药物分析杂志

时间 (time)/%	流动相比例（ratio of mobile phase）/%
0	20	80
1.5	20	80
2.0	60	40
3.7	60	40
3.8	20	80
6.0	20	80

时间 (time)/%	流动相比例（ratio of mobile phase）/%
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3.8	20	80
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加入量（added）/(ng·mL^-1)	批内（intra-batch）	批间（inter-batch）
5	5.25±0.10	5.0	1.9	5.17±0.18	3.4	3.5
15	15.1±0.20	0.67	1.3	14.4±3.77	-3.9	3.8
75	75.5±1.51	0.69	2.0	73.1±2.84	-2.5	2.8
750	759±15.5	1.2	2.0	759±2.51	1.3	2.5

加入量（added）/(ng·mL^-1)	批内（intra-batch）	批间（inter-batch）
5	5.25±0.10	5.0	1.9	5.17±0.18	3.4	3.5
15	15.1±0.20	0.67	1.3	14.4±3.77	-3.9	3.8
75	75.5±1.51	0.69	2.0	73.1±2.84	-2.5	2.8
750	759±15.5	1.2	2.0	759±2.51	1.3	2.5

成分（component）	加入量（added）/(ng·mL^-1)	基质效应（matrix effect）	回收率（recovery）
FCN-437c	15	102.0	2.7	103.0	0.65
	75	100.0	1.3	102.0	5.8
	750	100.0	0.94	105.0	5.1
FCN-437-D3	8	/	/	78.6	1.7

成分（component）	加入量（added）/(ng·mL^-1)	基质效应（matrix effect）	回收率（recovery）
FCN-437c	15	102.0	2.7	103.0	0.65
	75	100.0	1.3	102.0	5.8
	750	100.0	0.94	105.0	5.1
FCN-437-D3	8	/	/	78.6	1.7

参数（parameter）	单次给药（single administration）	连续给药（continuous administration）
C_max/(ng·mL^-1)	1 087±655	1 313±691
T_max/h	3.00±0.739	3.25±0.707
AUC_{0-24 h}/(ng·h^-1·mL^-1)	14 491±10 753	20 180±12 188
t_1/2/h	36.6±6.42	41.7±10.1
R_{AUC0-24 h}	1.33±0.507
R_C _max	1.59±0.656

参数（parameter）	单次给药（single administration）	连续给药（continuous administration）
C_max/(ng·mL^-1)	1 087±655	1 313±691
T_max/h	3.00±0.739	3.25±0.707
AUC_{0-24 h}/(ng·h^-1·mL^-1)	14 491±10 753	20 180±12 188
t_1/2/h	36.6±6.42	41.7±10.1
R_{AUC0-24 h}	1.33±0.507
R_C _max	1.59±0.656

HPLC-MS/MS法测定晚期乳腺癌患者血浆中FCN-437c浓度及临床应用^*

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姜丹凤 , 黄京秋 , 吴奇珍 , 王漪璇 , 方雅玲 , 吴维怡 , 吴文英 , 孙艳 ^*

药物分析杂志 | 代谢分析 2024,44(6): 972-978

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药物分析杂志 | 代谢分析 2024, 44(6): 972-978

HPLC-MS/MS法测定晚期乳腺癌患者血浆中FCN-437c浓度及临床应用^*

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姜丹凤, 黄京秋, 吴奇珍, 王漪璇, 方雅玲, 吴维怡, 吴文英, 孙艳^*

作者信息

复旦大学附属肿瘤医院Ⅰ期临床实验室，复旦大学上海医学院肿瘤学系，上海　200032

Tel： (021)38197021；E-mail： jdf-123@139.com

通讯作者:

^* Tel：(021)38197021；E-mail：yansun@fudan.edu.cn

Determination of FCN-437c in human plasma for patients with advanced breast cancer by HPLC-MS/MS and its clinical application^*

Dan-feng JIANG, Jing-qiu HUANG, Qi-zhen WU, Yi-xuan WANG, Ya-ling FANG, Wei-yi WU, Wen-ying WU, Yan SUN^*

Affiliations

Laboratory of Phase I Clinical Trials, Department of Oncology, Fudan University Shanghai Cancer Center; Department of Oncology, Shanghai Medical College, Fudan University, Shanghai 200032, China

出版时间: 2024-06-30 doi: 10.16155/j.0254-1793.2024.06.07

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摘要

收起

目的：

建立测定人血浆中FCN-437c药物浓度的HPLC-MS/MS方法，并用于FCN-437c的Ⅰ期临床研究。

方法：

血浆经蛋白沉淀处理后，采用HPLC-MS/MS法进样测定。色谱柱为YMC Triart PFP柱（50 mm×2.1 mm，5 μm），以0.5%甲酸水溶液（含5 mmol·L^-1乙酸铵，A）-乙腈（B）为流动相，梯度洗脱，流速为0.5 mL·min^-1，柱温为35 ℃，进样量为2 μL，进样器温度为10 ℃。质谱采用ESI⁺，MRM模式。检测离子反应对为m/z 549.4→449.5（FCN-437c）和m/z 552.5→449.0（FCN-437-D3，氘代内标），雾化气压力276 kPa，辅助气压力207 kPa，去簇电压100 V，碰撞室出口电压25 V。

结果：

人血浆中FCN-437c的线性范围为5~1 000 ng·mL^-1（r=0.999 0），定量限为5 ng·mL^-1，批内、批间精密度分别小于2.0%和4.1%，平均回收率为104.0%（FCN-437c）、78.6%（FCN-437-D3），内标归一化基质因子为100%~102%。FCN-437c储备液4 ℃放置202 d，FCN-437c及FCN-437-D3工作液室温放置24 h，血浆样品室温放置20 h、冻融四循环、-20 ℃放置134 d、-80 ℃放置662 d，样品处理后自动进样器放置24 h，全血样品室温放置4 h均稳定。应用此方法检测了受试者口服FCN-437c后血浆药物浓度，ISR样品测试结果为97.0%与初测值的偏差在±20%以内。血浆样本稀释10倍后准确度为102.0%~108.0%。FCN-437c连续给药与单次给药相比，R_{AUC_0-24}和R_{C_max}的累积比为1.33倍与1.59倍。

结论：

本方法简便、准确、耐用、专属性强，可满足人血浆中FCN-437c的定量分析的要求。

关键词

高效液相色谱-串联质谱法 / 血药浓度 / FCN-437c / 方法学验证 / 药代动力学

Abstract

收起

Objective:

To establish an HPLC-MS/MS method for the determination of FCN-437c in human plasma and its application to the phase I clinical study of FCN-437c.

Methods:

Following protein precipitation, plasma was injected and measured using HPLC-MS/MS method. The analytes were separated on a YMC Triart PFP column (50 mm×2.1 mm, 5 μm) using 0.5% formic acid (containing 5 mmol·L^-1 of ammonium acetate, A) and acetonitrile (B) as the mobile phase with gradient elution at the flow rate of 0.5 mL·min^-1, the column temperature was set at 35 ℃, the injection amount was 2 μL, and the injector temperature was 10 ℃. MS detection was performed with multiple reaction monitoring (MRM) mode using positive electrospray ionization. The ion transitions were m/z 549.4→449.4 for FCN-437c and m/z 552.3→449.3 for FCN-437-D3, respectively. Other mass spectrometry parameters were TEM, 500 ℃, GS1, 276 kPa, GS2, 207 kPa, DP, 100 V, CXP, 25 V.

Results:

The linear range of FCN-437c in human plasma was 5-1 000 ng·mL^-1 (r=0.999 0). The lower limit of quantification was 5 ng·mL^-1. The intra-batch and inter-batch precisions were less than 2.0% and 4.1%, respectively. The average recovery was 104.0% (FCN-437c), 78.6% (FCN-437-D3), and the internal standard normalized matrix factor was 100%-102%. The stock solution of FCN-437c was stable at 4 ℃ for 202 d, the working solution of FCN-437c and internal standard were stable at room temperature for 24 h. FCN-437c in human plasma was investigated to be stable at room temperature for 20 h, four cycles of freeze-thaw, -20 ℃ for 134 d, -80 ℃ for 662 d, as well as for 24 h in the autosampler after treatment. The whole blood samples were stable at room temperature for 4 h. This method was applied to the determination FCN-437c in human plasma, and the deviation between the test results and the initial values of 97.0% ISR samples was within ±20%. The accuracy was 102.0%-108.0% after 10-fold dilution of plasma samples. The cumulative ratio of R_AUC0-24 and R_C _max was 1.33 times and 1.59 times when FCN-437c was administered continuously compared with single administration.

Conclusion:

This method is simple, accurate, robust and specific, which can meet the requirements of quantitative analysis of FCN-437c in human plasma and also can be used to determine FCN-473c in human plasma of the phase I clinical study.

Key words

HPLC-MS/MS / plasma concentration / FCN-437c / method validation / pharmacokinetics

引用本文

姜丹凤, 黄京秋, 吴奇珍, 王漪璇, 方雅玲, 吴维怡, 吴文英, 孙艳. HPLC-MS/MS法测定晚期乳腺癌患者血浆中FCN-437c浓度及临床应用^*. 药物分析杂志, 2024 , 44 (6) : 972 -978 . DOI: 10.16155/j.0254-1793.2024.06.07

Dan-feng JIANG, Jing-qiu HUANG, Qi-zhen WU, Yi-xuan WANG, Ya-ling FANG, Wei-yi WU, Wen-ying WU, Yan SUN. Determination of FCN-437c in human plasma for patients with advanced breast cancer by HPLC-MS/MS and its clinical application^*[J]. Chinese Journal of Pharmaceutical Analysis, 2024 , 44 (6) : 972 -978 . DOI: 10.16155/j.0254-1793.2024.06.07

正文

收起

FCN-437c是一种具有我国自主知识产权的口服CDK4/6抑制剂类抗肿瘤新药，其作用机制在于通过选择性抑制 CDK4/6-Cyclin D二聚体激酶活性，阻碍Rb的磷酸化，阻断细胞从G1期进入S期，使细胞周期停滞于G1期，从而抑制肿瘤细胞的增殖，临床用于激素受体（HR）阳性，表皮生长因子受体2（HER2）阴性的晚期或转移性乳腺癌的女性患者的治疗。CDK4/6是细胞周期调控通路中的关键蛋白^[1-2]，靶向CDK4/6被认为是抗癌方法的1个范式转变^[3]，CDK4/6抑制剂在多项临床试验中被证实对HR+/HER2-乳腺癌患者具有良好的疗效^[4]。目前，全球已经有3个CDK4/6抑制剂（palbociclib、ribociclib、abemaciclib）上市^[5-8]，3个抑制剂均包含ATP-竞争性抑制以及CDK4/6选择性的关键分子结构的2-氨基吡啶和哌嗪环^[9]。FCN-437c与其药物结构类似，作为单药治疗具有抗肿瘤活性和良好的安全性^[10-11]。

迄今为止，已发表的检测CDK4/6抑制剂的LC-MS/MS检测方法主要使用C₈柱、C₁₈柱、苯基柱^[12-16]。FCN-437c在初步方法开发中尝试用C₈柱、C₁₈柱、苯基柱等多种色谱柱，采用不同pH调节剂的超纯水为水相，乙腈或甲醇为有机相，发现在上述色谱柱上均不易保留，无法形成特征性色谱峰。为了增强FCN-437c的保留情况，更换为YMC Triart PFP色谱柱。经探索发现，FCN-437c的洗脱相为水相，为获得最佳的色谱保留效果，采用水相逐步增加的梯度洗脱方法。经过方法学优化，最终建立了一种简便、专属性强的HPLC-MS/MS测定人血浆中FCN-437c浓度的方法，用于FCN-437c的人体临床研究，评价FCN-437c在ER+、HER2-的晚期乳腺癌绝经后女性受试者中的药代动力学特征，为临床用药的有效性及安全性提供依据。

1　仪器与试药

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1.1　仪器

ACQUITY UPLC H-Class超高效液相色谱（Waters公司），API 6500 Qtrap线性离子阱串联四级杆杂交质谱联用仪（SCIEX公司），5424 R高速离心机（Eppendorf公司），AB135-S精密电子天平（Mettler Toledo公司），Vortex-Genie 2涡旋混合仪（Scientific Industries公司），Pall Cascada纯水仪（Pall公司）等。

1.2　试药

甲醇、乙腈、甲酸、乙酸铵均为色谱纯，甲醇、乙腈（Merck公司），甲酸（ACS公司），乙酸铵（CNW公司），实验用超纯水（Pall公司，CascadaTM纯水仪制备（电阻率≥18.2 MΩ·cm）。

FCN-437c（待测物）对照品色谱纯度99.96%，FCN-437-D3（内标）对照品色谱纯度98.8%。空白血浆、空白全血由复旦大学附属肿瘤医院组织库提供。

2　方法与结果

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2.1　色谱条件

采用YMC Triart PFP色谱柱（50 mm×2.1 mm，5 μm）；流动相A为0.5%甲酸水溶液（含5 mmol·L^-1乙酸铵），流动相B为乙腈，梯度洗脱（见表1），流速 0.5 mL·min^-1，柱温35 ℃，进样量2 μL，进样器温度10 ℃。

2.2　质谱条件

选用电喷雾离子源（ESI），正离子电离模式，采用多反应监测（MRM）的质谱扫描方式进行检测，在45 V的碰撞能量下，检测FCN-437c离子对通道m/z为549.4→449.5，FCN-437-D3离子对通道m/z 552.5→449.0。其他质谱参数：雾化气压力为276 kPa，辅助气压力为207 kPa，去簇电压为100 V，碰撞室出口电压为25 V，运行时间为6 min。

2.3　对照品储备液和内标溶液的制备

精密称取FCN-437c对照品约10 mg，置10 mL量瓶中，二甲基亚砜（DMSO）充分溶解后用甲醇定容，配制FCN-437c储备液（S1），同法配制FCN-437c储备液（S2），S1和S2分别用于配制标准曲线和质控样品。称取FCN-437-D3对照品10 mg，置10 mL量瓶中，用二甲基亚砜（DMSO）充分溶解后用甲醇定容，配制FCN-437-D3储备液。继续以甲醇进行稀释，配制成质量浓度为100 μg·mL^-1的FCN-437-D3标准工作液。精密吸取FCN-437-D3标准工作液10 μL，加入乙腈-水（90∶10）100 mL，即得10 ng·mL^-1 FCN-437-D3溶液。上述溶液均使用经校准的移液器和容量瓶进行配制，并保存于4 ℃冰箱待用。

2.4　样品预处理

采用蛋白沉淀法进行血浆样本前处理。取血浆样本50 μL，加入含FCN-437-D3（浓度为10 ng·mL^-1）的乙腈-水（90∶10）200 μL，振摇5 min，离心（14 000 r·min^-1，10 min，室温），取上清液50 μL加入0.5%甲酸水溶液（含5 mmol·L^-1乙酸铵）50 μL，涡旋混匀后用于进样分析，进样量为2 μL。

2.5　临床应用

临床试验通过医院伦理委员会的批准后进行，遵循GCP原则。所有受试者需经医生体检、实验室检查、心电图等证实符合入选标准后入选，所有受试者均知情且签署知情同意书。

筛选12例晚期乳腺癌绝经后女性受试者，进行FCN-437c 200 mg剂量组的临床研究。单次给药采血时间点：给药前、给药后0.5、1、2、3、4、6、8、12、24、48、72、120 h；连续给药采血时间点：连续给药第21天给药前、给药后0.5、1、2、3、4、6、8、12、24、48、72 h。采患者全血2 mL，室温1 400 r·min^-1离心5 min后分离血浆，贴上唯一标签后放入超低温（-60~-90 ℃）冰箱保存。数据采集和积分软件为Analyst 1.5，药代参数计算软件为Phoenix WinNonlin^®6.3.0。

3　结果

收起

3.1　质谱分析

分别将1 μg·mL^-1 FCN-437c和FCN-437-D3溶液，以恒定流速泵入MS/MS系统，进行母离子及碎片离子分析，FCN-437c和FCN-437-D3的二级全扫描质谱图见图1。

3.2　特异性

在本实验采用的检测条件下，FCN-437c和FCN-437-D3的保留时间均为2.97 min，峰形良好。与空白血浆样品色谱图比较，内源性物质不干扰FCN-437c及FCN-437-D3的测定，FCN-437-D3对FCN-437c检测通道亦无干扰。结果表明，该方法特异性良好。此外，在标准曲线的定量上限样品之后进样分析的双空白血浆样品中，FCN-437c峰面积均为0，且FCN-437-D3峰面积均为0，表明本方法无明显系统残留。结果见图2。

3.3　标准曲线、定量限和检测限

用甲醇-水（50∶50）稀释FCN-437c储备液（S1），配制成质量浓度分别为100、200、800、2 000、8 000、10 000、16 000、20 000 ng·mL^-1（C1~C8）的FCN-437c工作液。取上述8个浓度的工作液20 μL，置于1.5 mL塑料离心管中，分别加入空白人血浆380 μL，涡旋1 min，制成FCN-437c质量浓度分别为5、10、40、100、400、500、800、1 000 ng·mL^-1的血浆标准溶液，按“2.4”项下方法处理后，再按“2.1”项下测定条件进样分析。以FCN-437c峰面积与FCN-437-D3峰面积之比Y为纵坐标，以FCN-437c质量浓度X为横坐标，用加权（W=1/X²）最小二乘法进行回归计算，拟合成标准曲线，得FCN-437c的回归方程：

结果显示，FCN-437c质量浓度在5~1 000 ng·mL^-1线性良好，批间、批内准确度和精密度偏差<20%，定量限（信噪比≥10）为5 ng·mL^-1，检测限（信噪比≥3）为1 ng·mL^-1。

3.4　精密度与准确度

用FCN-437c储备液（S2），配制成浓度为100、300、1 500、15 000 ng·mL^-1（LLOQ、QC1~QC3）的工作液，取上述4个浓度的工作液20 μL置于1.5 mL塑料离心管中，分别加入空白血浆380 μL，涡旋1 min，制成FCN-437c浓度分别为5、15、75、750 ng·mL^-1的血浆质控样品，按“2.4”项下方法处理后，再按“2.1”项下测定条件进样分析，每个质量浓度平行测定6份，根据同步操作制备的标准曲线计算样品中FCN-437c的实测浓度，同法连续测定3批，计算批内和批间准确度（RE）和精密度（RSD）。结果显示批内及批间准确度和精密度良好，满足生物样本定量分析的要求。结果见表2。

3.5　基质效应

取15份来源不同的空白血浆（包含9份正常血浆、3份溶血血浆、3份高脂血浆），按“2.4”项下方法处理（不加入FCN-437-D3）得到空白基质，加入低、中、高质量浓度的FCN-437c工作液及FCN-437-D3溶液，配制成浓度为15、75、750 ng·mL^-1的血浆样品，每个浓度平行制备15个样品，按“2.1”项下测定条件进样分析，记录FCN-437c与FCN-437-D3峰面积。取等量的相同3个浓度的FCN-437c工作液及FCN-437-D3溶液，用溶剂稀释至同浓度，每个浓度平行制备6个样品，同法分析测定，记录FCN-437c与FCN-437-D3峰面积。按下列公式计算基质效应，基质因子=含基质溶液样品峰面积/不含基质（纯溶液）样品峰面积×100%；内标归一化基质因子=化合物基质因子/内标基质因子×100%。结果显示无明显基质效应（表3），生物基质对FCN-437c定量分析的影响有限。

3.6　提取回收率

按“2.4”项下方法配制FCN-437c低、中、高浓度（15、75、750 ng·mL^-1）的血浆质控样品，每个浓度平行制备6个样品，按“2.1”项下测定条件进样分析，记录FCN-437c与FCN-437-D3峰面积。按“2.4”项下方法处理空白血浆（不加入FCN-437-D3）得到空白基质，加入FCN-437c工作液及FCN-437-D3溶液，配制FCN-437c低、中、高浓度（15、75、750 ng·mL^-1）的血浆样品，每个浓度平行测定6份，按“2.1”项下测定条件进样分析，记录FCN-437c与FCN-437-D3峰面积。计算提取回收率=血浆质控样品经处理后所测得峰面积平均值/空白基质处理后加等量药物所测得峰面积平均值×100%。结果显示FCN-437c和FCN-437-D3的提取回收率稳定，满足生物样本定量分析的要求。结果见表3。

3.7　稀释可靠性

按“2.4”项下方法配制高浓度的FCN-437c血浆质控样品（500、1 500、7 500 ng·mL^-1），并用空白血浆基质稀释该样品10倍，按“2.1”项下测定条件进样分析，每个浓度平行测定6份。测得准确度为108.0%、103.0%、102.0%，精密度为2.5%、4.5%、2.4%。结果表明10倍稀释后不影响准确度和精密度。

3.8　稳定性考察

按“2.3”项下方法配制FCN-437c的储备液，在4 ℃下存202 d；按“3.3”项下方法配制FCN-437c工作液（5、1 000 ng·mL^-1），在室温下存放24 h；按“3.4”项下方法配制FCN-437c低、中、高质量浓度（15、75、750 ng·mL^-1）的血浆样品，分别于处理前在室温放置20 h、-20 ℃放置134 d、-80 ℃放置662 d、-80 ℃~室温循环冻融3次、自动进样器（10 ℃）中放置24 h；全血中加入FCN-437c工作液，在室温下放置4 h后离心获得血浆，按“2.4”项下方法处理后进样分析，每个浓度平行测定不少于4份，考察稳定性，RSD均小于7%。结果表明，在上述条件下FCN-437c稳定性好。

3.9　同位素交换考察

分析批使用的内标为待测物的稳定同位素内标，且保留时间与待测物相同。需确保FCN-437-D3具有足够高的同位素纯度，并且不发生同位素交换反应，以避免检测的干扰，导致结果的偏差。配制高浓度的FCN-437c样品（不加FCN-437-D3）进样分析，内标通道产生的干扰峰的峰面积与内标平均峰面积比小于小于5%，结果显示FCN-437c对FCN-437-D3检测无影响。在每批次检测中，均随行进样QC₀样品（空白血浆加FCN-437-D3），FCN-437c通道峰面积均为0。结果显示，FCN-437-D3对FCN-437c检测无影响，FCN-437-D3溶液4 ℃放置127 d内未发生同位素交换，FCN-437-D3溶液稳定。

3.10　血浆样品再分析（ISR）

研究样本进行重复分析，ISR样品量为总样品量的11.8%，且样品的选择覆盖药动学曲线，计算初始浓度和再分析浓度的偏差。结果显示，97.0%的ISR样品测试结果与初测值的偏差在±20%以内，表明本分析方法重现性好。

3.11　检测方法的临床应用

采用上述检测方法，应用于FCN-437c首次临床研究。其中12例受试者口服FCN-437c 200 mg后体内FCN-437c血药浓度-时间曲线线性图见图3，主要药代参数见表4。与单次给药相比，第21天时，R_{AUC_0-24}和R_{C _max}的累积比几何平均值为1.33倍与1.59倍。与结构类似物Ribociclib比较，FCN-437c 200 mg剂量组暴露水平高于Ribociclib 400 mg剂量组，接近于Ribociclib 600 mg剂量组的暴露水平^[17]。

4　讨论

收起

FCN-437c是一种口服、强效、高选择性、全新结构的CDK4/6 抑制剂类抗肿瘤新药，本研究建立了一种灵敏可靠的定量分析人血浆中FCN-437c浓度的HPLC-MS/MS方法，并应用于晚期乳腺癌绝经后女性患者中的临床研究。FCN-437c虽然与其他CDK4/6抑制剂（诸如palbociclib、ribociclib、abemaciclib）结构类似，但色谱行为表现有较大差异。本研究在方法开发前期参考其他CDK4/6抑制剂的检测方法选择的条件，均无法形成特征性的色谱峰。最后根据FCN-437c自身性质，比较在不同填料的色谱柱上的保留行为后，采用了最佳的YMC Triart PFP色谱柱，通过其疏水性、π-π相互作用、偶极-偶极、立体选择性等多个保留机制，提高了待测物色谱保留。同时，根据流动相中有机相比例增加，待测物色谱保留增强的特点，采用了水相逐渐增加的梯度洗脱方法，获得最佳的色谱峰。检测前考察单独FCN-437c样品与FCN-437-D3样品，确保FCN-437c与FCN-437-D3之间不产生干扰。血浆样品采用蛋白沉淀法，血浆用量小，制备方法简便。对上述方法的选择性、线性、精密度和准确度、基质效应、提取回收率、稳定性等进行了验证，结果表明：该方法简单、可靠、灵敏、耐用。符合现行的中国药典2020年版附录9012关于生物分析方法验证的要求^[18]。

参考文献

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文献

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2024年第44卷第6期

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doi: 10.16155/j.0254-1793.2024.06.07

接收时间：2023-11-10
首发时间：2026-03-13
出版时间：2024-06-30

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收稿日期：2023-11-10

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复旦大学附属肿瘤医院Ⅰ期临床实验室，复旦大学上海医学院肿瘤学系，上海　200032

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^* Tel：(021)38197021；E-mail：yansun@fudan.edu.cn

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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TxT

时间 (time)/%	流动相比例（ratio of mobile phase）/%
0	20	80
1.5	20	80
2.0	60	40
3.7	60	40
3.8	20	80
6.0	20	80

时间
(time)/%

流动相比例（ratio of mobile phase）/%

1.5

2.0

3.7

3.8

6.0

加入量（added）/(ng·mL^-1)	批内（intra-batch）	批间（inter-batch）
5	5.25±0.10	5.0	1.9	5.17±0.18	3.4	3.5
15	15.1±0.20	0.67	1.3	14.4±3.77	-3.9	3.8
75	75.5±1.51	0.69	2.0	73.1±2.84	-2.5	2.8
750	759±15.5	1.2	2.0	759±2.51	1.3	2.5

加入量
（added）/(ng·mL^-1)

批内（intra-batch）

批间（inter-batch）

实测值(found)/(ng·mL^-1)

RSD/%

RE/%

实测值(found)/(ng·mL^-1)

RSD/%

RE/%

5.25±0.10

5.0

1.9

5.17±0.18

3.4

3.5

15.1±0.20

0.67

1.3

14.4±3.77

-3.9

3.8

75.5±1.51

0.69

2.0

73.1±2.84

-2.5

2.8

750

759±15.5

1.2

2.0

759±2.51

1.3

2.5

成分（component）	加入量（added）/(ng·mL^-1)	基质效应（matrix effect）	回收率（recovery）
FCN-437c	15	102.0	2.7	103.0	0.65
	75	100.0	1.3	102.0	5.8
	750	100.0	0.94	105.0	5.1
FCN-437-D3	8	/	/	78.6	1.7

成分
（component）

加入量
（added）/(ng·mL^-1)

基质效应（matrix effect）

回收率（recovery）

内标归一化基质因子
（Internal standard normalized matrix factor）/%

RSD/%

平均回收率
（average recovery）/%

RSD/%

FCN-437c

102.0

2.7

103.0

0.65

100.0

1.3

102.0

5.8

750

100.0

0.94

105.0

5.1

FCN-437-D3

78.6

1.7

参数（parameter）	单次给药（single administration）	连续给药（continuous administration）
C_max/(ng·mL^-1)	1 087±655	1 313±691
T_max/h	3.00±0.739	3.25±0.707
AUC_{0-24 h}/(ng·h^-1·mL^-1)	14 491±10 753	20 180±12 188
t_1/2/h	36.6±6.42	41.7±10.1
R_{AUC0-24 h}	1.33±0.507
R_C _max	1.59±0.656

参数
（parameter）

单次给药
（single administration）

连续给药
（continuous administration）

C_max/(ng·mL^-1)

1 087±655

1 313±691

T_max/h

3.00±0.739

3.25±0.707

AUC_{0-24 h}/(ng·h^-1·mL^-1)

14 491±10 753

20 180±12 188

t_1/2/h

36.6±6.42

41.7±10.1

R_{AUC0-24 h}

1.33±0.507

R_C _max

1.59±0.656