药物分析杂志

色谱主编号（column）	品牌（brand）	型号（type）	色谱主编号（column）	品牌（brand）	型号（type）
col 1	Ultimate	XB-C₁₈	col 9	Xtimate	C₁₈
col 2	GL Sciences	Wondasil C₁₈	col 10	Ultimate	LP-C₁₈
col 3	迪马（Dima）	Kromasil 100A C₁₈	col 11	Ultimate	AQ-C₁₈
col 4	中谱科技（ZHONGPU TECHNOLOGY）	RD-C₁₈	col 12	ZORBAX	Eclipse XDB-C₁₈
col 5	中谱红	AQ-C₁₈	col 13	Pntulips	QS-C₁₈
col 6	Thermo	Hypersil GOLD aQ C₁₈	col 14	ACE	5 C₁₈
col 7	依利特（Elite）	Suoersil ODS2	col 15	GRACE	Alltima C₁₈
col 8	中谱红	PR-C₁₈	col 16	GL Sciences	Wondasil C₁₈-WR

色谱主编号（column）	品牌（brand）	型号（type）	色谱主编号（column）	品牌（brand）	型号（type）
col 1	Ultimate	XB-C₁₈	col 9	Xtimate	C₁₈
col 2	GL Sciences	Wondasil C₁₈	col 10	Ultimate	LP-C₁₈
col 3	迪马（Dima）	Kromasil 100A C₁₈	col 11	Ultimate	AQ-C₁₈
col 4	中谱科技（ZHONGPU TECHNOLOGY）	RD-C₁₈	col 12	ZORBAX	Eclipse XDB-C₁₈
col 5	中谱红	AQ-C₁₈	col 13	Pntulips	QS-C₁₈
col 6	Thermo	Hypersil GOLD aQ C₁₈	col 14	ACE	5 C₁₈
col 7	依利特（Elite）	Suoersil ODS2	col 15	GRACE	Alltima C₁₈
col 8	中谱红	PR-C₁₈	col 16	GL Sciences	Wondasil C₁₈-WR

色谱柱（column）	线性方程（linear equation）	r
col 1	Y=1.006 5X-0.174 5	1.000
col 2	Y=0.980 7X+0.340 1	0.999 9
col 3	Y=0.993 5X-0.630 4	0.999 7
col 4	Y=0.996 9X+0.053 4	0.999 8
col 5	Y=1.011 6X+0.377	0.999 9
col 6	Y=0.976X-0.367 5	0.998 8
col 7	Y=1.003 8X-0.187 5	1.000
col 8	Y=1.007 2X+0.351 8	1.000
col 9	Y=0.981 9X-0.237 7	0.999 8
col 10	Y=1.010 8X+0.298 3	0.999 7
col 11	Y=1.009 1X+0.384 4	0.999 8
col 12	Y=0.999 8X-0.033 3	0.999 8
col 16	Y=1.022 1X-0.174 2	0.999 5

色谱柱（column）	线性方程（linear equation）	r
col 1	Y=1.006 5X-0.174 5	1.000
col 2	Y=0.980 7X+0.340 1	0.999 9
col 3	Y=0.993 5X-0.630 4	0.999 7
col 4	Y=0.996 9X+0.053 4	0.999 8
col 5	Y=1.011 6X+0.377	0.999 9
col 6	Y=0.976X-0.367 5	0.998 8
col 7	Y=1.003 8X-0.187 5	1.000
col 8	Y=1.007 2X+0.351 8	1.000
col 9	Y=0.981 9X-0.237 7	0.999 8
col 10	Y=1.010 8X+0.298 3	0.999 7
col 11	Y=1.009 1X+0.384 4	0.999 8
col 12	Y=0.999 8X-0.033 3	0.999 8
col 16	Y=1.022 1X-0.174 2	0.999 5

指标（indexes）	LCTRS	RRT
最大绝对偏差（maximum absolute deviation）/min	1.554	1.495
最大相对偏差（maximum relative deviation）/%	3.61	9.10
绝对偏差≤0.3 min百分比（the percentage that absolute deviation≤0.3 min）/%	76.92	70.77
相对偏差≤5%百分比（the percentage that relative deviation≤5%）/%	100	93.85
绝对偏差≤0.5 min的适用色谱柱数量（the number of applicable columns with absolute deviation≤0.5 min）	8	7
相对偏差≤5%的适用色谱柱数量（the number of applicable columns with relative deviation≤5%）	13	9

指标（indexes）	LCTRS	RRT
最大绝对偏差（maximum absolute deviation）/min	1.554	1.495
最大相对偏差（maximum relative deviation）/%	3.61	9.10
绝对偏差≤0.3 min百分比（the percentage that absolute deviation≤0.3 min）/%	76.92	70.77
相对偏差≤5%百分比（the percentage that relative deviation≤5%）/%	100	93.85
绝对偏差≤0.5 min的适用色谱柱数量（the number of applicable columns with absolute deviation≤0.5 min）	8	7
相对偏差≤5%的适用色谱柱数量（the number of applicable columns with relative deviation≤5%）	13	9

色谱柱（column）	天麻素（gastrodin）	山慈菇素Ⅰ （shancigusin Ⅰ）	2-O-葡萄糖基白及苷（dactylorhin A）	手参苷Ⅲ （gymnosideⅢ）	白及苷（militarine）	山药素Ⅲ （batatasin Ⅲ）
col 1	/	-0.135	0.041	-0.280	0.050	-0.186	/	-0.090	0.084	/	0.165	-0.135
col 2	/	0.347	0.013	0.452	0.141	0.229	/	0.295	0.441	/	0.599	0.329
col 3	/	0.379	-0.232	-0.420	-0.040	-0.211	/	-0.162	0.143	/	0.536	0.460
col 4	/	-0.057	-0.186	-0.306	-0.039	-0.156	/	-0.144	0.138	/	-0.396	-0.586
col 5	/	0.193	0.053	0.072	-0.021	-0.005	/	-0.030	0.028	/	-0.402	-0.540
col 6	/	0.068	0.242	0.250	0.397	0.408	/	-0.017	0.009	/	1.554	1.495
col 7	/	-0.156	-0.110	-0.242	-0.022	-0.149	/	-0.140	0.130	/	0.004	-0.133
col 8	/	0.232	0.125	0.212	0.008	0.090	/	0.042	-0.043	/	-0.184	-0.237
col 9	/	-0.301	-0.292	-0.266	-0.120	-0.071	/	0.083	-0.111	/	-0.574	-0.312
col 10	/	0.031	0.168	0.222	0.070	0.128	/	0.044	-0.055	/	-0.627	-0.581
col 11	/	0.188	0.197	0.359	0.024	0.187	/	0.140	-0.150	/	-0.412	-0.297
col 12	/	-0.133	-0.270	-0.369	-0.102	-0.196	/	-0.107	0.095	/	-0.494	-0.592
col 16	/	0.091	0.350	0.347	0.025	0.019	/	-0.039	0.033	/	0.993	0.890

色谱柱（column）	天麻素（gastrodin）	山慈菇素Ⅰ （shancigusin Ⅰ）	2-O-葡萄糖基白及苷（dactylorhin A）	手参苷Ⅲ （gymnosideⅢ）	白及苷（militarine）	山药素Ⅲ （batatasin Ⅲ）
col 1	/	-0.135	0.041	-0.280	0.050	-0.186	/	-0.090	0.084	/	0.165	-0.135
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col 5	/	0.193	0.053	0.072	-0.021	-0.005	/	-0.030	0.028	/	-0.402	-0.540
col 6	/	0.068	0.242	0.250	0.397	0.408	/	-0.017	0.009	/	1.554	1.495
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色谱柱（column）	天麻素（gastrodin）	山慈菇素Ⅰ （shancigusin Ⅰ）	2-O-葡萄糖基白及苷（dactylorhin A）	手参苷Ⅲ （gymnoside Ⅲ）	白及苷（militarine）	山药素Ⅲ （batatasin Ⅲ）
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col 2	/	8.256	0.048	1.612	0.445	0.696	/	0.935	1.344	/	1.336	0.739
col 3	/	9.096	-0.877	-1.508	-0.128	-0.648	/	-0.517	0.439	/	1.214	1.039
col 4	/	-1.316	-0.682	-1.067	-0.119	-0.464	/	-0.446	0.410	/	-0.871	-1.284
col 5	/	4.401	0.189	0.247	-0.065	-0.015	/	-0.091	0.082	/	-0.866	-1.159
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col 7	/	-3.630	-0.406	-0.847	-0.069	-0.446	/	-0.436	0.388	/	0.010	-0.293
col 8	/	5.337	0.453	0.732	0.025	0.265	/	0.129	-0.127	/	-0.399	-0.513
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色谱柱（column）	天麻素（gastrodin）	山慈菇素Ⅰ （shancigusin Ⅰ）	2-O-葡萄糖基白及苷（dactylorhin A）	手参苷Ⅲ （gymnoside Ⅲ）	白及苷（militarine）	山药素Ⅲ （batatasin Ⅲ）
col 1	/	-3.144	0.150	-0.974	0.155	-0.554	/	-0.278	0.250	/	0.363	-0.296
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col 16	/	2.103	1.278	1.205	0.076	0.057	/	-0.122	0.099	/	2.176	1.946

色谱柱（column）	天麻素（gastrodin）	山慈菇素Ⅰ （shancigusin Ⅰ）	2-O-葡萄糖基白及苷（dactylorhin A）	手参苷Ⅲ （gymnoside Ⅲ）	白及苷（militarine）	山药素Ⅲ （batatasin Ⅲ）
col 17	/	0.368	0.201	0.431	-0.023	0.200	/	0.200	-0.194	/	0.469	0.586
col 18	/	-0.184	-0.113	-0.214	-0.004	-0.099	/	-0.081	0.076	/	-0.328	-0.363
col 19	/	-0.190	-0.089	-0.225	0.026	-0.105	/	-0.122	0.118	/	-0.141	-0.234

色谱柱（column）	天麻素（gastrodin）	山慈菇素Ⅰ （shancigusin Ⅰ）	2-O-葡萄糖基白及苷（dactylorhin A）	手参苷Ⅲ （gymnoside Ⅲ）	白及苷（militarine）	山药素Ⅲ （batatasin Ⅲ）
col 17	/	0.368	0.201	0.431	-0.023	0.200	/	0.200	-0.194	/	0.469	0.586
col 18	/	-0.184	-0.113	-0.214	-0.004	-0.099	/	-0.081	0.076	/	-0.328	-0.363
col 19	/	-0.190	-0.089	-0.225	0.026	-0.105	/	-0.122	0.118	/	-0.141	-0.234

色谱柱（column）	天麻素（gastrodin）	山慈菇素Ⅰ （shancigusin Ⅰ）	2-O-葡萄糖基白及苷（dactylorhin A）	手参苷Ⅲ （gymnoside Ⅲ）	白及苷（militarine）	山药素Ⅲ （batatasin Ⅲ）
col 17	/	8.663	0.755	1.538	-0.072	0.445	/	0.631	-0.432	/	1.042	1.305
col 18	/	-4.247	-0.413	-0.746	-0.011	-0.214	/	-0.250	0.165	/	-0.714	-0.789
col 19	/	-4.416	-0.329	-0.792	0.082	-0.231	/	-0.381	0.260	/	-0.311	-0.515

色谱柱（column）	天麻素（gastrodin）	山慈菇素Ⅰ （shancigusin Ⅰ）	2-O-葡萄糖基白及苷（dactylorhin A）	手参苷Ⅲ （gymnoside Ⅲ）	白及苷（militarine）	山药素Ⅲ （batatasin Ⅲ）
col 17	/	8.663	0.755	1.538	-0.072	0.445	/	0.631	-0.432	/	1.042	1.305
col 18	/	-4.247	-0.413	-0.746	-0.011	-0.214	/	-0.250	0.165	/	-0.714	-0.789
col 19	/	-4.416	-0.329	-0.792	0.082	-0.231	/	-0.381	0.260	/	-0.311	-0.515

基于双标线性校正技术的白及多组分定性分析^*

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林昶 ¹ , 刘苏情 ¹ , 张静 ¹ , 杨聪 ¹ , 钱海兵 ¹^,^** , 杨长福 ¹ , 赵君 ²

药物分析杂志 | 成分分析 2025,45(3): 392-399

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药物分析杂志 | 成分分析 2025, 45(3): 392-399

基于双标线性校正技术的白及多组分定性分析^*

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林昶¹, 刘苏情¹, 张静¹, 杨聪¹, 钱海兵¹^,^**, 杨长福¹, 赵君²

作者信息

1.贵州中医药大学，贵阳 550000

2.贵州同德药业股份有限公司，铜仁 554300

Tel：15285966608；E-mail：375718640@qq.com

通讯作者:

^**Tel：13984350701；E-mail：279753407@qq.com

Qualitative determination of multiple components in Bletillae Rhizoma by linear calibration using two reference substances^*

Chang LIN¹, Su-qing LIU¹, Jing ZHANG¹, Cong YANG¹, Hai-bing QIAN¹^,^**, Chang-fu YANG¹, Jun ZHAO²

Affiliations

1. Guizhou University of Traditional Chinese Medicine, Guiyang 550000, China

2. Guizhou Tongde Pharmaceuticals Co., Ltd, Tongren 554300, China

出版时间: 2025-03-31 doi: 10.16155/j.0254-1793.2024-0317

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摘要

收起

目的：运用高效液相色谱（HPLC）法对白及中的6个成分进行分析，通过双标线性校正技术，对成分的保留时间进行预测，探讨其在色谱峰定性上的可行性和准确性，并将该方法与相对保留时间法进行比较。方法：采用高效液相色谱法，以水为流动相A，乙腈为流动相B，梯度洗脱（0~11 min，12%B；11~58 min，12%B→68%B；58~65 min，68%B→12%B），流速为0.9 mL · min^-1，进样量为5 μL，柱温为30 ℃，检测波长为280 nm。通过测定16根不同C₁₈色谱柱上6个成分的实际保留时间，计算出标准保留时间。以天麻素（峰1）和手参苷Ⅲ（峰4）作为双标成分，运用双标线性校正技术预测其他成分的保留时间，并在另外3个未知C₁₈色谱柱上进行验证。利用RRT法，以白及苷（峰5）为参照化合物，预测其他5个成分的保留时间。结果：建立了对白及6个成分的定性分析方法，可以准确预测白及中各个成分的保留时间。6个成分的标准保留时间分别为天麻素4.279 min、手参苷Ⅲ 32.145 min、山慈菇素Ⅰ 27.220 min、2-O-葡萄糖基白及苷28.603 min、白及苷33.509 min、山药素Ⅲ 45.504 min。结论：双标线性校正法可以提高对各组分保留时间的预测能力，从而提高分析结果的准确性和可靠性。

关键词

白及 / 双标线性校正技术 / 相对保留时间法 / 标准保留时间 / 色谱峰定性

Abstract

收起

Objective: To analyze six components in Bletillae Rhizoma using high-performance liquid chromatography. Through the linear calibration using two reference substances method, the retention time of the components was predicted, and the feasibility and accuracy of this technique in the qualitative identification of chromatographic peaks were explored. This method was also compared with the relative retention time (RRT) method. Methods: High-performance liquid chromatography was employed using an Ultimate XB-C₁₈ column (250 mm×4.6 mm, 5 μm). The mobile phase consisted of water (A) and acetonitrile (B), with a gradient elution as follows: 0-11 min,12% B; 11-58 min, 12% B to 68% B; 58-65 min, 68% B to 12% B. The flow rate was 0.9 mL · min^-1, the injection volume was 5 μL, the column temperature was maintained at 30 °C, and the detection wavelength was set at 280 nm. By measuring the actual retention time of the six components on 16 different C₁₈ chromatographic columns, the standard retention time was calculated. Gastrodin (Peak 1) and gymnadenin Ⅲ (Peak 4) were used as the double-standard compounds.The linear calibration using two reference substances method was used to predict the retention time of other components,and the prediction was verified on another three unknown C₁₈ chromatographic columns. With the relative retention time(RRT) method, using bletilloside (Peak 5) as the reference compound, the retention times of the other five components were predicted. Results: A qualitative analysis method for the six components in Bletillae Rhizoma was established,which could accurately predict the retention times of each component in Bletillae Rhizoma. The standard retention times of the six components as as follows: gastrodin 4.279 min, gymnadenin Ⅲ 32.145 min, pleione bulbocodioides factor Ⅰ27.220 min, 2-O-glucosylbletilloside 28.603 min, bletilloside 33.509 min, and batatasin Ⅲ 45.504 min. Conclusion: The linear calibration using two reference substances method can improve the prediction ability of the retention time of each component in Bletillae Rhizoma, thereby enhancing the accuracy and reliability of the analysis results.

Key words

Bletillae Rhizoma / liner calibration with two reference substances / relative retention time / relative retention time / peak localization in chromatography

引用本文

林昶, 刘苏情, 张静, 杨聪, 钱海兵, 杨长福, 赵君. 基于双标线性校正技术的白及多组分定性分析^*. 药物分析杂志, 2025 , 45 (3) : 392 -399 . DOI: 10.16155/j.0254-1793.2024-0317

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正文

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中药质量控制是确保中药产品安全、有效和符合规范的重要环节。中药成分的复杂性与多样性使得其质量控制具有一定挑战性，不同批次、不同产地的中药原料可能存在质量差异，需要针对性的控制措施。随着现代技术的发展，高效液相色谱、气相色谱、质谱及其联用等现代技术被广泛应用于中药质量控制，提高了对中药成分的分析和检测的精准度和可靠性。中药标准物质在中药质量控制中扮演着至关重要的角色，是保障中药产品质量的重要手段之一，但中药标准物质存在制备复杂，代表性不足，标准化难度大和成本高昂等缺点，给标准物质的使用与发展带来了挑战^[1]。目前，一测多评法与替代对照品法多作为减少标准物质，增加检测成分的常用方法^[2-6]，2020年版《中华人民共和国药典》中，黄连、银黄口服液等产品采用相对保留时间（relative retention time，RRT）法进行定性分析。然而，由于色谱柱不同导致的色谱峰定位误差较大，RRT法的适用性受到限制。

双标线性校正（linear calibration with two reference substances，LCTRC）法基于一个原理，即待测试成分在不同的色谱柱中的保留时间呈线性相关，通过选用2种比较物质来对多个色谱峰进行定性鉴定^[7-8]。利用这一技术，显著提升了色谱峰识别的准确度和色谱柱的通用性，还节约了检测成本。目前，该方法已经广泛应用于多组分色谱峰定性分析及含量测定中^[9-15]。

白及是兰科植物白及Bletilla striata（Thunb.）Reichb.f.的干燥块茎，气微，味苦，性微寒，归肺、肝、胃经^[16]，具有止血补肺、生肌止痛等功效，常用于治疗内外伤出血、疮疡肿毒、皮肤皲裂等病症^[17]。目前，对于白及的相关文献报道多集中于白及苷（militarine）的含量测定及多糖提取工艺的研究^[18-19]，对其相关的定性分析还处于空缺阶段。查阅文献发现，白及中的指标成分为天麻素、山慈菇素Ⅰ、2-O-葡萄糖基白及苷、手参苷Ⅲ、白及苷、山药素Ⅲ^[20-22]。本研究运用HPLC法，对白及中上述6个成分进行定性分析，以期为白及质量控制提供参考，拓宽双标线性校正法在中药分析中的应用。

1　仪器与试药

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1.1　仪器

LC-16型高效液相色谱仪（苏州岛津仪器有限公司），SK8200LHC型超声波清洗器（上海科导超声仪器有限公司），WP-UP-WF-20型微量分析型超纯水机（四川沃特尔水处理设备有限公司），ME204E/02X型万分之一电子天平（梅特勒-托利多有限公司）。

1.2　试药

对照品天麻素（批号PS012103，纯度98.5%）、山慈菇素Ⅰ（批号PS012009，纯度98.0%）、2-O-葡萄糖基白及苷（批号PS011099，纯度98.0%）均购自成都普思生物科技有限公司，手参苷Ⅲ（批号WP23051303，纯度98%）、白及苷（批号WP23091501，纯度8%）、山药素Ⅲ（批号WP24010210，纯度98%）均购自四川省维克奇生物科技有限公司。乙腈、甲醇为色谱纯，购自安徽天地高纯溶剂有限公司；水为实验室超纯水系统制备所得。

白及药材采集自贵州省黔东南苗族侗族自治州三穗县，经贵州中医药大学孙庆文教授鉴定为兰科植物白及Bletilla striata（Thunb.）Reichb. f.的干燥块茎。

2　方法与结果

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2.1　色谱条件

16 根色谱柱，编号col 1~col 16，规格为250 mm×4.6 mm，5 μm，详细信息见表1。以水（A）-乙腈（B）为流动相，梯度洗脱（0~11 min，12%B；11~58 min，12%B→68%B；58~65 min，68%B→ 12%B）,流速为0.9 mL · min^-1,进样量为 5 μL,柱温为 30℃,检测波长为 280 nm。方法学考察均使用col 1色谱柱。

2.2　混合对照品溶液的制备

取天麻素、2-O-葡萄糖基白及苷、山慈菇素Ⅰ、手参苷Ⅲ、山药素Ⅲ、白及苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成质量浓度分别为2.621 3、0.412 7、3.051 6、0.653 2、4.560 7、1.912 6 mg · mL^-1的对照品储备液；分别精密称取天麻素、2-O-葡萄糖基白及苷、山慈菇素Ⅰ、山药素Ⅲ、白及苷的对照品储备液各 50 μL，手参苷Ⅲ对照品储备液 100 μL，置于同一1 mL量瓶中，加50% 甲醇定容，摇匀，滤过，即得混合对照品溶液。

2.3　供试品溶液制备

取白及粉末（过3号筛）约0.5 g，精密称定，加入50% 甲醇25 mL，称量，加热回流处理 60 min，放冷后再次称量，用50%甲醇补足损失的量，摇匀，3 000 r · min^-1离心10 min，取离心液蒸干，残渣用甲醇溶解，转移至25 mL 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得。

2.4　方法学考察

2.4.1　精密度试验

取白及样品（批号20231013），按照“2.3”项下方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下，使用色谱柱col 1连续进样测定6次，结果显示天麻素、山慈菇素Ⅰ、2-O-葡萄糖基白及苷、手参苷Ⅲ、白及苷、山药素Ⅲ保留时间的RSD分别为0.32%、0.080%、0.076%、0.057%、0.059%、0.053%，表明该方法具有良好的精密度。

2.4.2　重复性试验

取白及样品（批号20231013）6份，按照“2.3”项下方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下，使用色谱柱col 1进行测定，结果显示天麻素、山慈菇素Ⅰ、2-O-葡萄糖基白及苷、手参苷Ⅲ、白及苷、山药素Ⅲ保留时间的RSD分别为0.045%、0.037%、0.031%、0.024%、0.024%、0.021%，表明该方法具有良好的重复性。

2.4.3　稳定性试验

取白及样品（批号20231013），按照“2.3”项下方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下，使用col 1色谱柱分别于0、2、4、8、12和24 h进样，结果显示天麻素、山慈菇素Ⅰ、2-O-葡萄糖基白及苷、手参苷Ⅲ、白及苷、山药素Ⅲ保留时间的RSD分别为0.082%、0.043%、0.052%、0.053%、0.051%、0.045%，表明该方法具有良好的稳定性。

2.4.4　色谱柱耐用性试验

取白及样品（批号20231013），按照“2.3”项下方法制备供试品溶液。在上述色谱条件下，使用上述16根不同色谱柱（col 1~col 16）分别分别进样测定，考察6个成分的分离效果。结果显示采用col 13、col 14、col 15色谱柱的色谱图中存在色谱柱分离度较差的问题，其余色谱柱均可将6个对照品色谱峰较好分离。图1为样品的代表性图谱。

3　双标线性校正法定性研究

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3.1　双标的选择和标准保留时间的计算

王龙星等^[23]研究发现，在不同色谱柱及色谱系统中，保持相同的操作条件下的保留时间均呈线性相关。在对各成分进行色谱峰的定位时，不同对照品保留时间也不同，因此，可以得到样品的实际保留时间，在16根色谱柱中，col 13、col 14和col 15无法将6个成分分离，其余13根色谱柱的数据均可以进行分析。孙磊等^[6]将标准保留时间（standard retention time，SRT）定义为不同色谱柱上各成分的实际保留时间的均值。以6个成分的SRT为横坐标（天麻素4.279 min、2-O-葡萄糖基白及苷28.553 min、山慈菇素Ⅰ 27.179 min、手参苷Ⅲ 32.145 min、山药素Ⅲ 45.339 min、白及苷33.145 min），实际保留时间为纵坐标，可以得到13根色谱柱中各成分的拟合结果，见图2。线性回归方程和相关系数见表2。结果显示，各色谱柱上不同成分的线性关系良好。

3.2　双标化合物的确定和优化

采用DRS Origin软件对13根色谱柱的数据进行分析，系统通过方法优化，对保留时间偏差、预测准确率和色谱柱符合率自动进行计算，得到天麻素与手参苷Ⅲ组合的预测正确率为100%，色谱柱符合率为80.77%。根据预测结果，将天麻素与手参苷Ⅲ作为白及高效液相色谱的双标化合物，以色谱柱col 1为例，将这2个成分的标准保留时间（天麻素4.279 min、手参苷Ⅲ 32.145 min）作为横坐标，实际保留时间（天麻素4.164 min、手参苷Ⅲ 32.220 min）为纵坐标，得到两点方程Y=1.006 8X-0.143 7，之后将其余4个成分的标准保留时间代入方程（X值），得到4个成分的预测保留时间分别为山慈菇素Ⅰ 27.220 min、2-O-葡萄糖基白及苷28.603 min、白及苷33.509 min、山药素Ⅲ45.504 min。实际保留时间依次为27.038、28.514、33.597、45.447 min，偏差的绝对值依次为0.041、0.050、0.084、0.165 min，均不超过0.5 min，满足要求^[24]，表明在色谱柱col 1上，该双标成分的预测结果良好。

3.3　LCTRS法与RRT法的对比

将LCTRS法与RRT法这2种对照品替代法在定性分析中的准确性进行比较，LCTRS 法以天麻素与手参苷Ⅲ作为双标化合物，RRT 法则以白及苷进行参照，相对保留时间法的均值分别为天麻素0.128、山慈菇素Ⅰ0.813、2-O-葡萄糖基白及苷0.854、手参苷Ⅲ 0.962、山药素Ⅲ 1.357。如表3~5所见，除最大绝对偏差外，其余5项指标都表明LCTRS 法相较于RRT 法在定性分析上的优势更大，适用范围广，能够更准确地预测成组分的保留时间。

3.4　样品分析

使用3根新的色谱柱（col 17、col 18和col 19），对已建立的2种方法进行验证，结果见表6、7。将2种方法得到的预测值与实测值进行分析，结果表明，LCTRC法所得到的各成分的绝对偏差与相对偏差均低于RRT法，可较好地预测白及样品中各个指标成分在3根新色谱柱上的保留时间，且准确度更高。

4　讨论

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4.1　检测波长的选择

本实验考察了270 nm和280 nm 2种检测波长，通过测量样品的吸收度，确定最大吸收波长，结合色谱峰的分离效果，最终选择280 nm作为检测波长，白及6个成分的吸收效果较好，其他组分的干扰较小。

4.2　方法适用性

中药通常蕴含多种特征成分，这些成分的类型丰富多样。LCTRC法能同时对多个不同类型的成分进行有效处理 ,无需针对每种类型的成分构建独立的分析方法。本研究选用的6个成分共分为3种类型（天麻素为苷类；山慈菇素Ⅰ、山药素Ⅲ为联苄类；2-O-葡萄糖基白及苷、手参苷Ⅲ、白及苷为酯类）。因此，LCTRC法不仅对相同类型的成分有较好的预测效果，对不同类型成分的预测效果也较好，减少了实验操作的复杂性，适用于中药成分分析中的大规模数据处理需求。

4.3　应用

作为替代对照品法的一种，LCTRC法对于对照品较为昂贵或无法获取相应对照品的情况展现了较大的优势。通过利用双标成分来调整和校正数据，在确保双标成分能够较好预测的情况下，LCTRC法能够提供一种有用的替代方案，模拟对照品的效果，从而在缺乏对照品或对照品昂贵的情况下仍能进行准确的定性分析。同时为复杂成分的分析提供了更加简便的方法，使之能够同时检测不同类型成分，通用性强。

对目标成分的准确定位是中药材含量测定的前提。在中药材研究过程中，定性分析也是十分重要的一环。根据实验结果显示，LCTRC法对于白及多种成分的定性分析有较大优势。相较于RRT法，LCTRC法可以提高对各组分保留时间的准确预测能力，从而提高分析结果的准确性和可靠性，且不受色谱柱类型限制，可以适用于不同类型的成分，从而扩大了其在不同分析条件下的适用范围，减少检验成本。但是，双标线性校正技术目前仅能用于高效液相色谱的定性分析上，对于高效液相色谱的含量测定、气相色谱及质谱分析仍需要更加深入的研究。

基金

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^*黔产白及产地加工一体化加工技术研究与白及多糖智能化提取加工与应用(黔科合支撑[2022]重点023-02)
贵州省高等学校中药（民族药）药性与效应研究重点实验室资助项目(黔教技〔2023〕18号)
贵州中医药大学国家与省级科技创新人才团队培育项目(贵中医TD合字〔2023〕3号)

参考文献

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文献

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2025年第45卷第3期

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doi: 10.16155/j.0254-1793.2024-0317

接收时间：2024-05-14
首发时间：2026-03-17
出版时间：2025-03-31

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收稿日期：2024-05-14

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^*黔产白及产地加工一体化加工技术研究与白及多糖智能化提取加工与应用(黔科合支撑[2022]重点023-02)

贵州省高等学校中药（民族药）药性与效应研究重点实验室资助项目(黔教技〔2023〕18号)

贵州中医药大学国家与省级科技创新人才团队培育项目(贵中医TD合字〔2023〕3号)

作者信息

1.贵州中医药大学，贵阳 550000

2.贵州同德药业股份有限公司，铜仁 554300

通讯作者:

^**Tel：13984350701；E-mail：279753407@qq.com

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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TxT

色谱主编号（column）	品牌（brand）	型号（type）	色谱主编号（column）	品牌（brand）	型号（type）
col 1	Ultimate	XB-C₁₈	col 9	Xtimate	C₁₈
col 2	GL Sciences	Wondasil C₁₈	col 10	Ultimate	LP-C₁₈
col 3	迪马（Dima）	Kromasil 100A C₁₈	col 11	Ultimate	AQ-C₁₈
col 4	中谱科技（ZHONGPU TECHNOLOGY）	RD-C₁₈	col 12	ZORBAX	Eclipse XDB-C₁₈
col 5	中谱红	AQ-C₁₈	col 13	Pntulips	QS-C₁₈
col 6	Thermo	Hypersil GOLD aQ C₁₈	col 14	ACE	5 C₁₈
col 7	依利特（Elite）	Suoersil ODS2	col 15	GRACE	Alltima C₁₈
col 8	中谱红	PR-C₁₈	col 16	GL Sciences	Wondasil C₁₈-WR

色谱主编号
（column）

品牌
（brand）

型号
（type）

色谱主编号
（column）

品牌
（brand）

型号
（type）

col 1

Ultimate

XB-C₁₈

col 9

Xtimate

C₁₈

col 2

GL Sciences

Wondasil C₁₈

col 10

Ultimate

LP-C₁₈

col 3

迪马（Dima）

Kromasil 100A C₁₈

col 11

Ultimate

AQ-C₁₈

col 4

中谱科技（ZHONGPU TECHNOLOGY）

RD-C₁₈

col 12

ZORBAX

Eclipse XDB-C₁₈

col 5

中谱红

AQ-C₁₈

col 13

Pntulips

QS-C₁₈

col 6

Thermo

Hypersil GOLD aQ C₁₈

col 14

ACE

5 C₁₈

col 7

依利特（Elite）

Suoersil ODS2

col 15

GRACE

Alltima C₁₈

col 8

中谱红

PR-C₁₈

col 16

GL Sciences

Wondasil C₁₈-WR

色谱柱（column）	线性方程（linear equation）	r
col 1	Y=1.006 5X-0.174 5	1.000
col 2	Y=0.980 7X+0.340 1	0.999 9
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col 4	Y=0.996 9X+0.053 4	0.999 8
col 5	Y=1.011 6X+0.377	0.999 9
col 6	Y=0.976X-0.367 5	0.998 8
col 7	Y=1.003 8X-0.187 5	1.000
col 8	Y=1.007 2X+0.351 8	1.000
col 9	Y=0.981 9X-0.237 7	0.999 8
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col 11	Y=1.009 1X+0.384 4	0.999 8
col 12	Y=0.999 8X-0.033 3	0.999 8
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色谱柱（column）

线性方程（linear equation）

col 1

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col 2

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0.999 7

col 11

Y=1.009 1X+0.384 4

0.999 8

col 12

Y=0.999 8X-0.033 3

0.999 8

col 16

Y=1.022 1X-0.174 2

0.999 5

指标（indexes）	LCTRS	RRT
最大绝对偏差（maximum absolute deviation）/min	1.554	1.495
最大相对偏差（maximum relative deviation）/%	3.61	9.10
绝对偏差≤0.3 min百分比（the percentage that absolute deviation≤0.3 min）/%	76.92	70.77
相对偏差≤5%百分比（the percentage that relative deviation≤5%）/%	100	93.85
绝对偏差≤0.5 min的适用色谱柱数量（the number of applicable columns with absolute deviation≤0.5 min）	8	7
相对偏差≤5%的适用色谱柱数量（the number of applicable columns with relative deviation≤5%）	13	9

指标（indexes）

LCTRS

RRT

最大绝对偏差（maximum absolute deviation）/min

1.554

1.495

最大相对偏差（maximum relative deviation）/%

3.61

9.10

绝对偏差≤0.3 min百分比（the percentage that absolute deviation≤0.3 min）/%

76.92

70.77

相对偏差≤5%百分比（the percentage that relative deviation≤5%）/%

100

93.85

绝对偏差≤0.5 min的适用色谱柱数量（the number of applicable columns with absolute deviation≤0.5 min）

相对偏差≤5%的适用色谱柱数量（the number of applicable columns with relative deviation≤5%）

色谱柱（column）	天麻素（gastrodin）	山慈菇素Ⅰ （shancigusin Ⅰ）	2-O-葡萄糖基白及苷（dactylorhin A）	手参苷Ⅲ （gymnosideⅢ）	白及苷（militarine）	山药素Ⅲ （batatasin Ⅲ）
col 1	/	-0.135	0.041	-0.280	0.050	-0.186	/	-0.090	0.084	/	0.165	-0.135
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色谱柱
（column）

天麻素
（gastrodin）

山慈菇素Ⅰ
（shancigusin Ⅰ）

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（dactylorhin A）

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（gymnosideⅢ）

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（militarine）

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（batatasin Ⅲ）

LCTRC

RRT

LCTRC

RRT

LCTRC

RRT

LCTRC

RRT

LCTRC

RRT

LCTRC

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col 1

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col 2

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col 4

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col 5

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col 7

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col 8

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col 9

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col 11

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col 12

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col 16

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0.993

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色谱柱（column）	天麻素（gastrodin）	山慈菇素Ⅰ （shancigusin Ⅰ）	2-O-葡萄糖基白及苷（dactylorhin A）	手参苷Ⅲ （gymnoside Ⅲ）	白及苷（militarine）	山药素Ⅲ （batatasin Ⅲ）
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色谱柱
（column）

天麻素
（gastrodin）

山慈菇素Ⅰ
（shancigusin Ⅰ）

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（dactylorhin A）

手参苷Ⅲ
（gymnoside Ⅲ）

白及苷
（militarine）

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（batatasin Ⅲ）

LCTRC

RRT

LCTRC

RRT

LCTRC

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LCTRC

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LCTRC

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LCTRC

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col 1

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col 2

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col 3

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-1.508

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1.039

col 4

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col 5

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col 6

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1.300

1.284

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col 7

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col 8

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col 9

-7.198

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-1.285

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col 10

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col 11

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col 12

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-1.085

-1.297

col 16

2.103

1.278

1.205

0.076

0.057

-0.122

0.099

2.176

1.946

色谱柱（column）	天麻素（gastrodin）	山慈菇素Ⅰ （shancigusin Ⅰ）	2-O-葡萄糖基白及苷（dactylorhin A）	手参苷Ⅲ （gymnoside Ⅲ）	白及苷（militarine）	山药素Ⅲ （batatasin Ⅲ）
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色谱柱
（column）

天麻素
（gastrodin）

山慈菇素Ⅰ
（shancigusin Ⅰ）

2-O-葡萄糖基白及苷
（dactylorhin A）

手参苷Ⅲ
（gymnoside Ⅲ）

白及苷
（militarine）

山药素Ⅲ
（batatasin Ⅲ）

LCTRC

RRT

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RRT

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LCTRC

RRT

LCTRC

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col 17

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col 18

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col 19

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-0.122

0.118

-0.141

-0.234

色谱柱（column）	天麻素（gastrodin）	山慈菇素Ⅰ （shancigusin Ⅰ）	2-O-葡萄糖基白及苷（dactylorhin A）	手参苷Ⅲ （gymnoside Ⅲ）	白及苷（militarine）	山药素Ⅲ （batatasin Ⅲ）
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色谱柱
（column）

天麻素
（gastrodin）

山慈菇素Ⅰ
（shancigusin Ⅰ）

2-O-葡萄糖基白及苷
（dactylorhin A）

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（gymnoside Ⅲ）

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（militarine）

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（batatasin Ⅲ）

LCTRC

RRT

LCTRC

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LCTRC

RRT

LCTRC

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LCTRC

RRT

LCTRC

RRT

col 17

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col 18

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