药物分析杂志

右旋糖酐对照品 (dextran reference substance)	M_p实测值(M_p detected)/Da	均值 (mean)	RSD/%	M_p标示值 (M_p labelled)/Da	相对误差 (relative error)/%
D4	14 176	13 576	13 186	13 344	12 945	13 086	13 386	3.3	13 050	2.6
D5	35 459	36 902	38 713	38 133	35 736	36 777	36 953	3.5	36 800	0.40
D6	67 644	67 287	69 574	67 639	63 783	63 800	66 621	3.5	64 650	3.0
D7	143 247	143 037	126 947	132 252	136 932	137 809	136 704	4.6	135 350	1.0

右旋糖酐对照品 (dextran reference substance)	M_p实测值(M_p detected)/Da	均值 (mean)	RSD/%	M_p标示值 (M_p labelled)/Da	相对误差 (relative error)/%
D4	14 176	13 576	13 186	13 344	12 945	13 086	13 386	3.3	13 050	2.6
D5	35 459	36 902	38 713	38 133	35 736	36 777	36 953	3.5	36 800	0.40
D6	67 644	67 287	69 574	67 639	63 783	63 800	66 621	3.5	64 650	3.0
D7	143 247	143 037	126 947	132 252	136 932	137 809	136 704	4.6	135 350	1.0

样品浓度 (sample concentration)/(mg·mL^-1）	M_w/Da	均值（mean）/Da	RSD/%
2	71 225	71 321	71 559	70 996	71 364	71 832	71 383	0.40
1	72 788	69 871	70 300	72 657	71 036	70 171	71 137	1.8
0.5	67 557	72 937	70 036	70 687	69 542	72 399	70 526	2.8
0.25	68 006	76 939	68 408	73 768	68 094	68 195	70 568	5.4

样品浓度 (sample concentration)/(mg·mL^-1）	M_w/Da	均值（mean）/Da	RSD/%
2	71 225	71 321	71 559	70 996	71 364	71 832	71 383	0.40
1	72 788	69 871	70 300	72 657	71 036	70 171	71 137	1.8
0.5	67 557	72 937	70 036	70 687	69 542	72 399	70 526	2.8
0.25	68 006	76 939	68 408	73 768	68 094	68 195	70 568	5.4

样品 (sample)	M_w/Da	均值（mean）/Da	RSD/%
原料(raw material)	72 476	72 033	72 458	71 286	72 341	72 681	72 213	0.70
注射剂(injection)	63 576	65 974	62 783	57 971	64 572	62 655	62 922	4.3
片剂(tablet)	88 694	88 347	90 525	90 692	92 379	90 533	90 195	1.6

样品 (sample)	M_w/Da	均值（mean）/Da	RSD/%
原料(raw material)	72 476	72 033	72 458	71 286	72 341	72 681	72 213	0.70
注射剂(injection)	63 576	65 974	62 783	57 971	64 572	62 655	62 922	4.3
片剂(tablet)	88 694	88 347	90 525	90 692	92 379	90 533	90 195	1.6

样品 (sample)	M_w/Da	均值（mean）/Da	RSD/%
原料(raw material)	72 215	70 604	71 051	71 419	70 102	71 078	1.1
注射剂(injection)	60 112	61 957	62 214	63 179	62 512	61 995	1.9
片剂(tablet)	90 533	90 649	89 463	90 023	91 182	90 370	0.70

样品 (sample)	M_w/Da	均值（mean）/Da	RSD/%
原料(raw material)	72 215	70 604	71 051	71 419	70 102	71 078	1.1
注射剂(injection)	60 112	61 957	62 214	63 179	62 512	61 995	1.9
片剂(tablet)	90 533	90 649	89 463	90 023	91 182	90 370	0.70

SEC-RI-MALLS测定甘露聚糖肽分子量与分子量分布

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邹剑 , 杨蕾 , 林涛 , 王觉晓 , 马晶 , 陈婕 , 李炎 ^*

药物分析杂志 | 生物检定·活性分析 2024,44(2): 256-263

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药物分析杂志 | 生物检定·活性分析 2024, 44(2): 256-263

SEC-RI-MALLS测定甘露聚糖肽分子量与分子量分布

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邹剑, 杨蕾, 林涛, 王觉晓, 马晶, 陈婕, 李炎^*

作者信息

四川省药品检验研究院国家药品监督管理局疫苗及生物制品质量控制与评价重点实验室四川省药品监督管理局生物制品质量监测与风险评估重点实验室,成都 610097

Tel：（028）87877146；E-mail：zoujian2111@ 126.com

通讯作者:

*Tel：(028)87877114；E-mail：34904523@qq.com

Determination of molecular weight and distribution of mannatide by means of SEC-RI-MALLS

Jian ZOU, Lei YANG, Tao LIN, Jue-xiao WANG, Jin MA, Jie CHEN, Yan LI^*

Affiliations

Sichuan Institute for Drug Control, NMPA Key Laboratory for Quality Control and Evaluation of Vaccines and Biological Products, SCMPA Key Laboratory for Quality Monitoring and Risk Assessment of Biological Products，Chengdu 610097，China

出版时间: 2024-02-29 doi: 10.16155/j.0254-1793.2024.02.08

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摘要

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目的：

建立尺寸排阻色谱-示差折光-多角度激光光散射检测器联用（size exclusion chromatography-refractive index-multiangle laser light scattering，SEC-RI-MALLS）测定甘露聚糖肽原料药和制剂分子量及分子量分布的方法。

方法：

采用SEC-RI-MALLS联用技术，以0.05 mol·L^-1硫酸钠溶液为流动相，Shodex OHpak SB-804 HQ为色谱分离柱，在流速0.5 mL·min^-1，柱温35 ℃的条件下对甘露聚糖肽分子量及其分布进行专属性、准确度、精密度、耐用性方法学验证，并与现行质量标准方法进行比较。

结果：

片剂辅料淀粉对测定无干扰，右旋糖酐标准品实测值同标示值的准确度相对误差<3.0%；当样品配制浓度为2 mg·mL^-1时精密度最好，RSD为0.40%；重现性、耐用性RSD均不大于5.0%。79批次样品采用Shodex OHpak SB-804 HQ色谱柱和TSK-GEL G4000 PW_XL色谱柱进行测定，结果无显著性差异。SEC-RI-MALLS法比甘露聚糖肽国家标准方法（GPC法）的结果平均高19 509 Da，且分子量分布更为集中。

结论：

SEC-RI-MALLS法无需标准品就能够测定甘露聚糖肽分子量及其分布，结果准确，耐用性好，与现行方法相比，更有利于该品种的安全性、有效性控制。

关键词

多角度激光光散射 / 尺寸排阻色谱 / 凝胶渗透色谱 / 甘露聚糖肽 / 分子量与分子量分布

Abstract

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Objective:

To establish a method for determining molecular weight and distribution of raw mannatide and its preparation with SEC-RI-MALLS.

Methods:

Specificity，accuracy, precision and robustness of SEC-RI-MALLS method was verified by performing on a Shodex OHpak SB-804 HQ column with 0.05 mol·L^-1 sodium sulfate buffer as mobile phase at a flow rate of 0.5 mL·min^-1 and a comparison between SEC-RI-MALLS and GPC was studied too.

Resulst:

The tablet excipient starch had no interference to the test. The relative accuracy error between the measured value and the labeled value of dextran standard was less than 3.0%. RSD of precision was 0.40% when the sample concentration was 2 mg·mL^-1 and the RSD of reproducibility and robustness were less than 5.0%. There was no significant difference between Shodex OHpak SB-804 HQ column and TSK-GEL G4000 PW_XL column by comparing the results of 79 batches of samples. Compared with the national standard method (GPC) for molecular weight determination, the molecular weight of SEC-RI-MALLS method was 19 509 Da higher on average, and the molecular weight distribution was more concentrated.

Conclusion:

SEC-RI-MALLS method can determine the molecular weight and distribution of mannatide without standard with good accuracy and robustness. Compared with the existing method, SEC-RI-MALLS method is more conducive to the safety and effectiveness control of the variety.

Key words

multi-angle laser light scattering / size exclusion chromatography / gel permeation chromatography / mannatide / molecular weight and distribution

引用本文

邹剑, 杨蕾, 林涛, 王觉晓, 马晶, 陈婕, 李炎. SEC-RI-MALLS测定甘露聚糖肽分子量与分子量分布. 药物分析杂志, 2024 , 44 (2) : 256 -263 . DOI: 10.16155/j.0254-1793.2024.02.08

Jian ZOU, Lei YANG, Tao LIN, Jue-xiao WANG, Jin MA, Jie CHEN, Yan LI. Determination of molecular weight and distribution of mannatide by means of SEC-RI-MALLS[J]. Chinese Journal of Pharmaceutical Analysis, 2024 , 44 (2) : 256 -263 . DOI: 10.16155/j.0254-1793.2024.02.08

正文

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甘露聚糖肽(mannatide)为我国首创的免疫增强剂，由健康人咽喉部分离的α-溶血性链球菌33号菌株经深层培养、发酵提取而得到的一种糖肽类物质，主要是由糖链结构一致、分子量和氨基酸含量不同的几种均一糖肽构成的混合物^[1]。甘露聚糖肽可以通过与淋巴细胞表面的甘露糖受体结合，激活机体的非特异性免疫反应从而提高机体免疫力，临床上常用作治疗肿瘤的辅助药，能减轻放化疗的毒副作用，增强和调节免疫功能，提高近期疗效，对其他原因造成的白细胞减少症、再生障碍性贫血、血小板减少性紫癜、多种口腔粘膜病等非肿瘤疾患均有较好的疗效^[2]。

分子量及其分布是甘露聚糖肽最重要的理化参数之一，是表征工艺稳定性和有效性的关键质量参数。甘露聚糖肽相关国家标准为化学药品地方标准上升国家标准第16册WS₁-XG-053-2000-2005（甘露聚糖肽）、WS₁-XG-055-2000-2005（甘露聚糖肽片）、WS₁-XG-056-2000-2005（甘露聚糖肽注射液），其中规定分子量与分子量分布采用右旋糖酐分子量对照品作校正曲线的凝胶渗透色谱法（gel permeation chromatography，GPC）测定^[3]。由于右旋糖酐和甘露聚糖肽本身在结构上的差异，因此，GPC方法测定的甘露聚糖肽分子量为相对右旋糖酐的分子量，不能反映甘露聚糖肽分子量真实值。而尺寸排阻色谱-示差折光-多角度激光光散射(SEC-RI-MALLS)联用技术兼具色谱法和光散射法的特点，可以在不需要标准品的情况下，快速、准确地测出高分子的绝对重均分子量（M_w）、峰值分子量（M_p)、数均分子量（M_n）、分子量分布（M_w/M_n）、z-均方根半径、分子的形状、分支、聚集态等物理参数^[4-6]，因此能更全面地反映甘露聚糖肽的结构特征，更有利于药品的质量控制。本文参照2020年版《中华人民共和国药典》通则<0514分子排阻色谱法>和<9101分析方法验证指导原则>^[7]，建立了SEC-RI-MALLS联用测定甘露聚糖肽原料药和制剂分子量与分子量分布的新方法，有利于指导该品种分子量测定标准方法的进一步提高。

1　材料

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1.1　仪器

Agilent-1200型液相色谱系统（Agilent公司）；DAWN HELEOS 18角度静态光散射仪、Optilab干涉型示差折光仪、ASTRA6.1分析软件(怀亚特公司)；XPR 205十万分之一分析天平(Mettler Toledo公司)；Milli-Q超纯水机(Millipore公司)。

1.2　试药

右旋糖酐分子量对照品：D4(M_p=13 050)、D5(M_p=36 800)、D6（M_p=64 650）、D7（M_p=135 350）、D8（M_p=300 600），来自中国食品药品检定研究院，批号为140637-201203；硫酸钠为分析纯，成都化学试剂厂；叠氮化钠为分析纯，天津市大茂化学试剂厂；甘露聚糖肽7批（3家供样企业）、甘露聚糖肽片45批（5家供样企业）、甘露聚糖肽注射液27批（1家供样企业）均来自于国家、省级市场抽验(2017—2021年度)。

2　方法

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2.1　色谱条件

色谱柱：Shodex OHpak SB-804 HQ色谱柱(300 mm×8.0 mm，10 μm)和TSK-GEL G4000 PW_XL色谱柱(300 mm×7.8 mm，10 μm)。

流动相：称取硫酸钠7.1 g，叠氮化钠0.5 g，加入1 000 mL超纯水溶解，得0.05 moL·L^-1的硫酸钠溶液，0.22 μm滤膜过滤，备用。

SEC-RI-MALLS系统色谱条件：采用1根Shodex OHpak SB-804 HQ色谱柱(300 mm×8.0 mm，10 μm)，以0.05 moL·L^-1的硫酸钠溶液为流动相，流速0.5 mL·min^-1，MALLS与RI检测器联用，柱温、检测器温度均为35 ℃，进样体积100 μL。MALLS激光波长为663.8 nm，Fused Silica样品池；MALLS 90°光电二极管检测器使用甲苯进行校正(校正常数：3.21×10^-5)，其他角度二极管检测器采用右旋糖酐分子量对照品D5(M_p=36 800)归一化；使用牛血清白蛋白确定MALLS和RI检测器之间的延迟体积(0.219 mL)；RI校正常数采用一系列氯化钠标准溶液进行测定(校正常数：3.45×10^-5)。

2.2　折射率增量(dn/dc)值测定

取原料药甘露聚糖肽、右旋糖酐纯品适量，加流动相配制成5个浓度梯度(0.5~5 mg·mL^-1)的样品溶液，手动进样量1 000 μL，用Optilab T-rEX检测器采集数据，分别连续测定3次。

2.3　专属性考察

精密称取制剂辅料淀粉50 mg，加流动相定容至25 mL量瓶中，即得2 mg·mL^-1淀粉溶液。0.22 μm滤膜过滤至样品瓶中，进样记录色谱图，同时以流动相作为空白对照，以同法制备的甘露聚糖肽作为对照溶液，甘露聚糖肽片作为样品溶液，记录色谱图。

2.4　准确度考察

精密称取多个右旋糖酐分子量对照品（D4~D7）各10 mg，加流动相5 mL配制成浓度为2 mg·mL^-1的溶液，待溶解完全后，经0.22 μm滤膜过滤至样品瓶中。每次进样1组，记录色谱图，使用Astra6.1软件计算标样的分子量，选取6次独立重复试验的结果均值与标示值比较相对误差。

2.5　精密度考察

2.5.1　不同浓度精密度

精密称取甘露聚糖肽原料50 mg，加流动相定容至25 mL量瓶中，待其完全溶解后，用流动相分别稀释0.25、0.5、1、2 mg mL^-1的样品溶液，经0.22 μm滤膜过滤至样品瓶中。每个样品在不同浓度下分别重复进样6次，记录色谱图，使用Astra 6.1软件计算样品分子量。

2.5.2　重复性

精密称取甘露聚糖肽原料、甘露聚糖肽片（以甘露聚糖肽计）各6份，每份50 mg，加流动相定容至25 mL量瓶中，甘露聚糖肽注射液6支，加流动相溶解稀释至质量浓度约为2 mg·mL^-1，待溶解完全后，0.22 μm滤膜过滤至样品瓶中，记录色谱图，使用Astra6.1软件计算样品分子量及其分布情况。

2.6　稳定性考察

取“2.5.2”项下同批次样品，待溶解完全后，0.22 μm滤膜过滤至样品瓶中，于0、6、12、18、24 h分别进样测定。

2.7　样品测定

2.7.1　SEC-RI-MALLS法

取7批甘露聚糖肽、45批甘露聚糖肽片，27批甘露聚糖肽注射剂，加流动相溶解稀释至质量浓度约为2 mg mL^-1，0.22 μm滤膜过滤至样品瓶中，记录色谱图，使用Astra6.1软件计算样品分子量及其分布。取上述同批次样品，用TSK-GEL G4000 PW_XL色谱柱替换Shodex OHpak SB-804HQ色谱柱，其余色谱条件不变。同法计算样品分子量及其分布。

2.7.2　GPC法

试验批次及样品制备同“2.7.1”项下，GPC色谱条件同甘露聚糖肽国家标准WS₁-XG-053-2000-2005项下“分子量与分子量分布”：取右旋糖酐分子量对照品(D4~D8)适量。采用Shodex OHpak SB-804 HQ色谱柱(300 mm×8.0 mm，10 μm)，流动相、柱温、流速、示差折光检测器温度、进样体积同“2.1”项下。采用Waters GPC专用软件，以右旋糖酐分子量对照品做校正曲线计算分子量及分布。

3　结果与讨论

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3.1　dn/dc值测定结果

dn/dc即折射率增量，描述聚合物溶液折光指数相对于溶质浓度的变化。同质量的2种聚合物，dn/dc越大，就能散射更多的光，M_w越小。dn/dc值和样品本身、溶剂、流动相密切相关，反映了三者之间的匹配程度，是准确测定分子量与分子量分布的重要参数^[8]。本次实验右旋糖酐、甘露聚糖肽在硫酸钠流动相中的dn/dc值分别为0.134 4、0.144 6 mL·g^-1(甘露聚糖肽dn/dc测定图见图1，n=3)。

3.2　专属性考察

甘露聚糖肽注射液处方组成为甘露聚糖肽、氯化钠、碳酸氢钠和注射用水；甘露聚糖肽片处方组成为甘露聚糖肽、玉米淀粉、硬脂酸镁和硫酸钙。其中，只有淀粉是大分子多糖聚合物，若分子量与甘露聚糖肽分子量接近，从尺寸排阻色谱的分离原理来看，可能对甘露聚糖肽分子量测定造成影响。从图2可以看出，甘露聚糖肽片主峰出峰时间同甘露聚糖肽保持一致（12~20 min），辅料淀粉出峰与空白出峰相似，在甘露聚糖肽出峰时间内对分子量测定无影响。

3.3　准确度考察

激光光散射法是测定聚合物M_w的绝对方法，仪器测量误差一般在5%以内。本实验使用MALLS法测定已知分子量的右旋糖酐分子量对照品，并将实测分子量与标示分子量作比较，考察系统准确度。由表1可知，不同分子量的多糖对照品其实测值与标示值的相对误差在3%以下，说明在D4~D7分子量范围内，该方法的准确度可靠。

3.4　精密度考察

3.4.1　不同样品浓度的进样精密度

多角度激光光散射仪灵敏度较高，在样品浓度较低时即可以检测，但示差折光检测器灵敏度较低，低浓度下基线波动会给样品测定带来较大偏差，因此，选择合适的样品浓度对测定至关重要^[8]。由表2可知，样品质量浓度在2 mg·mL^-1时，测试结果RSD最小，精密度最好，故选择2 mg·mL^-1作为样品的制备浓度。

3.4.2　重复性试验

对原料药、片剂、注射剂各6份进行测定，由表3可以看出，RSD<5.0%，说明本方法重复性好。

3.5　样品溶液稳定性

从表4可以看出，原料药、片剂和注射剂在1 d之内间隔不同时间段测试，M_w无明显变化，说明样品溶液稳定。

3.6　样品测定

3.6.1　SEC-RI-MALLS法和GPC法分子量及其分布

2种方法测定结果趋势图见图3，其中SEC-RI-MALLS法包含了Shodex OHpak SB-804 HQ和TSK-GEL G4000 PW_XL 2根色谱柱的测定结果。值得注意的是，不同企业来源的原料药和片剂之间未见明显差异，但注射剂测定结果平均分子量及其分布小于片剂。这主要是与现行国家标准中对注射剂分子量限度控制范围更窄有关[M_w应为40 000~65 000（注射剂）、40 000~90 000(片剂)，分布宽度应小于2.5(注射剂)和3.0（片剂）]^[3]，生产工艺上体现在经分子筛截留的较小分子量甘露聚糖肽用于注射剂生产，未经分子筛截留的甘露聚糖肽原料用于片剂生产。

3.6.2　不同色谱柱、不同方法甘露聚糖肽分子量及其分布测定结果分析和比较

SEC-RI-MALLS法分别采用Shodex OHpak SB-804 HQ色谱柱和TSK-GEL G4000 PW_XL色谱柱进行测定，2根色谱柱均以亲水性乙烯基聚合物为基材的高亲水性填料充填，主要用于水溶性多聚物的检测，除内径有所差别外，柱长、粒径、排阻限等基本一致。从测定结果来看，2根色谱柱测定结果基本一致，无统计学差异（图4），同时也表明新方法对不同品牌色谱柱的耐用性良好。

将GPC法与SEC-RI-MALLS法测定结果相比较，两者统计学差异显著（图4）。SEC-RI-MALLS法测定的M_w（71 004 Da）比GPC法测定的M_w (51 495 Da)均值高19 509 Da。但GPC法测定的分子量分布更宽，体现在分布宽度更宽（GPC法2.1，MALLS法1.8），两端10%小分子处的分子量更小（GPC法8 014 Da，MALLS方法19 006 Da），10%大分子处的分子量更大（GPC法160 950 Da，MALLS方法129 473 Da）。2种方法虽然在分离原理上相同（色谱柱、流动相、柱温、流速均相同），但计算方法不同。GPC法采用右旋糖酐分子量对照品作校正曲线，由于甘露聚糖肽和右旋糖酐本身结构上的差异，此时计算结果为相对分子量，测定结果可能和真实值相差较大。而SEC-RI-MALLS法根据静态光散射的原理，利用光散射强度和分子量大小之间的关系计算分子量，是M_w测定的绝对定量方法，能真实地反映甘露聚糖肽的M_w大小。

4　小结

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通过建立分子量标准品校正曲线来确定分子量分布和分子量的传统方法仍然被广泛地应用，但当这些方法所使用的标准品结构与样品不同时，会给测定结果带来明显的误差^[10]。基于光散射技术发展起来的MALLS法由于不需要标准品就能直接测定高聚物的绝对分子量，已经逐渐成为表征高聚物分子量及分子量分布的趋势^[11-14]。本文针对甘露聚糖肽原料、注射剂和片剂，建立了SEC-RI-MALLS法测定分子量及分子量分布，该方法在现行国标方法色谱条件下，对进样浓度等条件进行了优化，经方法学验证证明，新方法的专属性、精密度、准确度、耐用性良好。从79批次样本的测定结果来看，SEC-RI-MALLS法测定的M_w比现行国标GPC法平均高近20 000 Da。可见，现行标准方法大大低估了甘露聚糖肽的真实分子量，这可能是甘露聚糖肽临床使用过程中出现过敏反应的重要原因^[15]。该研究成果可以作为甘露聚糖肽分子量及分子量分布标准提高的重要依据，有利于该品种药品质量的进一步提高。

参考文献

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文献

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排序方式：

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2024年第44卷第2期

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doi: 10.16155/j.0254-1793.2024.02.08

首发时间：2026-03-13
出版时间：2024-02-29

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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TxT

右旋糖酐对照品 (dextran reference substance)	M_p实测值(M_p detected)/Da	均值 (mean)	RSD/%	M_p标示值 (M_p labelled)/Da	相对误差 (relative error)/%
D4	14 176	13 576	13 186	13 344	12 945	13 086	13 386	3.3	13 050	2.6
D5	35 459	36 902	38 713	38 133	35 736	36 777	36 953	3.5	36 800	0.40
D6	67 644	67 287	69 574	67 639	63 783	63 800	66 621	3.5	64 650	3.0
D7	143 247	143 037	126 947	132 252	136 932	137 809	136 704	4.6	135 350	1.0

右旋糖酐对照品
(dextran reference substance)

M_p实测值(M_p detected)/Da

均值
(mean)

RSD/%

M_p标示值
(M_p labelled)/Da

相对误差
(relative error)/%

14 176

13 576

13 186

13 344

12 945

13 086

13 386

3.3

13 050

2.6

35 459

36 902

38 713

38 133

35 736

36 777

36 953

3.5

36 800

0.40

67 644

67 287

69 574

67 639

63 783

63 800

66 621

3.5

64 650

3.0

143 247

143 037

126 947

132 252

136 932

137 809

136 704

4.6

135 350

1.0

样品浓度 (sample concentration)/(mg·mL^-1）	M_w/Da	均值（mean）/Da	RSD/%
2	71 225	71 321	71 559	70 996	71 364	71 832	71 383	0.40
1	72 788	69 871	70 300	72 657	71 036	70 171	71 137	1.8
0.5	67 557	72 937	70 036	70 687	69 542	72 399	70 526	2.8
0.25	68 006	76 939	68 408	73 768	68 094	68 195	70 568	5.4

样品浓度
(sample concentration)/(mg·mL^-1）

M_w/Da

均值
（mean）/Da

RSD/%

71 225

71 321

71 559

70 996

71 364

71 832

71 383

0.40

72 788

69 871

70 300

72 657

71 036

70 171

71 137

1.8

0.5

67 557

72 937

70 036

70 687

69 542

72 399

70 526

2.8

0.25

68 006

76 939

68 408

73 768

68 094

68 195

70 568

5.4

样品 (sample)	M_w/Da	均值（mean）/Da	RSD/%
原料(raw material)	72 476	72 033	72 458	71 286	72 341	72 681	72 213	0.70
注射剂(injection)	63 576	65 974	62 783	57 971	64 572	62 655	62 922	4.3
片剂(tablet)	88 694	88 347	90 525	90 692	92 379	90 533	90 195	1.6

样品
(sample)

M_w/Da

均值
（mean）/Da

RSD/%

原料(raw material)

72 476

72 033

72 458

71 286

72 341

72 681

72 213

0.70

注射剂(injection)

63 576

65 974

62 783

57 971

64 572

62 655

62 922

4.3

片剂(tablet)

88 694

88 347

90 525

90 692

92 379

90 533

90 195

1.6

样品 (sample)	M_w/Da	均值（mean）/Da	RSD/%
原料(raw material)	72 215	70 604	71 051	71 419	70 102	71 078	1.1
注射剂(injection)	60 112	61 957	62 214	63 179	62 512	61 995	1.9
片剂(tablet)	90 533	90 649	89 463	90 023	91 182	90 370	0.70

样品
(sample)

M_w/Da

均值
（mean）/Da

RSD/%

0 h

6 h

12 h

18 h

24 h

原料(raw material)

72 215

70 604

71 051

71 419

70 102

71 078

1.1

注射剂(injection)

60 112

61 957

62 214

63 179

62 512

61 995

1.9

片剂(tablet)

90 533

90 649

89 463

90 023

91 182

90 370

0.70