药物分析杂志

化合物名称 (compound name)	线性方程 (regression equation)	r	线性范围 (linear range)/(μg·mL^-1)	定量限 (quantitation limit)/(μg·mL^-1)	f
维生素D₃(vitamin D₃)	Y=159.446 0X-0.753 1	0.999 5	0.02~0.80	0.003 782	1.00
杂质A(impurity A)	Y=176.737 9X+0.038 10	0.999 9	0.02~0.80	0.003 932	0.90
杂质B(impurity B)	Y=69.414 1X+0.239 4	0.999 9	0.02~0.80	0.027 640	2.30
杂质C(impurity C)	Y=60.277 5X+0.206 0	0.999 9	0.02~0.80	0.016 820	2.65
杂质D(impurity D)	Y=104.656 5X+0.180 2	0.999 9	0.02~0.80	0.009 773	1.52

化合物名称 (compound name)	线性方程 (regression equation)	r	线性范围 (linear range)/(μg·mL^-1)	定量限 (quantitation limit)/(μg·mL^-1)	f
维生素D₃(vitamin D₃)	Y=159.446 0X-0.753 1	0.999 5	0.02~0.80	0.003 782	1.00
杂质A(impurity A)	Y=176.737 9X+0.038 10	0.999 9	0.02~0.80	0.003 932	0.90
杂质B(impurity B)	Y=69.414 1X+0.239 4	0.999 9	0.02~0.80	0.027 640	2.30
杂质C(impurity C)	Y=60.277 5X+0.206 0	0.999 9	0.02~0.80	0.016 820	2.65
杂质D(impurity D)	Y=104.656 5X+0.180 2	0.999 9	0.02~0.80	0.009 773	1.52

化合物名称 (compound name)	样品含有量 (content)/μg	加入量 (added)/μg	测得值 (measurement)/μg	回收率 (recovery)/%	平均回收率 (mean recovery)/%	RSD/%
杂质A(impurity A)	0.016 44	0.039 32	0.049 90	85.1	97.3	8.2
	0.016 44	0.039 32	0.049 63	84.4
	0.016 44	0.039 32	0.054 85	97.7
	0.016 44	0.196 61	0.211 38	99.2
	0.016 44	0.196 61	0.229 70	108.5
	0.016 44	0.196 61	0.204 58	95.7
	0.016 44	0.235 94	0.256 12	101.6
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	0.016 44	0.235 94	0.260 47	103.4
杂质B(impurity B)	0	0.039 48	0.042 39	107.4	102.9	3.6
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	0	0.236 91	0.252 70	106.7
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杂质C(impurity C)	0	0.039 57	0.031 97	80.8	96.7	9.6
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	0	0.237 42	0.246 10	103.7
杂质D(impurity D)	0	0.039 09	0.038 76	99.2	93.2	3.6
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	0	0.195 46	0.179 20	91.7
	0	0.234 55	0.218 82	93.3
	0	0.234 55	0.230 32	98.2
	0	0.234 55	0.220 65	94.1

化合物名称 (compound name)	样品含有量 (content)/μg	加入量 (added)/μg	测得值 (measurement)/μg	回收率 (recovery)/%	平均回收率 (mean recovery)/%	RSD/%
杂质A(impurity A)	0.016 44	0.039 32	0.049 90	85.1	97.3	8.2
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化合物名称 (compound name)	含量(content)/%
杂质A(impurity A)	0.08	0.08	0.05
杂质B(impurity B)	ND	ND	ND
杂质C(impurity C)	ND	ND	ND
杂质D(impurity D)	ND	ND	ND
未知杂质(unknown impurities)	ND	ND	ND
总杂(total impurities)	0.08	0.08	0.05

化合物名称 (compound name)	含量(content)/%
杂质A(impurity A)	0.08	0.08	0.05
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杂质D(impurity D)	ND	ND	ND
未知杂质(unknown impurities)	ND	ND	ND
总杂(total impurities)	0.08	0.08	0.05

SPE-HPLC法检测维生素D滴剂(软胶囊)中的有关物质

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解植彩 ¹ , 杨丽娜 ¹ , 潘寒 ¹ , 徐庆君 ¹ , 卢大峰 ¹ , 李树英 ¹ , 谢强胜 ²^,^*

药物分析杂志 | 安全监测 2024,44(7): 1238-1245

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药物分析杂志 | 安全监测 2024, 44(7): 1238-1245

SPE-HPLC法检测维生素D滴剂(软胶囊)中的有关物质

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解植彩¹, 杨丽娜¹, 潘寒¹, 徐庆君¹, 卢大峰¹, 李树英¹, 谢强胜²^,^*

作者信息

^1.青岛双鲸药业股份有限公司企业技术中心，青岛 266109

^2.山东省食品药品检验研究院，济南 250101

Tel：18509513692；E-mail：1530914160@qq.com

通讯作者:

^* Tel：（0531）81216710；E-mail：xie_qsh@163.com

Detection of related substances in vitamin D drops (soft capsules) by SPE-HPLC

Zhi-cai XIE¹, Li-na YANG¹, Han PAN¹, Qing-jun XU¹, Da-feng LU¹, Shu-ying LI¹, Qiang-sheng XIE²^,^*

Affiliations

^1.Enterprise’s Technical Center of Qingdao Double Whale Pharmaceutical Co., Ltd., Qingdao 266109, China

^2.Shandong Institute for Food and Drug Control, Jinan 250101, China

出版时间: 2024-07-31 doi: 10.16155/j.0254-1793.2023-0441

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摘要

收起

目的：

建立固相萃取-高效液相色谱法（SPE-HPLC法）快速检测维生素D滴剂（软胶囊）中维生素D₃有关物质反式维生素D₃（杂质A）、7-去氢胆固醇（杂质B）、光甾醇3（杂质C）、异速甾醇3（杂质D）。

方法：

取内容物约1.2 g（约相当于维生素D₃ 1 548 IU），精密称定，置于试管中，加入异辛烷4 mL，涡旋混匀，采用固相萃取小柱进行净化，以正己烷-乙酸乙酯（85∶15）为洗脱剂，无水乙醇为解吸剂；采用Luna Silica（2）100 Å硅胶柱（150 mm×4.6 mm，3 μm），以正己烷-正戊醇（996.5∶3.5）为流动相，采用加校正因子主成分自身对照法计算维生素D₃各杂质的含量。

结果：

前维生素D₃与植物油分离度>1.5。维生素D₃的线性范围为0.02~0.80 μg·mL^-1，r=0.999 5；杂质A的线性范围为0.02~0.80 μg·mL^-1，r=0.999 9；杂质B的线性范围为0.02~0.80 μg·mL^-1，r=0.999 9；杂质C的线性范围为0.02~0.80 μg·mL^-1，r=0.999 9；杂质D的线性范围为0.02~0.80 μg·mL^-1，r=0.999 9。维生素D₃杂质A~D的平均回收率（n=9）为93.2%~102.9%。对3批维生素D滴剂（软胶囊）样品进行检测，结果已知杂质及其他最大单个杂质含量均≤0.5%，杂质总含量≤1.0%。

结论：

本方法经系统方法学验证，适用于维生素D滴剂（软胶囊）中维生素D₃有关物质的检测，且具有操作简便、快速、准确的优势，为脂溶性维生素D₃制剂的质量控制提供了技术保证。

关键词

固相萃取 / 高效液相色谱法 / 维生素D₃有关物质 / 工艺杂质 / 降解杂质

Abstract

收起

Objective:

To establish a solid-phase extraction-high performance liquid chromatography(SPE-HPLC) method for the rapid detection of related substances of vitamin D₃, trans vitamin D₃ (impurity A), 7-dehydrocholesterol (impurity B), lumisterol 3 (impurity C), and isotachysterol 3 (impurity D), in vitamin D drops (soft capsules).

Methods:

The content, which was approximately equivalent to vitamin D₃ 1 548 IU, was taken in about 1.2 g, weighed accurately, put into a test tube, 4 mL of isooctane was added to it, and it was swirled and mixed well. Purification was performed using solid phase extraction columns, with n-hexane-ethyl acetate(85∶15) as the elution agent and anhydrous ethanol as the desorption agent. A Luna Silica(2) 100 Å silica gel column(150 mm×4.6 mm, 3 μm) was used, with n-hexane-n-pentanol (996.5∶3.5) as the mobile phase. The content of vitamin D₃ impurities was calculated using the adding standard calibration factors principal component self-control method.

Results:

The separation degree between pre-vitamin D₃ and vegetable oil was greater than 1.5. The linear range of vitamin D₃ was 0.02-0.80 μg·mL^-1, with r=0.999 5. The linear range of impurity A was 0.02 -0.80 μg·mL^-1, with r=0.999 9. The linear range of impurity B was 0.02-0.80 μg·mL^-1, with r=0.999 9. The linear range of impurity C was 0.02-0.80 μg·mL^-1, with r=0.999 9. The linear range of impurity D was 0.02-0.80 μg·mL^-1, with r=0.999 9. The average recovery rate of impurities A-D (n=9) was 93.2%-102.9%. The detection results of 3 batches of vitamin D drops (soft capsules) showed that the content of known impurities and other maximum single impurities were less than 0.5%, and the total content of impurities was less than 1.0%.

Conclusion:

The results indicate that the established method is suitable for the detection of vitamin D₃ related substances in vitamin D drops (soft capsules). It has the advantages of being easy to operate, providing rapid and accurate results, and providing technical assurance for the quality control of fat-soluble vitamin D₃ preparations.

Key words

solid phase extraction / high performance liquid chromatography / vitamin D₃-related substances / process impurities / degradation impurities

引用本文

解植彩, 杨丽娜, 潘寒, 徐庆君, 卢大峰, 李树英, 谢强胜. SPE-HPLC法检测维生素D滴剂(软胶囊)中的有关物质. 药物分析杂志, 2024 , 44 (7) : 1238 -1245 . DOI: 10.16155/j.0254-1793.2023-0441

Zhi-cai XIE, Li-na YANG, Han PAN, Qing-jun XU, Da-feng LU, Shu-ying LI, Qiang-sheng XIE. Detection of related substances in vitamin D drops (soft capsules) by SPE-HPLC[J]. Chinese Journal of Pharmaceutical Analysis, 2024 , 44 (7) : 1238 -1245 . DOI: 10.16155/j.0254-1793.2023-0441

正文

收起

维生素D₃是脂溶性维生素，作用于钙及磷的激素前体，能促进钙、磷吸收，具有广泛的临床应用^[1]。对于维生素D₃原料药和相关制剂，2020年版《中华人民共和国药典》^[2]、USP 38^[3]、EP 10.0^[4]均有收载，有关物质的检测方法多采用正相高效液相色谱法。维生素D₃有关物质，主要是其光热转化异构体，包括前维生素D₃、反式维生素D₃(杂质A)、7-去氢胆固醇(杂质B)、光甾醇3(杂质C)、异速甾醇3(杂质D)和速甾醇D₃（杂质E）^[5-6]。

目前，我国市售维生素D滴剂(软胶囊)的规格有400 IU·粒^-1(10 μg)、800 IU·粒^-1(20 μg)，内容物均以植物油为主，其中维生素D₃的含量约在10^-5 mg·kg^-1级别，若直接采用高效液相色谱法测定维生素D₃中的有关物质，植物油的干扰会非常严重，导致无法准确定量。经检索，可知测定维生素D₃有关物质多采用液液萃取的方法^[6-8]。但对于油性内容物与维生素D₃有关物质，其在液液萃取溶剂中的相似相容性，液液萃取很难将前维生素D₃与植物油有效分离，目前尚无简便且快速测定油性内容物维生素D₃有关物质的相关报道。

固相萃取(solid phase extract，SPE)技术利用具有吸附能力的吸附剂对样品进行萃取，通过不同的溶剂进行分离、纯化和浓缩来达到去除杂质、富集的效果^[9]。与传统的液液分离相比，固相萃取具有浓缩度高，材料简单，耗材少等优点^[10-11]。此外，研究表明固相萃取技术与高效液相色谱法结合能够达到更准确的定量^[12]。目前，固相萃取-高效液相色谱法已被有效应用于测定大豆油^[13]、饼干^[14]、婴幼儿奶粉^[15]中的维生素含量，但未有相关研究将固相萃取技术直接用于维生素D滴剂(软胶囊)中维生素D₃有关物质的检测。刘铁成等^[16]通过液液萃取，再经固相萃取柱净化、浓缩的方式，测定了维生素D₃及其有关物质，方法可行，但存在前处理所需时间较长，液液萃取提取率损失等问题。因此，固相萃取这一稳定且高效，同时具备抗干扰能力的方法在直接测定维生素D滴剂(软胶囊)中维生素D₃有关物质方面仍有较大的优化空间及研究意义。

基于目前油性介质中维生素D₃有关物质检测技术现状，本文以维生素D₃及其有关物质为研究目标，通过对前处理、方法学等进行系统研究，建立固相萃取-高效液相色谱法(SPE-HPLC法)快速测定维生素D滴剂(软胶囊)中维生素D₃有关物质，以期为维生素D滴剂(软胶囊)的质量控制提供技术保障，为微小规格制剂药物的质控研究提供参考。

1　仪器与试药

收起

岛津LC-20A液相色谱仪(配备光电二极管阵列紫外可见光检测器，岛津公司)、VORTEX-GENIE 2涡旋混合仪(Scientific Industries公司)、XPR205DU型十万分之一电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)、UGC-12C氮吹仪(北京优晟联合科技有限公司)。固相萃取小柱(Agilent Mega BE-SI，6 mL∶1 g；Agilent NH₂ 6 mL∶200 mg；Welch BRP Silica 6 mL∶200 mg；Welchrom C₁₈E 6 mL∶200 mg)。

对照品维生素D₃(含量100%)，中国食品药品检定研究院；维生素D₃杂质A(含量99.30%)、维生素D₃杂质B(含量94.01%)、维生素D₃杂质C(含量95.21%)，深圳市江川医药技术有限公司；维生素D₃杂质D(含量96.1%)，TLC PharmaChem Inc.。维生素D滴剂(软胶囊)样品(400 IU·粒^-1，批号2302005、2302006、2303005)由青岛双鲸药业股份有限公司提供；空白辅料（植物油，批号220903-2-01）由辽宁新兴药业股份有限公司提供；正己烷(湖北弗顿科学技术有限公司)、正戊醇(天津市科密欧化学试剂有限公司)、乙酸乙酯(西格玛奥德里奇(上海)贸易有限公司)、甲醇(湖北弗顿科学技术有限公司)均为色谱级。

2　方法与结果

收起

2.1　色谱条件

采用Luna 3μm Silica 100Å（150 mm×4.6 μm，3 μm)色谱柱，以正己烷-正戊醇(996.5∶3.5)为流动相，流速2.0 mL·min^-1，运行时间50 min，柱温30 ℃，检测波长265 nm，进样体积100 μL。

2.2　溶液的制备

2.2.1　供试品溶液

2.2.1.1　固相萃取法

取维生素D滴剂(软胶囊)内容物约1.2 g(约相当于维生素D₃ 1 548 IU)，精密称定，置于试管中，加入异辛烷4 mL，涡旋混匀，加入预先用正己烷活化的硅胶固相萃取小柱(Agilent Mega BE-SI，6 mL∶1 g)，用正己烷-乙酸乙酯(90∶10) 2 mL洗脱，常压洗脱至洗脱液不再流出时，加入无水乙醇2 mL解吸附，收集解吸附液，氮气吹干，加入异辛烷1 mL复溶，即得。

2.2.1.2　液液萃取法

取维生素D（软胶囊）内容物约6 g(约相当于维生素D₃ 7 742 IU)，精密称定，置离心管中，加甲醇20 mL，涡旋3 min，40 kHz超声20 min，5 000 r·min^-1离心5 min，倒出上清液，再加入甲醇10 mL，重复提取2次，合并提取液，氮气吹干，加异辛烷5 mL复溶，即得。

2.2.2　自身对照溶液

精密移取供试品溶液1 mL，置100 mL量瓶中，用异辛烷稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.3　混合杂质对照品溶液

取维生素D₃杂质A、杂质B、杂质C及杂质D的对照品各10 mg，精密称定，置同一100 mL棕色量瓶中，用异辛烷溶解、定容，配制成质量浓度均为0.1 mg·mL^-1混合杂质对照品储备液，-20 ℃避光保存。精密量取混合杂质对照品储备液1 mL置25 mL量瓶中，用异辛烷稀释定容至刻度，摇匀，即得。

2.2.4　维生素D₃对照品储备液

精密称取维生素D₃的对照品25 mg，置100 mL棕色量瓶中，加异辛烷80 mL，避免加热，40 kHz超声处理1 min使完全溶解，用异辛烷稀释至刻度，摇匀，即得。储备液充氮密塞，避光，0 ℃以下保存。

2.2.5　系统适用性溶液

量取“2.2.4”项下维生素D₃对照品储备液5 mL，置具塞玻璃容器中，通氮后密塞，置90 ℃水浴中加热1 h，取出，迅速冷却，加正己烷5 mL，摇匀，置1 cm具塞石英吸收池中，在2支8 W主波长分别为254 nm和365 nm的紫外光灯下，将石英吸收池斜放成45 °，并距灯管5~6 cm，照射5 min，使溶液中含有前维生素D₃、杂质A、维生素D₃和杂质E，作为系统适用性溶液^[17]，-20 ℃避光保存。

2.3　方法学验证

2.3.1　系统适用性试验

精密吸取“2.2.5”项下系统适用性溶液，按“2.1”项下色谱条件进行测定，结果显示，前维生素D₃峰与杂质A峰分离度2.71，维生素D₃峰与杂质E峰分离度2.59(图1)。

2.3.2　专属性

2.3.2.1　加标供试品溶液

取维生素D滴剂(软胶囊)内容物约1.2 g(约相当于维生素D₃ 1 548 IU)，精密称定，置于试管中，加入“2.2.3”项下混合杂质对照品溶液48 μL及异辛烷4 mL，涡旋混匀，加入预先用正己烷活化的硅胶固相萃取小柱，剩余操作同“2.2.1.1”项下固相萃取法，制备加标供试品溶液。

2.3.2.2　空白辅料溶液

取适量空白辅料，按“2.2.1.1”项下固相萃取法制备空白辅料溶液。

2.3.2.3　专属性试验

分别精密吸取加标供试品溶液及空白辅料溶液各100 μL，按“2.1”色谱条件进行测定，结果见图2。专属性结果表明，空白辅料溶液在各杂质保留时间范围内均未出峰，且植物油色谱峰未产生干扰，专属性良好。

2.3.3　线性关系考察及定量限测定

分别精密量取“2.2.4”项下维生素D₃对照品储备液适量，采取逐级稀释的方法，用异辛烷配制含有维生素D₃对照品质量浓度为0.02、0.04、0.20、0.40、0.80 μg·mL^-1的溶液；分别精密量取“2.2.3”项下混合杂质对照品溶液适量，采取逐级稀释的方法，用异辛烷配制混合对照品质量浓度为0.02、0.04、0.20、0.40 μg·mL^-1的溶液。精密吸取上述不同浓度的溶液各100 μL，分别注入高效液相色谱仪，进行分析；结果表明，维生素D₃在0.02~0.80 μg·mL^-1，杂质A、B、C、D在0.02~0.80 μg·mL^-1线性关系良好；当信噪比(S/N)为10∶1时的浓度为最低定量限浓度；参考文献中标准曲线法^[18]，以维生素D₃与各杂质线性方程的斜率之比，计算各杂质的相对校正因子，即f=K_{维生素D₃}/K_杂质，详见表1。

2.3.4　准确度

称取9份已测知杂质量(杂质A约为0.05%，杂质B~D均未检出)的样品(批号2303005)约1.2 g(约相当于维生素D₃ 1 548 IU)，精密称定，置试管中，分别加入“2.2.3”项下混合杂质对照品溶液10、48、58 μL各3份，加入异辛烷4 mL，涡旋混匀，加入预先用正己烷活化的硅胶固相萃取小柱，剩余操作同“2.2.1.1”项下固相萃取法，即得低、中、高3个浓度的回收率加标溶液，按“2.1”色谱条件进行分析，按加校正因子的1%主成分自身对照法计算各杂质回收率，结果见表2，维生素D₃各杂质在不同浓度的回收率为93.2%~102.9%，RSD<10%，结果表明该方法的准确度良好。

2.4　样品的测定

取3批样品，分别按“2.2.1.1”项下方法制备供试品溶液，按“2.2.2”项下方法制备自身对照溶液。精密量取上述溶液各100 μL，注入液相色谱仪。供试品溶液色谱图中若有与杂质A、杂质B、杂质C及杂质D保留时间一致的色谱峰，按加校正因子的主成分自身对照法计算，各杂质含量均不得大于0.5%，其他单个未知杂质含量不得大于0.5%，总杂质含量不得大于1.0%。结果见表3。

3　讨论

收起

3.1　固相萃取小柱选择

选择Welch BRP、Welchrom C₁₈E、Agilent NH₂及Agilent Mega BE-SI共4种固相萃取小柱进行同一浓度的供试品溶液上样分析，以维生素D₃峰面积响应值为考察指标，结果显示，使用Welchrom C₁₈E固相萃取小柱时，维生素D₃峰面积为339.540，峰面积响应差；采用NH₂固相萃取小柱及Welch BRP萃取小柱，维生素D₃峰面积响应分别为154.222及302.505，这与王尚等^[6]报道的一致，主要是维生素D₃为甾醇类化合物，极性很弱，其在氰基(-CN)、氨基(-NH₂)等极性固定相上的保留较弱所导致，而在Mega BE-SI固相萃取小柱条件下，维生素D₃峰面积4 099.731峰面积响应良好。因此，试验选择采用Mega BE-SI固相萃取小柱。

3.2　洗脱剂选择

参考文献报道^[19-21]，分别对洗脱剂的种类及比例进行筛选，以同浓度对应维生素D₃色谱峰峰面积以及响应峰面积与维生素D₃对照品直接进样峰面积比值计算提取率；结果以甲醇、正己烷、乙酸乙酯、乙酸乙酯-甲醇(90∶10)、乙酸乙酯-正己烷(10∶90)为洗脱剂时，维生素D₃峰面积响应分别为2 326.7、278.8、3 374.4、854.5及4 294.5，提取率分别为48.59%、49.68%、70.48%、17.85%、89.69%；各洗脱条件下植物油与前维生素D均可有效分离，且以乙酸乙酯-正己烷为洗脱剂时，回收率良好；进一步对乙酸乙酯-正己烷的比例进行筛选，结果显示，以乙酸乙酯-正己烷(15∶85)提取率较好，因此，选择乙酸乙酯-正己烷(15∶85)作为洗脱剂(图3)。

3.3　解吸剂选择

分别以无水乙醇、甲醇及不同比例的正己烷-乙酸乙酯为解吸剂，以异辛烷为复溶剂，考察相同浓度下加标供试品溶液中维生素D₃提取率及各杂质与植物油分离情况。结果表明，以正己烷-乙酸乙酯(50∶50、80∶20及70∶30)解吸时，植物油干扰杂质B且提取率低；以正己烷-乙酸乙酯(60∶40)、甲醇及无水乙醇解吸时，植物油对各色谱峰均未产生干扰，维生素D₃提取率分别为91.96%、93.54%及99.61%，综合比较，选择无水乙醇为解吸剂。

3.4　固相萃取与液液萃取的比较

为得到最优的提取方法，配制同浓度的供试品溶液进行分析，具体配制方法见“2.2.1.1”项及“2.2.1.2”项。结果显示（图4），相同浓度下，采用液液萃取，前维生素D₃与植物油无法有效分离，而采用固相萃取，前处理后可达到有效分离，且峰形良好。

3.5　结论

本文建立了SPE-HPLC法检测维生素D滴剂(软胶囊)中有关物质，通过改变选择萃取柱类型、淋洗和洗脱条件等影响维生素D₃响应值及提取率的因素，筛选出固相萃取小柱提取分离的最佳条件，并采用高效液相色谱法检测。这一方法专属性强，灵敏度高，可有效避免反复溶剂提取、冷冻、超声等样品前处理步骤，减少了实验人员带来的误差，节约样品处理、分析时间，能够满足国内外法规中对维生素D滴剂(软胶囊)有关物质检测的限度要求。

参考文献

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文献

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2024年第44卷第7期

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doi: 10.16155/j.0254-1793.2023-0441

首发时间：2026-03-13
出版时间：2024-07-31

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修回日期：2024-06-14

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^1.青岛双鲸药业股份有限公司企业技术中心，青岛 266109

^2.山东省食品药品检验研究院，济南 250101

通讯作者:

^* Tel：（0531）81216710；E-mail：xie_qsh@163.com

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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TxT

化合物名称 (compound name)	线性方程 (regression equation)	r	线性范围 (linear range)/(μg·mL^-1)	定量限 (quantitation limit)/(μg·mL^-1)	f
维生素D₃(vitamin D₃)	Y=159.446 0X-0.753 1	0.999 5	0.02~0.80	0.003 782	1.00
杂质A(impurity A)	Y=176.737 9X+0.038 10	0.999 9	0.02~0.80	0.003 932	0.90
杂质B(impurity B)	Y=69.414 1X+0.239 4	0.999 9	0.02~0.80	0.027 640	2.30
杂质C(impurity C)	Y=60.277 5X+0.206 0	0.999 9	0.02~0.80	0.016 820	2.65
杂质D(impurity D)	Y=104.656 5X+0.180 2	0.999 9	0.02~0.80	0.009 773	1.52

化合物名称
(compound name)

线性方程
(regression equation)

线性范围
(linear range)/(μg·mL^-1)

定量限
(quantitation limit)/(μg·mL^-1)

维生素D₃(vitamin D₃)

Y=159.446 0X-0.753 1

0.999 5

0.02~0.80

0.003 782

1.00

杂质A(impurity A)

Y=176.737 9X+0.038 10

0.999 9

0.02~0.80

0.003 932

0.90

杂质B(impurity B)

Y=69.414 1X+0.239 4

0.999 9

0.02~0.80

0.027 640

2.30

杂质C(impurity C)

Y=60.277 5X+0.206 0

0.999 9

0.02~0.80

0.016 820

2.65

杂质D(impurity D)

Y=104.656 5X+0.180 2

0.999 9

0.02~0.80

0.009 773

1.52

化合物名称 (compound name)	样品含有量 (content)/μg	加入量 (added)/μg	测得值 (measurement)/μg	回收率 (recovery)/%	平均回收率 (mean recovery)/%	RSD/%
杂质A(impurity A)	0.016 44	0.039 32	0.049 90	85.1	97.3	8.2
	0.016 44	0.039 32	0.049 63	84.4
	0.016 44	0.039 32	0.054 85	97.7
	0.016 44	0.196 61	0.211 38	99.2
	0.016 44	0.196 61	0.229 70	108.5
	0.016 44	0.196 61	0.204 58	95.7
	0.016 44	0.235 94	0.256 12	101.6
	0.016 44	0.235 94	0.253 70	100.6
	0.016 44	0.235 94	0.260 47	103.4
杂质B(impurity B)	0	0.039 48	0.042 39	107.4	102.9	3.6
	0	0.039 48	0.040 31	102.1
	0	0.039 48	0.041 21	104.4
	0	0.197 42	0.210 57	106.7
	0	0.197 42	0.199 10	100.9
	0	0.197 42	0.201 10	101.9
	0	0.236 91	0.230 06	97.1
	0	0.236 91	0.252 70	106.7
	0	0.236 91	0.234 00	98.8
杂质C(impurity C)	0	0.039 57	0.031 97	80.8	96.7	9.6
	0	0.039 57	0.031 95	80.7
	0	0.039 57	0.040 22	101.6
	0	0.197 85	0.201 20	101.7
	0	0.197 85	0.190 90	96.5
	0	0.197 85	0.203 20	102.7
	0	0.237 42	0.241 40	101.7
	0	0.237 42	0.239 70	101.0
	0	0.237 42	0.246 10	103.7
杂质D(impurity D)	0	0.039 09	0.038 76	99.2	93.2	3.6
	0	0.039 09	0.035 26	90.2
	0	0.039 09	0.035 15	89.9
	0	0.195 46	0.177 66	90.9
	0	0.195 46	0.179 70	91.9
	0	0.195 46	0.179 20	91.7
	0	0.234 55	0.218 82	93.3
	0	0.234 55	0.230 32	98.2
	0	0.234 55	0.220 65	94.1

化合物名称
(compound name)

样品含有量
(content)/μg

加入量
(added)/μg

测得值
(measurement)/μg

回收率
(recovery)/%

平均回收率
(mean recovery)/%

RSD/%

杂质A(impurity A)

0.016 44

0.039 32

0.049 90

85.1

97.3

8.2

0.016 44

0.039 32

0.049 63

84.4

0.016 44

0.039 32

0.054 85

97.7

0.016 44

0.196 61

0.211 38

99.2

0.016 44

0.196 61

0.229 70

108.5

0.016 44

0.196 61

0.204 58

95.7

0.016 44

0.235 94

0.256 12

101.6

0.016 44

0.235 94

0.253 70

100.6

0.016 44

0.235 94

0.260 47

103.4

杂质B(impurity B)

0.039 48

0.042 39

107.4

102.9

3.6

0.039 48

0.040 31

102.1

0.039 48

0.041 21

104.4

0.197 42

0.210 57

106.7

0.197 42

0.199 10

100.9

0.197 42

0.201 10

101.9

0.236 91

0.230 06

97.1

0.236 91

0.252 70

106.7

0.236 91

0.234 00

98.8

杂质C(impurity C)

0.039 57

0.031 97

80.8

96.7

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80.7

0.039 57

0.040 22

101.6

0.197 85

0.201 20

101.7

0.197 85

0.190 90

96.5

0.197 85

0.203 20

102.7

0.237 42

0.241 40

101.7

0.237 42

0.239 70

101.0

0.237 42

0.246 10

103.7

杂质D(impurity D)

0.039 09

0.038 76

99.2

93.2

3.6

0.039 09

0.035 26

90.2

0.039 09

0.035 15

89.9

0.195 46

0.177 66

90.9

0.195 46

0.179 70

91.9

0.195 46

0.179 20

91.7

0.234 55

0.218 82

93.3

0.234 55

0.230 32

98.2

0.234 55

0.220 65

94.1

化合物名称 (compound name)	含量(content)/%
杂质A(impurity A)	0.08	0.08	0.05
杂质B(impurity B)	ND	ND	ND
杂质C(impurity C)	ND	ND	ND
杂质D(impurity D)	ND	ND	ND
未知杂质(unknown impurities)	ND	ND	ND
总杂(total impurities)	0.08	0.08	0.05

化合物名称
(compound name)

含量(content)/%

lot No.
2302005

lot No.
2302006

lot No.
2303005

杂质A(impurity A)

0.08

0.05

杂质B(impurity B)

杂质C(impurity C)

杂质D(impurity D)

未知杂质(unknown impurities)

总杂(total impurities)

0.08

0.05