中国药学杂志

No.	蛋白质/多肽名称	动物来源	提取分离部位或合成方法	氨基酸序列	参考文献
1	Buforin Ⅰ	Bufo bufo gargarizans Cantor	胃组织	AGRGKQGGKVRAKAKTRSSRAGLQFPVGRVHRLLRKGNY	[2]
2	Buforin Ⅱ		Buforin Ⅰ结构经合成制得	TRSSRAGLQFPVGRVHRLLRK	[2]
3	FI(LK1)	Lumbricus rubellus	从动物全体分离得到的蚓激酶中分离提取	RSGLLNFCAVALALNDQGFRAVGIRIDSGDLAYLSCLARETFE RISEQFKLPWFSKLTIVASNDINEETILSLNEQGHKIDCFGIGT HLVTCQRQPALGCVYKMVEINAQPRIKLSQDVVKVTMPGNKN VFRLYGADGHALIDLLQRVDESPPEVGQKVLCRHPFQESKRA YVIPTHVEPLYDVYWADGRVTQAMPSLEEVRDRVQNSLRTLR QDHKRTLNPTPYKV	[2]
4	Buforin Ⅱ b		Buforin Ⅱ结构经合成制得	RAGLQFPVG[RLLR]₃	[3]
5	BGCATH37		皮肤分泌物	SSRRPCRGRSCGPRLRGGYTLIGRPVKNQNRPKYMWV	[4]
6	BGCATH(5-37)			PCRGRSCGPRLRGGYTLIGRPVKNQNRPKYMWV	[4]
7	胰岛素A	Bufo marinus	胰腺	GIVEQCCHSTCSLTELENYCN	[5]
8	胰岛素B			LANQHLCGPHLVEALYLVCGERGFYYYPKV	[5]
9	胰高血糖素36			HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNSKRSGGMS	[5]
10	胰高血糖素29			HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNS	[5]
11	胰高血糖素类似物GLP32			HAEGTFTSDMTSFLEEKAAKEFVDWLIKGRPK	[5]
12	胰高血糖素类似物GLP37			HAEGTYTNDVTQFLEEKAAKEFIDWLLKGIPKKQRLS	[5]
13	Bufokinin		肠	KPRPDQFYGLM	[6]
14	F1	Lumbricus rubellus	动物全体	VVGGSDTTIGQYPHQLSLRVTG	[7]
15	F2			IIGGSNASPGEFPWQLSQTRG	[7]
16	F3			VIGGTNASPGEFPWQLSQQRQ	[7]
17	F4			VIGGTDAAPGEFPWQLSQTR	[7]
18	F5			IVGGIEARPYEFPWQVSVRRKS	[7]
19	F6			IVGGIEARPYEFPWQVSVRRKS	[7]
20	EQY-5	Pheretima aspergillum	动物全体	N端19个氨基酸序列为QIGGTNASPGEFPPQLSQT	[8 -10]
21	EFE	Pheretima posthumous	动物全体自溶物	RKKGASWFWPWSVKKR	[11]
22	EPF3	Pheretima vulgaris	动物全体	ILGGTEARVGEIPWQLSQQRGGSHSCGASLLRPGSALSAAH CVDGAPPADVRIVAGLHLRSDESTAVASLAESFLIHPSYNVGE GTFPNDIAIIYLLTNINSAPVENIDFALLPPDNVEQFVGFTCVLS GWGRTSASNVLPDALQKVSIDVITTAECDSRMAAVAGADCTD AHIAVFDPALQKGSCNGDSGGPMNCPLSGEFVVAGVTSWGI SGGGACLPEYPSVYTRTGFYRQWIIDNIR	[12]
23	D2(8)		动物全体	IVGGYTCGA	[13]
24	Band13		动物全体	GVHLTDAEKA	[13]
25	Band9			同16	[13]
26	Band7			GVVISIANQKGGVG	[13]
27	ARSP1		动物全体	N端25个氨基酸序列为IIGGTNASPGEFPWQLSQTRGGSHS	[14]
28	F-1		动物全体	Ac-AMVSS	[15]
29	F-2			Ac-AMVGT	[15]
30	Lumbricin-PG	Pheretima guillelmi	皮肤分泌物	FSRYARMRDSRPWSDRKNNYSGPQFTYPPEKAPPEKLIKW NNEGSPIFEMPAEGGHIEP	[16]
31	VQ-5		体腔液	VSSVQ	[17]
32	AQ-5			AMAQQ	[17]
33	GGNG2	Eisenia foetida Pheretima vittata	动物全体	GKCAGQWAlHAAGGNGOH	[18]
34	GGNG3			PKCSRWAHSCGGGNGOH	[18]
35	GGNG1	Eisenia foetida	肠道	ARPKCAGRWAIHSCGGGNGOH	[18]
36	ANTP		毒液	N端前25位氨基酸残基序列为VRDGYIADDKNCAYFCG RNAYCDDE	[19]
37	AGAP		毒腺	VRDGYIADDKNCAYFCGRNAYCDDECKKNGAESGYCQW AGVYGNACWCYKLPDKVPIRVPGKCNG	[20]
38	CTX	Leiurus quinquestraqtum	毒液	MCMPCFTTDHQMARKCDDCCGGKGRGKCYGPQCLCR	[21]
39	BmKa1		腺体	MKPRVFFLLFLLVAAMIETGESEENEEGSNESGKSTEAKNT DASVDNEDSDIDGDSD	[22]
40	Bmka2			MSSKTLLVLLLVGVLVSTFFTADAYPASMDNSDDALEELDN LDLDDYFDLEPADFVLLDMWANMLESSDFDDME	[22]
41	BmKb1			MEIKYLLTVFLVLLIVSDHCQAFLFSLIPSAISGLISAFKGRR KRDLNGYIDHFKNFRKRDAELEELLSKLPIY	[22]
42	BmKn2			MKSQTFFLLFLVVLLLAISQSDAFIGAIARLLSKIFGKRSMGDM DTMKYLYDPSLSAADLQTLQKLMENY	[22]
43	BmKbpp		蝎子毒液固相合成	FRFGSFLKKVMKSKLAKKLRSKGKQLLKDYANKVLNGPEEE AAAPAE	[23]
44	Kn2-7		毒液	FIKRIARLLRKIF	[24]
45	Pantinin-1	Pandinus imperator	尾巴	MKTQFVILMITVILMQMLVQTEGGILGKLWEGFKSIVGKRGL NDRDQLDDLFDSDLSDADIKLLKEMFK	[25]
46	Pantinin-2			MKAQFAILLITLVLFQMFSQSEAIFGAIWKGISSLLGKRGLNN LNDFDELFDGEITKADLDFMREIMK	[25]
47	Pantinin-3			MKTQFAILLIALVLFQLLSQSDAFLSTIWNGIKSLLGRRGLNE LDNLDELFDGEISQADIDFLKELMS	[25]
48	SVP B5		毒腺	VRDGYIADDKNCAYFCGRNAYCDDECKKNGAESGYCQQAG VYYNACWCYYLLDDVVIIIPSGCDQW	[26]
49	BMK 9(3)-1		毒腺	GRDAYIADSENCPYFCGANPN	[27]
50	BMK 9(3)2			GRDAYIADSENCPYTCALNP	[27]
51	BmTXKS3		毒腺中克隆	MKIFFAILLILAVCSMAIWTVNGTPFAIKCATDADCSRKCPG NPPCRNGFCACT	[28]
52	BmTXLP2			MVKMQVIFIAFIAVIACSMVYGDSLSPWNEGDTYYGCQRQ TDEFCNKICKLHLASGGSCQQPAPFVKLCTCQGIDYDNS FFFGALEKQCPKLRE	[28]
53	BmAP1			MKFVFASFALFVIFLCFSQSLSQSYFRCRDDEVFDNCISNCGP PRCSNILNTYPCTNLGPLCTPGCKCKDGRVYDNQGRCVLQTE CFQK	[28]
54	HsTX1	Heterometrus spinnifer	毒素固相合成	ASCRTPKDCADPCRKETGCPYGKCMNRKCKCNRC	[29]
55	Pi5		毒液	VAKCSTSECGHACQQAGCRNSGCRYGSCICVGC	[30]
56	Pi6			VDACYEACMHHHMNSDDCIEACKNPVPP	[30]
57	AEP	Buthus martensii	毒液	N端前50个氨基酸残基为DGYIRGSDNCKVSCLLGNEGC NKECRAYGASYGYCWTVKLAQDCEGLPDT	[31]
58	BmK M4		毒液	VRDAYIAKPENCVYHCAGNEGCNKLCTDNGAESGYCQWGGR YGNACWCIKLPDDVPIRVPGKCH	[32]
59	BmK M1			VRDAYIAKPHNCVYECARNEYCNDLCTKNGAKSGYCQWVGK YGNGCWCIELPDNVPIRVPGKCH	[32]
60	BmK M8			GRDAYIADSENCTYFCGSNPYCNNVCTENGAKSGYCQWAGR YGNACYCIDLPASERIKEGGRCG	[32]
61	MAKATOXIN-1	Buthus martensii	毒液	GRDAYIADSENCTYTCALNPYCNDLCTKNGAKSGYCQWAG RYGNACWCID LPDKVPIRIS GSCR	[33]

No.	蛋白质/多肽名称	动物来源	提取分离部位或合成方法	氨基酸序列	参考文献
1	Buforin Ⅰ	Bufo bufo gargarizans Cantor	胃组织	AGRGKQGGKVRAKAKTRSSRAGLQFPVGRVHRLLRKGNY	[2]
2	Buforin Ⅱ		Buforin Ⅰ结构经合成制得	TRSSRAGLQFPVGRVHRLLRK	[2]
3	FI(LK1)	Lumbricus rubellus	从动物全体分离得到的蚓激酶中分离提取	RSGLLNFCAVALALNDQGFRAVGIRIDSGDLAYLSCLARETFE RISEQFKLPWFSKLTIVASNDINEETILSLNEQGHKIDCFGIGT HLVTCQRQPALGCVYKMVEINAQPRIKLSQDVVKVTMPGNKN VFRLYGADGHALIDLLQRVDESPPEVGQKVLCRHPFQESKRA YVIPTHVEPLYDVYWADGRVTQAMPSLEEVRDRVQNSLRTLR QDHKRTLNPTPYKV	[2]
4	Buforin Ⅱ b		Buforin Ⅱ结构经合成制得	RAGLQFPVG[RLLR]₃	[3]
5	BGCATH37		皮肤分泌物	SSRRPCRGRSCGPRLRGGYTLIGRPVKNQNRPKYMWV	[4]
6	BGCATH(5-37)			PCRGRSCGPRLRGGYTLIGRPVKNQNRPKYMWV	[4]
7	胰岛素A	Bufo marinus	胰腺	GIVEQCCHSTCSLTELENYCN	[5]
8	胰岛素B			LANQHLCGPHLVEALYLVCGERGFYYYPKV	[5]
9	胰高血糖素36			HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNSKRSGGMS	[5]
10	胰高血糖素29			HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNS	[5]
11	胰高血糖素类似物GLP32			HAEGTFTSDMTSFLEEKAAKEFVDWLIKGRPK	[5]
12	胰高血糖素类似物GLP37			HAEGTYTNDVTQFLEEKAAKEFIDWLLKGIPKKQRLS	[5]
13	Bufokinin		肠	KPRPDQFYGLM	[6]
14	F1	Lumbricus rubellus	动物全体	VVGGSDTTIGQYPHQLSLRVTG	[7]
15	F2			IIGGSNASPGEFPWQLSQTRG	[7]
16	F3			VIGGTNASPGEFPWQLSQQRQ	[7]
17	F4			VIGGTDAAPGEFPWQLSQTR	[7]
18	F5			IVGGIEARPYEFPWQVSVRRKS	[7]
19	F6			IVGGIEARPYEFPWQVSVRRKS	[7]
20	EQY-5	Pheretima aspergillum	动物全体	N端19个氨基酸序列为QIGGTNASPGEFPPQLSQT	[8 -10]
21	EFE	Pheretima posthumous	动物全体自溶物	RKKGASWFWPWSVKKR	[11]
22	EPF3	Pheretima vulgaris	动物全体	ILGGTEARVGEIPWQLSQQRGGSHSCGASLLRPGSALSAAH CVDGAPPADVRIVAGLHLRSDESTAVASLAESFLIHPSYNVGE GTFPNDIAIIYLLTNINSAPVENIDFALLPPDNVEQFVGFTCVLS GWGRTSASNVLPDALQKVSIDVITTAECDSRMAAVAGADCTD AHIAVFDPALQKGSCNGDSGGPMNCPLSGEFVVAGVTSWGI SGGGACLPEYPSVYTRTGFYRQWIIDNIR	[12]
23	D2(8)		动物全体	IVGGYTCGA	[13]
24	Band13		动物全体	GVHLTDAEKA	[13]
25	Band9			同16	[13]
26	Band7			GVVISIANQKGGVG	[13]
27	ARSP1		动物全体	N端25个氨基酸序列为IIGGTNASPGEFPWQLSQTRGGSHS	[14]
28	F-1		动物全体	Ac-AMVSS	[15]
29	F-2			Ac-AMVGT	[15]
30	Lumbricin-PG	Pheretima guillelmi	皮肤分泌物	FSRYARMRDSRPWSDRKNNYSGPQFTYPPEKAPPEKLIKW NNEGSPIFEMPAEGGHIEP	[16]
31	VQ-5		体腔液	VSSVQ	[17]
32	AQ-5			AMAQQ	[17]
33	GGNG2	Eisenia foetida Pheretima vittata	动物全体	GKCAGQWAlHAAGGNGOH	[18]
34	GGNG3			PKCSRWAHSCGGGNGOH	[18]
35	GGNG1	Eisenia foetida	肠道	ARPKCAGRWAIHSCGGGNGOH	[18]
36	ANTP		毒液	N端前25位氨基酸残基序列为VRDGYIADDKNCAYFCG RNAYCDDE	[19]
37	AGAP		毒腺	VRDGYIADDKNCAYFCGRNAYCDDECKKNGAESGYCQW AGVYGNACWCYKLPDKVPIRVPGKCNG	[20]
38	CTX	Leiurus quinquestraqtum	毒液	MCMPCFTTDHQMARKCDDCCGGKGRGKCYGPQCLCR	[21]
39	BmKa1		腺体	MKPRVFFLLFLLVAAMIETGESEENEEGSNESGKSTEAKNT DASVDNEDSDIDGDSD	[22]
40	Bmka2			MSSKTLLVLLLVGVLVSTFFTADAYPASMDNSDDALEELDN LDLDDYFDLEPADFVLLDMWANMLESSDFDDME	[22]
41	BmKb1			MEIKYLLTVFLVLLIVSDHCQAFLFSLIPSAISGLISAFKGRR KRDLNGYIDHFKNFRKRDAELEELLSKLPIY	[22]
42	BmKn2			MKSQTFFLLFLVVLLLAISQSDAFIGAIARLLSKIFGKRSMGDM DTMKYLYDPSLSAADLQTLQKLMENY	[22]
43	BmKbpp		蝎子毒液固相合成	FRFGSFLKKVMKSKLAKKLRSKGKQLLKDYANKVLNGPEEE AAAPAE	[23]
44	Kn2-7		毒液	FIKRIARLLRKIF	[24]
45	Pantinin-1	Pandinus imperator	尾巴	MKTQFVILMITVILMQMLVQTEGGILGKLWEGFKSIVGKRGL NDRDQLDDLFDSDLSDADIKLLKEMFK	[25]
46	Pantinin-2			MKAQFAILLITLVLFQMFSQSEAIFGAIWKGISSLLGKRGLNN LNDFDELFDGEITKADLDFMREIMK	[25]
47	Pantinin-3			MKTQFAILLIALVLFQLLSQSDAFLSTIWNGIKSLLGRRGLNE LDNLDELFDGEISQADIDFLKELMS	[25]
48	SVP B5		毒腺	VRDGYIADDKNCAYFCGRNAYCDDECKKNGAESGYCQQAG VYYNACWCYYLLDDVVIIIPSGCDQW	[26]
49	BMK 9(3)-1		毒腺	GRDAYIADSENCPYFCGANPN	[27]
50	BMK 9(3)2			GRDAYIADSENCPYTCALNP	[27]
51	BmTXKS3		毒腺中克隆	MKIFFAILLILAVCSMAIWTVNGTPFAIKCATDADCSRKCPG NPPCRNGFCACT	[28]
52	BmTXLP2			MVKMQVIFIAFIAVIACSMVYGDSLSPWNEGDTYYGCQRQ TDEFCNKICKLHLASGGSCQQPAPFVKLCTCQGIDYDNS FFFGALEKQCPKLRE	[28]
53	BmAP1			MKFVFASFALFVIFLCFSQSLSQSYFRCRDDEVFDNCISNCGP PRCSNILNTYPCTNLGPLCTPGCKCKDGRVYDNQGRCVLQTE CFQK	[28]
54	HsTX1	Heterometrus spinnifer	毒素固相合成	ASCRTPKDCADPCRKETGCPYGKCMNRKCKCNRC	[29]
55	Pi5		毒液	VAKCSTSECGHACQQAGCRNSGCRYGSCICVGC	[30]
56	Pi6			VDACYEACMHHHMNSDDCIEACKNPVPP	[30]
57	AEP	Buthus martensii	毒液	N端前50个氨基酸残基为DGYIRGSDNCKVSCLLGNEGC NKECRAYGASYGYCWTVKLAQDCEGLPDT	[31]
58	BmK M4		毒液	VRDAYIAKPENCVYHCAGNEGCNKLCTDNGAESGYCQWGGR YGNACWCIKLPDDVPIRVPGKCH	[32]
59	BmK M1			VRDAYIAKPHNCVYECARNEYCNDLCTKNGAKSGYCQWVGK YGNGCWCIELPDNVPIRVPGKCH	[32]
60	BmK M8			GRDAYIADSENCTYFCGSNPYCNNVCTENGAKSGYCQWAGR YGNACYCIDLPASERIKEGGRCG	[32]
61	MAKATOXIN-1	Buthus martensii	毒液	GRDAYIADSENCTYTCALNPYCNDLCTKNGAKSGYCQWAG RYGNACWCID LPDKVPIRIS GSCR	[33]

药用动物源蛋白质多肽化学组成和生物活性的研究进展

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周凡星 ¹ , 童明慧 ¹ , 刘娟 ¹ , 李蓉 ¹ , 方爱青 ¹ , 郭英球 ² , 时贞平 ² , 李娟 ¹^,³^,⁴^,^*

中国药学杂志 | 综述 2024,59(1): 7-17

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中国药学杂志 | 综述 2024, 59(1): 7-17

药用动物源蛋白质多肽化学组成和生物活性的研究进展

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周凡星¹, 童明慧¹, 刘娟¹, 李蓉¹, 方爱青¹, 郭英球², 时贞平², 李娟¹^,³^,⁴^,^*

作者信息

¹ 湖南中医药大学, 长沙 410208

² 长沙欧邦生物科技有限公司, 长沙 410000

³ 湖南省中药活性物质筛选工程技术研究中心, 长沙 410208

⁴ 湖南省中美老年性退行性疾病治疗药物国际联合研究中心, 长沙 410208

周凡星,女,学士研究方向:中药学;

童明慧,女,学士研究方向:中药学。周凡星和童明慧为共同第一作者

通讯作者:

*李娟,女,博士,副教授研究方向:中药物质基础与作用机制研究 Tel:(0731)88459421

Research Progress in Chemical Compositions and Bioactivities of Medicinal Animal-Derived Proteins Peptides

ZHOU Fanxing¹, TOGN Minghui¹, LIU Juan¹, LI Rong¹, FANG aiqing¹, GUO Yingqiu², SHI Zhenping², LI Juan¹^,³^,⁴^,^*

Affiliations

¹ Hunan University of Chinese Medicine, Changsha, 410208, China

² Changsha Oubang Biotechnology Co., Ltd., Changsha, 410000, China

³ Hunan Engineering Technology Research Center for Bioactive Substance Discovery of Chinese Medicine, Changsha, 410208, China

⁴ Hunan Province Sino-US International Joint Research Center for Therapeutic Drugs of Senile Degenerative Diseases, Changsha, 410208, China

出版时间: 2024-01-08 doi: 10.11669/cpj.2024.01.002

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摘要

收起

动物药是中药的重要药源之一,近年来,其生物活性物质逐步被发现,尤其是动物药中共有物质——蛋白质和多肽类成分,具有良好的抗菌、抗肿瘤和抗血栓等生物活性。本文选择目前研究较多的蟾蜍科、不同科属的地龙和全蝎等动物来源中药,检索国内外数据库,查阅从1989年至今与动物蛋白质和多肽相关的研究资料,重点综述了这些动物来源蛋白质/多肽的组成、成分分析和生物活性,为动物来源蛋白质和多肽的进一步研究和应用提供参考依据。

关键词

动物蛋白质 / 动物多肽 / 生物活性 / 抗菌 / 纤维蛋白溶解 / 抗病毒

Abstract

收起

Animal medicine is one of the important sources of Chinese medicine for disease prevention and treatment. In recent years, its bioactive substances have been gradually discovered, especially the protein and peptide components, which are co-occurring substances in animal medicine, with good biological activities such as antibacterial, anticancer and antithrombotic. In this paper, it was selected animal sources such as toad, different families of earthworms and scorpion, which have been studied more frequently, and searched domestic and international databases to review the research data related to animal proteins and peptides from 1989 to the present, focusing on reviewing the composition, composition analysis and biological activities of the proteins and peptides of these animal sources, so as to provide a reference basis for further research and application of animal source proteins/peptides.

Key words

animal protein / animal peptide / bioactivity / antibacterial / fibrinolysis / antiviral

引用本文

周凡星, 童明慧, 刘娟, 李蓉, 方爱青, 郭英球, 时贞平, 李娟. 药用动物源蛋白质多肽化学组成和生物活性的研究进展. 中国药学杂志, 2024 , 59 (1) : 7 -17 . DOI: 10.11669/cpj.2024.01.002

ZHOU Fanxing, TOGN Minghui, LIU Juan, LI Rong, FANG aiqing, GUO Yingqiu, SHI Zhenping, LI Juan. Research Progress in Chemical Compositions and Bioactivities of Medicinal Animal-Derived Proteins Peptides[J]. Chinese Pharmaceutical Journal, 2024 , 59 (1) : 7 -17 . DOI: 10.11669/cpj.2024.01.002

正文

收起

中药主要来源于植物、动物和矿物,早在先秦的《山海经》中就记载了动物、植物和矿物品名772种,有药用价值的137种,其中动物药有76种(兽类19种,鸟类17种、鱼类10种和鱼龟类30种)。据第四次全国中药资源普查统计,动物药在中药资源中的占比约为12%。根据功效,动物药分为具有平肝息风功效的全蝎、蜈蚣、地龙、僵蚕和牛黄等;具有开窍功效的麝香和蟾酥等;具有活血化瘀功效的土鳖虫、水蛭、斑蝥、穿山甲和虻虫等,以及具有清热功效的熊胆粉和水牛角等,其功效与各动物药的药效物质紧密联系。动物药富含糖类、脂类、蛋白质、多肽、生物碱、甾醇和萜类物质,其中,蛋白质/多肽是动物药中重要的共有物质,具有良好的抗菌、抗肿瘤和抗血栓等活性。本文对研究较多的蟾蜍科及不同科属的地龙和全蝎等,经国内外数据库检索,查阅从1989年至今动物蛋白质/多肽的相关研究资料,综述了不同动物来源蛋白质/多肽的组成、成分分析和生物活性,为动物来源蛋白质/多肽的进一步研究和应用提供参考依据(表1)。

1 蟾蜍科来源蟾蜍蛋白质/多肽的研究进展

收起

在我国,蟾蜍的动物来源为蟾蜍科蟾蜍属中华大蟾蜍(Bufo gargarizans Cantor)和黑眶蟾蜍(B. melanostictus Schneider)^[1],除中华大蟾蜍和黑眶蟾蜍外,国外以同科喙蟾属巨型海蟾蜍(Rhinella marina) [甘蔗蟾蜍(Bufo marinus)]的研究为主,并集中在动物耳后腺和皮肤腺体等干燥分泌物,及动物体内胃、胰腺、肠等组织中蛋白质/多肽类成分的研究。

1.1 抗菌作用

1996年,Park等^[2]采用酸水从B. bufo gargarizans胃组织中提取得到总多肽,经聚丙烯酰胺凝胶电泳(Tricine-SDS-PAGE)分析,所含肽类成分的相对分子质量均小于14 000,结合高效液相色谱法(HPLC)、tricine-SDS-PAGE和MALDI质谱技术,分离并鉴定了一个新的抗菌肽buforin Ⅰ(1,表1),其结构中39个氨基酸有37个氨基酸终端残基与非洲爪蟾组蛋白H2A相同,并在buforin Ⅰ结构的基础上,经胞内蛋白酶Lys-C裂解、Milligen pepsynthesizer 9050蛋白质固相合成和HPLC富集纯化,制得多肽buforin Ⅱ(2)。buforin Ⅰ和buforin Ⅱ对革兰阳性菌(G⁺:枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、变形链球菌和恶臭假单胞菌)、革兰阴性菌(G^-:大肠杆菌、伤寒杆菌和沙雷杆菌)和真菌(白念珠菌、新型隐球菌和酵母菌)等有较强的抑制作用,抑菌活性为阳性对照蛙皮素2(magainin 2)的10倍,buforin Ⅱ的抑菌活性高于buforin Ⅰ,且对真菌的抑制作用最佳。该团队^[34]于2009年报道了二者的抑菌机制,buforin Ⅰ是伴随胃黏膜细胞分泌盐酸和胃蛋白酶原进入管腔,充当胃表面的生物膜来抑制细菌生长;buforin Ⅱ可在不损伤细菌细胞膜的情况下,快速进入细胞膜,与细胞内大分子核酸结合,杀灭细菌,其抗菌效力取决于细胞的穿透效率^[35],脯氨酸铰链是其细胞穿透性的关键结构。此外,该团队在2008年合成的buforin Ⅱb因序列中间含有脯氨酸铰链,C端有一个典型的α螺旋序列,表现出比buforin Ⅱ更强的抗菌活性^[3,36]。同年,Xu等^[37]从B. bufo gargarizans的鲜皮中分离得到多肽F-Ⅰ、F-Ⅱ和F-Ⅲ,其中多肽F-Ⅲ的含量最高(78%)。3种多肽对G⁺(枯草杆菌、金黄色葡萄球菌)和G^-(大肠杆菌、绿脓杆菌)均具有较强的抑菌作用,FⅢ的抑菌效果最佳。2015年,Sun等^[4]从B. bufo gargarizans皮肤分泌物中得到一个全新的能编码抗菌肽BG-CATH的cDNA,分别作用于BG-CATH前体C端二元裂解信号处的2个可能的切割位点——K¹³³R¹³⁴-或R¹³⁷R¹³⁸-,制得BG-CATH37(5)和BG-CATH(5-37)(6),结构中均含有两个半胱氨酸,可形成分子内二硫键。BG-CATH37和抗菌肽BG-CATH第5至37这一段的多肽片段对人体病原菌(大肠杆菌、绿脓杆菌和金黄色葡萄球菌等)的抑制作用较弱,最低抑菌浓度(MIC)≥200 μg·mL^-1,但对B. bufo gargarizans栖息地常见的水生微生物如灿烂弧菌、海豚链球菌和产气单胞菌等,有较强的抑菌活性,MIC为3.125~40 μg·mL^-1。

1.2 抗肿瘤作用

Park等^[3]在buforin Ⅱ基础上,人工合成buforin Ⅱb多肽(4),其可与癌细胞表面神经节苷酯作用,具有特异性靶向定位,穿过癌细胞膜进入细胞内,诱导癌细胞线粒体依赖性凋亡,从而对62株癌细胞有选择性杀伤作用,半数抑制浓度(IC₅₀)为7.2~23.9 μg·mL^-1,其中,对jurkat和Hela细胞的IC₅₀分别为6 μg·mL^-1和12 μg·mL^-1,比阳性对照magainin G(IC₅₀ 34~68 μg·mL^-1)作用更强,而buforin Ⅱ对人成纤维细胞、小鼠胚胎成纤维细胞和外周血淋巴细胞等正常细胞无影响,IC₅₀约为350 μg·mL^-1。当buforin Ⅱb的浓度大于5 mg·kg^-1,对后肢移植NCI-H460细胞的肿瘤小鼠有显著的抑制作用。2011年,Chen等^[38]从B. bufo gargarizans的皮肤分泌物分离并提纯抗菌肽,将不同浓度的抗菌肽作用于大肠癌细胞SW 480,当浓度为0.1 mg·mL^-1时,SW 480细胞数量明显减少,细胞明显皱缩,成圆形,死细胞增多,当浓度达到0.3和0.5 mg·mL^-1时,无活细胞。进一步研究表明,当浓度低于40 μg·mL^-1时,抗菌肽对SW 480细胞的生长抑制作用不明显,当浓度为60~200 μg·mL^-1时,对细胞的抑制作用与浓度呈正相关,浓度高于200 μg·mL^-1时,对细胞的抑制率增长比较缓慢。

1.3 调节血糖作用

1998年,Conlon等^[5]从B. marinus胰腺中分离并收集到4个色谱峰,经鉴定,第一峰包括胰岛素A(8)、胰岛素B(8)和胰高血糖素36(9)3个多肽类成分;第二至第四峰分别是胰高血糖素29(10)、胰高血糖素类似物GLP-32(11)和GLP-37(12)。蟾蜍胰岛素(胰岛素A和胰岛素B,IC₅₀为11×10^-22 mol·L^-1)抑制[¹²⁵I-Tyr-A14]胰岛素与可溶性全长重组人胰岛素受体的结合,其抑制作用是人胰岛素(IC₅₀为42×10^-22 mol·L^-1)的4倍。GLP-32和GLP-37促进葡萄糖反应性大鼠胰岛素瘤细胞BRIN-BD11中胰岛素的释放,呈浓度依赖性,当浓度为10^-8和10^-9 mol·L^-1时,胰岛素分泌量明显增加,当浓度为10^-6 mol·L^-1时,胰岛素释放率最大,且释放率增长至用药前的5倍。

1.4 其他作用

1998年,Conlon等^[6]从B. marinus的肠中分离得到速激肽bufokinin(13),其与NK-1受体有强亲和力,可抑制NK-1位点选择性结合放射性配体(¹²⁵I-bolton-hunter标记[Sar⁹, Met(0₂)¹¹]),与NK-1受体结合的能力是选择性最强的SP配体的1.8倍,但抑制与NK-2位点、NK-3位点选择性结合放射配体的作用分别只有神经激肽A(NKA)、神经激肽B(NKB)的1/2。Liu等^[39]在CONLON J M研究基础上,发现bufokinin可作用于与哺乳动物NK-1受体相似的[¹²⁵I]BH-bufokinin受体,对蟾蜍大肠和圆形肠肌有强效持久的解痉作用。三卡因甲烷麻醉的蟾蜍,静脉给药bufokinin(1~1 000×10^-22 mol·L^-1)可降低心脏收缩血压和舒张血压,呈剂量依赖性,随着bufokinin剂量增加,低血压持续时间相应增加,全身动脉血压明显下降,且引起心脏收缩动脉血压下降的半数有效量(ED₅₀)为2.9 pmol,同时持续低血压的患者可以增高血压,但其对心率没有显著改变。当bufokinin浓度为10^-12和10^-11 ×10^-22 mol·L^-1时,可使三卡因甲烷麻醉的蟾蜍的血压在5 min内回到基准值,但当给药浓度为100和1 000×10^-22 mol·L^-1时,血压在60 min后只能回到正常血压的95%和89%。此外,bufokinin的免疫反应性纤维存在于肾动脉、坐骨神经动脉、腹侧主动脉、膀胱、舌头等血管中,bufokinin作用于这些免疫反应性纤维,调节蟾蜍的血流动力学和感觉神经功能。

2 不同科属来源地龙蛋白质/多肽的研究进展

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2020年版《中国药典》收载的地龙来源为钜蚓科动物参环毛蚓[Pheretima aspergillum(E. Perrier)]、通俗环毛蚓(P. vulgaris Chen)、威廉环毛蚓[P. guillelmi(Michaelsen)]或栉盲环毛蚓(P. pectinifera Michaelsen)^[40],除上述来源,国外还重点研究了同科动物环毛蚓(P. vittata)和印度蚯蚓(P. posthumous)及正蚓科动物粉正蚓(Lumbricus rubellus)和赤子爱胜蚓(Eisenia foetida)等。

2.1 纤维蛋白溶解作用

1991年,Mihara等^[41]从L. rubellus的生理盐水提取液中分离得到蚓激酶(lumbrokinase),相对分子质量20 000~30 000,等电点(PI)3.4,是一种热稳定性的酶,且具有较宽的最佳pH 3~10,可水解富含溶酶原和纤溶酶原游离的纤维蛋白平板,水解前者的活性更强。当pH 7.4,37 ℃,二异丙基氟磷酸盐(DFP)、大豆胰蛋白酶抑制剂(SBTI)和抗蛋白酶肽可有效抑制lumbrokinase活性,但抗纤溶酶剂和t-环氨基酸衍生物(t-AMCHA)对其无抑制作用。lumbrokinase经DEAE-纤维素柱色谱分离得到F-Ⅰ、F-Ⅱ和F-Ⅲ,均具有纤维蛋白溶解活性,且可以溶解酪蛋白;F-Ⅰ和F-Ⅲ继续经Sephadex G-75凝胶色谱分离得到F-Ⅰ-0、F-Ⅰ-1、F-Ⅰ-2和F-Ⅲ-1、 F-Ⅲ-2,其中,F-Ⅲ-1和F-Ⅲ-2均为胰蛋白酶,能分解精氨酸和赖氨酸键,这6个蛋白的相对分子质量在23 500~34 200范围,PI 3.52~4.12,其纤维蛋白溶解活性可被白扁豆胰蛋白酶抑制剂(LBTI)和DFP完全抑制;而SBTI仅完全抑制F-Ⅱ、F-Ⅲ-1和F-Ⅲ-2的活性,对F-Ⅰ-1和F-Ⅰ-2表现出较弱的抑制作用。

2004年,Cho等^[7]从L. rubellus分离得到6个具有水解纤维蛋白活性的lumbrokinase,F1~F6(14~19),均为多肽链,相对分子质量依次为24.6、26.8、28.2、25.4、33.1和33.0。在50 ℃,pH 4~12时,这六种蚓激酶的活性最佳,纤溶活性大小依次为F6>F2>F5>F3>F1>F4;降解酪蛋白活性大小为F2>F1>F5>F6>F3>F4。同时发现苯甲磺酰氟(PMSF)可完全抑制F1~F4的活性,抑酶肽、甲苯磺酰赖氨酰氯甲酮(TLCK)、N-(对甲苯磺酰基)-L-苯丙氨酰甲基氯酮(TPCK)、SBTI、LBTI以及亮肽素均可抑制F5和F6的活性。同年,Fang等^[42]从P. guillelmi的全体匀浆中分离得到3个较纯同工酶,命名为EFE-Ⅱ、EFE-Ⅲ和EFE-Ⅳ,比活力分别为1 050、1 250、2 000 IU·mg^-1。经Astrup法测定,当pH为4.5~7.6,EFE-Ⅳ性质稳定;当pH为6.5,该酶活力最高;当温度<55℃时,酶比较稳定,活力基本不变;当温度为70 ℃,酶活力保持50%。蚯蚓纤溶酶EFE-Ⅳ(1.25 kU·kg^-1和2.5 kU·kg^-1)对血栓的抑制率分别为35.1%和46.3%;EFE-Ⅳ(iv,2.5 kU·kg^-1)的纤维蛋白溶解酶活性较强,可使ELT显著缩短。Zhang等^[8-10]从P. aspergillum的鲜品中得到蛋白酶EQY-1、EQY-2、EQY-3、EQY-4和EQY-5(20),相对分子质量依次为(>97 000)、60 500、47 900、28 100和26 300,经分析EQY-1~EQY-5均不含胱氨酸,EQY-1和EQY-2均无脯氨酸,苯丙氨酸含量最高;EQY-3无组氨酸,赖氨酸含量最高;EQY-4无组氨酸和脯氨酸,缬氨酸和赖氨酸含量较高;EQY-5中无组氨酸和谷氨酸,丙氨酸和亮氨酸含量较高。经溶圈效价测定,EQY-1、EQY-2、EQY-3和EQY-4无明显活性,以尿激酶效价计,EQY-5效价为5 229 U·mg^-1,在pH 5,温度低于40 ℃时,活性最强。2011年,Trisina等^[43]从L. rubellus中获得的DLBS1033蛋白提取物,该提取物由一群特有的粉正蚓低相对分子质量蛋白(lumbricus low molecular-weight proteins,LLP)组成,相对分子质量小于100×10³,当pH 4~14,50 ℃时,DLBS1033最稳定,且降解酪蛋白的活性最强,其可作用于纤维蛋白原的α(66×10³)、β(54×10³)和γ(48×10³)3条多肽链,具有快速且长效的纤溶活性,且对纤维蛋白原的α链和γ链的溶解作用强于β链,其中,α链在凝血酶诱导生成纤维蛋白过程中起重要作用。当DLBS1033浓度为60 mg·mL^-1时,可通过提高血小板cAMP浓度和抑制Ca通道,延长血凝块形成的时间,从而发挥抗血栓作用。2016年,Verma等^[11]从P. posthumous分离得到一个丝氨酸蛋白酶EFE(21),由6种丝氨酸组成,相对分子质量29.5,当pH 4~12,20~60 ℃时,EFE稳定,且具有蛋白水解活性,当pH8,40 ℃,EFE浓度为1.2 U·mL^-1时,蛋白水解活性最强。EFE可激活循环中的血浆蛋白原,从而导致以血浆蛋白为基础的凝块溶解,并可直接作用于纤维蛋白,水解纤维蛋白原并激活纤溶酶原和凝血酶原。此外,EFE具有广泛底物亲和力,这与其二级结构(如螺旋型、线型、翻转型)和高比例的无序酶区域有直接相关性。同年,Fu等^[44]通过蛋白质均质化10 min、中空纤维膜分离技术结合尺寸排除色谱法从L. rubellus的蚓激酶中分离得到3个高纯度的蛋白组分F-Ⅰ、F-Ⅱ和F-Ⅲ,其中,F-Ⅰ(LK1)(3)的相对分子质量为25.8 kDa,具有高的酪蛋白水解活性,以尿激酶效价计,展示出60 U·mg^-1纤溶活性。

2020年,Wu等^[45]从P. guillelmi中分离得到一个抗血栓活性物质DPF3,比活力为(101.56±9.58)U·μg^-1,蛋白质分布于26×10³~34×10³,有两条明显的条带,分别命名为DPF3 ID NO.1和DPF3 ID NO.2,Byonic测序,最高序列为>Ac 44553_g1_il_1和>Dc43026_g1_il_2,分别含329和241个氨基酸,相对分子质量为24 462.094和28 519.526 Da,两者均属于纤溶酶类或蚓激酶类。DPF3 ID NO.1和DPF3 ID NO.2对纤维蛋白、纤维蛋白原、纤溶酶原均有直接作用,而对凝血酶无直接作用,DPF3对纤维蛋白原的水解作用呈剂量和时间相关性,对3条链的水解速度为α链>β链>γ链,水解程度为γ链>α链≈β链,当浓度为6.25 μg·mL^-1,可水解大部分的α链;当浓度为12.5 μg·mL^-1,可水解大部分的β链;当浓度为200 μg·mL^-1,才能完全水解纤维蛋白原的α和β链;当浓度为50 μg·mL^-1,能够完全水解γ链。体外血栓溶解试验发现在具有相似纤维蛋白水解作用的浓度下,尿激酶对照组仅使6%的栓块溶解,而DPF3可水解20%的栓块,高浓度的DPF3(3 709.9 μg·mL^-1)甚至可以水解80%的血栓,对血栓具有良好的溶解作用,且呈剂量和时间相关性。同时体外考察DPF3对凝血四项的影响,发现DPF3能显著延长APTT并降低Fib的含量,且具有延长TT的作用趋势,但对PT无显著影响,推测DPF3通过内源性或/和共同凝血途径以及第三种凝血途径产生抗血栓作用。2021年,Zhang等^[12]从P. vulgaris粗酶提取物中获得片段PvQ。PvQ对纤维蛋白和纤维蛋白原的比活力均较P. vulgaris粗酶提取物的高,且PvQ低中高浓度(342,684,1 368)mg·L^-1可溶解超过80%的血栓块,其溶栓作用强于蚓激酶对照品(41.97%),同时,当温度≥60℃或pH<7时,PvQ活性显著降低或失活,而温度≤50℃和碱性条件下,PvQ活性则不受影响或受影响较少。2022年,Liu等^[13]从P. vulgaris全体提取纯化得到一个全新的类似胰蛋白酶的丝氨酸蛋白酶EPF3(22),相对分子质量25 136.24,由241个氨基酸组成,经WISS-MODEL测定,其包含α螺旋结构(3.9%)、β折叠(43.8%)、β转角(21.1%)、无规则线团(32.1%)等多种形式的二级结构。当pH为7.0~11.0,温度低于40℃,EPF3结构稳定;当pH为8,50℃,EPF3的纤溶活性最强,且为蚓激酶的5倍。EPF3主要通过直接纤溶,纤维蛋白原水解和纤溶酶原激活,发挥溶血栓的作用。此外,EPF3也可以通过降解3条纤维蛋白原链(α、β和γ),进一步将水解产物水解为更小的片段来发挥抗凝作用。

2.2 抗肿瘤作用

2002年,Zhao等^[46]从E. foetida全体的粗提物D中分离得到D1、D2和D3组分,其中,D2组分相对分子质量为10×10³~60×10³,PI为3.25~3.75,采用HiPrep^TM 16/60 DEAE预装柱,从D2中分离得到D2(8)(23),相对分子质量为23 335.14。D2(8)可有效抑制肿瘤K562细胞、Hela细胞和SY5Y细胞的生长,在纤维蛋白平板实验中展示出激酶活性,以尿激酶效价计,活力单位为8 600 IU·mg^-1。D2组分经非变性PAGE电泳分离得到Band13(24)、Band9(25)、Band8、Band7(26)、Band6和Band5,相对分子质量分别为15 983.48、23 334.69、33 051.03、33 317.19、34 157.81和66 645.09,其中Band9和D2(8)是同一蛋白质,为丝氨酸蛋白酶,具有抗肿瘤和激酶活性。2003年,Xie等^[14]从E. foetida全体磷酸缓冲液中分离得到抽提物,其蛋白质含量为(60.43±2.36)%。当抽提物浓度为60~110 mg·L^-1时,对癌细胞HCT-116、MGc803、HeLa及K562的杀伤活性达到50%,其中,K562细胞最为敏感。该抽提物(ip,28或36 mg·kg^-1·d^-1)可延长腹水型荷瘤小鼠的生存期,且效果远远好于空白对照组(ip,每天0.2 mL生理盐水)和环磷酰胺标准药物组(ip,20 mg·kg^-1·d^-1),其主要通过癌细胞的直接杀伤作用和体质改善、增强身体等特异性免疫调节的间接作用来延长生存期。团队继续从该抽提物中分离鉴定出一个凋亡相关丝氨酸蛋白酶1(ARSP1)(27),pI<3.8,表观相对分子质量为28 000,糖蛋白染色法鉴定ARSP1为糖蛋白(或糖肽),其结构与丝氨酸蛋白酶类高度同源,进一步由PMSF对其纤溶酶活性的抑制实验证明属于丝氨酸蛋白酶类。ARSP1(200 mg·L^-1)可诱导人结肠癌细胞HCT-116凋亡杀死癌细胞。纤维蛋白平板法表明ARSP1也具有纤溶酶和纤溶酶原激活酶活性^[15]。

2.3 抗菌作用

2002年,Zhang等^[47]从E. foetida全体中分离得到抗菌肽F-1(28)和F-2(29),相对分子质量为535.27和519.27。F-1和F-2对鹑鸡肠球菌、绿脓杆菌、鲍氏不动杆菌、土生克雷伯氏菌有抑制作用,MIC分别为11.4和12.85 mg·L^-1,对粪肠球菌的MIC为22.8和25.68 mg·L^-1,对白色念珠菌抑制作用较弱。该团队继续从E. foetida全体中分离得到抗菌肽EABP-1^[16],该抗菌肽的最大吸收波长277.16 nm,分子量约为20 000,对鹑鸡肠球菌、绿脓杆菌、鲍氏不动杆菌、土生克雷伯氏菌的MIC均为11.4 μg·mL^-1,对粪肠球菌的MIC为22.8 μg·mL^-1,对白色念珠菌抑制作用较弱。2011年,Li等^[48]从P. guillelmi皮肤分泌物中分离得到一种全新的曲霉素样抗菌肽lumbricin-PG(30),含9个碱性氨基酸残基和8个酸性氨基酸残基,不含半胱氨酸,紫外吸收最大波长280 nm,分子量为6 909.07。lumbricin-PG对铜绿单胞菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌的MIC分别为2.5、5.0、20.0和10.0 μg·mL^-1,有良好的抗菌活性。同时,对人体和家兔红细胞几乎没有溶血活性。同年,Hua 等^[17]从E. foetida体腔液中分离得到蚯蚓体腔液蛋白ECFP,相对分子质量为38.6×10³,对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的MIC值分别为90和45 μg·mL^-1,抑菌作用较强,当ECFP浓度大于1.56 μg·mL^-1,对鸡的红细胞有显著的溶血作用。

2.4 抗炎镇痛作用

2017年,Li等^[18]从E. foetida体腔液中分离得到两种全新的抗炎镇痛肽VQ-5(31)和AQ-5(32),相对分子质量为519.277和535.218。AQ-5(iv,1.25、2.5、5 mg·kg^-1)可延长小鼠甩尾的反应时间,延长小鼠热板反应时间,降低醋酸引起的腹部扭动次数,对福尔马林诱导的舔爪实验的早期神经源性疼痛(0~5 min)和晚期炎症疼痛(15~30 min)阶段都有抑制作用,能抑制卡拉胶诱导的后爪水肿,并能降低水肿组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和COX-2的水平,显著降低炎症中性粒细胞的数量和减轻组织结构的损伤。同时,AQ-5(4和8 μg·mL^-1)抑制脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导RAW 264.7细胞中细胞外调节蛋白激酶Erk1/2、应激活化蛋白激酶JNK、Kappa B抑制因子激酶α/β (IKKα/β)水平,对丝裂原活化蛋白激酶p38 MAPK无影响,而同样剂量下的VQ-5对此均无明显效果。

2.5 其他作用

1995年,Oumi等^[49]从E. foetida肠道组织中分离得到多肽GGNG-1(35),并从E. foetida和P. vittata全体中分离得到2个多肽GGNG-2(33)和GGNG-3(34),3个多肽的相对分子质量分别为1 756.0、1 598.6和1 824.8,且均能增强E. foetida肠组织的张力和自发收缩的频率。同时三者也能引起环节动物组织如多毛类食道和水蛭阴道的收缩,但对软体动物和节肢动物组织均无影响。2000年,Kobayashi等^[50]从E. foetida的体腔液中分离得到1个全新的蛋白质Lysenin,相对分子质量为41 000,在24~29 ℃下(除猴子在36 ℃测定),对所测定的33种无脊椎动物中的5种动物的精子、39种脊椎动物中的30种动物的精子有杀死作用,这一作用主要和Lysenin与细胞膜上的鞘磷脂(SM)特异性结合从而导致细胞溶解有关,而无SM的无脊椎动物的精子不会受Lysenin影响。2008年,Ueda等^[51]从E. foetida的体腔液中分离得到适冷丝氨酸蛋白酶为特征的全新蛋白,相对分子质量27 000,能耐热和pH变化。该蛋白可水解黄瓜花叶病毒和番茄花叶病毒的衣壳蛋白,具有较强的抗病毒活性,当pH9.5,40~50 ℃,抗病毒活性最强,同时,该蛋白活性能被各种丝氨酸蛋白酶抑制剂所抑制。2013年,Sukumwang等^[52]从E. foetida体腔液中分离得到成孔毒素Lysenin,由297个氨基酸组成,相对分子质量为41,其可与SM特异性结合从而导致红细胞溶解,具体溶血过程包括Lysenin与靶膜SM的结合、形成的低聚物导致膜通透性增加和膜上形成成熟孔隙(3 nm)3个阶段。Lysenin的溶血作用与其剂量和作用温度有直接相关性,当37 ℃,浓度为10~100 ng·mL^-1,Lysenin更易与SM结合,但糖脂、酪氨酸脯氨酸酐能抑制此过程,从而降低溶血作用。

2014年,Sukandar等^[53]进一步评估了DLBS1033的作用,在急性实验中,给药剂量在0.2~16.2 g·kg^-1,观察14 d,小鼠无发病率和死亡率;在亚慢性毒性试验中,给药剂量在270~1 080 mg·kg^-1,连续给药90 d后,大鼠无任何死亡,药物安全;在产前检查发育毒性实验中,在大鼠妊娠的第6~15 d,每日给药DLBS1033 540 mg·kg^-1,未观察到不良反应;DLBS1033能与一种抗凝药如氯吡格雷或阿司匹林一起给药,而不能三者同时给药,会导致胃损伤。同年,Tjandrawinata等^[54]从L. rubellus分离得到一种生物活性蛋白质组分^99mTc-DLBS1033,能以完整的蛋白质形式经小肠吸收,循环半衰期为70 min,其长的生物半衰期可支持其作为溶栓蛋白。2021年,Pinzon等^[55]在标准治疗(阿司匹林100 mg、他汀类20 mg、维生素B12 100 mg,每天3次)的基础上,口服DLBS1033片剂(每片490 mg,1片1次,每天3次)30 d后,与标准治疗法比较,DLBS1033可显著提高急性缺血性中风患者后期康复情况的生活能力指数(BI)评分,降低患者脑梗死的美国国立卫生院卒中量表 (NIHSS)评分,在改善全身各项功能状态方面更有效,安全性更高。

3 不同科属来源全蝎蛋白质/多肽的研究进展

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钳蝎科东亚钳蝎(Buthus martensii Karsch)又名马氏正钳蝎(Mesobuthus martensii Karsch)是我国全蝎药材的主要来源^[56],国内外除研究东亚钳蝎外,还对蝎科统治者惧蝎(Pandinus imperator)和异距蝎亚科携刺异距蝎(Heterometrus spinnifer)分泌的毒液中的蛋白质/多肽成分进行了研究。

3.1 抗肿瘤作用

目前,以东亚钳蝎B. martensii的研究为主,2002年,Liu等^[42]从B. martensii毒液中分离得到一个多肽ANTP(36),相对分子质量为6 280,富含甘氨酸,不含组氨酸和苏氨酸。ANTP(iv,0.6 mg·kg^-1)对腹腔接种艾氏腹水瘤小鼠的生命延长率达31.5%(P<0.05);对S-180荷瘤小鼠实体瘤的抑制率达39.0%(P<0.01),与环磷酰胺对照组(iv,60 mg·kg^-1)比较,ANTP抗肿瘤作用更有效,所用剂量更少,小鼠体重降低得更少,毒性更小。同年,该团队^[20]继续从B. martensii毒液中获得了编码多肽AGAP(37)的基因,在强大的噬菌体T7启动子的控制下,基因在大肠杆菌中高水平表达,大部分重组AGAP基因以不溶性包涵体的形式表达,少数的重组AGAP基因以可溶形式存在。药理学实验表明,重组AGAP(1.0 mg·kg^-1)对艾氏腹水瘤腹腔接种小鼠的生命延长率达29%(P<0.05),对S-180荷瘤小鼠的纤维瘤的抑制率达23%(P<0.01),小鼠扭体反应抑制率达60%(P<0.01),热板法实验中可降低小鼠踢腿和舔食反应。

PESV是从B. martensii的毒液中提取得到的一种多肽提取物,含50~60个氨基酸,纯度89.1%,相对分子质量6 000~7 000,pH为7.4,大多数由3~4对二硫键交联而成,对多种肿瘤细胞都具有抑制作用^[57]。Li等^[58]团队研究发现PESV能够抑制卵巢癌细胞SKOV3的生长,其机制可能与抑制HPA、VEGF的表达有关,继续研究发现PESV可通过抑制细胞增殖周期进行和促进细胞凋亡,当PESV 浓度大于40 mg·L^-1,可抑制SKOV3细胞的增殖,当浓度等于40 mg·L^-1,增殖抑制率为34.66%,且呈剂量依赖性;PESV干预后,处于S期的细胞减少,处于G0/G1期的细胞增多;SKOV3细胞p27表达上调,表达Survivin的肿瘤细胞减少,而表达半胱氨酸蛋白酶(Caspase-12)的细胞显著增加^[59]。同时,Yu等^[60]发现当PESV浓度20 μg·mL^-1,可促进K562细胞凋亡,使细胞中磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)及p-Akt的蛋白表达降低,抑制K562 细胞增殖。2007年,Fu等^[61]从B. martensii的毒腺中分离得到一个重组氯霉素样肽rBmK Cta,该肽可抑制人脑胶质瘤细胞SHG-44的生长,IC₅₀值为0.28 μmol·L^-1,呈剂量依赖性。

2016年,Satitmanwiwat等^[62]进一步报道,蝎毒肽BmKn2对人类正常齿龈细胞HGC和牙髓细胞DPC等健康组织无细胞毒性及诱导作用,而对人口腔鳞癌细胞HSC4和口腔表皮样癌细胞KB有显著的细胞毒作用,IC₅₀分别为26和34 μg·mL^-1,且呈剂量依赖性,并伴有细胞凋亡。BmKn2作用后的HSC4和KB细胞有明显变化,核解体以及细胞凋亡膜联蛋白V阳性细胞数量增加。BmKn2对人口腔癌细胞的抑制作用主要通过P53依赖的内在凋亡途径诱导细胞凋亡,与细胞上的特异性受体结合,诱导激活P53和BAX,反向调节使口腔癌细胞BCL-2减少,BAX的激活导致几种线粒体凋亡介质的释放(如细胞色素C),随后形成的凋亡小细胞会激活半胱氨酸蛋白酶9(caspase-9),caspase-9又能激活caspase-3和caspase-7,最终导致DNA的裂解。同年,He等^[63]发现东亚钳蝎毒素(BMK)10~40 μg·mL^-1对人结肠癌细胞Caco-2有抑制作用,且抑制率与浓度和时长成正比,其抑制作用与BMK促进Caco-2细胞淋巴转化和细胞毒性作用有关。在研究发现B. martensi Karsch中短链神经毒素BmK CT与从以色列沙漠蝎Leiurus quinquestraqtum尾腺毒液中分离得到的可以特异性阻断氯通道的氯毒素CTX在相似的抑制神经胶质瘤细胞增殖功能的基础上,山西大学细胞分子生物学课题组^[21]于2017年报道了BmK CT通过活化p38α激活下游丝裂原活化蛋白激酶激活的蛋白激酶-2(MK2),而融合蛋白GST-BmK CT通过p38α丝裂原活化蛋白激酶(p38αMAPK)信号通路激活MK2均引起细胞S期和G2/M期的阻滞从而抑制胶质瘤U251细胞的增殖,p38α特异性抑制剂SB203580可反转GST-BmK引起的细胞周期阻滞。于2018年发现BmK CT可以通过下调磷酸化的AKT水平增强了替莫唑胺(TMZ)诱导的U251细胞凋亡的敏感性,表明BmK CT和TMZ可联合治疗胶质瘤^[64]。2019年,采用代谢组学方法发现BmK CT可通过下调低氧诱导因子HIF-1α的表达,降低丙酮酸激酶PKM2介导的有氧糖酵解从而抑制神经胶质瘤细胞的增殖^[65]。

3.2 抗菌作用

2004年,Zeng等^[22]采用Fmoc N端保护氨基酸的固相法,B. martensii腺体组织中提取的总DNA经合成,得到4个全新的无二硫键桥的毒液肽,BmKa1(39)、Bmka2(40)、BmKb1(41)和BmKn2(42)。BmKa1和Bmka2是酸性亲水基团,无抗菌活性,二级结构预测分别含100%和62%的线圈结构,不能与任何一种蛋白质受体或整个细胞的结合,而BmKb1和Bmkn2是两种新型阳离子螺旋抗菌肽,其中,Bmkn2的抗菌活性最强,对G⁺(如金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌、枯草芽孢杆菌)和G^-(如大肠杆菌、铜绿假单胞菌)都具有很强的抑菌作用。2012年,该团队^[23]从M. martensii分离得到一种全新的不含二硫键桥多功能肽BmKbpp(43),包含47个氨基酸残基,对单增李斯特菌、大肠杆菌、流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌、肠道沙门氏菌和铜绿假单胞菌等G^-都有强的抗菌活性,MIC分别为5.7、2.3、3.2、2.8、2.3和4.7 μmol·L^-1,并对克拉萨、灰葡萄孢菌和镰刀菌等真菌的生长有抑制作用,IC₅₀值分别为2.0、3.1和0.2 μmol·L^-1,也对抗生素耐药病原体(如肺炎克雷伯氏菌、流感嗜血杆菌)有生长抑制作用,并且显示出非常弱的溶血活性。同年,Chen等^[24]从M. martensii的毒液中分离得到的BmKn2肽(42)的衍生物Kn2-7(44),可直接作用于抗艾滋病病毒(HIV-1)微粒来发挥抗HIV-1作用,几乎能完全抑制病毒感染。Kn2-7对HIV-1假型病毒HIV-1 PV的抗病毒活性呈剂量依赖性,EC₅₀=2.76 μg·mL^-1;当Kn2-7剂量为16 μg·mL^-1,对HIV-1 PV的抑制率可达到98.7%,且Kn2-7起效快,在60 min达到峰值。同时,Kn2-7对金黄色葡萄球菌(AB 94004和ATCC 25923)、枯草杆菌(AB 91021)、苏云金杆菌(AB 92037)、黏液细胞(AB 93113)等G⁺,大肠杆菌(AB 94012和ATCC 25922)、铜绿假单胞菌(AB 93066、A 092994、A 093052、A 093056、A 093085和A 093115)等G^-,以及临床分离的耐抗生素菌株(如抗青霉素P1383和P1389、耐甲氧西林P1374、P1369、P1381、P1386、青霉素敏感 P111),都有较好的抑菌作用,MIC分别为3.13、3.13、6.25、6.25、6.25、6.25、25、25、50、100、50、50、100、6.25、6.25、3.13、3.13、6.25、6.25和3.13 μg·mL^-1,抑菌作用与浓度呈正比例。 Kn2-7通过与金黄色葡萄球菌(AB 94004)细胞壁的脂磷壁酸和大肠杆菌(AB 94012)细胞壁的LPS结合,从而使细胞崩解死亡。Kn2-7的抑菌效果强于BmKn2,同时溶血作用也明显低于BmKn2,HC50分别为90.27和17.13 μg·mL^-1^[66]。

2013年,Zeng等^[25]从P. imperator中克隆纯化得到3个不含半胱氨酸的毒液肽,Pantinin-1(45)、Pantinin-2(46)、Pantinin-3(47),相对分子质量分别为1 545.90、1 403.71、1 490.80。三种肽都含有一个α螺旋的阳离子两亲性分子,对金黄色葡萄球菌(AB 94004)、芽孢杆菌(AB 90008)、黄体微球菌(AB 2010179)、抗万古霉素肠球菌(S13)、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(16472)等G⁺,及真菌热带假丝酵母菌(AY 91009),都有很强的抗菌活性,而对大肠杆菌(DH5α)、恶臭假单胞菌、催产克雷伯菌(AB2010143)、阴沟肠杆菌(AB 2010162)和肠道沙门氏菌(AB 2010185)等G^-,几乎没有抗菌活性;Pantinin-1有微量的溶血活性,而Pantinin-2和Pantinin-3有中等溶血活性。

3.3 促进生长因子释放

SVP是从B. martensii的毒腺中分离纯化得到的多肽,能抑制肿瘤细胞,并且能对抗由射线造成的损伤^[67]。Dong^[68]等进一步研究发现SVP通过刺激骨髓中的有效造血生长因子(SCF)、IL-1α、IL-6、GM-CSF细胞因子等的释放,加速给予亚致死剂量的X射线小鼠造血能力的恢复,减轻由射线导致的骨髓抑制。2015年,Wang等^[26]主要研究蝎毒肽SVP B5(47),SVP-B5可增加被辐射小鼠中骨髓有核细胞的数量及被辐射小鼠中的菌落形成单位,加速被辐射小鼠内外周血白细胞和血小板的恢复,显著地降低BMNCS中的活性氧水平,减少P16,P21mRNA的有关表达,从而减轻辐射造成的DNA损伤,增强照射后造血功能的恢复,提高被辐射小鼠的存活率。2017年,Wang等^[69]从B. martensii的毒腺的粗提液中分离出SVP I、SVP Ⅱ和SVP Ⅲ,SVP Ⅱ经CM-Sepharose离子交换柱色谱分离得到SVP B1、B2、B3、B4、B5、B6和B7,其中,SVP B5纯度最高,SVP B4次之。SVP B5可促进小鼠骨髓性白血病细胞M-NFS-60的增殖,可促进细胞中IL-3R的表达,从而激活JAK/STAT5通道,促进骨髓单个核细胞群的形成以及增强造血干细胞的修复,同时,SVP-B5能促进射线损伤细胞的增殖,展示出类似生长因子的特性,可用于治疗严重骨髓抑制,而SVP B4并无明显的促细胞增殖作用。

3.4 离子通道阻滞作用

2000年,Chen^[27]从B. martensii毒腺中分离纯化得到BMK 9(3)-1(49)和BMK 9(3)-2(50),相对分子质量分别为7 020和7 037,氨基酸序列与α神经毒素,如马卡毒素Ⅰ的相似,具有与α神经毒素相同的减缓钠离子通道失活的作用,此外,BMK9(3)-1和BMN9(3)-2均可阻塞钾离子和钙离子通道来延长大鼠和青蛙神经的动作电位,且呈剂量依赖性。2001年,Zhu等^[28]利用分子生物学克隆技术从B. martensii毒腺中克隆并分离出3种独特的富含半胱氨酸的肽的前体BmTXKS3、BmTXLP2和BmAP1,其中,BmTXKS3(51)是1个短链K通道毒素样碱性蛋白肽,PI 8.6;BmTXLP2(52)是1种酸性肽,PI 4.97;BmAP1(53)是1种中性肽,PI 7.34,二级结构预测,其只包含4条β折叠,其中3条位置与丝氨酸蛋白酶抑制剂家族系列的位置相同,是一种丝氨酸蛋白酶抑制剂。2014年,Rashid等^[29]从H. spinnifer分离得到1个有4个二硫键交联的34个氨基酸残基的C端酰胺化肽HsTX1(54)。HsTX1是一种有效的K离子通道阻滞剂,对大鼠Kv1.3离子通道的IC₅₀为12×10^-22 mol·L^-1。因HsTX1无法靠近Kv1.1离子通道的孔结构域,从而在通道的选择性过滤中,阻止了HsTX1中赖氨酸通过孔与离子通道中酪氨酸羰基接触,HsTX1与Kv1.3的结合能力强于其与Kv1.1的结合能力。HsTX1的14位点上分别进行Ala、Phe、Val或Abu取代,得到HsTX1类似物HsTX[R14A],当14位点的残基被中性残基取代时,可降低HsTX1类似物与Kv1.1的结合,但不影响与Kv1.3的作用,对Kv1.3的选择性是Kv1.1的2 000倍。HsTX1及HsTX[R14A]可有效抑制大鼠淋巴细胞CCR7^-T_EM和CCR7⁺T_EM的增殖,且HsTX1[R14A]的稳定性好,可抵抗胃蛋白酶的蛋白水解,对胰蛋白酶和胰岛素的敏感性低。2017年,Olamendi-portugal等^[30]从P. imperator的毒液中分离得到两种新的肽类Pi5(55)和Pi6(56),相对分子质量分别为3 334.00和3 126.5,其中Pi5有8个半胱氨酸能形成4个二硫键,Pi6有4个半胱氨酸能形成2个二硫键。因Pi5和Pi6与α-KTx结构相似,选择果蝇中与钾通道相关的基因shaker的人类同源基因编码的离子通道Kv1.1、Kv1.2、Kv1.3、Kv1.4进行研究,发现即使Pi5和Pi6浓度为100 nmol·L^-1,对Kv1.1和Kv1.4也无抑制作用,且Pi6对Kv1.2、Kv1.3是低亲和力阻断剂,当Pi6的浓度为100 nmol·L^-1,剩余电流分数为68%和77%,而Pi5对Kv1.2、Kv1.3的阻断作用更强,当Pi5浓度为100 nmol·L^-1,能抑制Kv1.2离子通道约80%的电流,抑制Kv1.2离子通道的Kd为92 nmol·L^-1,抑制Kv1.3离子通道的Kd为77 nmol·L^-1。

3.5 其他作用

1989年,Zhou等^[31]从B.martensii分泌的毒液中分离得到一个多肽AEP(57),分子量8 290,PI 8.52。AEP静脉给药可有效抑制由马桑内酯或头孢类药物诱导的白化病雄性大鼠癫痫动物模型的癫痫发作,而对心率、血压和心电图没有不良影响。1997年,Luo等^[32]从B.martensii毒液中得到3个全新的中性哺乳动物神经毒素BMK M4(58)、BMK M1(59)和BMK M8(60),相对毒性分别为2.5、13.44和1,PI分别为9.44、7.60、5.30,LD₅₀依次为(0.75±0.034)、(4.0±0.25)、(10.0±0.34)μg·g^-1,蝎子毒素的毒性与其PI值有直接相关性,当毒素的PI越低,毒性越弱,Bmk M4在蝎子毒素中毒性为中等强度。1998年,Du等^[70]从东亚蝎毒中分离出一种新型多肽化合物SPP,研究发现SPP有镇痛作用,在小鼠热板法中能升高痛阈、减少小鼠醋酸牛体次数。此外,发现SPP有明显抗炎作用,能减轻大鼠或小鼠急性非特异性炎症及大鼠慢性非特异性炎症。2020年,Chen ^[70]通过小鼠福尔马林炎性痛和CFA慢性炎性痛模型发现东亚钳蝎蝎毒具有很强的镇痛效果,且镇痛活性为东亚钳蝎毒液>东亚钳蝎毒腺>东亚钳蝎全体。一步经分离纯化和电生理技术从东亚钳蝎毒液中分离得到了一个新型的具有钠通道活性的东亚钳蝎毒素(61),是一个长链毒素多肽,含有64个氨基酸,其中8个半胱氨酸形成四对二硫键,相对分子质量为7 113,与MAKATOXIN-1序列同源性高达98%。在小鼠福尔马林炎性痛模型中,MAKATOXIN-1组(50、150 nmol·kg^-1)对小鼠的第一相痛的抑制率<30%,150 nmol·kg^-1MAKATOXIN-1对第二相炎性痛的抑制率>70%,镇痛作用更强,由定量PCR技术检测发现其镇痛作用可能与腺苷受体A1和HCN2有关。在CFA慢性炎性痛模型中,MAKATOXIN-1组对小鼠机械痛敏感有镇痛作用,镇痛时效>4 h。

4 结语

收起

蛋白质/多肽作为治疗药物的研究和应用越来越受关注,Grand View Research 的报告显示,2021年全球多肽疗法市场规模达到393亿美元。预计年复合增长率为6.4%,到2030年,多肽的市场份额将达到687亿美元。截至2023年,已有100多种多肽药物进入临床,还有大量药物正在临床开发中^[71-72]。研究发现,来源于动物的蛋白质/多肽具有良好的生物活性,蟾蜍蛋白质/多肽对革兰阴性菌、革兰阳性菌及真菌都有抑制作用;地龙蛋白质/多肽主要以纤维蛋白溶解活性、抗肿瘤活性、抗菌活性,以及抗炎镇痛活性为主;全蝎蛋白质/多肽以抗肿瘤活性、抗菌活性、促进生长因子释放和离子通道阻滞作用为主。全蝎蛋白质/多肽,主要以东亚钳蝎为主,地龙蛋白质/多肽一直是研究热点,可以从全蝎和地龙的各个品种展开系列全面研究,而蟾蜍蛋白质/多肽有关报道在前期和近五年都很少,也可以着重从这一方面研究。目前,已上市的制剂华蟾素胶囊、华蟾素注射液和华蟾素片能有效治疗肝癌、胃癌、肺癌、结肠癌等,其制剂中含蟾酥蛋白质/多肽物质,同时具有良好的免疫调节作用,可有效降低不良反应和毒副作用^[73-76];以地龙蛋白/多肽为原料开发的药物地龙活性蛋白胶囊、地龙蛋白溶血栓胶囊和蚓激酶肠溶胶囊等,具有溶栓抗栓作用,在防治心脑血管和呼吸系统等疾病中发挥重要作用^[77],与其他抗栓药物,如尿激酶型纤溶酶原激活物u-PA和组织型纤溶酶原激活剂t-PA相比,具有溶栓作用强、不良反应小、患者易耐受、半衰期长等优点,更安全、有效且疗效稳定^[78-79];以蝎毒多肽为原料开发的镇痛治疗用生物制品蝎毒注射液、治疗急性消化道溃疡的速可平(SV)和治疗风湿性关节炎等自身免疫性疾病的痹痛灵胶囊等,临床应用广泛,在体内作用迅速、半衰期短、毒性反应迅速,如蝎毒多肽的镇痛作用强于吗啡,且无成瘾性,优点显著^[80]。但已上市的动物蛋白质/多肽类药物在使用中也存在一些问题,如,蚓激酶肠溶胶囊目前有一例致双下肢疼痛不良反应案例^[81],全蝎中分离得到的活性多肽具有很强的哺乳动物毒性等。

整体上看,药用动物蛋白质/多肽有极大研究开发利用的价值,具有很多现在市面上常用治疗药物不具备的优势,但是仍然需要做好临床试验和注意不良反应的相关报道,及时进行反馈与处理,使临床用药更安全。其次,需进一步完善动物源蛋白质/多肽的提取纯化及分子设计与改造工艺,获得活性更强,毒性更低的生物活性蛋白质/多肽,并系统研究其作用机理,未来从技术层面和临床试验层面着手,研制出安全、高效及低毒的动物蛋白/多肽。

基金

收起

国家级大学生创新创业训练计划项目资助(202110541017)
湖南省自然科学基金部门联合基金项目资助(2023JJ60472)
湖南省卫生健康委科研课题项目资助(202213055724)
湖南中医药大学中药学一流学科项目资助(校行科字[2018]3号)

参考文献

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文献

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2024年第59卷第1期

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doi: 10.11669/cpj.2024.01.002

接收时间：2022-09-05
首发时间：2025-11-12
出版时间：2024-01-08

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作者

出版历史

收稿日期：2022-09-05

基金

国家级大学生创新创业训练计划项目资助(202110541017)

湖南省自然科学基金部门联合基金项目资助(2023JJ60472)

湖南省卫生健康委科研课题项目资助(202213055724)

湖南中医药大学中药学一流学科项目资助(校行科字[2018]3号)

作者信息

¹ 湖南中医药大学, 长沙 410208

² 长沙欧邦生物科技有限公司, 长沙 410000

³ 湖南省中药活性物质筛选工程技术研究中心, 长沙 410208

⁴ 湖南省中美老年性退行性疾病治疗药物国际联合研究中心, 长沙 410208

通讯作者:

*李娟,女,博士,副教授研究方向:中药物质基础与作用机制研究 Tel:(0731)88459421

参考文献

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https://castjournals.cast.org.cn/joweb/zgyxzz/CN/10.11669/cpj.2024.01.002

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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TxT

No.	蛋白质/多肽名称	动物来源	提取分离部位或合成方法	氨基酸序列	参考文献
1	Buforin Ⅰ	Bufo bufo gargarizans Cantor	胃组织	AGRGKQGGKVRAKAKTRSSRAGLQFPVGRVHRLLRKGNY	[2]
2	Buforin Ⅱ		Buforin Ⅰ结构经合成制得	TRSSRAGLQFPVGRVHRLLRK	[2]
3	FI(LK1)	Lumbricus rubellus	从动物全体分离得到的蚓激酶中分离提取	RSGLLNFCAVALALNDQGFRAVGIRIDSGDLAYLSCLARETFE RISEQFKLPWFSKLTIVASNDINEETILSLNEQGHKIDCFGIGT HLVTCQRQPALGCVYKMVEINAQPRIKLSQDVVKVTMPGNKN VFRLYGADGHALIDLLQRVDESPPEVGQKVLCRHPFQESKRA YVIPTHVEPLYDVYWADGRVTQAMPSLEEVRDRVQNSLRTLR QDHKRTLNPTPYKV	[2]
4	Buforin Ⅱ b		Buforin Ⅱ结构经合成制得	RAGLQFPVG[RLLR]₃	[3]
5	BGCATH37		皮肤分泌物	SSRRPCRGRSCGPRLRGGYTLIGRPVKNQNRPKYMWV	[4]
6	BGCATH(5-37)			PCRGRSCGPRLRGGYTLIGRPVKNQNRPKYMWV	[4]
7	胰岛素A	Bufo marinus	胰腺	GIVEQCCHSTCSLTELENYCN	[5]
8	胰岛素B			LANQHLCGPHLVEALYLVCGERGFYYYPKV	[5]
9	胰高血糖素36			HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNSKRSGGMS	[5]
10	胰高血糖素29			HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNS	[5]
11	胰高血糖素类似物GLP32			HAEGTFTSDMTSFLEEKAAKEFVDWLIKGRPK	[5]
12	胰高血糖素类似物GLP37			HAEGTYTNDVTQFLEEKAAKEFIDWLLKGIPKKQRLS	[5]
13	Bufokinin		肠	KPRPDQFYGLM	[6]
14	F1	Lumbricus rubellus	动物全体	VVGGSDTTIGQYPHQLSLRVTG	[7]
15	F2			IIGGSNASPGEFPWQLSQTRG	[7]
16	F3			VIGGTNASPGEFPWQLSQQRQ	[7]
17	F4			VIGGTDAAPGEFPWQLSQTR	[7]
18	F5			IVGGIEARPYEFPWQVSVRRKS	[7]
19	F6			IVGGIEARPYEFPWQVSVRRKS	[7]
20	EQY-5	Pheretima aspergillum	动物全体	N端19个氨基酸序列为QIGGTNASPGEFPPQLSQT	[8 -10]
21	EFE	Pheretima posthumous	动物全体自溶物	RKKGASWFWPWSVKKR	[11]
22	EPF3	Pheretima vulgaris	动物全体	ILGGTEARVGEIPWQLSQQRGGSHSCGASLLRPGSALSAAH CVDGAPPADVRIVAGLHLRSDESTAVASLAESFLIHPSYNVGE GTFPNDIAIIYLLTNINSAPVENIDFALLPPDNVEQFVGFTCVLS GWGRTSASNVLPDALQKVSIDVITTAECDSRMAAVAGADCTD AHIAVFDPALQKGSCNGDSGGPMNCPLSGEFVVAGVTSWGI SGGGACLPEYPSVYTRTGFYRQWIIDNIR	[12]
23	D2(8)		动物全体	IVGGYTCGA	[13]
24	Band13		动物全体	GVHLTDAEKA	[13]
25	Band9			同16	[13]
26	Band7			GVVISIANQKGGVG	[13]
27	ARSP1		动物全体	N端25个氨基酸序列为IIGGTNASPGEFPWQLSQTRGGSHS	[14]
28	F-1		动物全体	Ac-AMVSS	[15]
29	F-2			Ac-AMVGT	[15]
30	Lumbricin-PG	Pheretima guillelmi	皮肤分泌物	FSRYARMRDSRPWSDRKNNYSGPQFTYPPEKAPPEKLIKW NNEGSPIFEMPAEGGHIEP	[16]
31	VQ-5		体腔液	VSSVQ	[17]
32	AQ-5			AMAQQ	[17]
33	GGNG2	Eisenia foetida Pheretima vittata	动物全体	GKCAGQWAlHAAGGNGOH	[18]
34	GGNG3			PKCSRWAHSCGGGNGOH	[18]
35	GGNG1	Eisenia foetida	肠道	ARPKCAGRWAIHSCGGGNGOH	[18]
36	ANTP		毒液	N端前25位氨基酸残基序列为VRDGYIADDKNCAYFCG RNAYCDDE	[19]
37	AGAP		毒腺	VRDGYIADDKNCAYFCGRNAYCDDECKKNGAESGYCQW AGVYGNACWCYKLPDKVPIRVPGKCNG	[20]
38	CTX	Leiurus quinquestraqtum	毒液	MCMPCFTTDHQMARKCDDCCGGKGRGKCYGPQCLCR	[21]
39	BmKa1		腺体	MKPRVFFLLFLLVAAMIETGESEENEEGSNESGKSTEAKNT DASVDNEDSDIDGDSD	[22]
40	Bmka2			MSSKTLLVLLLVGVLVSTFFTADAYPASMDNSDDALEELDN LDLDDYFDLEPADFVLLDMWANMLESSDFDDME	[22]
41	BmKb1			MEIKYLLTVFLVLLIVSDHCQAFLFSLIPSAISGLISAFKGRR KRDLNGYIDHFKNFRKRDAELEELLSKLPIY	[22]
42	BmKn2			MKSQTFFLLFLVVLLLAISQSDAFIGAIARLLSKIFGKRSMGDM DTMKYLYDPSLSAADLQTLQKLMENY	[22]
43	BmKbpp		蝎子毒液固相合成	FRFGSFLKKVMKSKLAKKLRSKGKQLLKDYANKVLNGPEEE AAAPAE	[23]
44	Kn2-7		毒液	FIKRIARLLRKIF	[24]
45	Pantinin-1	Pandinus imperator	尾巴	MKTQFVILMITVILMQMLVQTEGGILGKLWEGFKSIVGKRGL NDRDQLDDLFDSDLSDADIKLLKEMFK	[25]
46	Pantinin-2			MKAQFAILLITLVLFQMFSQSEAIFGAIWKGISSLLGKRGLNN LNDFDELFDGEITKADLDFMREIMK	[25]
47	Pantinin-3			MKTQFAILLIALVLFQLLSQSDAFLSTIWNGIKSLLGRRGLNE LDNLDELFDGEISQADIDFLKELMS	[25]
48	SVP B5		毒腺	VRDGYIADDKNCAYFCGRNAYCDDECKKNGAESGYCQQAG VYYNACWCYYLLDDVVIIIPSGCDQW	[26]
49	BMK 9(3)-1		毒腺	GRDAYIADSENCPYFCGANPN	[27]
50	BMK 9(3)2			GRDAYIADSENCPYTCALNP	[27]
51	BmTXKS3		毒腺中克隆	MKIFFAILLILAVCSMAIWTVNGTPFAIKCATDADCSRKCPG NPPCRNGFCACT	[28]
52	BmTXLP2			MVKMQVIFIAFIAVIACSMVYGDSLSPWNEGDTYYGCQRQ TDEFCNKICKLHLASGGSCQQPAPFVKLCTCQGIDYDNS FFFGALEKQCPKLRE	[28]
53	BmAP1			MKFVFASFALFVIFLCFSQSLSQSYFRCRDDEVFDNCISNCGP PRCSNILNTYPCTNLGPLCTPGCKCKDGRVYDNQGRCVLQTE CFQK	[28]
54	HsTX1	Heterometrus spinnifer	毒素固相合成	ASCRTPKDCADPCRKETGCPYGKCMNRKCKCNRC	[29]
55	Pi5		毒液	VAKCSTSECGHACQQAGCRNSGCRYGSCICVGC	[30]
56	Pi6			VDACYEACMHHHMNSDDCIEACKNPVPP	[30]
57	AEP	Buthus martensii	毒液	N端前50个氨基酸残基为DGYIRGSDNCKVSCLLGNEGC NKECRAYGASYGYCWTVKLAQDCEGLPDT	[31]
58	BmK M4		毒液	VRDAYIAKPENCVYHCAGNEGCNKLCTDNGAESGYCQWGGR YGNACWCIKLPDDVPIRVPGKCH	[32]
59	BmK M1			VRDAYIAKPHNCVYECARNEYCNDLCTKNGAKSGYCQWVGK YGNGCWCIELPDNVPIRVPGKCH	[32]
60	BmK M8			GRDAYIADSENCTYFCGSNPYCNNVCTENGAKSGYCQWAGR YGNACYCIDLPASERIKEGGRCG	[32]
61	MAKATOXIN-1	Buthus martensii	毒液	GRDAYIADSENCTYTCALNPYCNDLCTKNGAKSGYCQWAG RYGNACWCID LPDKVPIRIS GSCR	[33]

No.

蛋白质/多肽名称

动物来源

提取分离部位或合成方法

氨基酸序列

参考文献

Buforin Ⅰ

Bufo bufo gargarizans Cantor

胃组织

AGRGKQGGKVRAKAKTRSSRAGLQFPVGRVHRLLRKGNY

[2]

Buforin Ⅱ

Buforin Ⅰ结构经合成制得

TRSSRAGLQFPVGRVHRLLRK

[2]

FI(LK1)

Lumbricus rubellus

从动物全体分离得到的蚓激酶中分离提取

RSGLLNFCAVALALNDQGFRAVGIRIDSGDLAYLSCLARETFE
RISEQFKLPWFSKLTIVASNDINEETILSLNEQGHKIDCFGIGT
HLVTCQRQPALGCVYKMVEINAQPRIKLSQDVVKVTMPGNKN
VFRLYGADGHALIDLLQRVDESPPEVGQKVLCRHPFQESKRA
YVIPTHVEPLYDVYWADGRVTQAMPSLEEVRDRVQNSLRTLR
QDHKRTLNPTPYKV

[2]

Buforin Ⅱ b

Buforin Ⅱ结构经合成制得

RAGLQFPVG[RLLR]₃

[3]

BGCATH37

皮肤分泌物

SSRRPCRGRSCGPRLRGGYTLIGRPVKNQNRPKYMWV

[4]

BGCATH(5-37)

PCRGRSCGPRLRGGYTLIGRPVKNQNRPKYMWV

[4]

胰岛素A

Bufo marinus

胰腺

GIVEQCCHSTCSLTELENYCN

[5]

胰岛素B

LANQHLCGPHLVEALYLVCGERGFYYYPKV

[5]

胰高血糖素36

HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNSKRSGGMS

[5]

胰高血糖素29

HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNS

[5]

胰高血糖素类似物GLP32

HAEGTFTSDMTSFLEEKAAKEFVDWLIKGRPK

[5]

胰高血糖素类似物GLP37

HAEGTYTNDVTQFLEEKAAKEFIDWLLKGIPKKQRLS

[5]

Bufokinin

肠

KPRPDQFYGLM

[6]

Lumbricus rubellus

动物全体

VVGGSDTTIGQYPHQLSLRVTG

[7]

IIGGSNASPGEFPWQLSQTRG

[7]

VIGGTNASPGEFPWQLSQQRQ

[7]

VIGGTDAAPGEFPWQLSQTR

[7]

IVGGIEARPYEFPWQVSVRRKS

[7]

IVGGIEARPYEFPWQVSVRRKS

[7]

EQY-5

Pheretima aspergillum

动物全体

N端19个氨基酸序列为QIGGTNASPGEFPPQLSQT

[8 -10]

EFE

Pheretima posthumous

动物全体自溶物

RKKGASWFWPWSVKKR

[11]

EPF3

Pheretima vulgaris

动物全体

ILGGTEARVGEIPWQLSQQRGGSHSCGASLLRPGSALSAAH
CVDGAPPADVRIVAGLHLRSDESTAVASLAESFLIHPSYNVGE
GTFPNDIAIIYLLTNINSAPVENIDFALLPPDNVEQFVGFTCVLS
GWGRTSASNVLPDALQKVSIDVITTAECDSRMAAVAGADCTD
AHIAVFDPALQKGSCNGDSGGPMNCPLSGEFVVAGVTSWGI
SGGGACLPEYPSVYTRTGFYRQWIIDNIR

[12]

D2(8)

动物全体

IVGGYTCGA

[13]

Band13

动物全体

GVHLTDAEKA

[13]

Band9

同16

[13]

Band7

GVVISIANQKGGVG

[13]

ARSP1

动物全体

N端25个氨基酸序列为IIGGTNASPGEFPWQLSQTRGGSHS

[14]

F-1

动物全体

Ac-AMVSS

[15]

F-2

Ac-AMVGT

[15]

Lumbricin-PG

Pheretima guillelmi

皮肤分泌物

FSRYARMRDSRPWSDRKNNYSGPQFTYPPEKAPPEKLIKW
NNEGSPIFEMPAEGGHIEP

[16]

VQ-5

体腔液

VSSVQ

[17]

AQ-5

AMAQQ

[17]

GGNG2

Eisenia foetida Pheretima vittata

动物全体

GKCAGQWAlHAAGGNGOH

[18]

GGNG3

PKCSRWAHSCGGGNGOH

[18]

GGNG1

Eisenia foetida

肠道

ARPKCAGRWAIHSCGGGNGOH

[18]

ANTP

毒液

N端前25位氨基酸残基序列为VRDGYIADDKNCAYFCG
RNAYCDDE

[19]

AGAP

毒腺

VRDGYIADDKNCAYFCGRNAYCDDECKKNGAESGYCQW
AGVYGNACWCYKLPDKVPIRVPGKCNG

[20]

CTX

Leiurus quinquestraqtum

毒液

MCMPCFTTDHQMARKCDDCCGGKGRGKCYGPQCLCR

[21]

BmKa1

腺体

MKPRVFFLLFLLVAAMIETGESEENEEGSNESGKSTEAKNT
DASVDNEDSDIDGDSD

[22]

Bmka2

MSSKTLLVLLLVGVLVSTFFTADAYPASMDNSDDALEELDN
LDLDDYFDLEPADFVLLDMWANMLESSDFDDME

[22]

BmKb1

MEIKYLLTVFLVLLIVSDHCQAFLFSLIPSAISGLISAFKGRR
KRDLNGYIDHFKNFRKRDAELEELLSKLPIY

[22]

BmKn2

MKSQTFFLLFLVVLLLAISQSDAFIGAIARLLSKIFGKRSMGDM
DTMKYLYDPSLSAADLQTLQKLMENY

[22]

BmKbpp

蝎子毒液固相合成

FRFGSFLKKVMKSKLAKKLRSKGKQLLKDYANKVLNGPEEE
AAAPAE

[23]

Kn2-7

毒液

FIKRIARLLRKIF

[24]

Pantinin-1

Pandinus imperator

尾巴

MKTQFVILMITVILMQMLVQTEGGILGKLWEGFKSIVGKRGL
NDRDQLDDLFDSDLSDADIKLLKEMFK

[25]

Pantinin-2

MKAQFAILLITLVLFQMFSQSEAIFGAIWKGISSLLGKRGLNN
LNDFDELFDGEITKADLDFMREIMK

[25]

Pantinin-3

MKTQFAILLIALVLFQLLSQSDAFLSTIWNGIKSLLGRRGLNE
LDNLDELFDGEISQADIDFLKELMS

[25]

SVP B5

毒腺

VRDGYIADDKNCAYFCGRNAYCDDECKKNGAESGYCQQAG
VYYNACWCYYLLDDVVIIIPSGCDQW

[26]

BMK 9(3)-1

毒腺

GRDAYIADSENCPYFCGANPN

[27]

BMK 9(3)2

GRDAYIADSENCPYTCALNP

[27]

BmTXKS3

毒腺中克隆

MKIFFAILLILAVCSMAIWTVNGTPFAIKCATDADCSRKCPG
NPPCRNGFCACT

[28]

BmTXLP2

MVKMQVIFIAFIAVIACSMVYGDSLSPWNEGDTYYGCQRQ
TDEFCNKICKLHLASGGSCQQPAPFVKLCTCQGIDYDNS
FFFGALEKQCPKLRE

[28]

BmAP1

MKFVFASFALFVIFLCFSQSLSQSYFRCRDDEVFDNCISNCGP
PRCSNILNTYPCTNLGPLCTPGCKCKDGRVYDNQGRCVLQTE
CFQK

[28]

HsTX1

Heterometrus spinnifer

毒素固相合成

ASCRTPKDCADPCRKETGCPYGKCMNRKCKCNRC

[29]

Pi5

毒液

VAKCSTSECGHACQQAGCRNSGCRYGSCICVGC

[30]

Pi6

VDACYEACMHHHMNSDDCIEACKNPVPP

[30]

AEP

Buthus martensii

毒液

N端前50个氨基酸残基为DGYIRGSDNCKVSCLLGNEGC
NKECRAYGASYGYCWTVKLAQDCEGLPDT

[31]

BmK M4

毒液

VRDAYIAKPENCVYHCAGNEGCNKLCTDNGAESGYCQWGGR
YGNACWCIKLPDDVPIRVPGKCH

[32]

BmK M1

VRDAYIAKPHNCVYECARNEYCNDLCTKNGAKSGYCQWVGK
YGNGCWCIELPDNVPIRVPGKCH

[32]

BmK M8

GRDAYIADSENCTYFCGSNPYCNNVCTENGAKSGYCQWAGR
YGNACYCIDLPASERIKEGGRCG

[32]

MAKATOXIN-1

Buthus martensii

毒液

GRDAYIADSENCTYTCALNPYCNDLCTKNGAKSGYCQWAG
RYGNACWCID LPDKVPIRIS GSCR

[33]