中国药学杂志

Corban No.	δ_H	δ_C
1	α1.06(m)	38.6
	β1.87(m)
2	α1.88(m)	30.8
	β1.54(m)
3	3.49(m)	79.3
4	α2.32(m)	40.0
	β2.16(m)
5		141.8
6	5.37(br d,J=5.4 Hz)	122.9
7	α1.48(m)	33.1
	β1.98(m)
8	1.57(m)	33.1
9	0.96(m)	51.8
10		37.9
11	α1.55(m)	22.0
	β1.49(m)
12	α1.92(m)	40.3
	β1.88(m)
13		42.7
14	1.04(m)	58.0
15	α2.12(m)	27.7
	β1.65(m)
16	α1.12(m)	25.2
	β1.63(m)
17	1.44(m)	59.0
18	0.70(s)	12.9
19	1.00(s)	83.6
20	3.58(m)	83.6
21	1.33(d,J=6.0 Hz)	23.0
3-cym
1'	4.85(br d,J=9.0 Hz)	97.3
2'	α2.05(1H,m)	36.7
	β1.55(1H,m)
3'	3.83(m)	78.1
4'	3.23(dd,J=10.2,3.0 Hz)	84.6
5'	3.81(m)	69.8
6'	1.17(d,J=6.6 Hz)	18.5
3'-OCH₃	3.42(s)	58.5
3-dig
1″	4.49(d,J=8.4 Hz)	104.0
2″	5.06(t,J=8.4 Hz)	72.5
3″	3.33(dd,J=8.4,3.0 Hz)	82.8
4″	3.87(br d,J=3.0 Hz)	68.9
5″	3.67(q,J=6.6 Hz)	71.9
6″	1.30(d,J=6.6 Hz)	16.9
2″-COCH₃		171.7
2″-COCH₃	2.05(s)	21.1
3″-OCH₃	3.37(s)	57.2
20-dig
1″'	4.38(d,J=7.8 Hz)	104.8
2″'	3.82(m)	76.0
3″'	3.35(m)	85.8
4″'	3.81(m)	68.6
5″'	3.58(m)	71.5
6″'	1.26(d,J=6.6 Hz)	17.0
3″'-OCH₃	3.43(m)	57.0
20-glu
1″″	4.66(d,J=7.8 Hz)	104.0
2″″	3.17(m)	76.1
3″″	3.19(m)	78.0
4″″	3.19(m)	72.2
5″″	3.35(m)	77.8
6″″	3.60(m)	63.3
	3.82(m)

Corban No.	δ_H	δ_C
1	α1.06(m)	38.6
	β1.87(m)
2	α1.88(m)	30.8
	β1.54(m)
3	3.49(m)	79.3
4	α2.32(m)	40.0
	β2.16(m)
5		141.8
6	5.37(br d,J=5.4 Hz)	122.9
7	α1.48(m)	33.1
	β1.98(m)
8	1.57(m)	33.1
9	0.96(m)	51.8
10		37.9
11	α1.55(m)	22.0
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12	α1.92(m)	40.3
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15	α2.12(m)	27.7
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	3.82(m)

香加皮中C₂₁甾体类化学成分及其抗炎活性研究

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赵淑秀 ¹ , 侯国栋 ¹^,² , 孙晶 ¹ , 王亚新 ¹^,² , 白翠慧 ¹^,² , 杜玉洁 ¹^,² , 刘青芝 ² , 林永强 ¹ , 郭东晓 ¹^,^*

中国药学杂志 | 论著 2025,60(10): 1026-1032

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中国药学杂志 | 论著 2025, 60(10): 1026-1032

香加皮中C₂₁甾体类化学成分及其抗炎活性研究

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赵淑秀¹, 侯国栋¹^,², 孙晶¹, 王亚新¹^,², 白翠慧¹^,², 杜玉洁¹^,², 刘青芝², 林永强¹, 郭东晓¹^,^*

作者信息

¹ 山东省食品药品检验研究院, 中药标准创新与质量评价山东省工程研究中心, 中药配方颗粒共性技术山东省工程研究中心, 济南 250101

² 山东中医药大学, 济南 250355

赵淑秀,女,硕士研究方向:药物分析

通讯作者:

^*郭东晓,男,博士,硕士生导师,主任药师研究方向:中药、保健食品和化妆品质量评价 Tel: (0531)81216540

C₂₁ Steroids and Their Anti-Inflammatory Activities from Periplocae Cortex

Shuxiu ZHAO¹, Guodong HOU¹^,², Jing SUN¹, Yaxin WANG¹^,², Cuihui BAI¹^,², Yujie DU¹^,², Qingzhi LIU², Yongqiang LIN¹, Dongxiao GUO¹^,^*

Affiliations

¹ Shandong Engineering Research Center for Standard Innovation and Quality Evaluation of TCM, Shandong Engineering Research Center for Generic Technologies of Traditional Chinese Medicine Formula Granules, Shandong Institute for Food and Drug Control, Jinan 250101, China

² Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan 250355, China

出版时间: 2025-05-01 doi: 10.11669/cpj.2025.10.004

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摘要

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目的研究香加皮(Periplocae Cortex)的化学成分及其抗炎活性。方法通过分子排阻色谱(MCI)树脂柱、硅胶柱、凝胶柱对香加皮药材中化学成分进行提取分离,采用核磁共振波谱、质谱、红外光谱等方法,对单体化合物的结构进行鉴定。采用Griess法建立脂多糖诱导小鼠单核巨噬细胞RAW264.7细胞释放炎症因子模型,对化合物进行抗炎活性评价。结果从香加皮得到6个化合物,分别为Δ⁵-孕甾烯-3β,20(S)-二醇-3-O-[2-O-乙酰基-β-D-洋地黄糖-(1→4)-β-D-加拿大麻糖苷]-20-O-[β-D-葡萄糖-(1→2)-β-D-洋地黄糖苷](1)、Δ⁵-孕甾烯-3β,17α,20α-三醇(2)、杠柳新苷L(3)、杠柳新苷N(4)、periplocogenin(5)、杠柳苷M(6)。其中1为新化合物,命名为杠柳苷G1。体外抗炎活性研究表明,化合物1、5、6具有一定的抗炎活性。结论香加皮中分离鉴定的化合物及活性研究为其药用资源开发和利用提供了依据。

关键词

香加皮 / 甾体类 / 抗炎活性 / Δ⁵-孕甾烯-3β,20(S)-二醇-3-O-[2-O-乙酰基-β-D-洋地黄糖-(1→4)-β-D-加拿大麻糖苷]-20-O-[β-D-葡萄糖-(1→2)-β-D-洋地黄糖苷] / 杠柳苷G1

Abstract

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OBJECTIVE To study the chemical constituents and anti-inflammatory activity of Periplocae Cortex. METHODS The chemical components in Periplocae Cortex were extracted and isolated by MCI resin column, silica gel column and gel column, and the structure of the monomeric compounds was identified by nuclear magnetic resonance spectroscopy, mass spectrometry, infrared spectroscopy, etc. The Griess method was used to test the lipopolysaccharide-induced model of inflammatory factor release from mouse monocyte macrophage RAW264.7 cells, and the anti-inflammatory activity of the compound was evaluated. RESULTS A total of 6 compounds were isolated from Periplocae Cortex, including Δ⁵-pregnene-3β,20(S)-diol-3-O-[2-O-acetyl-β-D-digital-opyranosyl-(1→4)-β-D-cymaropyranoside]-20-O-[β-D-glucopyranosyl-(1→2)-β-D-digita-lopyranoside] (1), Δ⁵-pregnene-3β,17α,20α-triol (2), periplocoside L (3), periplocoside N (4), periplocogenin (5), periplocoside M (6). Compound 1 is a new compound, named periplocoside G1. In vitro anti-inflammatory activity studies showed that 1, 5, and 6 showed antiinflammatory activities. CONCLUSION The isolated and identified compounds and their activities provide a basis for the rational development and utilization of medicinal resources.

Key words

Periplocae Cortex / steroid / anti-inflammatory activity / Δ⁵-pregnene-3β,20(S)-diol-3-O-[2-O-acetyl-β-D-digitalopyranosyl-(1→4)-β-D-cymaropyranoside]-20-O-[β-D-glucopyranosyl-(1→2)-β-D-digitalopyranoside] / periplocoside G1

引用本文

赵淑秀, 侯国栋, 孙晶, 王亚新, 白翠慧, 杜玉洁, 刘青芝, 林永强, 郭东晓. 香加皮中C₂₁甾体类化学成分及其抗炎活性研究. 中国药学杂志, 2025 , 60 (10) : 1026 -1032 . DOI: 10.11669/cpj.2025.10.004

Shuxiu ZHAO, Guodong HOU, Jing SUN, Yaxin WANG, Cuihui BAI, Yujie DU, Qingzhi LIU, Yongqiang LIN, Dongxiao GUO. C₂₁ Steroids and Their Anti-Inflammatory Activities from Periplocae Cortex[J]. Chinese Pharmaceutical Journal, 2025 , 60 (10) : 1026 -1032 . DOI: 10.11669/cpj.2025.10.004

正文

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香加皮(Periplocae Cortex)别名北五加、香五加,为萝摩科植物杠柳(Periploca sepium Bge.)的干燥根皮^[1]。香加皮的药用历史悠久,是我国传统中药材,《神农本草经》序录曰:“下品药性专主攻击,毒烈之气,倾损中和,不可常服,疾愈即止。”据考证,上述表述中的“下品”即为具有毒性的香加皮^[2]。杠柳在我国分布范围较为广泛,多见于华北、华东等地区^[3]。现代药理学研究证明,香加皮具有抗肿瘤、强心、免疫调节、抗炎等多种活性^[4],其化学成分^[5]包括甾体类、三萜类、苯丙素类、简单芳香族、长链脂肪族、低聚糖等。

本研究以体积分数70%乙醇为提取剂,从香加皮提取物中分离得到6个化合物,分别为Δ⁵-孕甾烯-3β,20(S)-二醇-3-O-[2-O-乙酰基-β-D-洋地黄糖-(1→4)-β-D-加拿大麻糖苷]-20-O-[β-D-葡萄糖-(1→2)-β-D-洋地黄糖苷](1)、Δ⁵-孕甾烯-3β,17α,20α-三醇(2)、杠柳新苷L(3)、杠柳新苷N(4)、periplocogenin(5)、杠柳苷M(6)。其中化合物1为新化合物,命名为杠柳苷G1(结构见图1)。采用脂多糖诱导RAW264.7细胞释放炎症因子模型研究,发现化合物1、5、6具有一定的抗炎活性。

1 仪器与材料

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Bruker Avance Ⅲ 600超导超屏蔽傅里叶变换核磁共振波谱仪(德国布鲁克公司);METTLER TOLEDO XSE205电子天平(瑞士梅特勒托利多公司);Buchi R210旋转蒸发仪(瑞士步奇公司);超高效液相色谱-离子阱-飞行时间串联质谱(HPLC-IT-TOF-MS)液质联用仪(日本岛津公司);Bio Tek EPOCH2NS酶标仪(美国博腾公司);悟空K2025型高效液相色谱仪(山东悟空仪器有限公司)。

乙醚、乙酸乙酯、正丁醇、甲醇、乙醇、石油醚、丙酮、二氯甲烷等试剂均为分析纯;MCI GEL CHP20/P120树脂(37~75 μm,日本三菱化学株式会社);柱层析硅胶(200~300目,青岛海湾精细化工有限公司);Sephadex LH-20羟丙基葡聚糖凝胶(北京索莱宝科技有限公司);Agilent Zrobax SB-C₁₈色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);正相硅胶薄层板(烟台市化学工业研究所);噻唑蓝(MTT,北京鼎国昌盛生物技术有限公司);杜尔贝科改良伊戈尔培养基(DMEM,美国gibco公司);胎牛血清(上海达特希尔生物科技有限公司);二甲基亚砜(DMSO,LIFE SCIENCE公司);脂多糖[LPS,西格玛奥德里奇(上海)贸易有限公司];对氨基苯磺酰胺、胰酶(北京鼎国昌盛生物技术有限公司);3,4-二羟基苯甲羟肟酸(DiDOX,美国MedChem Express公司,批号:HY-19387/CS-5292)。

香加皮产地为陕西,经山东省食品药品检验院穆向荣副主任药师鉴定为萝藦科植物杠柳(P. sepium Bge.)的干燥根皮,样品保存于山东省食品药品检验研究院,编号为SDIFDC-G-PSZ01。

2 方法

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2.1 提取分离

将4 kg香加皮药材粉碎,用体积分数70%乙醇加热回流提取3次,每次1 h,提取液合并、减压浓缩,获得乙醇提取物浸膏,约600 g。所得浸膏加水分散,依次用乙醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取,减压浓缩。取正丁醇萃取相用MCI树脂柱分离,用甲醇-水溶液(体积分数40%~100%)梯度洗脱,共得到7个流分。流分3经过硅胶柱色谱柱,使用二氯甲烷-甲醇系统(100∶1~1∶1)进行梯度洗脱,经TLC检测并合并相同组分,得到Fr. 3A~3V共22个流分。流分Fr. 3O先后经凝胶(二氯甲烷-甲醇1∶1)和硅胶柱(二氯甲烷-甲醇系统100∶1~13∶1)进行梯度洗脱,得到化合物1(4.6 mg)和2(45.2 mg);流分5经过硅胶柱色谱柱,使用二氯甲烷-甲醇系统(100∶1~1∶1)进行梯度洗脱,经薄层色谱(TLC)检测并合并相同组分,得到Fr. 5A~5U共21个流分。流分Fr. 5B经C18-HPLC色谱(柱温35 ℃,甲醇-水67∶33)分离得到化合物3(9.5 mg);Fr. 5H先后经凝胶柱(二氯甲烷-甲醇1∶1)和C18-HPLC色谱(柱温35 ℃,甲醇-水73:27)分离得到化合物4(1.2 mg);Fr. 5J经凝胶柱(二氯甲烷-甲醇1∶1)洗脱,结晶得到化合物5(41.2 mg)和6(15.2 mg)。

2.2 抗炎活性研究

2.2.1 RAW264.7细胞培养

RAW264.7细胞中加入含体积分数10%胎牛血清、体积分数1%青霉素/链霉素双抗的DMEM高糖培养液,将其置于体积分数为5% CO₂、湿度为95%、恒温为37 ℃的培养箱中,定期更换培养液和传代,培养至对数期备用。

2.2.2 MTT法检测化合物对RAW264.7细胞活力的影响

调整处于对数期的RAW264.7细胞接种于96孔板中(每孔8×10⁴个),每孔200 μL。空白对照组细胞不加药物,阳性对照组细胞加阳性药物DiDOX,实验组细胞加入不同浓度化合物的溶液。培养细胞24 h,每孔加入20 μL 2 mg·mL^-1的MTT溶液,继续培养2~3 h,弃去培养液中的上清液,并加入100 μL DMSO,避光轻摇约10 min至结晶溶解,采用全波长酶标仪在波长570 nm处检测各孔的光密度(OD)值,计算细胞存活率。

2.2.3 Griess法检测RAW264.7细胞NO释放量

调整处于对数期的RAW264.7细胞接种于96孔板中(每孔1×10⁴个),每孔200 μL,将其置于体积分数为5% CO₂、湿度95%、恒温37 ℃的培养箱中,培养24 h后,弃上清液,将所有细胞随机分为三组:空白对照组(0.1 mL不含LPS的空白培养基)、模型组(0.1 mL 1.0 μg·mL^-1 LPS)、实验组(0.1 mL 1.0 μg·mL^-1 LPS+100、50、25、12.5、6.25、3.125 μmol·L^-1的不同化合物)、阳性药物组(加入0.1 mL 1.0 μg·mL^-1 LPS+50.0、100.0 μmol·L^-1 DiDOX)。继续培养24 h,取上清液100 μL,加等量Griess试剂,混匀,室温静置10 min,波长设置为570 nm,在酶标仪上测定吸光度,将其代入标准曲线(A=0.006 4c+0.002 4,r²=0.999 4,其中A为吸光度,c为亚硝酸钠浓度)中,计算NO释放量。

标准曲线的制备:配制浓度分别为50、25、12.5、6.25、3.13、1.56 μmol·L^-1的亚硝酸钠溶液,移入96孔板中,按体积比1∶1加入Griess试剂,显色后测定570 nm波长处的吸光度。以浓度为横坐标,吸光度为纵坐标作图,得标准曲线。

NO释放量:NO在体内或体外易被氧化生成亚硝酸盐,Griess试剂可与亚硝酸盐反应生成有色化合物,在特定波长下测量吸光度来定量亚硝酸盐,可反映NO的水平。

3 结果

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3.1 结构鉴定

化合物1:白色无定形粉末(甲醇)。[α

${]}_{D}^{25}$

=-127.273 (c 0.50,MeOH);UV

${\lambda }_{max}^{MeOH}$

(nm): 207 (2.04),278 (0.121);IR

${\nu }_{max}^{KBr}$

(cm^-1): 3 445,2 936,1 743,1 636,1 447,1 373,1 312,1 236,1 066,564,549,521。HR-ESI-MS (m/z): 103 1.542 7 [M+COOH]^-,理论值为1 031.543 2,偏差0.5×10^-6,推测分子式为C₅₀H₈₂O₁₉,不饱和度为10。

Libermann-Burchard和Molish反应均为阳性,推测其为甾体化合物^[6]。根据¹H-NMR和¹³C-NMR谱,结合HSQC谱,δ_C 12.9和δ_H 0.70 (3H,s)、δ_C 19.9和δ_H 1.00 (3H,s)、δ_C 23.0和δ_H 1.33 (3H,d,J=6.0 Hz)分别为C₂₁孕甾烷C-18、C-19和C-21位甲基典型特征;δ_C 141.8 (C-5),122.9 (C-6)和δ_H 5.37 (1H,br d,J=5.4 Hz,H-6)显示孕甾烷结构中存在Δ⁵双键;δ_C 79.3和δ_H 3.49 (1H,m)、δ_C 83.6和δ_H 3.58 (1H,m)分别为C-3和C-20位连氧次甲基。因此,该成分母核为3、20位双氧化的Δ⁵-孕甾烯。¹H-NMR谱低场区显示4个糖的端基质子信号δ_H 4.85 (1H,br d,J=9.0 Hz),4.49 (1H,d,J=8.4 Hz),4.38 (1H,d,J=7.8 Hz),4.66 (1H,d,J=7.8 Hz),结合¹³C-NMR谱糖区的信号,推测结构中存在4个糖基;¹H-NMR谱偶合常数表明,其端基质子均为β构型(³J_H1,H2 > 7 Hz)^[7];¹H-NMR谱化学位移值δ_H 3.40左右显示3个甲氧基信号δ_H 3.43 (3H,s)、3.42 (3H,s)、3.37 (3H,s),在HMBC谱(图2)上分别与糖区碳信号δ_C 85.8 (C-3″'),78.1 (C-3'),82.8 (C-3″)相关,表明糖的结构中连有3个甲氧基。此外,¹H-和¹³C-NMR谱还显示,结构中有一个乙酰基[δ_C 172.9,21.1,δ_H2.05 (3H,s)]。

¹³C-NMR碳谱显示50个碳信号,结合无畸变极化转移技术(DEPT135)和异核单量子关系(HSQC)谱分析,该成分结构中有10个甲基(包括3个甲氧基)、10个亚甲基(包括1个sp³杂化的连氧亚甲基、9个sp³杂化的亚甲基)、26个次甲基(包括1个sp²杂化的次甲基、4个sp³杂化的双连氧次甲基、17个sp³杂化的连氧次甲基、4个sp³杂化的次甲基)、4个季碳(包括1个羰基季碳、1个sp²杂化的季碳、2个sp³杂化的季碳)。结合文献对比^[8],该化合物应为以Δ⁵-孕甾烯为母核,结构中包含1个乙酰基、1个葡萄糖(glu)、1个加拿大麻糖(cym)、2个洋地黄糖(dig)的甾体糖苷类成分。

由HMBC谱可知,cym端基质子δ_H 4.85 (1H,br d,J=9.0 Hz)与甾体母核C-3 (δ_C 79.3)存在远程相关,因此判断cym连接在甾体母核的C-3位;dig端基质子δ_H 4.49 (1H,d,J=7.8 Hz)与cym的C-4' (δ 84.6)存在远程相关,因此判断其连接方式为dig C-1″→cym C-4';H-2″信号δ_H 5.06 (t,J=8.4 Hz)与乙酰基的羰基碳存在远程相关,说明乙酰基连接于dig的C-2″处。在HMBC谱上,另一个dig端基质子信号δ_H 4.38 (1H,d,J=7.8 Hz)与甾体母核C-20 (δ_C 83.6)存在远程相关,因此该糖基连接在甾体母核的C-20位;glu端基质子信号δ 4.66 (1H,d,J=7.8 Hz)与上述dig的C-2″'(δ_C 76.0)存在远程相关,故其连接方式为glu C-1″″→dig C-2″'。

综合分析¹H-NMR和¹³C-NMR、HSQC、HMBC、¹H-¹H COSY和NOESY谱,结合相似结构的文献比对^[8],化合物1鉴定为Δ⁵-孕甾烯-3β,20(S)-二醇-3-O-[2-O-乙酰基-β-D-洋地黄糖-(1→4)-β-D-加拿大麻糖苷]-20-O-[β-D-葡萄糖-(1→2)-β-D-洋地黄糖苷]。经文献检索,该化合物未见报道,为新化合物,命名为杠柳苷G1(periplocoside G1)。Itokawa等^[8-10]从香加皮中分离得到以Δ⁵-孕甾烯-3β,20(S)-二醇为母核的多个糖苷类次级代谢产物,其中已知成分Δ⁵-孕甾烯-3β,20(S)-二醇-3-O-[2-O-乙酰基-β-D-洋地黄糖-(1→4)-β-D-加拿大麻糖苷]-20-O-[β-D-葡萄糖-(1→6)-β-D-葡萄糖-(1→2)-β-D-洋地黄糖苷]^[8](化合物M)与化合物1的结构非常相似,不同之处仅在于1的20位少连接了一个葡萄糖基(因此¹³C-NMR谱上,化合物1比M的C-6″″往高场位移了6.6×10^-6)。结合一维、二维核磁图谱,对该成分¹H-和¹³C-NMR数据进行了归属,见表1。

化合物2:白色无定形粉末(氯仿)。HR-ESI-MS(m/z): 379.248 1 [M+COOH]^-,理论值379.249 0,偏差2.4×10^-6,推测分子式C₂₁H₃₄O₃。¹H-NMR(600 MHz,CDCl₃)δ: 3.85(1H,m,H-3),3.6(1H,d,J=5.4 Hz,H-6),3.53(1H,q,J=10.8 Hz,H-20),2.60(1H,m,H-16β),2.33(1H,dd,J=13.1,3.4 Hz,H-4α),2.24(1H,m,H-4β),1.99(1H,m,H-7),1.86(1H,m,H-2α),1.84(1H,m,H-14),1.74(1H,m,H-12α),1.72(1H,m,H-1β),1.63(1H,m,H-2β),1.58(1H,m,H-16α),1.52(1H,m,H-11),1.49(1H,m,H-8),1.47(1H,m,H-12β),1.20(3H,d,J=6.3 Hz,H-21),1.17(1H,m,H-15),1.08(1H,m,H-9),1.02(3H,s,H-19),0.98(1H,m,H-1α),0.75(3H,s,H-18)。¹³C-NMR(150 MHz,CDCl₃) δ: 140.7(C-5), 121.6(C-6), 85.7(C-17), 72.4(C-20), 71.7(C-3), 51.4(C-14), 49.7(C-9), 45.7(C-13),42.3(C-4),37.7(C-166),37.3(C-1),36.5(C-10),31.9(C-7),31.9(C-8),31.7(C-2),31.1(C-12),23.6(C-15),20.5(C-11),19.4(C-19),18.6(C-21),14.0(C-18)。以上数据与文献[9]数据比对基本一致,故该化合物鉴定为Δ⁵-孕甾烯-3β,17α,20α-三醇。

化合物3:白色针状结晶(氯仿)。HR-ESI-MS(m/z): 512.358 7 [M+NH₄]⁺,理论值512.358 2,偏差1.0×10^-6,推测分子式为C₂₈H₄₆O₇。¹H-NMR(600 MHz,CDCl₃)δ: 5.37(1H,d,J=5.2 Hz,H-6),4.33(1H,d,J=7.8 Hz,H-1'),3.85(1H,d,J=6.3 Hz,H-20), 3.84(1H,m,H-4'), 3.62(1H,m,H-2'),3.57(1H,m,H-3),3.55(1H,m,H-5'),3.52(3H,s,OMe),3.22(1H,dd,J=7.8,10.35 Hz,H-3'),2.39(1H,m,H-4α),2.32(1H,m,H-4β),2.04(1H,m,H-2α),1.97(1H,m,H-16α),1.86(1H,m,H-7),1.78(1H,m,H-1β),1.76(1H,m,H-12α),1.74(1H,m,H-14),1.72(1H,m,H-15α),1.64(1H,m,H-2β),1.62(1H,m,H-16β),1.58(1H,m,H-8),1.56(1H,m,H-11α),1.54(1H,m,H-12β),1.45(1H,m,H-11β),1.36(3H,d,J=6.5 Hz,H-6'),1.25(1H,m,H-15β),1.20(3H,d,J=6.4 Hz,H-21),1.08(1H,m,H-1α), 1.02(3H,s,C-19), 0.97(1H,m,H-9), 0.75(3H,s,H-18)。¹³C-NMR(150 MHz,CDCl₃) δ: 140.5(C-5), 121.8(C-6), 101.1(C-1'), 85.7(C-17), 82.9(C-3'), 78. 6(C-3), 72.4(C-20), 70.6(C-2'), 70.4(C-5'), 68.0(C-4'), 57.4(C-OMe), 51.4(C-14), 49.7(C-9), 45.7(C-13), 38.9(C-4), 37.7(C-16), 37.3(C-1),36.7(C-10),31.9(C-7),31.8(C-8),31.1(C-12),29.6(C-2),23.5(C-15),20.5(C-11),19.4(C-19),18.6(C-21),16.5(C-6'),14.0.(C-18)。以上数据与文献[9]数据比对基本一致,故该化合物鉴定为杠柳新苷L。

化合物4:白色无定形粉末(甲醇)。HR-ESI-MS(m/z): 509.312 0 [M+COOH]^-,理论值509.311 6,偏差0.8×10^-6,推测分子式C₂₇H₄₄O₆。¹H-NMR(600 MHz,DMSO-d₆) δ: 5.27(1H,dd,J=5.5 Hz,H-6),4.58(1H,d,J=4.6 Hz,H'-1),4.54(1H,m H-16),3.59(1H,m H-20), 3.58(1H,m,H-3), 3.11(1H,m,H'-4),2.69(1H,m,H-4α),2.14(1H,m,H-4β),2.00(1H,m,H-7),1.88(1H,m,H-2α),1.94(1H,m,H'-2β),1.75(1H,m,H-1β),1.72(1H,m,H-14),1.69(1H,m,H-15α),1.66(1H,m,H-2β),1.62(1H,m,H-16β),1.62(1H,m,H'-2α),1.56(1H,m,H-8),1.53(1H,m,H-11α),1.48(1H,m,H'-5),1.40(1H,m H-11β),1.34(1H,m,H-12β),1.23(1H,m,H-15β),1.15(3H,d,J=6.2 Hz,C-6'),1.13(3H,d,J=6.2 Hz,C-21),1.06(1H,dd,J=12.0,6.1 Hz,H-1α),0.94(3H,s,C-19),0.98(1H,m,H-9),0.66(3H,s,H-18)。¹³C-NMR(150 MHz,DMSO-d₆)δ: 141.8(C-5), 120.9(C-6), 101.7(C-1'), 84.7(C-17), 81.6(C-20), 77.4(C-4'), 71.9(C-5'), 70.9(C-3'),70.4(C-3),50.9(C-14),50.1(C-9),45.5(C-13),42.7(C-4),40.6(C-12),37.4(C-1),36.5(C-10),36.4(C-2'),32.1(C-16),32.0(C-8),31.9(C-7),31.2(C-2),23.5(C-15),20.6(C-11),19.6(C-19),18.6(C-6'),18.0(C-21),14.7(C-18)。以上数据与文献[9]数据比对基本一致,故该化合物鉴定为杠柳新苷N。

化合物5:白色无定形粉末(氯仿)。HR-ESI-MS(m/z): 519.290 2 [M+COOH]^-,理论值519.290 9,偏差1.4 × 10^-6,推测分子式C₂₈H₄₂O₆。¹H-NMR(600 MHz,CDCl₃)δ: 5.78(1H,d,J=3.1 Hz,H'-4),5.37(1H,m,H-6),5.05(1H,s,H'-1),4.72(1H,qd,J=6.8,3.0 Hz,H'-5),4.33(1H,d,J=7.8 Hz,H-1'),3.85(1H,q,J=6.3 Hz,H-20),3.64(3H,s,OCH₃),3.59(1H,m,H-3),2.39(1H,m,H-4α),2.32(1H,m,H-4β),2.14(1H,dd,J=12.4,3.9 Hz,H-2α),1.93(1H,m,H-16α),1.87(1H,dt,J=13.4,3.6 Hz,H-7),1.76(1H,m,H-1β),1.74(1H,m,H-12α),1.72(1H,m,H-14),1.69(1H,m,H-15α),1.65(1H,m,H-2β),1.63(1H,m,H-16β),1.58(1H,m,H-8),1.56(1H,m,H-11α),1.52(3H,d,J=6.8 Hz,H'-6),1.49(1H,m,H-12β),1.45(1H,dd,J=13.5,4.1 Hz,H-11β),1.25(1H,m,H-15β),1.20(3H,d,J=6.3 Hz,H-21),1.08(1H,dd,J=13.8,3.9 Hz,H-1α),1.01(3H,s,H-19),0.98(1H,m,H-9),0.75(3H,s,H-18)。¹³C-NMR(150 MHz,CDCl₃)δ: 185.8(C-2'),147.8(C-3'),140.3(C-5),121.9(C-6),118.4(C-4'),97.3(C-1'),85.7(C-17),78. 5(C-3),72.3(C-20),68.8(C-5'),54.9(C-7'),51.4(C-14),49.7(C-9),45.6(C-13),38.5(C-4),37.7(C-16),37.3(C-1),36.7(C-10),31.9(C-7),31.8(C-8),31.0(C-12),29.3(C-2),23.5(C-15),23.0(C-6'),20.5(C-11),19.3(C-19),18.6(C-21),14.0(C-18)。以上数据与文献[10]数据比对基本一致,故该化合物鉴定为periplocogenin。

化合物6:白色无定形粉末(氯仿)。HR-ESI-MS(m/z): 649.359 1 [M+COOH]^-,理论值649.359 3,偏差0.3 × 10^-6,推测分子式C₃₄H₅₂O₉。¹H-NMR(600 MHz,CDCl₃)δ: 5.78(1H,d,J=3.1 Hz,H'-4),5.36(1H,m,H-6),5.05(1H,s,H'-1),4.71(1H,dd,J=6.9,2.9 Hz,H'-5),4.61(1H,dd,J=9.6,2.1 Hz,H″-1),3.75(1H,q,J=6.4 Hz,H-20),3.67(1H,m,H-3),3.64(3H,s,OCH₃),3.58(1H,m,H″-3),3.29(1H,dd,J=9.1,5.8 Hz,H″-4),3.11(1H,t,J=8.8 Hz,H″-5),2.31(1H,m,H-4α),2.22(1H,m,H-4β),2.18(1H,m,H″-2),2.00(1H,m,H-7),1.97(1H,m,H-2α),1.94(1H,m,H-16α),1.92(1H,m,H-1β),1.82(1H,m,H-14),1.75(1H,m,H-12α),1.69(1H,m,H-15α),1.68(1H,m,H-16β),1.65(1H,m,H-2β),1.63(1H,m,H″-2),1.54(1H,m,H-12β),1.52(1H,m,H-11α),1.52(3H,d,J=6.8 Hz,H'-6),1.45(1H,dd,J=13.5,4.1 Hz,H-11β),1.42(1H,m,H-8),1.34(3H,d,J=6.1 Hz,H″-6),1.30(3H,d,J=6.4 Hz,H-21),1.15(1H,dd,J=12.1,5.8 Hz,H-15β),1.07(1H,m,H-1α),1.00(3H,s,H-19),0.97(1H,m,H-9),0.73(3H,s,H-18)。¹³C-NMR(150 MHz,CDCl₃) δ: 185.9(C-2'),147.9(C-3'),140.4(C-5),122.0(C-6),118.5(C-3'),100.8(C-1″),97.3(C-1'),85.5(C-17),83.0(C-20),78.6(C-3),77.6(C-4″),71.9(C-5″),71.6(C-3″), 68.9(C-5'), 55.0(C-3'-OMe), 51.1(C-14), 49.7(C-9),45.4(C-13),39.4(C-12),38.6(C-4),38.4(C-2″), 37.4(C-1), 36.8(C-10), 31.9(C-7), 31.9(C-8), 31.0(C-16), 29.4(C-2), 23.5(C-15), 23.0(C-6'),20.6(C-11),19.4(C-19),17.8(C-21),17.0(C-6″),14.1(C-18)。以上数据与文献[9]数据比对基本一致,故该化合物鉴定为杠柳苷M。

3.2 抗炎活性研究

3.2.1 对细胞RAW264.7细胞活力的影响

按照“2.2.2”项下方法进行测定,与空白对照组相比,6个化合物浓度在3.125~100 μmol·L^-1,细胞活力均在80%以上,无显著性差异,故在此浓度范围皆对细胞无毒性作用。

3.2.2 对LPS刺激RAW264.7细胞中NO的含量测定

按照“2.2.3”项下方法进行测定,结果见图3。化合物1、5、6具有一定的抗炎活性且均呈现出剂量依赖性,其中化合物1活性较强,在25 μmol·L^-1时的作用与阳性药物DiDOX 100 μmol·L^-1相当。

4 讨论

收起

本研究从香加皮正丁醇部位中分离得到6个C₂₁甾体类化合物,化合物1为新化合物,对所分离得到的化合物进行了体外抗炎活性筛选,发现化合物1、5、6具有一定的抗炎活性。

化合物3、5、6均以化合物2作为苷元,分别在C-3位羟基或C-20位羟基进行不同基团取代,结果表现出不同的抗炎活性:作为苷元的化合物2、苷元C-3位被洋地黄糖基取代生成的化合物3均未表现出抗炎活性,而苷元C-3位被2-hydroxy-4-methoxy-6-methyl-2H-pyran-3(6H)-one基团取代生成的化合物5和6则均表现出抗炎活性,这可以为C₂₁甾体类化合物抗炎活性的结构优化提供思路。

本实验从香加皮提取物中分离得到一种新的C₂₁甾体类化合物,其抗炎活性研究为香加皮药材的作用机制研究,以及资源开发和利用提供了一定的参考依据。

基金

收起

国家重点研发计划-中医药现代化专项资助(2023YFC3504100)
山东省重点研发计划(重大科技创新工程)项目资助(2021CXGC010511)
山东省技术创新项目资助(202350100442)
山东省食品药品检验研究院平台课题资助(SDIFDC-KY-1-2021023)

参考文献

收起

文献

收起

参考文献引证文献

排序方式：

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2025年第60卷第10期

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文章信息

doi: 10.11669/cpj.2025.10.004

接收时间：2024-12-06
首发时间：2025-11-09
出版时间：2025-05-01

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出版历史

收稿日期：2024-12-06

基金

国家重点研发计划-中医药现代化专项资助(2023YFC3504100)

山东省重点研发计划(重大科技创新工程)项目资助(2021CXGC010511)

山东省技术创新项目资助(202350100442)

山东省食品药品检验研究院平台课题资助(SDIFDC-KY-1-2021023)

作者信息

¹ 山东省食品药品检验研究院, 中药标准创新与质量评价山东省工程研究中心, 中药配方颗粒共性技术山东省工程研究中心, 济南 250101

² 山东中医药大学, 济南 250355

通讯作者:

^*郭东晓,男,博士,硕士生导师,主任药师研究方向:中药、保健食品和化妆品质量评价 Tel: (0531)81216540

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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