中国药学杂志

Measure time	Groups	WBC /10⁹·L^-1	Neut /10⁹·L^-1	Neut /%	Mono /10⁹·L^-1	Mono /%	Lymph /10⁹·L^-1	Lymph /%
After three days of first dose	Negative control	8.72±1.44	1.22±0.59	13.62±5.20	0.31±0.11	3.42±0.85	7.07±0.99	81.48±5.64
(D4,n=5)	Adjuvant control	11.04±2.49	1.59±0.43	14.38±2.08	0.45±0.08	4.32±1.30	8.80±2.09	79.54±2.94
	Low dose	9.07±0.99	1.33±0.13	14.82±2.43	0.31±0.06	3.48±0.78	7.29±1.00	80.18±2.53
	High dose	12.45±1.54¹⁾	3.57±0.75¹⁾	28.66±4.50¹⁾	0.55±0.10¹⁾	4.52±1.19	8.15±1.22	65.40±4.48¹⁾
After three days of last dose	Negative control	5.84±1.87	0.75±0.17	13.51±3.34	0.20±0.10	3.44±1.58	4.77±1.70	81.11±3.55
(D88,n=10)	Adjuvant control	7.07±1.86	0.87±0.17	13.07±4.59	0.31±0.17	4.21±1.27	5.74±1.70	80.64±4.80
	Low dose	10.00±2.06¹⁾	2.70±0.79¹⁾	27.90±10.48¹⁾	0.41±0.17¹⁾	4.04±1.42	6.69±1.98	66.09±9.65¹⁾
	High dose	11.09±2.50¹⁾	3.56±1.05¹⁾	32.07±6.70¹⁾	0.57±0.22¹⁾	5.05±0.91	6.73±1.70	60.90±7.01¹⁾
End of recovery period	Negative control	8.34±2.08	2.29±0.76	27.20±6.08	0.32±0.17	3.60±1.25	5.53±1.24	66.80±7.04
(D113,n=5)	Adjuvant control	7.49±2.84	1.52±0.52	20.80±4.58	0.27±0.10	3.76±1.29	5.55±2.37	73.38±5.94
	Low dose	7.85±1.89	1.86±0.76	22.96±6.55	0.27±0.14	3.42±1.49	5.59±1.26	71.68±7.54
	High dose	9.77±1.54	2.57±0.33	26.74±5.00	0.30±0.07	3.16±0.62	6.71±1.41	68.24±5.35

Measure time	Groups	WBC /10⁹·L^-1	Neut /10⁹·L^-1	Neut /%	Mono /10⁹·L^-1	Mono /%	Lymph /10⁹·L^-1	Lymph /%
After three days of first dose	Negative control	8.72±1.44	1.22±0.59	13.62±5.20	0.31±0.11	3.42±0.85	7.07±0.99	81.48±5.64
(D4,n=5)	Adjuvant control	11.04±2.49	1.59±0.43	14.38±2.08	0.45±0.08	4.32±1.30	8.80±2.09	79.54±2.94
	Low dose	9.07±0.99	1.33±0.13	14.82±2.43	0.31±0.06	3.48±0.78	7.29±1.00	80.18±2.53
	High dose	12.45±1.54¹⁾	3.57±0.75¹⁾	28.66±4.50¹⁾	0.55±0.10¹⁾	4.52±1.19	8.15±1.22	65.40±4.48¹⁾
After three days of last dose	Negative control	5.84±1.87	0.75±0.17	13.51±3.34	0.20±0.10	3.44±1.58	4.77±1.70	81.11±3.55
(D88,n=10)	Adjuvant control	7.07±1.86	0.87±0.17	13.07±4.59	0.31±0.17	4.21±1.27	5.74±1.70	80.64±4.80
	Low dose	10.00±2.06¹⁾	2.70±0.79¹⁾	27.90±10.48¹⁾	0.41±0.17¹⁾	4.04±1.42	6.69±1.98	66.09±9.65¹⁾
	High dose	11.09±2.50¹⁾	3.56±1.05¹⁾	32.07±6.70¹⁾	0.57±0.22¹⁾	5.05±0.91	6.73±1.70	60.90±7.01¹⁾
End of recovery period	Negative control	8.34±2.08	2.29±0.76	27.20±6.08	0.32±0.17	3.60±1.25	5.53±1.24	66.80±7.04
(D113,n=5)	Adjuvant control	7.49±2.84	1.52±0.52	20.80±4.58	0.27±0.10	3.76±1.29	5.55±2.37	73.38±5.94
	Low dose	7.85±1.89	1.86±0.76	22.96±6.55	0.27±0.14	3.42±1.49	5.59±1.26	71.68±7.54
	High dose	9.77±1.54	2.57±0.33	26.74±5.00	0.30±0.07	3.16±0.62	6.71±1.41	68.24±5.35

Measure time	Groups	WBC /10⁹·L^-1	Neut /10⁹·L^-1	Neut /%	Mono /10⁹·L^-1	Mono /%	Lymph /10⁹·L^-1	Lymph /%
After three days of first dose	Negative control	9.57±2.13	1.76±1.00	18.48±9.95	0.25±0.14	2.48±1.16	7.38±1.81	76.94±10.42
(D4,n=5)	Adjuvant control	10.44±0.93	1.54±0.38	14.68±3.17	0.39±0.14	3.68±1.21	8.34±0.73	80.02±4.14
	Low dose	10.10±1.66	2.24±0.97	21.78±8.50	0.43±0.11	4.24±1.09	7.28±1.23	72.48±8.97
	High dose	10.23±0.38	2.50±0.76	24.34±6.96	0.39±0.10	3.82±0.90	7.15±0.75	70.04±7.84
After three days of last dose	Negative control	5.18±1.42	0.66±0.22	13.02±3.07	0.17±0.11	3.31±1.54	4.23±1.21	81.55±3.10
(D88,n=10)	Adjuvant control	6.06±2.60	0.65±0.17	11.67±3.61	0.20±0.08	3.59±1.21	5.07±2.36	82.48±3.62
	Low dose	7.52±1.98	2.34±0.58¹⁾	31.79±6.47¹⁾	0.33±0.16¹⁾	4.23±1.26	4.69±1.56	61.87±6.78¹⁾
	High dose	9.29±2.81¹⁾	3.12±1.30¹⁾	33.42±7.88¹⁾	0.43±0.18¹⁾	4.53±0.81	5.51±1.70	59.57±7.90¹⁾
End of recovery period	Negative control	3.59±1.49	0.68±0.20	21.42±9.13	0.12±0.07	3.36±0.86	2.70±1.32	72.70±9.72
(D113,n=5)	Adjuvant control	2.93±0.90	0.57±0.14	19.72±2.45	0.11±0.04	3.78±0.83	2.18±0.72	74.08±2.82
	Low dose	4.00±1.54	0.66±0.12	18.62±6.94	0.23±0.13	5.42±2.32	3.00±1.38	73.00±7.28
	High dose	4.49±1.42	1.11±0.40¹⁾	26.04±8.64	0.20±0.14	4.14±2.13	3.07±1.17	66.64±8.55

Measure time	Groups	WBC /10⁹·L^-1	Neut /10⁹·L^-1	Neut /%	Mono /10⁹·L^-1	Mono /%	Lymph /10⁹·L^-1	Lymph /%
After three days of first dose	Negative control	9.57±2.13	1.76±1.00	18.48±9.95	0.25±0.14	2.48±1.16	7.38±1.81	76.94±10.42
(D4,n=5)	Adjuvant control	10.44±0.93	1.54±0.38	14.68±3.17	0.39±0.14	3.68±1.21	8.34±0.73	80.02±4.14
	Low dose	10.10±1.66	2.24±0.97	21.78±8.50	0.43±0.11	4.24±1.09	7.28±1.23	72.48±8.97
	High dose	10.23±0.38	2.50±0.76	24.34±6.96	0.39±0.10	3.82±0.90	7.15±0.75	70.04±7.84
After three days of last dose	Negative control	5.18±1.42	0.66±0.22	13.02±3.07	0.17±0.11	3.31±1.54	4.23±1.21	81.55±3.10
(D88,n=10)	Adjuvant control	6.06±2.60	0.65±0.17	11.67±3.61	0.20±0.08	3.59±1.21	5.07±2.36	82.48±3.62
	Low dose	7.52±1.98	2.34±0.58¹⁾	31.79±6.47¹⁾	0.33±0.16¹⁾	4.23±1.26	4.69±1.56	61.87±6.78¹⁾
	High dose	9.29±2.81¹⁾	3.12±1.30¹⁾	33.42±7.88¹⁾	0.43±0.18¹⁾	4.53±0.81	5.51±1.70	59.57±7.90¹⁾
End of recovery period	Negative control	3.59±1.49	0.68±0.20	21.42±9.13	0.12±0.07	3.36±0.86	2.70±1.32	72.70±9.72
(D113,n=5)	Adjuvant control	2.93±0.90	0.57±0.14	19.72±2.45	0.11±0.04	3.78±0.83	2.18±0.72	74.08±2.82
	Low dose	4.00±1.54	0.66±0.12	18.62±6.94	0.23±0.13	5.42±2.32	3.00±1.38	73.00±7.28
	High dose	4.49±1.42	1.11±0.40¹⁾	26.04±8.64	0.20±0.14	4.14±2.13	3.07±1.17	66.64±8.55

Measure time	Groups	HGB /g·L^-1	HCT /%	Retic /10¹²·L^-1	Retic /%	MCV /10^-15 L	MCH /10^-12 g	PLT /10¹²·L^-1
After three days of first dose	Negative control	135.8±3.4	44.32±0.97	0.525±0.035	8.35±0.70	70.34±1.72	21.52±0.47	1.23±0.07
(D4,n=5)	Adjuvant control	133.0±3.2	43.12±1.18	0.390±0.060¹⁾	6.24±1.18¹⁾	68.76±3.33	21.20±1.05	1.13±0.16
	Low dose	125.2±4.1¹⁾	41.10±1.64¹⁾	0.340±0.061¹⁾	5.66±1.07¹⁾	68.28±2.34	20.78±0.63	1.19±0.20
	High dose	126.8±0.4¹⁾	41.38±0.44¹⁾	0.334±0.068¹⁾	5.41±1.10¹⁾	66.98±1.61	20.50±0.47	1.15±0.14
After three days of last dose	Negative control	155.3±6.8	49.89±2.22	0.179±0.030	2.05±0.38	57.23±1.76	17.81±0.75	0.91±0.14
(D88,n=10)	Adjuvant control	148.7±7.0	48.25±2.20	0.182±0.034	2.11±0.41	56.08±1.37	17.27±0.68	1.00±0.14
	Low dose	146.3±4.6¹⁾	47.74±1.94	0.183±0.030	2.13±0.39	55.41±1.88	17.01±0.67¹⁾	1.06±0.09¹⁾
	High dose	141.9±5.4¹⁾	46.50±1.83¹⁾	0.137±0.032¹⁾	1.60±0.36¹⁾	54.43±2.06¹⁾	16.60±0.64¹⁾	1.14±0.10¹⁾
End of recovery period	Negative control	166.3±7.8	54.73±3.35	0.197±0.028	2.11±0.39	58.13±1.66	17.70±0.63	0.89±0.08
(D113,n=5)	Adjuvant control	159.4±7.3	52.44±2.03	0.222±0.018	2.41±0.26	56.74±2.35	17.22±0.88	0.90±0.08
	Low dose	157.0±3.7	52.80±1.94	0.199±0.030	2.18±0.37	57.58±3.47	17.14±0.79	0.97±0.10
	High dose	155.6±6.1	52.32±2.42	0.221±0.050	2.31±0.49	54.70±1.23	16.26±0.43¹⁾	0.97±0.08

Measure time	Groups	HGB /g·L^-1	HCT /%	Retic /10¹²·L^-1	Retic /%	MCV /10^-15 L	MCH /10^-12 g	PLT /10¹²·L^-1
After three days of first dose	Negative control	135.8±3.4	44.32±0.97	0.525±0.035	8.35±0.70	70.34±1.72	21.52±0.47	1.23±0.07
(D4,n=5)	Adjuvant control	133.0±3.2	43.12±1.18	0.390±0.060¹⁾	6.24±1.18¹⁾	68.76±3.33	21.20±1.05	1.13±0.16
	Low dose	125.2±4.1¹⁾	41.10±1.64¹⁾	0.340±0.061¹⁾	5.66±1.07¹⁾	68.28±2.34	20.78±0.63	1.19±0.20
	High dose	126.8±0.4¹⁾	41.38±0.44¹⁾	0.334±0.068¹⁾	5.41±1.10¹⁾	66.98±1.61	20.50±0.47	1.15±0.14
After three days of last dose	Negative control	155.3±6.8	49.89±2.22	0.179±0.030	2.05±0.38	57.23±1.76	17.81±0.75	0.91±0.14
(D88,n=10)	Adjuvant control	148.7±7.0	48.25±2.20	0.182±0.034	2.11±0.41	56.08±1.37	17.27±0.68	1.00±0.14
	Low dose	146.3±4.6¹⁾	47.74±1.94	0.183±0.030	2.13±0.39	55.41±1.88	17.01±0.67¹⁾	1.06±0.09¹⁾
	High dose	141.9±5.4¹⁾	46.50±1.83¹⁾	0.137±0.032¹⁾	1.60±0.36¹⁾	54.43±2.06¹⁾	16.60±0.64¹⁾	1.14±0.10¹⁾
End of recovery period	Negative control	166.3±7.8	54.73±3.35	0.197±0.028	2.11±0.39	58.13±1.66	17.70±0.63	0.89±0.08
(D113,n=5)	Adjuvant control	159.4±7.3	52.44±2.03	0.222±0.018	2.41±0.26	56.74±2.35	17.22±0.88	0.90±0.08
	Low dose	157.0±3.7	52.80±1.94	0.199±0.030	2.18±0.37	57.58±3.47	17.14±0.79	0.97±0.10
	High dose	155.6±6.1	52.32±2.42	0.221±0.050	2.31±0.49	54.70±1.23	16.26±0.43¹⁾	0.97±0.08

Measure time	Groups	HGB /g·L^-1	HCT /%	Retic /10¹²·L^-1	Retic /%	MCV /10^-15 L	MCH /10^-12 g	PLT /10¹²·L^-1
After three days of first dose	Negative control	137.2	±10.3	43.84±2.85	0.274±0.087	3.97±1.47	62.30±1.65	19.46±0.38	1.04±0.13
(D4,n=5)	Adjuvant control	139.8	±8.9	44.84±3.65	0.202±0.033	2.85±0.64	62.74±2.18	19.62±0.99	1.10±0.16
	Low dose	126.0	±6.4	40.24±2.28	0.220±0.045	3.46±0.64	63.52±1.81	19.92±0.54	1.18±0.19
	High dose	127.8	±7.6	40.80±3.11	0.238±0.056	3.63±0.84	61.98±0.66	19.44±0.40	1.00±0.17
After three days of last dose	Negative control	146.8	±6.0	45.34±1.64	0.199±0.064	2.55±0.83	58.04±1.85	18.77±0.58	0.96±0.11
(D88,n=10)	Adjuvant control	145.6	±5.3	45.46±1.88	0.191±0.045	2.44±0.57	58.11±1.26	18.61±0.59	1.04±0.15
	Low dose	139.7	±4.1¹⁾	43.66±1.97¹⁾	0.187±0.036	2.45±0.43	57.27±2.03	18.35±0.69	0.99±0.10
	High dose	133.1	±2.1¹⁾	42.02±0.89¹⁾	0.194±0.034	2.60±0.44	56.30±1.02	17.83±0.49¹⁾	1.08±0.11
End of recovery period	Negative control	149.6	±8.9	48.22±3.41	0.169±0.045	2.10±0.53	60.26±1.37	18.70±0.31	0.89±0.23
(D113,n=5)	Adjuvant control	152.4	±10.5	49.40±3.27	0.165±0.035	2.08±0.48	62.06±2.24	19.12±0.68	0.91±0.05
	Low dose	149.2	±6.1	48.24±1.99	0.154±0.016	1.91±0.21	59.88±1.27	18.54±0.56	0.86±0.13
	High dose	146.0	±17.5	48.30±6.08	0.214±0.085	2.85±1.73	60.16±1.66	18.22±0.69	0.84±0.17

Measure time	Groups	HGB /g·L^-1	HCT /%	Retic /10¹²·L^-1	Retic /%	MCV /10^-15 L	MCH /10^-12 g	PLT /10¹²·L^-1
After three days of first dose	Negative control	137.2	±10.3	43.84±2.85	0.274±0.087	3.97±1.47	62.30±1.65	19.46±0.38	1.04±0.13
(D4,n=5)	Adjuvant control	139.8	±8.9	44.84±3.65	0.202±0.033	2.85±0.64	62.74±2.18	19.62±0.99	1.10±0.16
	Low dose	126.0	±6.4	40.24±2.28	0.220±0.045	3.46±0.64	63.52±1.81	19.92±0.54	1.18±0.19
	High dose	127.8	±7.6	40.80±3.11	0.238±0.056	3.63±0.84	61.98±0.66	19.44±0.40	1.00±0.17
After three days of last dose	Negative control	146.8	±6.0	45.34±1.64	0.199±0.064	2.55±0.83	58.04±1.85	18.77±0.58	0.96±0.11
(D88,n=10)	Adjuvant control	145.6	±5.3	45.46±1.88	0.191±0.045	2.44±0.57	58.11±1.26	18.61±0.59	1.04±0.15
	Low dose	139.7	±4.1¹⁾	43.66±1.97¹⁾	0.187±0.036	2.45±0.43	57.27±2.03	18.35±0.69	0.99±0.10
	High dose	133.1	±2.1¹⁾	42.02±0.89¹⁾	0.194±0.034	2.60±0.44	56.30±1.02	17.83±0.49¹⁾	1.08±0.11
End of recovery period	Negative control	149.6	±8.9	48.22±3.41	0.169±0.045	2.10±0.53	60.26±1.37	18.70±0.31	0.89±0.23
(D113,n=5)	Adjuvant control	152.4	±10.5	49.40±3.27	0.165±0.035	2.08±0.48	62.06±2.24	19.12±0.68	0.91±0.05
	Low dose	149.2	±6.1	48.24±1.99	0.154±0.016	1.91±0.21	59.88±1.27	18.54±0.56	0.86±0.13
	High dose	146.0	±17.5	48.30±6.08	0.214±0.085	2.85±1.73	60.16±1.66	18.22±0.69	0.84±0.17

Groups	After three days of last dose (D88,n=10)	End of recovery period (D113,n=5)
Negative control-male	67.28	±4.27	34.71	±1.89	32.57	±2.83	1.08	±0.06	68.45	±5.69	34.13	±2.86	34.33	±2.93	1.00	±0.00
Adjuvant control-male	65.63	±2.45	31.65	±2.28¹⁾	33.98	±0.64	0.94	±0.08¹⁾	69.20	±3.45	34.76	±1.16	34.44	±2.74	1.04	±0.09
Low dose-male	65.71	±2.90	29.74	±1.94¹⁾	35.97	±1.54¹⁾	0.82	±0.04¹⁾	69.78	±3.69	34.10	±0.82	35.68	±2.96	0.96	±0.05
High dose-male	62.47	±1.39¹⁾	27.04	±0.97¹⁾	35.43	±1.07¹⁾	0.76	±0.05¹⁾	69.38	±4.11	33.18	±1.33	36.20	±3.22	0.09	±0.07
Negative control-female	74.10	±4.70	44.02	±2.92	30.08	±2.68	1.49	±0.14	81.04	±5.83	45.76	±4.54	35.28	±1.92	1.30	±0.12
Adjuvant control-female	77.69	±4.61	44.40	±3.20	33.29	±2.32¹⁾	1.33	±0.12¹⁾	81.14	±2.92	47.50	±2.74	33.64	±1.84	1.44	±0.11
Low dose-female	74.35	±6.26	38.94	±5.47¹⁾	35.41	±1.91¹⁾	1.10	±0.17¹⁾	84.82	±4.79	47.50	±2.93	37.32	±2.38	1.28	±0.08
High dose-Female	66.21	±2.92¹⁾	31.85	±1.89¹⁾	34.36	±1.16¹⁾	0.92	±0.04¹⁾	84.12	±6.38	46.02	±2.95	38.10	±3.56	1.20	±0.07

Groups	After three days of last dose (D88,n=10)	End of recovery period (D113,n=5)
Negative control-male	67.28	±4.27	34.71	±1.89	32.57	±2.83	1.08	±0.06	68.45	±5.69	34.13	±2.86	34.33	±2.93	1.00	±0.00
Adjuvant control-male	65.63	±2.45	31.65	±2.28¹⁾	33.98	±0.64	0.94	±0.08¹⁾	69.20	±3.45	34.76	±1.16	34.44	±2.74	1.04	±0.09
Low dose-male	65.71	±2.90	29.74	±1.94¹⁾	35.97	±1.54¹⁾	0.82	±0.04¹⁾	69.78	±3.69	34.10	±0.82	35.68	±2.96	0.96	±0.05
High dose-male	62.47	±1.39¹⁾	27.04	±0.97¹⁾	35.43	±1.07¹⁾	0.76	±0.05¹⁾	69.38	±4.11	33.18	±1.33	36.20	±3.22	0.09	±0.07
Negative control-female	74.10	±4.70	44.02	±2.92	30.08	±2.68	1.49	±0.14	81.04	±5.83	45.76	±4.54	35.28	±1.92	1.30	±0.12
Adjuvant control-female	77.69	±4.61	44.40	±3.20	33.29	±2.32¹⁾	1.33	±0.12¹⁾	81.14	±2.92	47.50	±2.74	33.64	±1.84	1.44	±0.11
Low dose-female	74.35	±6.26	38.94	±5.47¹⁾	35.41	±1.91¹⁾	1.10	±0.17¹⁾	84.82	±4.79	47.50	±2.93	37.32	±2.38	1.28	±0.08
High dose-Female	66.21	±2.92¹⁾	31.85	±1.89¹⁾	34.36	±1.16¹⁾	0.92	±0.04¹⁾	84.12	±6.38	46.02	±2.95	38.10	±3.56	1.20	±0.07

Groups	After three days of last dose (D88,n=10)	End of recovery period (D113,n=5)
Negative control-male	48.17	±10.05	59.62	±3.58	38.23	±3.56	1.58	±0.25	48.34	±2.82	54.55	±4.78	44.09	±4.77	1.26	±0.27
Adjuvant control-male	52.47	±3.58	62.88	±4.24	34.71	±3.98	1.84	±0.34	42.99	±3.27	62.96	±5.56	35.29	±5.40	1.84	±0.44
Low dose-male	53.17	±6.50	57.70	±6.19	39.38	±6.28	1.51	±0.35	46.62	±4.72	60.93	±7.97	37.21	±7.78	1.72	±0.50
High dose-male	45.00	±5.44	65.90	±4.84	30.89	±4.56	2.19	±0.51¹⁾	43.76	±4.12	60.38	±3.45	38.14	±3.45	1.60	±0.26
Negative control-female	55.74	±6.13	64.15	±8.01	33.01	±8.00	2.10	±0.81	50.02	±8.40	60.64	±6.40	38.09	±6.33	1.65	±0.46
Adjuvant control-female	53.81	±4.04	60.69	±6.19	36.40	±5.62	1.72	±0.45	53.74	±8.33	72.55	±2.23¹⁾	26.15	±2.29¹⁾	2.80	±0.36¹⁾
Low dose-female	54.55	±6.99	66.16	±5.40	30.64	±5.47	2.25	±0.64	53.16	±6.27	61.38	±6.14	37.35	±6.10	1.69	±0.37
High dose-female	54.88	±7.83	64.56	±5.91	31.47	±4.92	2.12	±0.52	47.88	±6.48	68.08	±4.52	30.46	±4.50	2.29	±0.50

Groups	After three days of last dose (D88,n=10)	End of recovery period (D113,n=5)
Negative control-male	48.17	±10.05	59.62	±3.58	38.23	±3.56	1.58	±0.25	48.34	±2.82	54.55	±4.78	44.09	±4.77	1.26	±0.27
Adjuvant control-male	52.47	±3.58	62.88	±4.24	34.71	±3.98	1.84	±0.34	42.99	±3.27	62.96	±5.56	35.29	±5.40	1.84	±0.44
Low dose-male	53.17	±6.50	57.70	±6.19	39.38	±6.28	1.51	±0.35	46.62	±4.72	60.93	±7.97	37.21	±7.78	1.72	±0.50
High dose-male	45.00	±5.44	65.90	±4.84	30.89	±4.56	2.19	±0.51¹⁾	43.76	±4.12	60.38	±3.45	38.14	±3.45	1.60	±0.26
Negative control-female	55.74	±6.13	64.15	±8.01	33.01	±8.00	2.10	±0.81	50.02	±8.40	60.64	±6.40	38.09	±6.33	1.65	±0.46
Adjuvant control-female	53.81	±4.04	60.69	±6.19	36.40	±5.62	1.72	±0.45	53.74	±8.33	72.55	±2.23¹⁾	26.15	±2.29¹⁾	2.80	±0.36¹⁾
Low dose-female	54.55	±6.99	66.16	±5.40	30.64	±5.47	2.25	±0.64	53.16	±6.27	61.38	±6.14	37.35	±6.10	1.69	±0.37
High dose-female	54.88	±7.83	64.56	±5.91	31.47	±4.92	2.12	±0.52	47.88	±6.48	68.08	±4.52	30.46	±4.50	2.29	±0.50

Groups	n	N.meningitidis GroupB fHBP-A family strains	N.meningitidis GroupB fHBP-B family strains
Adjuvant control	5	1∶5	<1∶4	1∶28	1∶37	1∶5	1∶6	1∶9	1∶11
Low dose	5	1∶676	1∶2 353	1∶1 783	1∶2 048	1∶194	1∶1 024	1∶676	1∶1 176
High dose	5	1∶1 024	1∶676	1∶1 552	1∶2 048	1∶84	1∶128	1∶388	1∶1 176

Groups	n	N.meningitidis GroupB fHBP-A family strains	N.meningitidis GroupB fHBP-B family strains
Adjuvant control	5	1∶5	<1∶4	1∶28	1∶37	1∶5	1∶6	1∶9	1∶11
Low dose	5	1∶676	1∶2 353	1∶1 783	1∶2 048	1∶194	1∶1 024	1∶676	1∶1 176
High dose	5	1∶1 024	1∶676	1∶1 552	1∶2 048	1∶84	1∶128	1∶388	1∶1 176

重组B群脑膜炎球菌疫苗大鼠安全性和免疫原性研究

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苏桂民 ¹^,² , 纪国存 ¹^,² , 郭通 ¹^,² , 冀颖 ¹^,² , 龙静 ¹^,² , 王欣惠 ¹^,² , 朱卫华 ¹^,² , 杜琳 ¹^,²

中国药学杂志 | 论著 2024,59(2): 118-127

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中国药学杂志 | 论著 2024, 59(2): 118-127

重组B群脑膜炎球菌疫苗大鼠安全性和免疫原性研究

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苏桂民¹^,², 纪国存¹^,², 郭通¹^,², 冀颖¹^,², 龙静¹^,², 王欣惠¹^,², 朱卫华¹^,², 杜琳¹^,²

作者信息

¹ 北京市细菌性疫苗工程技术研究中心, 北京 100176

² 北京智飞绿竹生物制药有限公司研发中心, 北京 100176

苏桂民,男,研究员研究方向:疫苗研发 Tel: (010)67872389

Safety and Immunogenicity of Recombinant Group B Meningococcal Vaccine in Rats

SU Guimin¹^,², JI Guocun¹^,², GUO Tong¹^,², JI Ying¹^,², LONG Jing¹^,², WANG Xinhui¹^,², ZHU weihua¹^,², DU Lin¹^,²

Affiliations

¹ Beijing Bacterial Vaccine Engineering Research Center, Beijing 100176, China

² Vaccine Research and Development Center, Beijing Zhifei Lvzhu Biopharmaceutical Co., Ltd., Beijing 100176, China

出版时间: 2024-01-22 doi: 10.11669/cpj.2024.02.003

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摘要

收起

目的对大鼠重复给予重组B群脑膜炎球菌疫苗,考察该创新疫苗的非临床安全性和免疫原性,为临床设计人用剂量及临床毒副反应的监测提供参考依据。方法使用SD大鼠,设计阴性对照组、佐剂对照组、疫苗低剂量组(每只1剂)和高剂量组(每只3剂)4个主试验组及3个卫星组。于第0、3、6、9、12 周分别肌肉注射,进行临床观察和解剖观察,并对多种组织脏器进行病理学检查。检测体质量、食量、体温、血细胞计数、凝血功能、血液生化、眼科、T淋巴细胞亚群、细胞因子、血清特异性IgG抗体和杀菌抗体等指标。结果低、高剂量重组B群脑膜炎球菌疫苗均能产生高水平的结合抗体,免疫血清具有较强活性的杀菌抗体。低、高剂量组疫苗可引起大鼠中性粒细胞、单核细胞及淋巴细胞显著升高,血红蛋白和红细胞比容显著降低。与给药相关的改变还表现为血清球蛋白升高,白蛋白降低,与之伴随的A/G值降低。4周恢复期后均可恢复正常。与佐剂和疫苗免疫相关的组织病理学改变为注射局部可见轻微至中度肉芽肿性炎症、急性炎症,坐骨神经外膜单个核细胞/混合细胞浸润、增生,淋巴结髓索浆细胞数目及粒细胞系增多等。结论重组B群脑膜炎球菌疫苗对SD大鼠具有良好的免疫原性和安全性,未见免疫毒性反应,可见与铝佐剂和免疫反应相关的外周血液指标变化以及注射部位炎症。本试验剂量下,重组B群脑膜炎球菌疫苗未见不良反应剂量(no observed adverse effect level,NOAEL)为每只3剂。

关键词

重组B群脑膜炎球菌疫苗 / 大鼠 / 免疫原性 / 安全性

Abstract

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OBJECTIVE To investigate the non-clinical safety and immunogenicity of recombinant group B meningococcal vaccine by repeatedly dose to rats, so as to provide reference for designing dose level and monitoring toxicity and side effects in clinical trials. METHODS SD rats were used to design 4 main toxicity groups including negative control group, adjuvant control group, low dose vaccine group (1 dose each) and high dose vaccine group (3 doses each) and 3 satellite groups. The vaccine was dosed by intramuscular injection at weeks 0, 3, 6, 9 and 12 respectively. During the study, all the animals of the main toxicity group were observed for clinical signs, indicators such as body weights, food consumption, body temperature, blood cells counting, coagulation, serum biochemistry, ophthalmology, T lymphocyte subsets and cytokines were detected. Serum specific IgG antibody and bactericidal antibody were measured for satellite animals. All the animals were observed anatomically, main organs were weighed to the calculate viscera/body ratio and the viscera/brain ratio, and various tissues and organs were examined pathologically. RESULTS It could produce high-leveled binding antibodies and bactericidal antibodies with strong activity in immune serum that rats injected the low and high doses of recombinant group B meningococcal vaccines. Both the low and high dose vaccines caused the increases in neutrophils, monocytes and lymphocytes significantly, the decreases in hemoglobin and RBC significantly. Other dose-related changes involved the increase in serum globulin and decrease in albumin, with concomitant decrease in A/G, which basically returned to normal after 4 weeks of recovery period. The histopathological findings associated with adjuvant and vaccine were mild or moderate granulomatous inflammation, acute inflammation in injection site, infiltration and proliferation of mononuclear cells/mixed cells in the sciatic membrane, and increased number of myeloid plasma cells and granulocytes in lymph nodes. CONCLUSION Recombinant group B meningococcal vaccine had good immunogenicity and safety profile in SD rats, there is no immune toxicity reaction. It is obvious that adjuvant and vaccine-related changes in indicators of peripheral blood and the inflammation response in injection site. Under the dose levels of this study, there is no adverse effect level on recombinant B group meningococcal vaccine for 3 doses/one rat.

Key words

recombinant group B meningococcal vaccine / rat / immunogenicity / safety

引用本文

苏桂民, 纪国存, 郭通, 冀颖, 龙静, 王欣惠, 朱卫华, 杜琳. 重组B群脑膜炎球菌疫苗大鼠安全性和免疫原性研究. 中国药学杂志, 2024 , 59 (2) : 118 -127 . DOI: 10.11669/cpj.2024.02.003

SU Guimin, JI Guocun, GUO Tong, JI Ying, LONG Jing, WANG Xinhui, ZHU weihua, DU Lin. Safety and Immunogenicity of Recombinant Group B Meningococcal Vaccine in Rats[J]. Chinese Pharmaceutical Journal, 2024 , 59 (2) : 118 -127 . DOI: 10.11669/cpj.2024.02.003

正文

收起

脑膜炎球菌是引起流行性脑脊髓膜炎(简称流脑)的主要病原体,按荚膜多糖划分为12个血清群,其中A、B、C、X、Y和W₁₃₅群几乎覆盖了全球所有流脑病例的致病菌群^[1-3]。近年来,随着A、C、Y、W₁₃₅群脑膜炎球菌荚膜多糖疫苗或多糖结合疫苗的推广使用,B群流脑开始在多个国家占有相当大的发病比例^[4]。2015-2019年中国境内报告流脑病例共540例,年均发病率为0.78/1 000万,在296例脑膜炎球菌血清群阳性病例中,A、B、C、W₁₃₅、Y及不可分群分别占4.73%、36.15%、22.97%、6.08%、1.69%、28.38%,其中0~4岁、5~9岁病例中B群病例分别占58.56%、55.00%,呈现儿童高发B群流脑态势^[5-6]。

与A、C、Y、W₁₃₅群多糖疫苗不同,B群多糖的主要成分是α(2→8)-N-乙酰神经氨酸聚合物,是人中枢神经系统抗原类似物,作为疫苗成分,其免疫原性弱且存在导致自身免疫性疾病的风险^[7],因而B群脑膜炎球菌疫苗研发采用的为蛋白疫苗策略。国外研发上市B群疫苗主要为外膜囊泡(outer membrane vesicle,OMV)疫苗及重组蛋白疫苗,其中OMV疫苗是PorA蛋白作为主要抗原成分的囊泡疫苗,由于PorA蛋白序列具有高度保守性,其不能对所有致病流行株形成广泛有效的保护效果^[8-10]。蛋白类疫苗Trumenba^®疫苗(Pfizer)和Bexsero^®疫苗(GSK)2种,已分别于2014年10月和2015年1月获得美国食品药品监督管理局(FDA)批准上市,均含有H因子结合蛋白(fHBP)作为抗原成分。fHBP蛋白是几乎表达在所有B群脑膜炎球菌流行株的一种脂蛋白^[11],根据氨基酸序列和抗原性分为fHBP-A、fHBP-B亚家族^[12]2个亚家族,每种B群菌株只表达1种fHBP蛋白,且不相互交叉保护^[13-14]。Trumenba疫苗筛选了2个fHBP蛋白亚家族代表性的各一蛋白作为抗原成分^[15],临床试验和医学调查证实其对分离的致病菌株具有免疫保护作用,扩展了对B群流行株的保护范围^[16]。我国20世纪90年代开始,Wang等^[17-18]已开展B群外膜蛋白类抗原研究及流脑分型抗体制备工作,为我国B群流脑疫苗研发奠定了基础。近年来B群OMV、蛋白结合多糖及融合蛋白等^[19-21]作疫苗成分的免疫原性研究均有大量报道,但国内至今未有实现商品化的B群疫苗。

重组B群脑膜炎球菌疫苗(大肠杆菌)是国内正在研发的创新型疫苗,选取fHBP-A、fHBP-B亚家族蛋白为有效成分。本研究对大鼠重复肌肉注射该重组B群疫苗,考察疫苗的安全性、有效性和对主要脏器的损害及影响程度,为临床设计人用剂量和监测其毒副反应提供参考依据。

1 材料和方法

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1.1 受试物和对照品

重组B群脑膜炎球菌疫苗(大肠杆菌,将fHBP-A和fHBP-B蛋白基因克隆至大肠埃希菌,经发酵培养、诱导表达,将菌体破碎离心,层析纯化制成纯化蛋白原液,加入磷酸铝佐剂吸附后混合制成疫苗,含有fHBP-A和fHBP-B蛋白各60 μg,批号:20200801)、佐剂对照品(批号: 20200616、20200922)(北京智飞绿竹生物制药有限公司);阴性对照品为0.9%氯化钠注射液(生理盐水,山东齐都药业有限公司,批号:6B19111301,6B20060706)。

1.2 实验动物和饲养条件

SPF级SD大鼠,6~7周龄,共150只,雌雄各半(北京维通利华实验动物技术有限公司,合格证编号:110011201107518884、110011201107518986)。体重范围:140~220 g。饲养于聚碳酸酯盒中,20~26 ℃,湿度40%~70%,光照约12 h明暗交替。

1.3 试剂和仪器

HRP标记山羊抗大鼠多克隆抗体(美国Sigma公司)、fHBP抗体检测用预包被酶标板(北京智飞绿竹生物制药有限公司);LEGENDplex^TM大鼠检测试剂盒(BioLegend公司);四甲基联苯胺(TMB)显色液;牛肉粉琼脂;氯化三苯基四氮唑(TTC)染料(美国Sigma公司);苏木精-伊红(HE)染料等。

Advia2120型全自动血球分析仪(德国Siemens公司);CA-1500型全自动血凝分析仪(日本Sysmex公司);Cobas6500型尿检分析仪(瑞士Roche公司);FACS Calibur 流式细胞仪(美国BD公司);DxFLEX流式细胞仪(美国Beckman公司);酶标仪(美国MDC公司);生物安全柜(新加坡ESCO公司);二氧化碳培养箱(美国Thermo公司);涂片机,显微镜,包埋机,切片机等。

1.4 研究设计

使用Provantis 9.4.3.0系统动物管理模块将动物按性别区段随机分为7组,包括主试验组4个组别:阴性对照组、佐剂对照组、低剂量组(每只1剂)、高剂量组(每只3剂)和3个卫星组,主试验组每组每性别15只动物,卫星组每组每性别5只动物。肌肉注射给药,多点注射。在0、3、6、9、12周各给药1次,连续给药共5次,恢复期4周。

试验期间对所有动物进行临床观察,对主试验组动物统计体质量和摄食量,进行眼科检查、血细胞计数、凝血功能、血液生化、尿液分析、免疫学指标T淋巴细胞亚群、细胞因子等测定,并大体解剖观察,及骨髓涂片、脏器称重和组织病理学等检查。

卫星组采集血液检测血清抗体效价,并检测血清杀菌滴度。血清杀菌试验参照Ingeborg S.Aaberge^[22]的方法进行,其中B群脑膜炎球菌Nm211009和Nm450522等株fHBP蛋白属于A亚家族,Nm311302和Nm311113等株fHBP蛋白属于B亚家族,菌株均来自于中国疾病预防控制中心。

1.5 数据采集与统计方法

使用Provantis 9.4.3.0系统采集数据或导入数据,使用SAS 9.2软件进行方差分析、Dunnett's多重比较(参数法)等统计分析。

2 结果

收起

2.1 症状观察、注射部位观察、体质量、摄食量、体温和眼科检查

动物临床观察未见异常反应,各组动物给药局部观察未见红斑、充血、肿胀、溃疡和硬结异常反应。从入组前1周(D-7)至恢复期结束前(第112天,D112),与阴性对照组比较,佐剂和疫苗各剂量组动物体重均未见有统计学意义的显著变化(P>0.05),雌、雄性动物各组间体重在各时间点均无明显差异(P>0.05)。给予重组B群脑膜炎球菌疫苗未对大鼠体质量、摄食量、体温和眼部产生明显影响,见图1~2。

2.2 血液学测定

与同期同性别阴性对照组比较,首次给药后3 d(第4天,D4):高剂量组雄性动物可见中性粒细胞(Neut)计数和百分比、单核细胞(Mono)计数显著升高和淋巴细胞(Lymph)百分比显著降低;末次给药后3 d(第88天,D88):低、高剂量组雌雄动物均可见Neut计数和百分比、Mono计数升高和Lymph百分比降低,低、高剂量组雄性动物的白细胞计数升高,而雌性动物只有高剂量组升高,见表1~2。4周恢复期结束(第113天,D113),以上改变可见恢复或恢复趋势。

首次给药后3 d(D4),低、高剂量组的血红蛋白(HGB)浓度和红细胞比容(HCT)百分比显著降低或呈降低趋势,末次给药后3 d(D88),低、高剂量组均表现为显著降低。此外,首次给药后佐剂对照组和低、高剂量组雄性动物Retic浓度和百分比降低,雌性动物并不明显,末次给药后3 d(D88),只有高剂量雄性动物网织红细胞(Retic)仍显著降低,直至4周恢复期结束(D113)。另外,雌雄动物表现不同的是,末次给药后3 d(D88)高剂量组雄性动物平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)的明显降低和血小板(PLT)水平明显升高,而同时期雌性动物只有高剂量的MCH变化显著(表3~4)。

以上差异具有统计学意义(P≤0.05),可能与给予供试品后引起的免疫反应和或局部刺激性相关,4周恢复期结束(D113),以上改变可见恢复或恢复趋势。

2.3 血液生化

末次给药后3 d(D88),佐剂对照组和低、高剂量组与给药相关的异常改变主要表现为球蛋白(Glb)浓度升高,白蛋白(Alb)浓度降低,以及与之伴随的白蛋白/球蛋白(A/G)显著降低,高剂量组动物的血清总蛋白(TP)水平同样显著降低,见表5。

此外,首、末次给药后次日(D2、D86),佐剂对照组和低、高剂量组雌雄动物可见凝血纤维蛋白(FIB)浓度升高,首、末次药后3 d(D4、D88)仍处于显著增高水平,但呈现一定的恢复趋势。多数指标的改变具有统计学意义(P≤0.05),结合疫苗的作用机制和方式,认为可能与给予佐剂或疫苗后引起的免疫反应和局部刺激性有关,见图3。4周恢复期结束(D113),以上各项指标均明显恢复。其他生化指标未见与给药相关的异常改变。

2.4 淋巴细胞亚群分布、细胞因子

各组动物的T淋巴细胞亚群未见与给药相关的异常改变。末次给药后3 d(D88)高剂量组雄性动物CD3⁺CD4⁺/CD3⁺CD8⁺升高,为阴性对照组均值的1.38倍,见表6。4周恢复期结束(D113),佐剂对照组雌性动物CD3⁺CD4⁺水平升高和CD3⁺CD8⁺水平降低,随之CD3⁺CD4/CD3⁺CD8⁺显著升高,由于仅单性别可见且未见明显规律性改变,因此不具有毒理学意义。

首次给药后和末次给药后1~2 h(D1、D85),低、高剂量组动物的TNF-α和IL-6均可见显著升高,且首次给药后升高幅度大于末次给药后,高剂量组升高幅度大于低剂量组,可能与给药后引起的免疫反应相关。末次给药后3 d(D88)和4周恢复期结束(D113),各组动物的TNF-α、IL-6未见明显异常改变,见图4。

2.5 血清抗体效价

低、高剂量组均能产生高水平的特异性IgG抗体,表现出相似的变化规律。在免疫初期,血清抗体水平表现出一定的剂量相关性,随着免疫次数增加,抗体水平在低、高剂量组之间无明显差异,见图5。首次给药后3周(第21天,D21),低、高剂量组均产生抗fHBP-A、抗fHBP-B 2种抗原的结合抗体,低剂量小于高剂量;给药后6周(第42天,D42)2种抗原的结合抗体水平基本达到峰值,均在1∶2¹⁷以上,无剂量差异;给药后6、9、12周甚至恢复期结束一直保持在较高水平。

2.6 杀菌抗体滴度

以B群脑膜炎球菌Nm210902、Nm450522株(A亚家族)和Nm311302、Nm311113株(B亚家族)作为靶菌检测血清的杀菌活性,见表7、图6,3次免疫后(第63天,D63)血清对靶菌均表现出显著的杀菌活性。与佐剂对照相比,低、高剂量血清对A亚家族两个菌株的杀菌滴度均大于1∶512,与佐剂对照呈显著差异,且雌雄动物表现相近;对B亚家族两个菌株的杀菌滴度不小于1:388,与佐剂对照差异显著,雌性稍高于雄性。其中对Nm311302菌株,低剂量组血清平均滴度1∶1 024、1∶676,显著高于高剂量组的1∶588、1∶512,体现出剂量效应和菌株特殊性,Nm311113菌株,低、高剂量血清杀菌呈现相似变化。

2.7 脏器质量和病理学检查

与阴性对照组相比,低和高剂量组动物脾脏和肝脏脏器质量略有增加,导致脏体比或脏脑比小幅度增加,但未引起显著影响。

佐剂对照组和低、高剂量组动物引起双侧注射部位肌肉白色斑块的大体病理学改变见图7A~7F,注射局部轻微至中度肉芽肿性炎症,并大多数动物伴有注射局部肌肉可见轻微至中度急性炎症,坐骨神经外膜轻度单个核细胞或混合炎细胞浸润,考虑为注射局部炎症蔓延至周围邻近组织,同时病变发生率疫苗组高于佐剂对照组。4周恢复期结束,以上病理变化完全恢复或呈现一定的恢复趋势。另外,动物腹股沟淋巴结出现轻度至中度髓索浆细胞数目增多,及胸骨骨髓轻微粒细胞系增多的现象,可能与肌肉注射疫苗后产生的免疫反应有关。恢复期结束(D113),上述改变可见完全恢复。其他脏器组织未见与给药相关的毒性病理改变,见图7G~7J。

3 讨论

收起

首次给药后和末次给药后3 d,低、高剂量组雌雄动物均出现WBC、Neut、Mono、Glb水平升高,中性粒细胞Neut在非特异性免疫中起着十分重要的作用,具有很强的吞噬活性^[23],而单核细胞Mono在特异性免疫应答的诱导和调控中起关键作用^[24],所以导致白细胞计数WBC显著升高。首、末次给药后次日和3 d后FIB始终处于显著升高水平,这可能纤维蛋白FIB促进组织血运重建,伤口愈合和组织修复的作用有关^[25-26],同时给药后引起的TNF-α和IL-6的短时间内升高,结合蛋白疫苗的作用机制和方式,该变化与给药后引起的免疫反应与局部刺激性有关。

病理学检查中,低和高剂量组分别有13/20和17/20动物出现的注射局部肌肉轻微至中度急性炎症;3/20和6/20动物腹股沟淋巴结发生轻度至中度髓索浆细胞数目增多;以及10/20和16/20动物胸骨骨髓发生轻微至轻度粒细胞系增多现象。上述变化均与注射疫苗后引起的免疫反应相关。恢复期结束后上述改变均完全恢复。

佐剂对照组和低、高剂量组注射局部均有与铝佐剂相关的轻微至中度肉芽肿性炎症,与铝佐剂可导致注射局部炎症反应的文献报道一致^[27],反应性质与本试验相同且恢复需要较长时间。佐剂对照组和低、高剂量组分别有6/20、14/20、15/20动物坐骨神经外膜可见轻微至轻度单个核细胞/混合炎细胞浸润,可能为注射局部炎症蔓延至周围邻近组织所致。4周恢复期结束上述改变尚未恢复,但呈现明显的恢复趋势。

低、高剂量组均可诱导SD大鼠产生较高水平的特异性IgG抗体,且4周恢复期结束抗体滴度仍维持在较高水平未见降低。4株B群脑膜炎球菌流行株的杀菌活性显示,低、高剂量组均表现为显著的杀菌活性,从而表明疫苗针对B群脑膜炎球菌流行株的高效预防作用。

因此,采用每只1剂和每只3剂的重组B群脑膜炎球菌疫苗,在第 0、3、6、9、12 周分别肌肉注射注射SD大鼠,低、高剂量疫苗均能引起大鼠中性粒细胞、单核细胞及淋巴细胞显著升高,血清球蛋白升高,与之伴随的A/G值降低。低、高剂量疫苗和佐剂均引起双侧注射部位肌肉白色斑块的病理学改变及注射部位轻微至中度肉芽肿性炎症、急性炎症,坐骨神经外膜单个核细胞或混合细胞浸润,淋巴结髓索浆细胞数目增多及骨髓粒细胞系增多等,4周恢复期结束后病变完全或部分恢复,该病理学改变主要与疫苗中所含磷酸铝佐剂有关。重组B群脑膜炎球菌疫苗对SD大鼠有良好的免疫原性和较好的安全性,无明显毒性剂量为每只3剂。本实验为评价重组B群脑膜炎球菌疫苗的非临床安全性提供了重要研究结果,为临床设计人用剂量和临床不良反应的监测提供了参考。

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文献

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2024年第59卷第2期

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doi: 10.11669/cpj.2024.02.003

接收时间：2022-12-25
首发时间：2025-11-13
出版时间：2024-01-22

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收稿日期：2022-12-25

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¹ 北京市细菌性疫苗工程技术研究中心, 北京 100176

² 北京智飞绿竹生物制药有限公司研发中心, 北京 100176

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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Groups	After three days of last dose (D88,n=10)								End of recovery period (D113,n=5)
Groups	TP/g·L^-1		Alb/g·L^-1		Glb/g·L^-1		A/G		TP/g·L^-1		Alb/g·L^-1		Glb/g·L^-1		A/G
Negative control-male	67.28	±4.27	34.71	±1.89	32.57	±2.83	1.08	±0.06	68.45	±5.69	34.13	±2.86	34.33	±2.93	1.00	±0.00
Adjuvant control-male	65.63	±2.45	31.65	±2.28¹⁾	33.98	±0.64	0.94	±0.08¹⁾	69.20	±3.45	34.76	±1.16	34.44	±2.74	1.04	±0.09
Low dose-male	65.71	±2.90	29.74	±1.94¹⁾	35.97	±1.54¹⁾	0.82	±0.04¹⁾	69.78	±3.69	34.10	±0.82	35.68	±2.96	0.96	±0.05
High dose-male	62.47	±1.39¹⁾	27.04	±0.97¹⁾	35.43	±1.07¹⁾	0.76	±0.05¹⁾	69.38	±4.11	33.18	±1.33	36.20	±3.22	0.09	±0.07
Negative control-female	74.10	±4.70	44.02	±2.92	30.08	±2.68	1.49	±0.14	81.04	±5.83	45.76	±4.54	35.28	±1.92	1.30	±0.12
Adjuvant control-female	77.69	±4.61	44.40	±3.20	33.29	±2.32¹⁾	1.33	±0.12¹⁾	81.14	±2.92	47.50	±2.74	33.64	±1.84	1.44	±0.11
Low dose-female	74.35	±6.26	38.94	±5.47¹⁾	35.41	±1.91¹⁾	1.10	±0.17¹⁾	84.82	±4.79	47.50	±2.93	37.32	±2.38	1.28	±0.08
High dose-Female	66.21	±2.92¹⁾	31.85	±1.89¹⁾	34.36	±1.16¹⁾	0.92	±0.04¹⁾	84.12	±6.38	46.02	±2.95	38.10	±3.56	1.20	±0.07

Groups	After three days of last dose (D88,n=10)								End of recovery period (D113,n=5)
Groups	CD3⁺ /%		CD3⁺CD4⁺ /%		CD3⁺CD8⁺ /%		CD3⁺CD4⁺/ CD3⁺CD8⁺		CD3⁺ /%		CD3⁺CD4⁺ /%		CD3⁺CD8⁺ /%		CD3⁺CD4⁺/ CD3⁺CD8⁺
Negative control-male	48.17	±10.05	59.62	±3.58	38.23	±3.56	1.58	±0.25	48.34	±2.82	54.55	±4.78	44.09	±4.77	1.26	±0.27
Adjuvant control-male	52.47	±3.58	62.88	±4.24	34.71	±3.98	1.84	±0.34	42.99	±3.27	62.96	±5.56	35.29	±5.40	1.84	±0.44
Low dose-male	53.17	±6.50	57.70	±6.19	39.38	±6.28	1.51	±0.35	46.62	±4.72	60.93	±7.97	37.21	±7.78	1.72	±0.50
High dose-male	45.00	±5.44	65.90	±4.84	30.89	±4.56	2.19	±0.51¹⁾	43.76	±4.12	60.38	±3.45	38.14	±3.45	1.60	±0.26
Negative control-female	55.74	±6.13	64.15	±8.01	33.01	±8.00	2.10	±0.81	50.02	±8.40	60.64	±6.40	38.09	±6.33	1.65	±0.46
Adjuvant control-female	53.81	±4.04	60.69	±6.19	36.40	±5.62	1.72	±0.45	53.74	±8.33	72.55	±2.23¹⁾	26.15	±2.29¹⁾	2.80	±0.36¹⁾
Low dose-female	54.55	±6.99	66.16	±5.40	30.64	±5.47	2.25	±0.64	53.16	±6.27	61.38	±6.14	37.35	±6.10	1.69	±0.37
High dose-female	54.88	±7.83	64.56	±5.91	31.47	±4.92	2.12	±0.52	47.88	±6.48	68.08	±4.52	30.46	±4.50	2.29	±0.50

Groups	n	N.meningitidis GroupB fHBP-A family strains				N.meningitidis GroupB fHBP-B family strains
		Nm210902		Nm450522		Nm311302		Nm311113
		Male	Female	Male	Female	Male	Female	Male	Female
Adjuvant control	5	1∶5	<1∶4	1∶28	1∶37	1∶5	1∶6	1∶9	1∶11
Low dose	5	1∶676	1∶2 353	1∶1 783	1∶2 048	1∶194	1∶1 024	1∶676	1∶1 176
High dose	5	1∶1 024	1∶676	1∶1 552	1∶2 048	1∶84	1∶128	1∶388	1∶1 176