,162,201,261	1.89

连接方式（type of linkage）	部分甲基化糖醇乙酸酯（PMAAs）	保留时间（retention time）/min	m/z	相对摩尔比（molar ratio）/%
t-Rha(p)	1,5-di-O-acetyl-6-deoxy-2,3,4-tri-O-methyl rhamnitol	4.706	59,72,89,102,115,118,131,145,162,175	4.75
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连接方式（type of linkage）	部分甲基化糖醇乙酸酯（PMAAs）	保留时间（retention time）/min	m/z	相对摩尔比（molar ratio）/%
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t-Ara(p)	1,5-di-O-acetyl-2,3,4-tri-O-methyl arabinitol	6.507	88,101,102,117,118,129,161	1.70
t-Gal(p)-UA	1,5-di-O-acetyl-2,3,4,6-tetra-O-methyl galactitol	8.843	73,89,102,118,147,162,163,207	3.92
t-Gal(p)	1,5-di-O-acetyl-2,3,4,6-tetra-O-methyl galactitol	8.850	87,102,118,129,145,161,162,205	2.92
2,3-Rha(p)	1,2,3,5-tetra-O-acetyl-6-deoxy-4-O-methyl rhamnitol	10.221	71,89,101,131,262	1.20
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4-Gal(p)-UA	1,4,5-tri-O-acetyl-2,3,6-tri-O-methyl galactitol	12.525	87,99,102,115,118,131,162,175,235	21.89
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3,6-Gal(p)	1,3,5,6-tetra-O-acetyl-2,4-di-O-methyl galactitol	17.524	87,101,118,129,160,189,234	1.91

连接方式（type of linkage）	部分甲基化糖醇乙酸酯（PMAAs）	保留时间（retention time）/min	m/z	相对摩尔比（molar ratio）/%
t-Rha(p)	1,5-di-O-acetyl-6-deoxy-2,3,4-tri-O-methyl rhamnitol	5.025	59,72,89,102,115,118,131,145,162,175	1.44
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4-Gal(p)	1,4,5-tri-O-acetyl-2,3,6-tri-O-methyl galactitol	12.568	87,102,113,118,129,162,233	6.51
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2,4-Glc(p)	1,2,4,5-tetra-O-acetyl-3,6-di-O-methyl glucitol	15.608	87,88,113,130,190,233	1.76
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3,6-Gal(p)	1,3,5,6-tetra-O-acetyl-2,4-di-O-methyl galactitol	17.524	87,101,118,129,160,189,234	1.91

青翘、连翘叶多糖的分离纯化、结构解析和抗炎活性比较^*

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赵小艳 ¹ , 高秀华 ²^,³^,⁴ , 申晓芸 ²^,³^,⁴ , 李科 ²^,³^,⁴^,^** , 李震宇 ²^,³^,⁴

药物分析杂志 | 活性分析 2025,45(3): 440-451

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药物分析杂志 | 活性分析 2025, 45(3): 440-451

青翘、连翘叶多糖的分离纯化、结构解析和抗炎活性比较^*

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赵小艳¹, 高秀华²^,³^,⁴, 申晓芸²^,³^,⁴, 李科²^,³^,⁴^,^**, 李震宇²^,³^,⁴

作者信息

1.山西药科职业学院，太原 030031

2.山西大学中医药现代研究中心，太原 030006

3.山西大学化学生物学与分子工程教育部重点实验室，太原 030006

4.地产中药功效物质研究与利用山西省重点实验室，太原 030006

Tel：15615237219；E-mail：2284667690@qq.com

通讯作者:

^**Tel：（0351）7011202；E-mail：like@sxu.edu.cn

Separation, purification, structural analysis, and comparison of the anti-inflammatory activity of polysaccharides in Green Fructus Forsythiae and Folium Forsythiae^*

Xiao-yan ZHAO¹, Xiu-hua GAO²^,³^,⁴, Xiao-yun SHEN²^,³^,⁴, Ke LI²^,³^,⁴^,^**, Zhen-yu LI²^,³^,⁴

Affiliations

1. Shanxi Pharmaceutial Vocational College, Taiyuan 030031, China

2. Modern Research Center of Traditional Chinese Medicine, Shanxi University, Taiyuan 030006, China

3. Key Laboratory of Chemical Biology and Molecular Engineering,Ministry of Education, Shanxi University, Taiyuan 030006, China

4. Shanxi Provincial Key Laboratory of Research and Utilization of Functional Substances in Traditional Chinese Medicine, Taiyuan 030006, China

出版时间: 2025-03-31 doi: 10.16155/j.0254-1793.2024-1320

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摘要

收起

目的：从青翘以及连翘叶中提取分离得到青翘多糖和连翘叶多糖进行结构表征和抗炎活性比较。方法：通过浸提和纯化工艺获得粗多糖，采用凝胶排阻色谱和激光光散射检测法测定其分子量，使用MTT法评估了多糖的细胞毒性，通过ELISA法测定NO、TNF-α和IL-10的水平。结果：聚合物分散性指数（PDI）显示其分子量分布较为均匀。单糖组成分析表明，2种多糖均含有多种单糖，其中青翘多糖含有更多的半乳糖醛酸，而连翘叶多糖葡萄糖含量较高。甲基化分析显示青翘多糖主要通过4-Gal（p）-UA连接，而连翘叶多糖则主要通过4-Glc（p）连接。青翘和连翘叶多糖均能显著抑制LPS诱导的NO和TNF-α的产生，同时促进IL-10的生成，且连翘叶多糖在这些效应上优于青翘多糖。结论：青翘与连翘叶多糖具有显著的抗炎活性，本研究为连翘资源开发奠定基础。

关键词

青翘多糖 / 连翘叶多糖 / 分离纯化 / 结构表征 / 抗炎

Abstract

收起

Objective: To extract and isolate polysaccharides from Green Fructus Forsythiae and Folium Forsythiae for structural characterization and comparison of their anti-inflammatory activities. Methods: Crude polysaccharides were obtained through extraction and purification processes. Gel permeation chromatography and laser light scattering were used to determine their molecular weight. The MTT assay was employed to evaluate the cytotoxicity of the polysaccharides, while ELISA was used to measure levels of nitric oxide (NO), tumor necrosis factor-alpha (TNF-α), and interleukin-10 (IL-10). Results: The polydispersity index (PDI) indicated a relatively uniform molecular weight distribution. Monosaccharide composition analysis showed that both polysaccharides contained various monosaccharides, with Green Fructus Forsythiae polysaccharide having a higher content of galacturonic acid, while Folium Forsythiae polysaccharide had a higher glucose content. Methylation analysis revealed that polysaccharides in Green Fructus Forsythiae were primarily linked by 4-Gal (p)-UA, while those of Folium Forsythiae polysaccharide were mainly linked by 4-Glc (p). Both polysaccharides significantly inhibited the production of NO and TNF-α induced by LPS while promoting the generation of IL-10, with polysaccharide in Folium Forsythiae showing superior effects compared to Green Fructus Forsythiae polysaccharide. Conclusion: Polysaccharides from Green Fructus Forsythiae and Folium Forsythiae exhibit significant anti-inflammatory activities. This research lays the foundation for the development of Folium Forsythiae resources.

Key words

Green Fructus Forsythiae polysaccharide / Folium Forsythiae polysaccharide / separation and purification / structural characterization / anti-inflammatory

引用本文

赵小艳, 高秀华, 申晓芸, 李科, 李震宇. 青翘、连翘叶多糖的分离纯化、结构解析和抗炎活性比较^*. 药物分析杂志, 2025 , 45 (3) : 440 -451 . DOI: 10.16155/j.0254-1793.2024-1320

Xiao-yan ZHAO, Xiu-hua GAO, Xiao-yun SHEN, Ke LI, Zhen-yu LI. Separation, purification, structural analysis, and comparison of the anti-inflammatory activity of polysaccharides in Green Fructus Forsythiae and Folium Forsythiae^*[J]. Chinese Journal of Pharmaceutical Analysis, 2025 , 45 (3) : 440 -451 . DOI: 10.16155/j.0254-1793.2024-1320

正文

收起

连翘是木犀科植物连翘Forsythia suspensa（Thunb.）Vahl的干燥果实，为临床常用的清热解毒类中药，主要分布在我国陕西、河北等地，又名黄花条、连壳等，果实初熟尚绿时采收称为青翘，果实熟透颜色发黄时采收称为老翘^[1]。据《本草纲目》《神农本草经》等中医典籍记载，连翘味苦，性寒，可泻火，入心肺二经。连翘具有清热解毒，消肿散结，疏散风热的功效^[2]，可用于治疗风热感冒、乳痈、瘰疬肿痛等疾病^[3]。研究显示^[1]，连翘具有抗炎、抗菌、抗病毒、抗癌、抗氧化、抗衰老、抗肥胖、保肝，以及改善糖尿病肾病、阿尔兹海默病等药理作用，同时其安全性较高。

至今，许多对于连翘的研究多集中在连翘苷、连翘酯苷以及连翘酚等化合物，而对于连翘中大分子化合物连翘多糖相关报道较少。在连翘提取物的制备方法（2020年版《中华人民共和国药典》）中，醇沉后的物质当作杂质被处理，没有加以利用，而一些相关研究表明，这些沉淀为连翘多糖，并且连翘多糖具有抗炎以及抗氧化活性^[4]。目前市场上的连翘主要以青翘为主，果实为连翘的主要入药部位，而大量的连翘叶却未得到充分利用，大部分被直接废弃，造成资源浪费。对连翘叶成分的深入分析以及开发基于连翘叶的食品，能够有效提升连翘的经济效益，并保护自然资源。2017年，山西省颁布了《食品安全地方标准连翘叶》^[5]，将连翘叶纳入食品范畴（山西省食品安全地方标准审评委员会，2017年），为连翘叶及其提取物的产品开发奠定了基础。近年来，已有学者对连翘叶片黄酮类、皂苷类等成分进行了研究^[6]，而关于连翘叶片多糖类物质的研究却鲜见报道。本研究通过对比青翘和连翘叶多糖的结构以及抗炎活性，为其进一步开发奠定基础。

1　材料

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1.1　试剂

单糖对照品岩藻糖（Fuc，批号F2252）、葡萄糖（Glu，批号D9434）、甘露糖（Man，批号 M6020）、阿拉伯糖（Ara，批号E003256）、半乳糖（Gal，批号G5388）、葡萄糖醛酸（GlcA，批号G5269）、半乳糖醛酸（GalA ，批号73960）、木糖（Xyl，批号95729）、果糖（Fru，批号F0550000）、核糖（Rib，批号R7500）购自Sigma公司；鼠李糖（Rha，批号B21172）、甘露糖醛酸（Man-UA，批号B25941）、古罗糖醛酸（Gul-UA，批号B25921）。购自上海源叶生物科技有限公司。以上单糖对照品质量分数均大于98%。

二甲基亚砜（DMSO，批号472301）、氢氧化钠（色谱纯，批号221465）、醋酸钠（分析纯，批号241245）、1-环己基-2-吗啉乙基碳二亚胺甲基对甲苯磺酸盐（批号C106402）、咪唑（批号I5513）、乙酸酐（批号3320102）购自Sigma公司。三氟乙酸（色谱纯，批号200028）、甲醇（分析纯，批号200015）、无水乙醇（批号016362）购自ANPEL公司；二氯甲烷（批号80047318）、氨水（批号XW011336216024）、碘甲烷（批号80084118）、乙酸（批号C124040010）、硝酸钠（分析纯，批号10019918）、硼氘化钠（批号XW011568189701）购自国药集团化学试剂有限公司；苯酚（批号13300101）、硫酸（批号1270301）购自西陇科学股份有限公司；RAW264.7（小鼠单核巨噬细胞株，批号SCC-211800）、MTT（批号M1020）、胎牛血清（批号S9030）、DMEM培养基（批号11995）、0.25 %胰蛋白酶（批号T1300）、PBS磷酸盐缓冲液（批号P1010）、脂多糖（批号L8880）购自北京索莱宝科技有限公司。苯酚、硫酸购自西陇科学股份有限公司。RAW264.7（小鼠单核巨噬细胞株，ATCC）、MTT、澳洲胎牛血清、DMEM培养基、0.25%胰蛋白酶、PBS磷酸盐缓冲液、脂多糖均购自北京索莱宝科技有限公司。一氧化氮（NO）检测试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司；肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-10（IL-10）的酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒均购自武汉博士德生物工程有限公司。

1.2　仪器

SJ30-5A十万分之一电子天平（沈阳神宇龙腾天平有限公司）；XH-T漩涡混合器（新宝仪器公司）；Reacti-thermo氮气吹扫仪（Thermo公司）；ICS 5000+离子色谱（Thermo公司）；UltiMate 3000高效液相色谱仪（Thermo公司）；OPTILABT-rex示差检测器（Wyatt公司）；DAWN HELEOS-Ⅱ激光光散射检测器（Wyatt公司）；Tissuelyser-48高通量组织破碎仪（上海净信实业发展有限公司）；ZLS-1台式快速离心浓缩干燥器（湖南赫西仪器装备有限公司）；LGJ-10冷冻干燥机（四环福瑞科仪科技发展有限公司）；6890A气相色谱仪（Agilent公司）；5977B质谱仪（Agilent公司）；酶标仪Multiskan GO（Thermo公司）；Milli-Q纯水仪（Merck公司）；DGJ-10C冷冻干燥机（上海博登生物科技有限公司）；RE 5298A旋转蒸发仪（郑州市亚容生化仪器有限公司）；explorer 100AKTA纯化系统（通用电器公司）；Sephacryl S-400HR 26 mm×1 000 mm凝胶纯化柱（通用电器公司）。

2　方法

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2.1　多糖的提取纯化

按照参考文献[7]方法并稍作修改，将青翘和连翘叶分别干燥、研磨和筛分过100目筛。加入5倍量无水乙醇，搅拌萃取脂溶性色素和部分杂质，6 000 g离心10 min，收集沉淀。向沉淀中按1 ∶ 20加入纯水，60 ℃水浴提取4 h冷却至室温，6 000 g离心10 min，收集上清。沉淀残渣按照同样的步骤复提取1次。合并2次提取液，真空旋蒸浓缩至原体积的10%，加入4倍体积无水乙醇，4 ℃过夜醇沉。8 000 g离心10 min收集沉淀，冷冻干燥，即得粗多糖提取物。

按照参考文献方法^[8-9]除去粗多糖中的蛋白质、脂肪及色素等杂质。取粗多糖，加入纯水使其充分溶解，加入木瓜蛋白酶，过夜酶解。向水项中加入三氯甲烷和正丁醇（三氯甲烷与正丁醇比例为1 ∶ 4），充分混匀，收集上层水相。向液体中加入石油醚，充分混匀，收集下层水相。向水相中加入大孔树脂AB-8，充分混匀，过夜吸附。收集液体，3 000 Da透析袋透析48 h除去小分子组分，冷冻干燥，即得精制多糖。将其浓缩至原体积的1/5多糖母液，10 000 g离心10 min，取上清液过凝胶层析柱分离纯化，流速1 mL · min^-1；采用1.5倍柱体积纯水洗脱，每10 mL收集1管，收集所有洗脱液。每隔1管对管中洗脱液的总糖含量采用苯酚-硫酸法进行测定，绘制凝胶纯化洗脱曲线。合并同一个洗脱峰对应的各收集管洗脱液，旋蒸浓缩至原体积的20%。冷冻干燥，并采用苯酚-硫酸法鉴定凝胶纯化后多糖含量。

2.2　多糖的分子量测定

将精制连翘叶多糖和青翘多糖分别溶解在0.1 mol · L^-1 硝酸钠水溶液（含0.02% 叠氮化钠，w/w）中，配制为终浓度为1 mg · mL^-1的溶液，并通过孔径为0.45 μm的过滤器过滤后上机检测。采用凝胶排阻色谱柱Ohpak SB-805 HQ（300 mm×8 mm）和Ohpak SB-803 HQ（300 mm×8 mm）串联。柱温45 ℃，进样量100 μL，流动相A（0.02% 叠氮化钠，0.1 mol · 1^-1硝酸钠），流速0.6 mL · min^-1，等度洗脱75 min。利用示差检测器根据其折光强度检测样品的浓度信息，利用多角度激光光散射仪检测大分子的光散射信息，并根据马克 · 霍温克方程（Mark-Houwink Equation）计算出每个组分对应的分子量^[10-11]。

2.3　多糖的单糖组成分析

按照参考文献[12-13]方法称取待测样品5 mg置于水解管中，加入2 mol · L^-1三氟乙酸3 mL溶解，密封，121 ℃加热2 h。通氮气，吹干。加入纯甲醇清洗，再吹干，重复甲醇清洗2~3次。加入无菌水1 mL，转入色谱瓶中待测。

色谱系统采用Thermo ICS5000+离子色谱系统（Thermo Fisher Scientific，USA），利用电化学检测器对单糖组分进行分析检测。采用Dionex™ CarboPac™PA20（150 mm×3.0 mm，10 μm）液相色谱柱；进样量为5 μL。流动相A（水），流动相B（0.1 mol · L^-1 氢氧化钠），流动相C（0.1 mol · L^-1 氢氧化钠，0.2 mol · L^-1醋酸钠），流速0.5 mL · min^-1；柱温为30 ℃；洗脱梯度：0 min A相-B相-C相（95 ∶ 5 ∶ 0），26 min A相-B相-C相（85 ∶ 5 ∶ 10），42 min A相-B相-C相（85 ∶ 5 ∶ 10），42.1 min A相-B相-C相（60 ∶ 0 ∶ 40，V/V），52 min A相-B相-C相（60 ∶ 40 ∶ 0），52.1 min A相-B相-C相（95 ∶ 5 ∶ 0），60 min A相-B相-C相（95 ∶ 5 ∶ 0）。

用外标法定量，通过配制不同浓度对照品溶液，利用Chromeleon 7软件拟合得到标准曲线。利用不同浓度的对照品溶液，以对照品的浓度为横坐标，以对照品的峰面积为纵坐标作图，以获得靶向化合物与其峰面积的线性关系，进而根据未知样品中相应化合物的峰面积计算其浓度。

2.4　多糖的甲基化分析

按照参考文献[13]方法称取样品5 mg，加入纯水1 mL溶解，加入100 mg · mL^-1 1-环己基-2-吗啉乙基碳二亚胺甲基对甲苯磺酸盐1 mL，反应2 h。加入2 mol · L^-1的咪唑1 mL，将样品平均分为2份，分别加入30 mg · mL^-1的硼氢化钠和30 mg · mL^-1的硼氘化钠1 mL，反应3 h。加入冰醋酸100 μL终止反应。透析48 h后冷冻干燥样品，进行后续处理。样品中加入DMSO溶解500 μL。加入氢氧化钠1 mg，孵育30 min。加入碘甲烷溶液50 μL反应1 h。加入水1 mL和二氯甲烷2 mL，涡旋混匀，8 000 g离心10 min，弃水相。重复水洗3次。吸取下层二氯甲烷相并用氮气吹干。加入2 mol · L^-1 TFA 100 μL，121 ℃反应90 min。30 ℃蒸干。加入2 mol · L^-1氨水50 μL，1 mol · L^-1 硼氘化钠50 μL ，混匀，室温下反应2.5 h。加入乙酸20 μL终止反应，氮气吹干，甲醇250 μL洗2次，氮气吹干。加入乙酸酐250 μL，涡旋混匀，100 ℃反应2.5 h。加入水1 mL静置10 min。加入二氯甲烷500 μL，涡旋混匀，8 000 g离心10 min，弃水相，重复水洗3次。取下层二氯甲烷相，GC-MS上机检测。

色谱系统采用Agilent气相色谱系统（Agilent 6890A；Agilent Technologies，USA），色谱柱为BPX70（30 m×0.25 mm×0.25 µm）。进样量为1 μL，分流比10 ∶ 1，载气为高纯氦气；柱温箱的初始温度为140 ℃保持2.0 min，以3 ℃ · min^-1程序升温至230 ℃，保持3 min。

质谱系统采用Aiglent公司的四极杆质谱检测系统（Agilent 5977B；Agilent Technologies，USA），配有电子轰击离子源（EI）和MassHunter工作站。采用电子轰击离子源（EI），分析物在全扫描（SCAN）模式下进行检测，质量扫描范围（m/z）：50~350。

2.5　多糖的抗炎活性筛选

2.5.1　细胞培养

将RAW264.7细胞在含有10%PBS、100 μg · L^-1青霉素和100 μg · L^-1链霉素的DMEM培养基中，于37 ℃、5% CO₂饱和湿度下培养，直至细胞生长至对数期。

2.5.2　细胞毒性实验

通过MTT法测定青翘多糖及连翘叶多糖对RAW 264.7细胞存活的影响。将生长密度80%的RAW 264.7细胞，传代3~5次，吹打后制成2×10⁴个 · mL^-1的单细胞悬液，接种于96孔板中，每孔100 μL，置于细胞培养箱中培养，待细胞完全贴壁后，分别加入青翘多糖及连翘叶多糖溶液（10、25、50、100、250、500 μg · mL^-1）10 μL，无血清的DMEM培养基为对照组，孵育24 h后，每孔加入5 mg · mL^-1的MTT试剂10 μL ，再于培养箱中培养4 h。4 h后小心吸弃MTT试剂，向每孔中加入DMSO试剂100 μL。室温下用摇床振荡10 min，再于酶标仪490 nm下检测每孔吸收度。

2.5.3　ELISA法检测IL-10、NO和TNF-α的水平

用含10% FBS胎牛血清的完全培养液将RAW264.7细胞配成单个细胞悬液，以每孔10⁴个细胞的浓度接种到96孔板，每孔体积100 μL。在5% CO₂，37 ℃条件下孵育24 h，届时细胞单层铺满孔底。设置对照组，炎症模型组，以及多糖给药组（浓度梯度分别为10，25，50，100 μg · mL^-1），每组均设置3个复孔，药物预干预2 h后，炎症模型组与多糖给药组加入适量LPS，使得LPS最终浓度为1 μg · mL^-1，对照组加入等量的PBS后继续培养24 h；24 h后取细胞培养基上清液，1 000 g，4 ℃，离心15 min，取上清液，根据ELISA试剂盒和NO快速检测盒的说明测定NO、TNF-α和IL-10的生成量。

2.6　统计学分析

实验数据用均数±标准差表示，采用Prism 7.00软件进行单因素方差分析，P<0.05表示差异具有统计学意义。

3　结果

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3.1　多糖的提取、分离纯化及分子量测定

通过水提醇沉法从青翘和连翘叶中得到青翘多糖和连翘叶多糖，粗多糖经Sephacryl S-400HR柱色谱纯化，洗脱曲线如图1，各得到1个主要组分，青翘多糖回收率为16.0%，连翘叶多糖回收率为15.0%。

将青翘多糖39、41、43、45、47管的洗脱液，连翘叶多糖39、41、43、45、47管的洗脱液进行合并后，对青翘多糖和老翘多糖凝胶柱纯化前后的总糖含量进行测定，标准曲线见图2。青翘提取除杂后得率为18.52 mg，纯度为74.7%；连翘叶得率为17.92 mg，纯度为72.6%。凝胶纯化后青翘多糖纯度高达91.1%，连翘叶多糖89.1%。

经凝胶排阻色谱-示差检测器，多角度激光光散射仪检测，根据马克 · 霍温克方程（Mark-Houwink Equation）计算出每个组分对应的分子量。由表1可得到连翘叶多糖的数均分子量、重均分子量、均分子量、峰值分子量比青翘大。从多糖样品的聚合物分散性指数（PDI）可以看出青翘多糖和连翘叶多糖的PDI较小，分子量分布较均匀。

3.2　多糖的单糖组成分析

将单糖对照品混合样品与青翘多糖、连翘叶多糖的衍生化产物进行HPLC分析，可以确定其单糖组成（见图3）。从表2可知青翘多糖含有大量半乳糖醛酸（47.15%）、少量葡萄糖（14.31%）。根据表3可知连翘叶多糖含有大量葡萄糖（44.76%）、少量半乳糖醛酸（20.95%）。

3.3　基于GC-MS的多糖连接方式分析

青翘多糖和连翘叶多糖的GC-MS总离子色谱图见图4。通过计算色谱峰面积与对应衍生物分子量的比值，近似代表化合物的相对摩尔量，进而计算出样品中各种糖苷键的相对摩尔比。青翘多糖甲基化分析结果如表4所示，其中4-Gal（p）-UA含量占比最高推测为主链，同时存在t-Rha（p），t-Glc（p），t-Gal（p）-UA，t-Gal（p），4-Glc（p）等分支结构。连翘叶多糖甲基化分析结果如表5所示，其中4-Glc（p）含量占比最高推测为主链，同时存在t-Ara（f），t-Gal（p）-UA，4-Gal（p）-UA，4-Gal（p）等分支结构。

3.4　MTT法检测细胞毒性

通过MTT法测定青翘多糖和连翘叶多糖对RAW 264.7细胞存活率的影响，如图5-A、图5-B所示，与对照组比较，10~100 μg · mL^-1质量浓度范围内青翘多糖与连翘叶多糖24 h内细胞存活率均在90%以上，表明青翘多糖与连翘叶多糖此浓度范围内无细胞毒性。因此，可在10~100 μg · mL^-1范围内选取合适浓度进行后续炎症因子的测定。

3.5　ELISA法检测IL-10、NO和TNF-α的水平

如图6所示，青翘多糖和连翘叶多糖均可抑制LPS模型组产生NO。青翘多糖为100 μg · mL^-1时，抑制NO产生的作用最强；连翘叶多糖为100 μg · mL^-1时，抑制NO产生的作用最强。青翘多糖和连翘叶多糖最佳剂量组与模型组比较差异有统计学意义（P<0.05），均能显著抑制NO的产生。连翘叶多糖对NO活性的抑制作用强于青翘多糖。

如图7所示，青翘多糖和连翘叶多糖均可抑制LPS模型组产生TNF-α。青翘多糖为100 μg · mL^-1时，抑制TNF-α产生的作用最强；连翘叶多糖为100 μg · mL^-1时，抑制TNF-α产生的作用最强。青翘多糖和连翘叶多糖最佳剂量与模型组比较差异有统计学意义（P<0.05），均能显著抑制TNF-α的产生。连翘叶多糖对TNF-α产生的抑制作用强于青翘多糖。

如图8所示，青翘多糖在10~50 μg · mL^-1时，促进LPS模型组产生IL-10。青翘多糖为50 μg · mL^-1时，促进IL-10产生的作用最强，与模型组比较差异有统计学意义（P<0.05）。青翘多糖在50~100 μg · mL^-1时，抑制LPS模型组产生IL-10。连翘叶多糖在0~50 μg · mL^-1时，促进LPS模型组产生IL-10。连翘叶多糖为50 μg · mL^-1时，促进IL-10产生的作用最强，与模型组比较差异有统计学意义（P<0.05）。连翘叶多糖在50~100 μg · mL^-1时，抑制LPS模型组产生IL-10。连翘叶多糖对IL-10的促进作用强于青翘多糖。

4　结论

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本研究对青翘和连翘叶多糖的结构解析及其抗炎活性进行了系统的探讨。通过对青翘和连翘叶多糖的结构分析，发现这些多糖具有复杂的糖链结构。青翘多糖主要通过4-Gal（p）-UA连接，而连翘叶多糖则主要通过4-Glc（p）连接。其结构特征为多糖的生物活性提供了基础。

在抗炎活性方面，青翘和连翘叶多糖均表现出显著的抗炎效果。青翘多糖能够有效LPS诱导的NO和TNF-α的产生，同时促进IL-10的生成。

综上所述，青翘和连翘叶多糖在抗炎活性方面表现出良好的潜力，为开发新型天然抗炎药物提供了重要的科学依据。

5　讨论

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连翘是山西省的重要道地药材，以其独特的生长环境和清热解毒、消肿散结等功效广泛应用于感冒、咽喉炎等疾病的治疗，成分包括苯乙醇苷、黄酮类等，具有抗炎、抗病毒和免疫调节作用。其中，连翘多糖因其免疫调节、抗氧化、抗肿瘤等生物活性，近年来备受关注，但研究仍显不足。有研究表明^[14-15]，结构对多糖的生物活性有非常大的影响。本研究的多糖结构分析结果表明，青翘多糖与连翘叶多糖在分子量、单糖组成、连接方式上都存在明显差异。

5.1　相对分子质量对青翘多糖和连翘叶多糖活性的影响

多糖的活性与其分子量密切相关，需达到适宜范围方能有效发挥功能。较高的分子量有助于多糖携带足够的活性基团^[16-17]。Liu等^[18]用超滤膜将灵芝多糖截留为RGLP（相对分子质量10 000 kDa以上）和EGLP（相对分子质量10 000 kDa以下）进行体外抗炎活性筛选，结果显示相对分子质量较大的RGLP活性更强。本研究结果表明，相对分子质量较大的连翘叶多糖抗炎活性优于相对分子质量较小的青翘多糖，推测相对分子质量是影响其抗炎活性的原因之一。

5.2　单糖组成对青翘多糖和连翘叶多糖活性的影响

青翘多糖由9个单糖组成，其中半乳糖醛酸含量最多。连翘叶多糖由8个单糖组成，其中葡萄糖含量最多。高含量的半乳糖醛酸（青翘多糖）与葡萄糖（连翘叶多糖）可能导致它们在免疫调节上的不同作用^[19]。半乳糖醛酸具有较强的负电荷，可能在免疫系统中具有更多的调节作用，尤其是在减少过度炎症反应方面^[20]。多糖中较高比例的葡萄糖，能够使其具有良好的抗炎活性^[21]。因此推测，青翘多糖中高比例的半乳糖醛酸和连翘叶多糖中高比例的葡萄糖发挥抗炎作用的重要原因。

5.3　糖苷键对青翘多糖和连翘叶多糖活性的影响

多糖的连接方式对其活性具有显著影响，这是由于不同的连接方式会改变多糖的空间构象、生物活性位点的可及性以及与靶标分子的相互作用能力^[22]。主链的组成直接影响多糖的刚性和与免疫受体的结合能力^[23]。本研究结果提示，青翘多糖主链主要由4-Gal（p）-UA组成，占比最高（41.06%），同时含有4-Glc（p）和少量4-Man（p），连翘叶多糖主链以4-Glc（p）为主，占比最高（46.81%），同时含有4-Gal（p）-UA（21.89%）。4-Gal（p）-UA和4-Glc（p）通常能够维持多糖的空间稳定性，便于与免疫系统中的模式识别受体（如TLRs或CLRs）相互作用，从而触发抗炎信号通路^[24]，使多糖发挥抗炎作用。

5.4　NO、TNF-α和IL-10与炎症反应密切相关

NO是炎症反应中生成的重要炎症因子，介导炎症等疾病的发生，其含量可以作为炎症反应程度的指标^[25]。多糖能调节NO的生成，通过促进NO合成酶的表达或降低NO的过量释放，进而减轻炎症反应^[26]。TNF-α是一种由巨噬细胞等免疫细胞产生的促炎细胞因子，它在促进炎症反应和调节细胞死亡中起着关键作用。IL-10是一种多细胞源性的细胞因子，其中单核细胞、巨噬细胞是其主要来源细胞。通过抑制促炎因子的产生、调节巨噬细胞极化和增强B细胞功能等多种机制来控制炎症反应。多糖类物质能够上调IL-10的表达，增强其抗炎作用。多糖能够通过抑制促炎细胞因子的释放和促进抗炎因子的合成，调整免疫平衡。本研究细胞实验结果显示，这2种多糖均能有效抑制LPS诱导的NO和TNF-α的产生，同时对IL-10的影响则呈现出浓度依赖性，但两者的抑制效果存在差异，其中，连翘叶多糖对NO和TNF-α的抑制作用强于青翘多糖。青翘多糖和连翘叶多糖在0~50 μg · mL^-1浓度范围内均能促进LPS模型组IL-10的产生。然而，当浓度提高到50~100 μg · mL^-1时，青翘多糖对IL-10的产生产生了抑制作用，而连翘叶多糖在此浓度范围内仍能促进IL-10的生成。综上所述，连翘叶多糖的体外抗炎活性优于青翘多糖。

尽管本研究揭示了青翘多糖和连翘叶多糖的抗炎效果，但仍需进一步探讨其具体的作用机制及在体内的生物活性。后续可以通过代谢组学技术来研究连翘叶多糖的抗炎活性机制，在动物炎症模型上进行验证。此外，未来的研究可以考虑多糖的联合应用效果，以期为临床抗炎治疗提供更为全面的理论基础。

基金

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^*2024年度山西省中医药管理局科研课题（连翘多糖分离纯化、结构解析及体外抗炎活性成分筛选）(2024ZYYB055)

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2025年第45卷第3期

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文章信息

doi: 10.16155/j.0254-1793.2024-1320

接收时间：2024-12-07
首发时间：2026-03-17
出版时间：2025-03-31

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作者

出版历史

收稿日期：2024-12-07

基金

^*2024年度山西省中医药管理局科研课题（连翘多糖分离纯化、结构解析及体外抗炎活性成分筛选）(2024ZYYB055)

作者信息

1.山西药科职业学院，太原 030031

2.山西大学中医药现代研究中心，太原 030006

3.山西大学化学生物学与分子工程教育部重点实验室，太原 030006

4.地产中药功效物质研究与利用山西省重点实验室，太原 030006

通讯作者:

^**Tel：（0351）7011202；E-mail：like@sxu.edu.cn

参考文献

分享链接

https://castjournals.cast.org.cn/joweb/ywfxzz/CN/10.16155/j.0254-1793.2024-1320

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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TxT

样品名称（sample name）	数均分子量（M_n）/kDa	峰值分子量（M_p）/kDa	重均分子量（M_w）/kDa	均分子量（M_z）/kDa	聚合物分散性指数（PDI）
青翘多糖（Green Fructus Forsythiae polysaccharide）	7.84±0.67	6.26±0.94	13.04±0.42	22.93±0.74	1.62±0.79
连翘叶多糖（Folium Forsythiae polysaccharide）	486.20±0.13	372.24±0.15	587.49±0.10	797.21±0.18	1.21±0.16

样品名称
（sample name）

数均分子量
（M_n）/kDa

峰值分子量
（M_p）/kDa

重均分子量
（M_w）/kDa

均分子量
（M_z）/kDa

聚合物分散性指数
（PDI）

青翘多糖
（Green Fructus Forsythiae polysaccharide）

7.84±0.67

6.26±0.94

13.04±0.42

22.93±0.74

1.62±0.79

连翘叶多糖
（Folium Forsythiae polysaccharide）

486.20±0.13

372.24±0.15

587.49±0.10

797.21±0.18

1.21±0.16

单糖名称（type of monosaccharide）	摩尔比（molar ratio）/%	含量（content）/（μg · mL^-1）
Fuc	1.02	3.64
Ara	10.80	35.31
Rha	10.65	38.08
Gal	9.21	36.13
Glc	14.31	56.14
Xyl	1.84	6.01
Man	3.91	15.35
Gal-UA	47.15	199.29
Glc-UA	1.11	4.67

单糖名称
（type of monosaccharide）

摩尔比
（molar ratio）/%

含量
（content）/（μg · mL^-1）

Fuc

1.02

3.64

Ara

10.80

35.31

Rha

10.65

38.08

Gal

9.21

36.13

Glc

14.31

56.14

Xyl

1.84

6.01

Man

3.91

15.35

Gal-UA

47.15

199.29

Glc-UA

1.11

4.67

单糖名称（type of monosaccharide）	摩尔比（molar ratio）/%	含量（content）/（μg · mL^-1）
Fuc	1.13	3.55
Ara	9.36	26.81
Rha	7.34	22.98
Gal	8.77	30.15
Glc	44.76	153.87
Xyl	2.38	6.82
Man	5.32	18.30
Gal-UA	20.95	77.60

单糖名称
（type of monosaccharide）

摩尔比
（molar ratio）/%

含量
（content）/（μg · mL^-1）

Fuc

1.13

3.55

Ara

9.36

26.81

Rha

7.34

22.98

Gal

8.77

30.15

Glc

44.76

153.87

Xyl

2.38

6.82

Man

5.32

18.30

Gal-UA

20.95

77.60

连接方式（type of linkage）	部分甲基化糖醇乙酸酯（PMAAs）	保留时间（retention time）/min	m/z	相对摩尔比（molar ratio）/%
t-Rha(p)	1,5-di-O-acetyl-6-deoxy-2,3,4-tri-O-methyl rhamnitol	4.706	59,72,89,102,115,118,131,145,162,175	4.75
t-Ara(f)	1,4-di-O-acetyl-2,3,5-tri-O-methyl arabinitol	4.975	71,87,102,118,129,145,161	2.20
t-Xyl(p)	1,5-di-O-acetyl-2,3,4-tri-O-methyl xylitol	5.818	88,101,102,118,119,161,162	1.12
2-Rha(p)	1,2,5-tri-O-acetyl-6-deoxy-3,4-di-O-methyl rhamnitol	7.379	89,100,115,130,131,175,190	1.21
t-Glc(p)	1,5-di-O-acetyl-2,3,4,6-tetra-O-methyl glucitol	7.487	87,102,118,129,145,161,162,205	4.90
3-Ara(f)	1,3,4-tri-O-acetyl-2,5-di-O-methyl arabinitol	8.032	87,99,113,118,129,201,233	1.08
t-Gal(p)-UA	1,5-di-O-acetyl-2,3,4,6-tetra-O-methyl galactitol	8.391	73,89,102,118,147,162,163,207	10.10
t-Gal(p)	1,5-di-O-acetyl-2,3,4,6-tetra-O-methyl galactitol	8.392	87,102,118,129,145,161,162,205	1.22
5-Ara(f)	1,4,5-tri-O-acetyl-2,3-di-O-methyl arabinitol	9.109	87,102,118,129,162,189	2.59
3,4-Rha(p)	1,3,4,5-tetra-O-acetyl-6-deoxy-2-O-methyl rhamnitol	9.909	87,99,113,118,129,149,173,275	1.27
4-Man(p)	1,4,5-tri-O-acetyl-2,3,6-tri-O-methyl mannitol	11.208	87,102,113,118,129,162,233	1.06
4-Gal(p)-UA	1,4,5-tri-O-acetyl-2,3,6-tri-O-methyl galactitol	12.002	87,99,102,115,118,131,162,175,235	41.06
4-Gal(p)	1,4,5-tri-O-acetyl-2,3,6-tri-O-methyl galactitol	12.037	87,102,113,118,129,162,233	9.44
4-Glc(p)	1,4,5-tri-O-acetyl-2,3,6-tri-O-methyl glucitol	12.303	87,102,113,118,129,162,233	8.54
6-Gal(p)	1,5,6-tri-O-acetyl-2,3,4-tri-O-methyl galactitol	13.627	87,99,102,118,129,162,189,233	1.14
3,4-Gal(p)-UA	1,3,4,5-tetra-O-acetyl-2,6-di-O-methyl galactitol	13.842	87,118,131,143,185,205,307	3.00
2,4-Glc(p)	1,2,4,5-tetra-O-acetyl-3,6-di-O-methyl glucitol	15.020	87,88,99,113,130,190,233	3.46
4,6-Glc(p)	1,4,5,6-tetra-O-acetyl-2,3-di-O-methyl glucitol	16.782	85,102,118,127,159,162,201,261	1.89

连接方式
（type of linkage）

部分甲基化糖醇乙酸酯
（PMAAs）

保留时间
（retention time）/min

m/z

相对摩尔比
（molar ratio）/%

t-Rha(p)

1,5-di-O-acetyl-6-deoxy-2,3,4-tri-O-methyl rhamnitol

4.706

59,72,89,102,115,118,131,145,162,175

4.75

t-Ara(f)

1,4-di-O-acetyl-2,3,5-tri-O-methyl arabinitol

4.975

71,87,102,118,129,145,161

2.20

t-Xyl(p)

1,5-di-O-acetyl-2,3,4-tri-O-methyl xylitol

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2-Rha(p)

1,2,5-tri-O-acetyl-6-deoxy-3,4-di-O-methyl rhamnitol

7.379

89,100,115,130,131,175,190

1.21

t-Glc(p)

1,5-di-O-acetyl-2,3,4,6-tetra-O-methyl glucitol

7.487

87,102,118,129,145,161,162,205

4.90

3-Ara(f)

1,3,4-tri-O-acetyl-2,5-di-O-methyl arabinitol

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87,99,113,118,129,201,233

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t-Gal(p)-UA

1,5-di-O-acetyl-2,3,4,6-tetra-O-methyl galactitol

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t-Gal(p)

1,5-di-O-acetyl-2,3,4,6-tetra-O-methyl galactitol

8.392

87,102,118,129,145,161,162,205

1.22

5-Ara(f)

1,4,5-tri-O-acetyl-2,3-di-O-methyl arabinitol

9.109

87,102,118,129,162,189

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3,4-Rha(p)

1,3,4,5-tetra-O-acetyl-6-deoxy-2-O-methyl rhamnitol

9.909

87,99,113,118,129,149,173,275

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4-Man(p)

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1.06

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41.06

4-Gal(p)

1,4,5-tri-O-acetyl-2,3,6-tri-O-methyl galactitol

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87,102,113,118,129,162,233

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4-Glc(p)

1,4,5-tri-O-acetyl-2,3,6-tri-O-methyl glucitol

12.303

87,102,113,118,129,162,233

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6-Gal(p)

1,5,6-tri-O-acetyl-2,3,4-tri-O-methyl galactitol

13.627

87,99,102,118,129,162,189,233

1.14

3,4-Gal(p)-UA

1,3,4,5-tetra-O-acetyl-2,6-di-O-methyl galactitol

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2,4-Glc(p)

1,2,4,5-tetra-O-acetyl-3,6-di-O-methyl glucitol

15.020

87,88,99,113,130,190,233

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4,6-Glc(p)

1,4,5,6-tetra-O-acetyl-2,3-di-O-methyl glucitol

16.782

85,102,118,127,159,162,201,261

1.89

连接方式（type of linkage）	部分甲基化糖醇乙酸酯（PMAAs）	保留时间（retention time）/min	m/z	相对摩尔比（molar ratio）/%
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t-Ara(p)	1,5-di-O-acetyl-2,3,4-tri-O-methyl arabinitol	6.507	88,101,102,117,118,129,161	1.70
t-Gal(p)-UA	1,5-di-O-acetyl-2,3,4,6-tetra-O-methyl galactitol	8.843	73,89,102,118,147,162,163,207	3.92
t-Gal(p)	1,5-di-O-acetyl-2,3,4,6-tetra-O-methyl galactitol	8.850	87,102,118,129,145,161,162,205	2.92
2,3-Rha(p)	1,2,3,5-tetra-O-acetyl-6-deoxy-4-O-methyl rhamnitol	10.221	71,89,101,131,262	1.20
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4-Glc(p)	1,4,5-tri-O-acetyl-2,3,6-tri-O-methyl glucitol	12.902	87,102,113,118,129,162,233	46.81
3,4-Gal(p)-UA	1,3,4,5-tetra-O-acetyl-2,6-di-O-methyl galactitol	14.435	87,118,131,143,185,205,307	1.76
2,4-Glc(p)	1,2,4,5-tetra-O-acetyl-3,6-di-O-methyl glucitol	15.608	87,88,113,130,190,233	1.76
4,6-Glc(p)	1,4,5,6-tetra-O-acetyl-2,3-di-O-methyl glucitol	17.008	85,102,118,127,159,162,201,261	2.17
3,6-Gal(p)	1,3,5,6-tetra-O-acetyl-2,4-di-O-methyl galactitol	17.524	87,101,118,129,160,189,234	1.91

连接方式
（type of linkage）

部分甲基化糖醇乙酸酯
（PMAAs）

保留时间
（retention time）/min

m/z

相对摩尔比
（molar ratio）/%

t-Rha(p)

1,5-di-O-acetyl-6-deoxy-2,3,4-tri-O-methyl rhamnitol

5.025

59,72,89,102,115,118,131,145,162,175

1.44

t-Ara(f)

1,4-di-O-acetyl-2,3,5-tri-O-methyl arabinitol

5.309

71,87,102,118,129,145,161

3.03

t-Xyl(p)

1,5-di-O-acetyl-2,3,4-tri-O-methyl xylitol

6.338

88,101,102,118,119,161,162

0.37

t-Ara(p)

1,5-di-O-acetyl-2,3,4-tri-O-methyl arabinitol

6.507

88,101,102,117,118,129,161

1.70

t-Gal(p)-UA

1,5-di-O-acetyl-2,3,4,6-tetra-O-methyl galactitol

8.843

73,89,102,118,147,162,163,207

3.92

t-Gal(p)

1,5-di-O-acetyl-2,3,4,6-tetra-O-methyl galactitol

8.850

87,102,118,129,145,161,162,205

2.92

2,3-Rha(p)

1,2,3,5-tetra-O-acetyl-6-deoxy-4-O-methyl rhamnitol

10.221

71,89,101,131,262

1.20

4-Man(p)

1,4,5-tri-O-acetyl-2,3,6-tri-O-methyl mannitol

11.722

87,102,113,118,129,162,233

2.60

4-Gal(p)-UA

1,4,5-tri-O-acetyl-2,3,6-tri-O-methyl galactitol

12.525

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21.89

4-Gal(p)

1,4,5-tri-O-acetyl-2,3,6-tri-O-methyl galactitol

12.568

87,102,113,118,129,162,233

6.51

4-Glc(p)

1,4,5-tri-O-acetyl-2,3,6-tri-O-methyl glucitol

12.902

87,102,113,118,129,162,233

46.81

3,4-Gal(p)-UA

1,3,4,5-tetra-O-acetyl-2,6-di-O-methyl galactitol

14.435

87,118,131,143,185,205,307

1.76

2,4-Glc(p)

1,2,4,5-tetra-O-acetyl-3,6-di-O-methyl glucitol

15.608

87,88,113,130,190,233

1.76

4,6-Glc(p)

1,4,5,6-tetra-O-acetyl-2,3-di-O-methyl glucitol

17.008

85,102,118,127,159,162,201,261

2.17

3,6-Gal(p)

1,3,5,6-tetra-O-acetyl-2,4-di-O-methyl galactitol

17.524

87,101,118,129,160,189,234

1.91