中国药学杂志

HPLC /Name	Shimadzu	Agilent	Thermo	Average f
Tamsulosin hydrochloride	21 116.41	/	21.05	/	0.3416	/	/
Impurity A	21 170.40	1.00	22.17	0.95	0.3592	0.95	1.0
Impurity B	21 507.27	0.98	21.17	0.99	0.3467	0.99	1.0
Impurity C	20 750.02	1.02	20.17	1.04	0.3213	1.06	1.0
Impurity D	23 554.88	0.90	23.30	0.90	0.3785	0.90	0.9
Impurity E	49 991.25	0.42	49.79	0.42	0.7945	0.43	0.4
Impurity F	18 505.58	1.14	18.28	1.15	0.2917	1.17	1.2
Impurity H	27 659.43	0.76	28.40	0.74	0.4563	0.75	0.8
Impurity I	16 862.91	1.25	16.45	1.28	0.2598	1.31	1.3

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Name	LOD	LOQ
Tamsulosin hydrochloride	0.025	-	0.100	-
Impurity A	0.010	0.000 2	0.025	0.000 5
Impurity B	0.010	0.000 2	0.025	0.000 5
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Impurity D	0.025	0.000 5	0.100	0.002 0
Impurity E	0.010	0.000 2	0.025	0.000 5
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Company Lot No.	Company Ⅰ	Company Ⅱ	Company Ⅲ
Impurity A	0.073	0.050	0.063	0.035	0.015	0.017	0.055	0.039	0.039
Impurity B	0.011	0.009	0.011	0.003	0.008	0.004	0.005	0.006	0.007
Impurity C	<LOD	<LOD	<LOD	<LOD	<LOD	<LOD	<LOD	<LOD	<LOD
Impurity D	0.002	0.002	<LOD	0.002	0.002	0.002	<LOD	0.003	<LOD
Impurity E	<LOD	<LOD	<LOD	<LOD	<LOD	<LOD	<LOD	<LOD	<LOD
Impurity F	<LOD	<LOD	<LOD	<LOD	<LOD	<LOD	<LOD	<LOD	<LOD
Impurity H	0.002	0.002	0.016	0.002	0.002	0.002	0.001	0.004	0.003
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Other impurity	0.010	0.012	0.034	0.007	0.014	0.009	0.007	0.013	0.007
Total impurities	0.101	0.079	0.134	0.057	0.050	0.041	0.070	0.068	0.060

Company Lot No.	Company Ⅰ	Company Ⅱ	Company Ⅲ
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Name	Low concentration	Medium concentration	High concentration
Impurity A	0.118	0.134	0.162	0.173	0.206	0.226
Impurity B	0.057	0.064	0.105	0.116	0.151	0.168
Impurity C	0.046	0.055	0.092	0.108	0.138	0.151
Impurity D	0.047	0.056	0.093	0.108	0.138	0.149
Impurity E	0.042	0.050	0.084	0.100	0.126	0.140
Impurity F	0.056	0.051	0.094	0.102	0.140	0.152
Impurity H	0.045	0.051	0.091	0.100	0.136	0.149
Impurity I	0.050	0.059	0.093	0.106	0.136	0.152

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盐酸坦索罗辛有关物质测定方法及杂质控制限度研究

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程冬 , 薛敏华 , 裘旭华 , 赵述强 , 陆益红 ^*

中国药学杂志 | 论著 2024,59(11): 1047-1056

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中国药学杂志 | 论著 2024, 59(11): 1047-1056

盐酸坦索罗辛有关物质测定方法及杂质控制限度研究

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程冬, 薛敏华, 裘旭华, 赵述强, 陆益红^*

作者信息

江苏省食品药品监督检验研究院, 国家药品监督管理局化学药品杂质谱研究重点实验室, 南京 210019

程冬,男,主管药师研究方向:药品质量控制及安全性评价

通讯作者:

*陆益红,女,主任药师研究方向:药品质量控制及安全性评价 Tel:(025)86251220

Determination and Limits of Related Substances in Tamsulosin Hydrochloride

Dong CHENG, Minhua XUE, Xuhua QIU, Shuqiang ZHAO, Yihong LU^*

Affiliations

Jiangsu Institute for Food and Drug Control, NMPA Key Laboratory for Impurity Profile of Chemical Drugs, Nanjing 210019, China

出版时间: 2024-06-08 doi: 10.11669/cpj.2024.11.012

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摘要

收起

目的建立加校正因子的主成分自身对照法,测定盐酸坦索罗辛有关物质,并基于Nexus 2.6软件(包含Derek和Sarah模型)遗传毒性预测结果拟定各已知杂质的控制限度。方法采用ZORBAX SB-C₁₈色谱柱(4.6 mm×150 mm,3.5 μm),以高氯酸盐缓冲液-乙腈为流动相,梯度洗脱,225 nm波长下测定盐酸坦索罗辛8个已知杂质的校正因子,通过加校正因子的主成分自身对照法测定盐酸坦索罗辛的有关物质,并采用Nexus 2.6软件对已知杂质进行遗传毒性预测。结果采用加校正因子的主成分自身对照法测定各已知杂质含量与外标法测定结果基本一致(差值为±0.02%),方法学验证结果显示各已知杂质线性、精密度、准确度、定量限、检测限均满足检测要求,遗传毒性软件预测结果杂质I为阳性(ICH M7 第3类),其他杂质均为阴性(ICH M7 第5类)。结论本研究建立的方法快速、高效、准确、灵敏,并且基于遗传毒性软件预测结果拟定各已知杂质限度为0.1%,本研究可为盐酸坦索罗辛标准的制修订提供参考。

关键词

盐酸坦索罗辛 / 校正因子法 / 主成分自身对照法 / 有关物质 / 遗传毒性预测 / 杂质限度

Abstract

收起

OBJECTIVE To establish a self-contrast HPLC method with correction factor for determination of the related substances in tamsulosin hydrochloride, and validate the limits of impurities based on the prediction of genotoxicity using Nexus 2.6 software (with Derek and Sarah). METHODS ZORBAX SB-C₁₈(4.6 mm×150 mm,3.5 μm)column was used for the determination of correction factors of the eight known impurities in tamsulosin hydrochloride with mobile phase consisting of perchlorate buffer solution-acetonitrile by gradient elution under the detection wavelength of 225 nm, the related substances in tamsulosin hydrochloride were determine by self-contrast HPLC method with the correction factor, and the genotoxicity of the impurities was predicted by using Nexus 2.6 software. RESULTS There was no significant difference (the deviation is within ±0.02%) between the results by relative correction factors and external standards. The validation test showed that the proposed method met the requirements for the intended analytical applications, and the predicted result of impurity I by Nexus 2.6 software was positive (ICH M7 class 3), and all the others were negative (ICH M7 class 5). CONCLUSION The established method is rapid, efficient, accurate and sensitive, and a limit of 0.1% is established for each known impurity according to the predicted genotoxicity. This study provides a basis for revising pharmacopoeia standards.

Key words

tamsulosin hydrochloride / correction factor method / self-contrast method / related substance / genotoxicity prediction / impurity limit

引用本文

程冬, 薛敏华, 裘旭华, 赵述强, 陆益红. 盐酸坦索罗辛有关物质测定方法及杂质控制限度研究. 中国药学杂志, 2024 , 59 (11) : 1047 -1056 . DOI: 10.11669/cpj.2024.11.012

Dong CHENG, Minhua XUE, Xuhua QIU, Shuqiang ZHAO, Yihong LU. Determination and Limits of Related Substances in Tamsulosin Hydrochloride[J]. Chinese Pharmaceutical Journal, 2024 , 59 (11) : 1047 -1056 . DOI: 10.11669/cpj.2024.11.012

正文

收起

盐酸坦索罗辛(tamsulosin hydrochloride)为α₁肾上腺素受体拮抗剂,临床上主要用于治疗前列腺增生症^[1-2]。目前国内该品种有10多个原料药和药品批准文号,已上市制剂包括盐酸坦索罗辛缓释片和盐酸坦索罗辛缓释胶囊等。2020年版《中国药典》尚未收载该品种,各生产企业均执行各自注册标准,检验标准有待进一步提高和完善。《欧洲药典》(EP11.0)、《美国药典》(USP2023)、《日本药典》(JP18)中均有盐酸坦索罗辛原料药标准收载,且有关物质检测方法一致,规定方法1测定盐酸坦索罗辛色谱峰保留时间之前的杂质(包括已知杂质B、C、D、E、F),方法 2测定盐酸坦索罗辛色谱峰保留时间之后的杂质(包括已知杂质A、H、I)。各已知杂质结构及来源信息见图1,其中杂质B和杂质I为合成盐酸坦索罗辛的起始物料,杂质A、杂质D、杂质E和杂质F为工艺杂质,杂质C和杂质H为降解产物。

采用EP有关物质方法1检测时,杂质C和杂质D未能有效分离,且杂质B和杂质E均在保留时间2.5 min内出峰,当该法用于制剂有关物质检测时,容易受到辅料峰的干扰。同时,EP11.0收载的质量标准有关物质采用方法1和方法2分别控制,耗时且增加检验成本。因此,有必要对盐酸坦索罗辛有关物质检测方法进行优化,提高检测效率,并对其有关物质含量进行考察。

EP11.0盐酸坦索罗辛有关物质检测方法采用主成分自身对照法计算各杂质的含量,为了进一步提高各已知杂质含量测定的准确性,拟采用建立的方法对盐酸坦索罗辛已知杂质的校正因子进行测定^[3-4],通过加校正因子的主成分自身对照法测定盐酸坦索罗辛各已知杂质的含量,确保杂质准确定量。此外,本研究拟采用Nexus 2.6版本软件中的Derek和Sarah模型对已知杂质进行遗传毒性预测^[5-6],按照ICH M7的要求对遗传毒性杂质制定严格的限度进行控制,确保临床安全有效。本研究可为盐酸坦索罗辛标准的制修订提供参考。

1 仪器与试药

收起

LC-20AB高效液相色谱仪(日本岛津公司);HPLC 1260高效液相色谱仪(美国安捷伦公司);Vanquish高效液相色谱仪(美国赛默飞公司);MettlerXSE-205DU十万分之一电子天平、Mettler Seven Excellence pH计(瑞士梅特勒托利多公司);Nexus 2.6版本遗传毒性预测软件(英国Lhasa公司);甲醇、乙腈均为色谱纯,高氯酸、氢氧化钠、盐酸、过氧化氢均为分析纯;超纯水由Millipore超纯水系统制备。

盐酸坦索罗辛对照品(中国食品药品检定研究院,批号:100688-201102,纯度:99.8%);杂质A对照品(批号:4524-028A8,纯度:98.8%)、杂质B对照品(批号:2163-087A1,纯度:99.6%)、杂质C对照品(批号:1912-012A5,纯度:98.9%)、杂质D对照品(批号:1904-018A3,纯度:99.6%)、杂质E对照品(批号:4479-027A6,纯度:97.4%)、杂质F对照品(批号:1708-010A3,纯度:95.2%)、杂质H对照品(批号:2225-042A3,纯度:99.7%)、杂质I对照品(批号:4473-007A3,纯度:98.8%)[TLC Pharmaceutical Standards公司(以下简称TLC公司)];盐酸坦索罗辛供试品(企业Ⅰ,批号:211102、211103、211104;企业Ⅱ,批号:639220601、639220602、639220603;企业Ⅲ,批号:20170203、20170302、20171103)。

2 方法与结果

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2.1 色谱条件

色谱柱:ZORBAX SB-C₁₈(4.6 mm×150 mm,3.5 μm);流动相:A相为高氯酸盐缓冲液(取高氯酸17.4 mL和氢氧化钠6 g,加水3 800 mL溶解,用氢氧化钠试液调节pH至2.0,加水至4 000 mL),B相为乙腈;梯度洗脱:0~5 min,流动相A 85%~78%;5~30 min,流动相A 78%~75%;30~50 min,流动相A 75%~40%;50~55 min,流动相A 40%~40%;55~55.1 min,流动相A 40%~85%;55.1~65 min,流动相A 85%~85%;流速:1.0 mL·min^-1,柱温:40 ℃,检测波长:225 nm,进样体积:10 μL。

2.2 溶液的制备

稀释剂:取高氯酸盐缓冲液和乙腈,按照体积比为7∶3混匀,即得。

系统适用性:取盐酸坦索罗辛与杂质A、B、C、D、E、F、H、I对照品各适量,精密称定,用稀释剂溶解并定量稀释制成每1 mL中分别含盐酸坦索罗辛约5 mg及各杂质均为约5 μg的混合溶液。

供试品溶液:取盐酸坦索罗辛供试品适量,精密称定,置棕色量瓶中,加稀释剂溶解并定量稀释制成每1 mL中含盐酸坦索罗辛约5 mg的溶液。

对照溶液:精密量取供试品溶液适量,用稀释剂定量稀释制成每1 mL中含盐酸坦索罗辛约5 μg的溶液。

2.3 方法学验证

2.3.1 系统适用性实验

系统适用性溶液色谱图中,各组分色谱峰之间的分离度均大于1.5,理论板数按盐酸坦索罗辛峰计算大于3 000,典型色谱图见图2。

2.3.2 专属性

以稀释剂为空白溶剂进样分析,空白溶剂无干扰。称取盐酸坦索罗辛供试品(批号:211102)适量,分别进行酸、碱、氧化、高温与光照破坏,酸、碱破坏样品须中和,将各破坏样品用稀释剂定量稀释制成每1 mL中含盐酸坦索罗辛约5 mg的溶液,滤过,取续滤液进样分析。破坏试验结果表明,该色谱条件专属性好,盐酸坦索罗辛色谱峰与原有杂质以及极端条件下破坏产生的杂质色谱峰均能良好分离。盐酸坦索罗辛对热较稳定,在较强的酸、碱和光照条件下可降解产生多个杂质,在氧化条件下容易被破坏产生较大量的杂质,典型色谱图见图3。

2.3.3 线性和范围

取盐酸坦索罗辛与杂质A、B、C、D、E、F、H、I对照品各适量,精密称定,用稀释剂溶解并定量稀释制成每1 mL中分别含盐酸坦索罗辛与杂质各约1 mg的溶液,作为S0对照品溶液。再分别稀释配制每1 mL含各组分约100、50、25、10、5、2.5、1、0.5 μg的溶液,作为S1、S2、S3、S4、S5、S6、S7、S8对照品溶液进样分析。以峰面积Y和浓度X计算线性回归方程,盐酸坦索罗辛线性方程为Y=21 116.41X-3544.90(r=0.999 9)、杂质A线性方程为Y=21 170.40X-1 065.77(r=1.000 0)、杂质B线性方程为Y=21 507.27X-284.59(r=1.000 0)、杂质C线性方程为Y=20 750.02X-2 532.80(r=1.000 0)、杂质D线性方程为Y=23 554.88X-4 014.85(r=0.999 9)、杂质E线性方程为Y=49 991.25X-27.44(r=1.000 0)、杂质F线性方程为Y=18 505.58X-1 418.44(r=1.000 0)、杂质H线性方程为Y=27 659.43X-3 221.66(r=1.000 0)、杂质I线性方程为Y=16 862.91X-3 795.34(r=0.999 9),结果显示盐酸坦索罗辛与各已知杂质浓度在0.5~100 μg·mL^-1范围内线性良好。

2.3.4 校正因子(f)

分别采用岛津、安捷伦和赛默飞3个品牌的高效液相色谱仪对盐酸坦索罗辛与杂质A、B、C、D、E、F、H、I的线性进行测定,计算线性回归方程。各杂质的校正因子以盐酸坦索罗辛的线性斜率和杂质的线性斜率的比值计算,取校正因子的平均值为校正因子结果。杂质A、B、C、D、E、F、H、I的校正因子分别为1.0、1.0、1.0、0.9、0.4、1.2、0.8和1.3,详细数据见表1。根据《化学药物杂质研究的技术指导原则》(编号:【H】GPH3-1)相关要求,杂质A、B、C、D的校正因子在0.9~1.1范围内,可以直接用主成分的自身对照法计算含量;杂质E、F、H、I的校正因子超出0.9~1.1范围,可采用加校正因子的主成分自身对照法计算含量。

2.3.5 检测限和定量限

取“2.3.3”项下混合对照品溶液,进一步稀释得到每1 mL含各组分约0.25、0.1、0.05、0.025、0.01、0.005 μg的混合溶液,分别作为S9、S10、S11、S12、S13、S14对照品溶液进样分析,以信噪比(S/N)=3计算检测限,以S/N=10计算定量限。盐酸坦索罗辛及各杂质的检测限及定量限结果见表2,各杂质的检测限和定量限均可满足检测的灵敏度要求。

2.3.6 精密度

取S5对照品溶液(5 μg·mL^-1)连续进样6次,结果显示盐酸坦索罗辛与各已知杂质峰面积的相对标准偏差(RSD)值均在0.11%~1.02%范围内,进样精密度良好。

2.3.7 重复性

取盐酸坦索罗辛供试品(批号:211102)约100 mg,精密称定,置20 mL棕色量瓶中,精密加入S1对照品溶液1 mL,加稀释剂溶解并定量稀释至刻度,摇匀,同法处理6份样品作为重复性供试品溶液进样分析。重复性结果显示,供试品溶液加标约相当于100%限度浓度(各已知杂质拟定限度为0.1%,即浓度为5μg·mL^-1)时,盐酸坦索罗辛与各已知杂质的重复性结果RSD值均在0.46%~1.19%范围内,重复性良好。

2.3.8 准确度

取盐酸坦索罗辛供试品(批号:211102)约100 mg,精密称定,置20 mL棕色量瓶中,分别精密加入S1对照品溶液0.5、1和1.5 mL,加稀释剂溶解并定量稀释至刻度,摇匀,作为低、中、高3个浓度的加标溶液,每个浓度制备3份样品溶液进样分析。准确度结果显示,供试品溶液加标约相当于50%、100%、150%限度浓度(各杂质浓度为2.5、5、7.5 μg·mL^-1)时,杂质A、B、C、D、E、F、H、I平均回收率结果分别为101.18%、101.35%、102.70%、103.70%、100.44%、98.36%、101.65%、101.00%(n=9),准确度良好。

2.3.9 稳定性

取盐酸坦索罗辛供试品(批号:211102)约100 mg,精密称定,置20 mL棕色量瓶中,精密加入S1对照品溶液1 mL,加标约相当于100%限度浓度,加稀释剂溶解并定量稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液,分别于0、2、4、6、8、12、18和24 h进样,稳定性结果显示,供试品溶液在24 h内各已知杂质面积RSD值均在0.49%以内,稳定性良好。

2.3.10 耐用性

采用不同批号的ZORBAX SB-C₁₈色谱柱(4.6 mm×150 mm,3.5 μm)和YMC-Pack ODS-AQ色谱柱(4.6 mm×150 mm,3.5 μm)进行试验,精密量取S5对照品溶液进样分析。结果显示,不同批号的ZORBAX SB-C₁₈色谱柱和YMC-Pack ODS-AQ色谱柱分析时各组分峰之间分离度均大于2.0,色谱柱耐用性良好,典型色谱图见图4。

采用安捷伦高效液相色谱仪和赛默飞高效液相色谱仪进行实验,精密量取S5对照品溶液进样,实验结果显示,各组分色谱峰之间分离度均符合要求,仪器耐用性良好,典型色谱图见图5。

2.4 供试品测定

取盐酸坦索罗辛供试品溶液和对照溶液进样分析,供试品溶液色谱图中如有与杂质A、B、C、D、E、F、H、I保留时间一致的色谱峰,杂质A、B、C、D按主成分自身对照法计算含量,杂质E、F、H、I按校正因子分别为0.4、1.2、0.8、1.3的加校正因子主成分自身对照法计算含量,其他单个未知杂质按主成分自身对照法计算含量,结果见表3。

因供试品中部分已知杂质未检出,本研究通过对准确度试验中的高、中、低3个浓度的加标样品进行检测结果比较,采用加校正因子的主成分自身对照法与外标法计算各已知杂质含量,两种方法检测各已知杂质含量的结果差值在±0.02%以内,结果基本一致,结果见表4。

2.5 杂质控制限度研究

2.5.1 遗传毒性软件预测

绘制盐酸坦索罗辛及其已知杂质的化学结构,导入Nexus 2.6软件(包括Derek和Sarah模型)进行化合物的遗传毒性预测。Derek模型通过毒理学专家文献、毒理学数据库等信息,结合化合物在数据库中所匹配的警示结构预测化合物的遗传毒性。Sarah模型则基于统计学算法,从Ames突变实验数据出发,构建统计模型,通过搜索匹配已知毒性风险化合物结构片段,预测化合物的遗传毒性。本研究采用ICH M7分类模式,定义盐酸坦索罗辛为原料药(API),对8个已知杂质进行遗传毒性预测。计算机构效关系(QSAR)技术筛选评估结果显示,盐酸坦索罗辛杂质I具有烷基卤化物警示结构,预测结果为阳性,ICH M7分类为3类,其他杂质均为阴性,ICH M7分类为5类,结果见表5。

2.5.2 杂质I的限度

软件预测结果显示盐酸坦索罗辛杂质I具有遗传毒性警示结构:Alert027-Alkyl halide,结构见图6,烷基卤化物具有亲电性结构,可以通过与DNA碱基上的亲核基团反应生成DNA加合物,产生遗传毒性。Derek数据库中Ames试验结果表明一级和二级烷基卤化物均有一定的致突变性。因此,盐酸坦索罗辛杂质I的软件预测结果为阳性,ICH M7分类为3类。

根据ICH M7(R2)指导原则《评估和控制药物中DNA反应性(致突变)杂质以限制潜在致癌风险》^[7],第3类杂质为具有警示结构、与原料药结构无关、无致突变数据的化合物。该类杂质应按照适宜的毒理学关注阈值(TTC)控制不超过可接受限度,或进一步开展细菌致突变试验进行研究。在使用TTC值评估原料药和制剂中的致突变杂质的可接受限度时,宜采用1.5 μg·d^-1的杂质限度,对应理论上额外增加1×10^-5的患癌风险^[8-9]。根据TTC值计算遗传毒性杂质限度(公式1)。

公式(1)杂质限度(%)=

T T C (1.5 μ g · d - 1) 每 日 剂 量 (μ g · d - 1)

×100%

盐酸坦索罗辛制剂的成人剂量为200 μg·d^-1,按照TTC值为1.5 μg·d^-1计算,杂质I的限度应为0.75%。因盐酸坦索罗辛的每日给药剂量较低,所以该杂质的计算限度远高于EP和USP标准中盐酸坦索罗辛一般杂质的限度0.1%。因此,为了有效控制产品质量风险,结合样品中杂质I实际测定结果,建议参照ICH Q3A杂质限度控制要求^[10]拟定盐酸坦索罗辛杂质I的限度为0.1%。

2.5.3 其他杂质的限度

其他已知杂质遗传毒性的软件预测结果均为阴性,ICH M7分类为5类,建议参考EP和USP一般杂质限度拟定盐酸坦索罗辛各已知杂质的限度为0.1%。EP和USP盐酸坦索罗辛有关物质标准限度规定:“单个未知杂质的峰面积不得大于对照溶液的主峰面积(0.10%)”。建议拟定标准限度为:“供试品溶液色谱图中如有与杂质A、B、C、D、E、F、H、I保留时间一致的色谱峰,其峰面积乘以校正因子(杂质A、B、C、D、E、F、H、I校正因子依次为1.0、1.0、1.0、0.9、0.4、1.2、0.8、1.3)后均不得大于对照溶液主峰面积(0.1%),其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液的主峰面积(0.1%)”。本研究建立的加校正因子的主成分自身对照法在检测各杂质的含量时,与对照溶液的主峰面积进行比较,杂质的峰面积不得大于对照溶液的主峰面积。因此,限度规定括号内的0.1%与EP和USP标准中的0.10%的表述基本一致。

3 讨论

收起

3.1 检测波长的选择

紫外-可见光谱扫描结果显示,盐酸坦索罗辛的最大吸收波长为225.2 和279.8 nm,在225.2 nm波长处的吸光度约是279.8 nm处吸光度的3.5倍。盐酸坦索罗辛不同生产企业的标准分别使用了223和225 nm波长进行有关物质检查,研究比较了上述2个波长的测定结果,在225 nm波长下的图谱基线相对较平稳。同时,EP11.0和USP2023标准中盐酸坦索罗辛标有关物质检查均采用了225 nm的波长进行检测。综上,本研究选择225 nm作为盐酸坦索罗辛有关物质的检测波长。

3.2 流动相的优化

当采用EP和USP盐酸坦索罗辛标准有关物质方法1规定的流动相A-流动相B(70∶30)等度洗脱时,已知杂质C与杂质D无法有效分离,典型图谱见图7,尝试其他比例的等度洗脱时杂质分离效果均不理想。因此,本研究选择了与EP和USP标准中相同的流动相,即以高氯酸盐缓冲液为流动相A,乙腈为流动相B,考察了系列梯度洗脱方式,优化之后的梯度洗脱方法可以有效的分离盐酸坦索罗辛及其8个已知杂质,杂质B和杂质E均可在保留时间2.5 min之后出峰,典型图谱见图7。该法可以将EP和USP盐酸坦索罗辛标准有关物质方法1和方法2合并进行检测,提高检测效率。

3.3 色谱柱的选择

本研究在方法开发初期采用型号为ZORBAX SB-C₁₈的色谱柱时选择了规格1(4.6 mm×150 mm,5 μm)和规格2(4.6 mm×250 mm,5 μm)的2种色谱柱进行试验,结果杂质C与杂质D色谱峰、杂质A与杂质I色谱峰之间的分离度均小于1.5。因此,研究选择规格3色谱柱(4.6 mm×150 mm,3.5 μm)后,各杂质峰的分离度均符合要求。继续考察了不同批号的ZORBAX SB-C₁₈色谱柱(4.6 mm×150 mm,3.5 μm)和YMC-Pack ODS-AQ色谱柱(4.6mm×150 mm,3.5 μm)分离效果,各组分峰之间分离度均大于2.0。试验结果说明,C₁₈色谱柱填料的粒径对杂质C与杂质D色谱峰以及杂质A与杂质I色谱峰之间的分离度有一定的影响,3.5 μm粒径的填料对于上述杂质的分离效果较好。

3.4 质量与工艺分析

3家企业生产的9批次盐酸坦索罗辛原料药按建立的方法进行有关物质分析,结果显示各已知杂质及未知杂质的含量均在0.1%以下,杂质总量在0.2%以下,总体质量水平较高。各企业的样品检出杂质的种类相同,见图8,可以推测3家原料药生产企业的合成工艺基本一致。工艺杂质中的合成氧化产物杂质E和副产物杂质F均小于检测限(<LOD),副产物杂质D的含量<0.003%,说明合成工艺水平良好。但是,3家企业样品均检出了含量约为0.01%的起始原料杂质B和杂质I,企业应持续关注不同批次间该2种杂质的含量变化趋势,结合纯化工艺参数的控制情况,合理评价纯化工艺对起始物料杂质的去除能力。各企业样品均检出了较高含量的工艺杂质A,企业Ⅰ样品的杂质A的平均含量为0.06%,企业Ⅲ样品的杂质A的平均含量为0.04%。杂质A为合成工艺中盐酸坦索罗辛与起始物料杂质I反应生成,见图1,提示生产企业应关注该杂质批间含量差异变化情况,是否有含量接近0.1%限度值的异常趋势,结合工艺可行性、经济性等综合因素,考虑优化提纯工艺,通过分离纯化来减少盐酸坦索罗辛原料药中杂质A的含量。必要时,可以进一步优化合成工艺,通过控制反应速率,调整起始物料投料量等降低杂质A的反应生成,提高产品的质量水平。

4 结论

收起

本研究建立了加校正因子的主成分自身对照法测定盐酸坦索罗辛的有关物质,方法学验证结果良好。该法将欧洲药典(EP)和美国药典(USP)收载的盐酸坦索罗辛标准有关物质检查项下两法合并成一法,采用加校正因子的主成分自身对照法进行已知杂质定量,提高了检测效率和方法的准确度。使用本文建立的方法对3家企业的样品进行有关物质检测,结果显示各企业生产的盐酸坦索罗辛原料药质量稳定,通过杂质来源分析,提示企业在该品种的生产工艺上仍有提升的空间。此外,采用Nexus 2.6软件对各已知杂质的遗传毒性进行预测,为杂质的限度制定提供了依据。因此,本研究建立的盐酸坦索罗辛有关物质分析方法及拟定的杂质限度可用于盐酸坦索罗辛原料药的质量控制,可为《中国药典》标准的制修订提供参考。

基金

收起

国家药典委员会药品标准制修订研究课题资助(2011233)
江苏省药品监督管理局科研计划课题资助(202120)

参考文献

收起

文献

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排序方式：

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2024年第59卷第11期

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doi: 10.11669/cpj.2024.11.012

接收时间：2023-12-13
首发时间：2025-11-25
出版时间：2024-06-08

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收稿日期：2023-12-13

基金

国家药典委员会药品标准制修订研究课题资助(2011233)

江苏省药品监督管理局科研计划课题资助(202120)

作者信息

江苏省食品药品监督检验研究院, 国家药品监督管理局化学药品杂质谱研究重点实验室, 南京 210019

通讯作者:

*陆益红,女,主任药师研究方向:药品质量控制及安全性评价 Tel:(025)86251220

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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TxT

HPLC /Name	Shimadzu	Agilent	Thermo	Average f
Tamsulosin hydrochloride	21 116.41	/	21.05	/	0.3416	/	/
Impurity A	21 170.40	1.00	22.17	0.95	0.3592	0.95	1.0
Impurity B	21 507.27	0.98	21.17	0.99	0.3467	0.99	1.0
Impurity C	20 750.02	1.02	20.17	1.04	0.3213	1.06	1.0
Impurity D	23 554.88	0.90	23.30	0.90	0.3785	0.90	0.9
Impurity E	49 991.25	0.42	49.79	0.42	0.7945	0.43	0.4
Impurity F	18 505.58	1.14	18.28	1.15	0.2917	1.17	1.2
Impurity H	27 659.43	0.76	28.40	0.74	0.4563	0.75	0.8
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HPLC
/Name

Shimadzu

Agilent

Thermo

Average
f

Slope

Tamsulosin hydrochloride

21 116.41

21.05

0.3416

Impurity A

21 170.40

1.00

22.17

0.95

0.3592

0.95

1.0

Impurity B

21 507.27

0.98

21.17

0.99

0.3467

0.99

1.0

Impurity C

20 750.02

1.02

20.17

1.04

0.3213

1.06

1.0

Impurity D

23 554.88

0.90

23.30

0.90

0.3785

0.90

0.9

Impurity E

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0.42

49.79

0.42

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0.43

0.4

Impurity F

18 505.58

1.14

18.28

1.15

0.2917

1.17

1.2

Impurity H

27 659.43

0.76

28.40

0.74

0.4563

0.75

0.8

Impurity I

16 862.91

1.25

16.45

1.28

0.2598

1.31

1.3

Name	LOD	LOQ
Tamsulosin hydrochloride	0.025	-	0.100	-
Impurity A	0.010	0.000 2	0.025	0.000 5
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Name

LOD

LOQ

μg·mL^-1

Tamsulosin hydrochloride

0.025

0.100

Impurity A

0.010

0.000 2

0.025

0.000 5

Impurity B

0.010

0.000 2

0.025

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0.025

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0.100

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Impurity D

0.025

0.000 5

0.100

0.002 0

Impurity E

0.010

0.000 2

0.025

0.000 5

Impurity F

0.025

0.000 5

0.050

0.001 0

Impurity H

0.005

0.000 1

0.025

0.000 5

Impurity I

0.025

0.000 5

0.100

0.002 0

Company Lot No.	Company Ⅰ	Company Ⅱ	Company Ⅲ
Impurity A	0.073	0.050	0.063	0.035	0.015	0.017	0.055	0.039	0.039
Impurity B	0.011	0.009	0.011	0.003	0.008	0.004	0.005	0.006	0.007
Impurity C	<LOD	<LOD	<LOD	<LOD	<LOD	<LOD	<LOD	<LOD	<LOD
Impurity D	0.002	0.002	<LOD	0.002	0.002	0.002	<LOD	0.003	<LOD
Impurity E	<LOD	<LOD	<LOD	<LOD	<LOD	<LOD	<LOD	<LOD	<LOD
Impurity F	<LOD	<LOD	<LOD	<LOD	<LOD	<LOD	<LOD	<LOD	<LOD
Impurity H	0.002	0.002	0.016	0.002	0.002	0.002	0.001	0.004	0.003
Impurity I	0.004	0.004	0.010	0.007	0.008	0.007	0.002	0.002	0.004
Other impurity	0.010	0.012	0.034	0.007	0.014	0.009	0.007	0.013	0.007
Total impurities	0.101	0.079	0.134	0.057	0.050	0.041	0.070	0.068	0.060

Company
Lot No.

Company Ⅰ

Company Ⅱ

Company Ⅲ

20171103

211102

211103

211104

639220601

639220602

639220603

20170203

20170302

Impurity A

0.073

0.050

0.063

0.035

0.015

0.017

0.055

0.039

Impurity B

0.011

0.009

0.011

0.003

0.008

0.004

0.005

0.006

0.007

Impurity C

<LOD

Impurity D

0.002

<LOD

0.002

<LOD

0.003

<LOD

Impurity E

<LOD

Impurity F

<LOD

Impurity H

0.002

0.016

0.002

0.001

0.004

0.003

Impurity I

0.004

0.010

0.007

0.008

0.007

0.002

0.004

Other impurity

0.010

0.012

0.034

0.007

0.014

0.009

0.007

0.013

0.007

Total impurities

0.101

0.079

0.134

0.057

0.050

0.041

0.070

0.068

0.060

Name	Low concentration	Medium concentration	High concentration
Impurity A	0.118	0.134	0.162	0.173	0.206	0.226
Impurity B	0.057	0.064	0.105	0.116	0.151	0.168
Impurity C	0.046	0.055	0.092	0.108	0.138	0.151
Impurity D	0.047	0.056	0.093	0.108	0.138	0.149
Impurity E	0.042	0.050	0.084	0.100	0.126	0.140
Impurity F	0.056	0.051	0.094	0.102	0.140	0.152
Impurity H	0.045	0.051	0.091	0.100	0.136	0.149
Impurity I	0.050	0.059	0.093	0.106	0.136	0.152

Name

Low concentration

Medium concentration

High concentration

Impurity A

0.118

0.134

0.162

0.173

0.206

0.226

Impurity B

0.057

0.064

0.105

0.116

0.151

0.168

Impurity C

0.046

0.055

0.092

0.108

0.138

0.151

Impurity D

0.047

0.056

0.093

0.108

0.138

0.149

Impurity E

0.042

0.050

0.084

0.100

0.126

0.140

Impurity F

0.056

0.051

0.094

0.102

0.140

0.152

Impurity H

0.045

0.051

0.091

0.100

0.136

0.149

Impurity I

0.050

0.059

0.093

0.106

0.136

0.152