高效液相色谱（HPLC）是现代分析化学中一种重要的分离分析技术，广泛应用于生物化学、医药和食品等领域。然而，随着样品复杂性的增加，传统单模式色谱难以实现混合物的高效分离。为此，混合模式色谱（MMC）通过整合反相液相色谱（RPLC）、亲水作用色谱（HILIC）及离子交换色谱（IEC）等多种分离机制，结合功能化固定相，实现了对复杂样品的高效分离。本文简要描述了4种混合模式的分离机理，详细总结了固定相化学反应类型、填料结构以及新型固定相材料，系统综述了2020-2024年基于RPLC/IEC、RPLC/HILIC、HILIC/IEC及RPLC/HILIC/IEC 4种混合模式的高效液相色谱固定相的应用，并分析了不同模式在复杂样品分离中的优势与局限性。最后，本文展望了混合模式固定相在高效液相色谱应用中所面临的挑战及未来的发展趋势。

可利霉素是一种在医药领域广泛使用的大环内酯类抗生素，主要成分为3种不同的螺旋霉素衍生物。然而随着相关研究的深入，近期发现可利霉素以及多种不同结构的螺旋霉素衍生物都具有一定的抗肿瘤活性，说明利用螺旋霉素作为母核，进行不同的取代基修饰，可能会得到更好的抗肿瘤活性药物。虽然螺旋霉素有着成为抗肿瘤药物的潜力，但是关于其作用靶点及完整机制的研究依然欠缺。为了揭示其抗肿瘤作用机制，本研究采用了基于活性的蛋白质组分析（ABPP）策略，设计并合成了一种高活性螺旋霉素衍生物正己酰螺旋霉素（h-SPM），进而依据其结构合成了一种结构相似且带有适用于ABPP实验官能团的活性分子探针。利用该探针与细胞蛋白质共孵育，使两者结合，从而捕获h-SPM潜在的药物靶点，随后对探针结合的蛋白质进行分离纯化与质谱分析，获得详细的靶点蛋白质信息。进一步通过基因本体（GO）分析挖掘这些蛋白质的性质和功能，得到明确的功能信息，并据此筛选出若干潜在靶点蛋白质。通过上述方法，从蛋白质谱的结果中鉴定出包括淀粉样前体蛋白（APP）、低密度脂蛋白受体（LDLR）在内的多个h-SPM潜在作用靶点，并采用免疫印迹（Western Blotting）方法确定这些蛋白质对h-SPM产生了响应。随后，通过短发夹RNA（shRNA）介导的蛋白质敲低及细胞染色等实验，证明蛋白质APP在该药物发挥作用的过程中扮演了关键角色，初步揭示了该类药物的抗肿瘤作用机制。本研究不仅建立了适用于螺旋霉素类化合物的靶点筛选方法，也为该类药物的后续开发提供了关键靶点线索与理论依据。

中药质量控制一直是中药现代化研究领域的重点和难点，中药成分复杂，对先进分离材料的研究提出了更高的需求。共价有机框架材料（COF）是一类由多齿有机单元通过共价键连接而成的新型多孔晶体材料，在催化与色谱分析等领域具有良好的应用价值。本研究创新性地构建了一种基于共价有机框架的新型核壳型色谱固定相。以2，4，6-三（4-氨基苯基）-1，3，5-三嗪（TAPT）和1，4-苯二甲醛（TA）为构筑单元，在聚合诱导胶体聚集（PICA）法制备的二氧化硅微球表面，通过多步聚合策略成功制备了TAPT-TA-COF@SiO₂核壳复合材料。系统表征结果表明，所制备的固定相具有优异的单分散性，COF层在SiO₂核表面呈现均匀包覆。氮气吸附-脱附等温线分析证实材料具有典型的介孔结构，比表面积和孔径分布与原始多孔SiO₂微球相近，为高效传质提供了结构基础。红外表征说明出现新材料C=N的特征吸收峰1 515 cm^-1，粉末X射线衍射也表明TAPT-TA-COF@SiO₂复合材料具有COF的晶体衍射峰。色谱性能评价显示，该固定相在反相色谱模式下，通过疏水相互作用、π-π相互作用以及独特的介孔结构，实现了中等极性和非极性混合物的基线分离。制备重复性实验结果表明，TAPT-TA-COF@SiO₂填充色谱柱的批内相对标准偏差（RSD）低于1.6%，展现出优异的制备稳定性。此外，在中药质量控制应用方面，该方法在黄芪甲苷含量测定中显示出一定优势，测得含量为0.085%，符合药典标准要求。本研究不仅为COF基色谱固定相的设计与制备提供了新的技术路径，而且为分离科学与药学领域的交叉深入研究奠定了坚实基础。

有机紫外吸收剂（OUVAs）是一类近年来备受关注的新污染物。本研究针对水体中OUVAs检出率高且含量低的特点，建立了一种基于固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱同时检测生活饮用水中9种紫外稳定剂与7种紫外过滤剂的分析方法。在500 mL水样中先加入25 mg抗坏血酸，然后加入盐酸将pH调至2~3，再加入1 mL 5 μg/L的混合内标工作液，用HLB固相萃取柱（200 mg/6 mL）对水样中的目标化合物进行富集浓缩，以Acquity Premier BEH C₁₈（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）色谱柱分离，甲醇-2 mmol/L乙酸铵水溶液为流动相进行梯度洗脱，采用电喷雾正离子模式电离、多反应监测模式检测，内标法定量。以饮用水作为基质，对所建立方法的精密度和准确度进行考察。结果表明，16种有机紫外吸收剂在一定范围内均呈现良好的线性关系，相关系数r均大于0.992。方法检出限（MDL，S/N=3）为0.03~5 ng/L，定量限（MQL，S/N=10）为0.1~15 ng/L。目标分析物在5、20、50 ng/L 3个加标水平下，回收率为75.0%~130.6%，相对标准偏差（RSD）为0.9%~12.9%（n=6）。用该方法对7份水源水样品和7份饮用水样品进行检测，实验结果表明，2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮（UV-9）、奥克立林（OC）共2种有机紫外吸收剂被检出；水源水中UV-9的检出质量浓度为<MQL~13.4 ng/L，OC的检出质量浓度为5.0~32.23 ng/L。饮用水UV-9的检出质量浓度为0.4 ng/L，OC的检出质量浓度为<MQL~13.2 ng/L。该方法适用于生活饮用水中16种有机紫外吸收剂痕量分析测定，可用于我国生活饮用水中有机紫外吸收剂的环境监测分析。

建立了一种测定大气细颗粒物（PM_2.5）中7种对苯二胺类化合物（p-phenylenediamines， PPDs）及其醌类氧化物（PPD-Qs）的高效液相色谱-串联质谱方法。样品通过90 mm石英纤维滤膜采集后，采用含1%（体积分数）氨水和20 μmol/L谷胱甘肽的乙腈提取，QuEChERS方法净化及氮吹浓缩后，以5 mmol/L甲酸铵（含0.1%甲酸）和甲醇为流动相，通过Waters ACQUITY UPLC HSS T₃（100 mm×2.1 mm，1.8 μm）色谱柱分离，在电喷雾正离子源多反应监测模式下检测，内标法定量。结果表明，各目标物在0.05~20.0 ng/mL范围内线性关系良好（相关系数r均大于0.999），方法检出限和方法定量限分别为0.003~0.07 pg/m³和0.01~0.2 pg/m³。在低、中、高3个加标水平下，各目标物的回收率为66.3%~119.0%，相对标准偏差为1.5%~13.2%（n=6）。应用该方法检测包头市2025年1、2月的PM_2.5样品，7种PPDs和5种PPD-Qs被检出，质量浓度范围分别为2.26~251.2 pg/m³和2.36~105.4 pg/m³。该方法简便、环保、准确，适用于PM_2.5中PPDs和PPD-Qs的快速定量分析。

生物碱是一类广泛存在于植物中的天然化合物，部分生物碱因其潜在的毒性已被明令禁止在化妆品中添加。随着精油类化妆品的普及，其植物来源成分可能引入禁用生物碱，带来安全隐患，因此建立快速、准确的分析方法对产品安全风险评估具有重要意义。本文开发了一种基于QuEChERS前处理结合超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）的分析方法，用于同步测定精油类化妆品中13种禁用生物碱。样品经含0.1%甲酸的甲醇溶液超声提取，QuEChERS粉末净化后无需浓缩，直接进样分析；采用Waters ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱（100 mm×2.1 mm， 1.8 μm）分离，以乙腈和0.1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱，电喷雾电离正离子模式（ESI⁺）和多反应监测（MRM）进行定性与定量分析。该方法在0.2~50 ng/mL范围内线性关系良好，相关系数均大于0.99，检出限（LOD）为1~4 μg/kg，定量限（LOQ）为2~10 μg/kg。在3个加标水平下的平均回收率为83.9%~119.1%，相对标准偏差（RSD）不超过7.3%（n=6）。为考察方法的实用性和适用性，将该方法用于50批市售精油化妆品中13种禁用生物碱的检测，样品包括15批宣称婴幼儿使用或儿童产品以及35批成人用精油产品。结果显示，所有样品中均未检出本方法所涵盖的13种禁用生物碱。本方法操作简便，灵敏度高，重复性好，适用于精油类化妆品中多种禁用生物碱的高通量筛查与检测，其中欧夹竹桃苷检测方法的建立为该领域检测技术的发展提供了新的思路，为化妆品质量控制和消费者安全提供了可靠的技术支撑。

采用超临界流体色谱（SFC）‐紫外检测法建立了一种利格列汀及其S-对映体的拆分方法，对所建立的方法进行方法学验证，并应用于实际样品中S-对映体的检测。实验考察了S-对映体在6种色谱柱上的分离情况，对不同助溶剂进行了研究，并对柱温、背压、流速等色谱条件进行了优化。采用DAICEL CHIRALPAK AD-H（250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱进行分离，以超临界CO₂为流动相A，以乙醇-异丙醇（1∶1，体积比）溶液（含0.25%二乙胺和0.25%三氟乙酸）为流动相B，等度洗脱A-B（73∶27，体积比），流速1.5 mL/min，柱温为40 ℃，背压为15 MPa，进样量为6 μL，检测波长为220 nm，在此色谱条件下利格列汀与其S-对映体分离度为3.1，峰形良好；两者均在2～90 μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系，相关系数分别为0.999 7和0.999 9（n=8），检出限均为0.8 μg/mL（S/N=3），定量限均为2 μg/mL（S/N=10）。原料药和片剂中S-对映体的平均加标回收率分别为97.4%（RSD=1.1%， n=9）和101.6%（RSD=1.2%， n=9）。3批原料和两家企业的3批制剂中均未检出S-对映体。本研究采用SFC方法分离利格列汀及其S-对映体，环保、灵敏，分离效率高，峰面积重复性好，不仅可为利格列汀的质量控制与药品质量标准中SFC方法的收载提供技术依据，也为其他手性药物的快速拆分与杂质控制提供了可借鉴的策略。

有机磷酸酯（organic phosphate esters， OPEs）和邻苯二甲酸酯（phthalate esters， PAEs）是两类人工合成的化合物，常作为阻燃剂和增塑剂以物理结合的方式被添加到各种工业和消费品中，二者均具有多脏器累积毒性。本研究采用超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）建立了全血中22种OPEs及其二酯代谢物（mOPEs）和11种邻苯二甲酸酯类代谢物（mPAEs）的检测方法。全血样本采用HMR S-micro BIO 96孔固相萃取柱净化，使用Ghost Trap DS-HP色谱柱（30 mm×2.1 mm）作为背景鬼峰捕集柱，以ACQUITY UPLC^® BEH C18色谱柱（150 mm×2.1 mm，1.7 μm）作为分析柱，采用0.5 mmol/L乙酸铵溶液和甲醇为流动相进行梯度洗脱，质谱采用电喷雾离子源（ESI）电离，以正负离子扫描、多反应监测（MRM）模式检测，同位素内标法定量。结果表明，33种目标化合物在15 min内均可实现基线分离，目标化合物在相应质量浓度范围内线性关系良好（r为0.993 3~0.999 8），检出限为0.003～0.31 ng/mL，定量限为0.01～1.02 ng/mL。全血样本加标回收率为60.5%～138.3%，相对标准偏差（RSD）为1.6%～11.0%。应用该方法对14个全血样本进行检测，在14份样本中均检出磷酸三（1-氯-2-丙基）酯、磷酸三苯酯（TPHP）、磷酸2-乙基己基二苯基酯、邻苯二甲酸单（2-乙基-5-羟己基）酯、邻苯二甲酸单正丁酯和邻苯二甲酸单正辛酯，且TPHP的检出量最高（10.04 ng/mL）。该方法具有操作简便、灵敏度高、准确性好、所需样品量少以及节约试剂等优点，适用于人体的生物监测，为人群有机磷酸酯和邻苯二甲酸酯类物质的监测提供了理论依据。

醛酮类化合物（CCs）是环境空气中非常重要的一类含氧挥发性有机物，在大气光化学反应、臭氧生成、二次有机气溶胶形成等过程中具有重要作用。本研究建立了使用高效液相色谱-三重四极杆质谱单次进样同时测定环境空气中40种CCs的分析方法。优化了样品采集、前处理和仪器分析条件。环境空气样品使用2，4-二硝基苯肼（DNPH）管采集（采样流量为1 L/min，采样时长为4 h），采用乙腈洗脱、定容（5 mL），经0.22 μm滤膜过滤后进样分析。采用Sepax BR-C18色谱柱（250 mm×4.6 mm， 5 μm）进行分离，以1.0 mmol/L乙酸铵水溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱，柱温50 ℃，进样量5 μL，采用负离子电喷雾离子源（ESI）进行多反应监测（MRM）扫描。结果表明，40种CCs在2.5~200 μg/L范围内线性关系良好（R²≥0.997 8），方法检出限为0.001~0.03 μg/m³，方法定量限为0.005~0.12 μg/m³，低、中、高3个水平下的空白加标回收率为75.2%~119.0%，相对标准偏差为0.4%~4.2%。将其应用于珠三角实际样品的分析，除糠醛和异佛尔酮外，其余38种CCs均可有效检出，其中甲醛、乙醛和壬醛的含量在各观测点均较高；整体上，低分子质量单羰基化合物（LMW-MCs）的含量略高于高分子质量单羰基化合物（HMW-MCs），远高于二羰基化合物（DCs）。本方法简便快速，具有良好的灵敏度、精准度和分离度，有效解决了现有方法中DCs和HMW-MCs种类少、检测困难等问题，适用于环境空气中CCs的检测。

当前本科生环境化学实验教学中，样品前处理与大型仪器分析环节割裂，难以培养学生系统的分析能力；同时，实验内容仍以常规水质指标和重金属等传统污染物为主，缺乏针对新污染物的监测与治理技术训练，与国家战略需求存在显著差距。为此，本文以典型新污染物——药物及个人护理用品中的有机紫外防晒剂（OUVFs）为目标物，设计了一个融合材料合成、样品前处理与大型仪器分析于一体的综合性实验。实验采用加热回流法制备磁性共价有机骨架材料（MCOF），引导学生将其作为新型吸附剂应用于磁固相萃取（MSPE），利用其简便的磁分离性能在8 min内实现OUVFs的快速富集，结合超高效液相色谱-串联质谱法（UHPLC-MS/MS）完成海水样品的定量检测。该实验通过“课前预习-课中实验-课后讨论”三段式教学模块，重点强化学生在吸附剂合成与表征、富集参数优化及数据解析方面的自主探究能力。实践表明，该设计不仅使学生深入理解了复杂样品前处理过程及多因素协同作用机制，更显著提升了其在解决新污染物监测问题中的综合创新与实践能力。

分析化学中的分离与富集步骤不仅是分析流程的关键环节，更是决定分析方法准确性、可靠性及适用性的核心技术。然而，在传统实验教学中，该环节常因课时限制和教学重心偏重仪器操作而遭到忽视，导致学生知识体系呈现“碎片化”，难以建立理论联系实际的完整分析科学思维。为解决这一问题，本文立足“知识-能力-实践”三维融合的教学目标，以固相微萃取（SPME）技术萃取环境水样中6种含氮农药为案例，创新性构建“正反案例式教学”模式。通过对比非极性聚二甲基硅氧烷（PDMS）涂层与强极性聚丙烯酸酯（PA）涂层的纤维，采用高效液相色谱-紫外检测法（HPLC-UV），系统探究分析物极性与涂层性质的匹配规律：正向案例中PDMS涂层基于“相似相溶”原理，对弱极性农药展现出更优的萃取性能（线性决定系数R²≥0.993 7，检出限0.019~0.17 μg/L）；反向案例中PA涂层因萃取机理差异，萃取效果较弱（检出限0.066~1.069 μg/L）。结合对兰州市实际河流水样的加标回收试验（加标回收率为81.5%~117%），同步建立“知识内化-能力提升-实践素养”多维度评估体系。教学反馈显示，学生对核心原理的理解显著深化，创新思维与问题解决能力得到有效培养。“正反案例对比”教学能够有效衔接理论与实验、激发学生探究思维，为分析化学实验教学改革提供了可复制、可推广的实践范例，对培养具备理性方法选择与问题解决能力的高素质人才具有重要价值。

本文针对制药工程专业本科实验教学需求，设计了一套基于QuEChERS-GC-MS联用技术检测茶叶中联苯菊酯农药残留的实验方案。实验内容包括样品前处理、QuEChERS实验条件的单因素筛选和响应面法优化、GC-MS分析方法建立、茶叶样品中联苯菊酯农药残留的测定以及实验数据处理等环节，旨在培养学生综合运用现代分析技术解决实际问题的能力。通过该实验，学生可以掌握GC-MS仪器设备的基本原理和操作技能，了解真实样品中农药残留分析的完整流程，体会样品前处理对复杂体系中痕量组分分析的重要性。在单因素实验选择的QuEChERS实验条件下，茶叶样品中联苯菊酯的回收率为85.9%；在响应面法优化的QuEChERS实验条件下，茶叶样品中联苯菊酯的回收率可达90.33%。在38份茶叶样品中，有12份样品检测出了联苯菊酯，最大检出值为0.911 mg/kg，均未超出食品安全国家标准GB 2763-2021规定的茶叶中联苯菊酯的最大残留限量。本教学设计包括实验前相关内容学习、实验中操作技能训练和实验后数据分析，不仅能激发学生的学习兴趣，还能培养学生严谨的科学思维，让学生在全流程学习过程中主动面对问题，积极分析问题，设法解决问题。