畜牧兽医学报

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抗鸡沙门菌的乳酸杆菌菌株筛选与鉴定

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梁玥 , 陈静 , 张茹梦 , 孔娜 , 谷雅倩 , 陈思琪 , 赵思惠 , 韩琪琪 , 刘华珍

畜牧兽医学报 | 基础兽医 2026,57(2): 1074-1086

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畜牧兽医学报 |基础兽医 2026 , 57 (2) : 1074 -1086

抗鸡沙门菌的乳酸杆菌菌株筛选与鉴定

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梁玥，主要从事家禽肠道微生物的研究，E-mail： yueliang1002@webmail.hzau.edu.cn

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梁玥, 陈静, 张茹梦, 孔娜, 谷雅倩, 陈思琪, 赵思惠, 韩琪琪, 刘华珍

作者信息

华中农业大学动物医学院，武汉 430070

通讯作者:

刘华珍，主要从事家禽肠道微生物及家禽免疫研究，E-mail：lhz219@mail.hzau.edu.cn

作者简介:

梁玥，主要从事家禽肠道微生物的研究，E-mail： yueliang1002@webmail.hzau.edu.cn

Screening and Identification of Lactobacillus Strains against Salmonella for Chicken

Yue LIANG, Jing CHEN, Rumeng ZHANG, Na KONG, Yaqian GU, Siqi CHEN, Sihui ZHAO, Qiqi HAN, Huazhen LIU

Affiliations

College of Veterinary Medicine，Huazhong Agricultural University，Wuhan 430070，China

Corresponding Author:

LIU Huazhen， E-mail： lhz219@mail.hzau.edu.cn

出版时间: 2026-02-23 doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2026.02.041

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摘要

收起

本研究旨在筛选与鉴定抗鸡沙门菌的乳酸杆菌菌株，为养鸡业提供抗生素替代品。采用MRS培养基从鸡空肠内容物中分离乳酸杆菌，通过体外抑菌能力、耐酸能力、产酶能力和黏附性能指标筛选候选菌株，并选择1日龄AA肉鸡进行菌株移植28 d，观察其对鸡生长发育的影响，并在42 d进行沙门菌感染试验验证其抑制沙门菌能力，最终鉴定抗鸡沙门菌的乳酸杆菌菌株。结果显示：共分离鉴定27株乳酸杆菌（包括13株唾液联合乳杆菌、11株罗伊氏黏液乳杆菌、2株约氏乳杆菌和1株格氏乳杆菌），其中唾液联合乳杆菌S31菌株可显著抑制鼠伤寒沙门菌和鸡伤寒沙门菌，在pH 3.0时存活率大于50%，可产蛋白酶、脂肪酶，提示S31菌株不仅具有较强抑制沙门菌能力，还具有胃肠道适应性及潜在的益生功能。动物试验结果显示，唾液联合乳杆菌S31菌株移植28 d可显著增加受体鸡体重（P<0.000 1）、腿肌重（P<0.001）、胸肌重（P<0.01）、空肠长度（P<0.01）、肠绒毛长度（P<0.05）、杯状细胞数量（P<0.05）、空肠乳酸杆菌丰度（P<0.05），提示S31菌株可促进鸡生长发育。在42 d进行沙门菌感染，唾液联合乳杆菌S31菌株移植组脾脏载菌量（P<0.05）、回肠TLR-4、MyD88和AP-1信号通路转录水平（P<0.01）和促炎因子IL-1β、IL-6和IL-12转录水平（P<0.05）均显著低于对照组，空肠和回肠结构完整。综上，唾液联合乳杆菌S31菌株不仅具备较强的抑制沙门菌能力，还有良好的胃肠道适应性及优良的促生长功能，具有潜在应用价值。

关键词

鸡 / 乳酸杆菌 / 沙门菌 / 抑菌能力

Abstract

收起

The aim of this study was to identify the Lactobacillus strains that are resistant to Salmonella and provide antibiotic alternatives for the chicken industry. Lactobacillus were isolated from chicken jejunal contents using MRS medium， candidate strains were screened by in vitro bacterial inhibition， acid resistance， enzyme production and adhesion， selected strains were orally administered to one-day-old AA chickens for 28 days to evaluate their effects on growth performance. At 42 days， a Salmonella challenge test was conducted to validate the inhibitory effect against salmonellosis， finally the Lactobacillus strain resistant to Salmonella was identified. Results A total of 27 Lactobacillus strains （including 13 strains of Ligilactobacillus salivarius， 11 strains of Limosilactobacillus reuteri， 2 strains of Lactobacillus johnsonii， and 1 strain of Lactobacillus gasseri） were isolated and identified， among which L. salivarius S31 could significantly inhibit Salmonella Typhimurium and Salmonella Gallinarum， with survival rate of more than 50% at pH 3.0， and produce protease and lipase. This suggests that S31 strain not only has a strong ability to inhibit Salmonella， but also has gastrointestinal adaptability and potential probiotic function. The results of animal experiments showed that the transplantation of L. salivarius S31 strain for 28 d significantly increased the body weight （P<0.000 1）， leg muscle weight （P<0.001）， breast muscle weight （P<0.01）， jejunum length （P<0.01）， intestinal villi length （P<0.05）， goblet cell counts （P<0.05）， and abundance of Lactobacillus in jejunum of the chickens （P<0.05）， which suggests that S31 strain can promote the growth of chickens. The Salmonella attacking was carried out at 42 days， and bacterial load of the spleen （P<0.05）， the transcription levels of TLR-4， MyD88 and AP-1 signaling pathways in the ileum （P<0.01）， and the transcription levels of pro-inflammatory factors IL-1β， IL-6 and IL-12 （P<0.05） in L. salivarius S31 transplantation group were significantly lower than those in the control group， and the jejunum and ileum structures were intact. L. salivarius S31 strain exhibits robust Salmonella-inhibitory capacity， favorable gastrointestinal adaptability， and superior growth-promoting properties， demonstrating significant potential for practical applications.

Key words

chicken / Lactobacillus / Salmonella / antibacterial activity

引用本文

梁玥, 陈静, 张茹梦, 孔娜, 谷雅倩, 陈思琪, 赵思惠, 韩琪琪, 刘华珍. 抗鸡沙门菌的乳酸杆菌菌株筛选与鉴定. 畜牧兽医学报, 2026 , 57 (2) : 1074 -1086 . DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2026.02.041

Yue LIANG, Jing CHEN, Rumeng ZHANG, Na KONG, Yaqian GU, Siqi CHEN, Sihui ZHAO, Qiqi HAN, Huazhen LIU. Screening and Identification of Lactobacillus Strains against Salmonella for Chicken[J]. Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica, 2026 , 57 (2) : 1074 -1086 . DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2026.02.041

正文

收起

在我国养禽业中，禽沙门菌病的发病率约占禽发病总数的30%，已成为严重危害养禽业健康发展的重要疾病之一^［1］。沙门菌感染不仅影响鸡生长性能，还通过污染肉、蛋及其制品威胁公共卫生安全，引发食品安全问题^［2］。有数据显示，我国生鸡肉被沙门菌污染率高达26.4%，对动物性食品安全和人类健康有潜在影响^［3］。美国因家禽造成的食源性疾病占比17.9%，每年经济损失高达28亿美元^［4⁃5］。欧盟报告多国疫情中沙门菌关联最多，其中肠炎沙门菌是蛋类鸡蛋制品中的主要致病菌，由其引发的疫情和病例数量居所有致病菌/食品组合首位^［6］。有研究表明，沙门菌可在肠上皮细胞表面定植并迁移到全身，通过多种毒力因子和机制引发全身感染^［7⁃9］。经典的抗生素治疗方式无法将其从受感染鸡群中全部根除，这可能是导致沙门菌感染率居高不下的重要原因。大量研究表明，肠道益生菌不仅能促进机体生长发育，还与病原菌之间存在复杂的相互作用，能有效抑制沙门菌的生长和定植^［10］。因此，开发基于益生菌的替代策略具有巨大潜力。乳酸杆菌作为鸡小肠内的优势菌属，不仅可通过竞争定植表位抑制沙门菌，还可产生有机酸、过氧化氢、胞外多糖、蛋白或肽类等抑菌物质抑制沙门菌^{［11⁃12］}。乳酸杆菌种类多样，不同乳酸杆菌的功能存在差异。因此，本研究旨在分离鉴定抗鸡沙门菌的乳酸杆菌菌株，为禽类生产实践提供新益生菌资源，推动养鸡业可持续发展。

1　材料与方法

收起

1.1　试验材料

1.1.1　试验动物

选择4周龄生长性能优良的桂山凰鸡，取空肠内容物进行乳酸杆菌分离鉴定。选择1日龄AA肉鸡（公）作为候选菌株移植和沙门菌感染试验动物。所有动物试验均获得华中农业大学科学伦理委员会批准（批准号：HZAUCH-2018-008）。

1.1.2　培养基

LB培养基：胰蛋白胨10 g·L^-1，NaCl 10 g·L^-1，酵母提取物5 g·L^-1。

NA液体培养基：胰蛋白胨5 g·L^-1，NaCl 5 g·L^-1，牛肉浸粉3 g·L^-1。

蛋白酶鉴别培养基：牛肉膏5 g·L^-1，蛋白胨10 g·L^-1，NaCl 1 g·L^-1，琼脂粉15 g·L^-1，脱脂乳粉15 g·L^-1，115 ℃ 20 min高压蒸汽灭菌。

淀粉酶鉴别培养基：蛋白胨5 g·L^-1，酵母提取物5 g·L^-1，NaCl 5 g·L^-1，可溶性淀粉10 g·L^-1，K₂HPO₄ 1 g·L^-1，KH₂PO₄ 1 g·L^-1，MgSO₄·7H₂O 0.4 g·L^-1，琼脂粉10 g·L^-1。

脂肪酶鉴别培养基：蛋白胨10 g·L^-1，酵母提取物5 g·L^-1，NaCl 10 g·L^-1，琼脂粉10 g·L^-1，三丁酸甘油酯乳化液40 mL·L^-1（2%聚乙烯醇匀液∶三丁酸甘油酯=1∶9，磁力搅拌）。

1.1.3　主要试剂

MRS肉汤（HB0384-1）和琼脂粉（HB8274-1）（青岛海博生物技术有限公司）；2×Hieff ® PCR Master Mix（With Dye）（上海翌圣生物科技股份有限公司）；DL2000 DNA Marker、RNAiso Plus（9108）、反转录试剂盒（RR036A）和荧光定量PCR试剂盒（RR820A）（北京宝日医生物技术有限公司）；革兰氏染色试剂盒（SL7040）（北京酷来搏科技有限公司）；组织DNA提取试剂盒（D3396-01）（广州飞扬生物工程有限公司）。

1.1.4　沙门菌菌株

用于体外抑菌试验的指示菌为鼠伤寒沙门菌（CP112994.1菌株）及鸡伤寒沙门菌（CICC 21510菌株），用于动物感染试验的为鸡伤寒沙门菌（CICC 21510菌株），保存于华中农业大学动物组织胚胎学实验室。

1.1.5　主要仪器

高压蒸汽灭菌锅（HVE-50）（华粤企业集团有限公司）；微生物生长曲线全自动曲线分析仪（FLUOstar OMEGA）（美国BioDot公司）；pH计（武汉鑫星星科学仪器公司）；荧光定量PCR仪（BIO-RAD CFX384）（上海伯乐生命医学产品有限公司）；超微量紫外分光光度计（F-2100）（杭州遂真生物技术有限公司）。

1.2　乳酸杆菌菌株的分离鉴定

取鸡空肠内容物样品，采用MRS固体培养基37 ℃培养48 h后，挑取优势单菌落进行纯化培养，并通过革兰染色观察菌体形态。以纯化菌液为模板，使用细菌通用引物（F：5’-AGAGTTTG- ATCCTGGCTCAG-3’； R：5’-GGTTACCTTG- TTACGACTT-3’）进行PCR扩增所筛菌株16S rRNA基因。扩增产物送至生工生物工程（上海）股份有限公司测序，并将测序结果在NCBI中进行Blast对比分析。

1.3　体外筛选抑菌能力强、益生功能优、抗逆性能好的乳酸杆菌候选菌株

1.3.1　抑菌试验

用于抑菌试验的指示菌为鼠伤寒沙门菌（CP112994.1菌株）及鸡伤寒沙门菌（CICC 21510菌株）。将沙门菌活化并稀释至10⁸ CFU·mL^-1均匀涂布于LB固体平板上，使用6 mm打孔器打孔后加入100 μL分离菌株菌液，置37 ℃恒温静置培养6 h，测量抑菌圈直径，平行重复3次。

1.3.2　抑菌曲线及产酸曲线检测

将所筛菌株接种于MRS培养基，37 ℃ 180 r·min^-1振荡培养20 h，每2 h测定菌液pH值并绘制产酸曲线。从4 h起菌液取样进行打孔法抑菌试验，测量抑菌圈直径并绘制抑菌曲线，平行重复3次。

1.3.3　菌液不同组分的抑菌性能探究

将所筛菌株接种于MRS培养基，37 ℃ 180 r·min^-1振荡培养16 h，3 500 r·min^-1 10 min离心并经0.22 μm滤膜过滤，获得无菌上清液。离心所得菌体，用PBS缓冲液洗涤两次，再加入PBS缓冲液调整为原浓度。将无菌上清液、菌体和发酵液进行打孔法抑菌试验，测量抑菌圈直径，平行重复3次。将发酵液pH值经浓HCl和NaOH调为3.80后再进行打孔法抑菌试验，测量抑菌圈直径，平行重复3次。

1.3.4　无菌上清液不同浓度对沙门菌生长的影响

将所筛菌株无菌上清液，分别以0.05、0.10、0.15、0.20的体积比例加入LB培养基中，再将沙门菌活化菌液1%接种于其中，37 ℃ 180 r·min^-1振荡培养24 h后测OD_{600 nm}值记为A_t，设置LB培养基作为对照测OD_{600 nm}值记为A₀，平行重复三次并根据以下公式计算抑菌率：

Antibacterial index （%）=（A_t/A₀）×100%

1.3.5　自凝集能力和与沙门菌共聚集能力检测

将所筛菌株发酵液3 000 r·min^-1 10 min离心弃上清，加入PBS缓冲液洗涤2次并调节菌液OD_{600 nm}值为0.8，记为A₀。吸取4 mL菌液，混匀后在37 ℃静置培养3 h，吸取上层菌液1 mL测定OD_{600 nm}值，记为A_t。平行重复三次并根据以下公式计算菌株自凝集率：

Auto-aggregation （%）=（1-At/A0）×100%

沙门菌菌液同样洗涤并调节OD_{600 nm}值为0.8，记为A_y。吸取2 mL候选菌株菌液和2 mL致病菌菌液，混匀后在37 ℃静置培养3 h，吸取上层菌液1 mL测定OD_{600 nm}值，记为A_m。平行重复三次并根据以下公式计算菌株与沙门菌共聚集率：

Co-aggregation （%）=［1-A_m/（A₀+A_y）/2］×100%

1.3.6　产酶试验

使用6 mm打孔器在产酶鉴别培养基上打孔，并吸取100 μL发酵液于孔中，37 ℃静置培养48 h后测量并记录透明圈直径。向淀粉酶鉴别培养基滴加2 mL碘液，染色10 min测量透明圈直径。

1.3.7　耐酸试验

将菌液10%接种于pH=3.00的MRS培养基中，37 ℃ 2 h后倍比稀释后涂板，48 h后计数平板菌落数（C₁），对照组为MRS培养基计数平板菌落数（C₀）。平行重复三次并依据以下公式计算存活率：

存活率（%）=C₁/C₀×100%

1.4　动物试验验证候选菌株的功能

1.4.1　益生菌悬液和标准致病性鸡沙门菌悬液的制备

益生菌菌液3 500 r·min^-1 15 min 离心弃上清，加入等体积0.75%生理盐水混匀备用（1×10⁹ CFU·mL^-1）。鸡伤寒沙门菌（CICC 21510菌株）1%接种于NA培养基，37 ℃ 180 r·min^-1 12 h，3 500 r·min^-1 15 min离心弃上清，加入0.75%生理盐水调节菌液浓度约为1×10¹⁰ CFU·mL^-1。

1.4.2　试验动物处理

选择1日龄AA肉鸡（公）作为试验动物，随机分为益生菌移植组和生理盐水对照组。益生菌移植组中，每只鸡每天灌胃1 mL益生菌悬液（1×10⁹ CFU·mL^-1），对照组雏鸡每日灌胃1 mL 0.75%生理盐水，连续灌胃28 d，在30日龄随机选择两组各12个个体进行解剖取材。为了进一步探讨益生菌移植是否对鸡沙门菌感染有拮抗作用，每组选择12只体重相近的个体继续饲喂至42 d，灌胃1 mL鸡伤寒沙门菌（CICC 21510菌株）悬液（1×10¹⁰ CFU·mL^-1），并在46 d取材（图1）。试验动物在相同的环境条件下进行饲养，自由采食和饮水。

1.4.3　样品采集

禁食12 h后，颈动脉放血处死动物。采集空肠内容物于1.5 mL无菌离心管中，液氮速冻后转移至-80 ℃冰箱，用于肠道菌群测序。对胸肌和腿肌重量，空肠和回肠长度进行测量后，在每个个体的相同部位采集肝脏、脾脏、空肠和回肠组织，一部分置于4%多聚甲醛溶液中进行固定保存，一部分保存于-80 ℃冰箱。

1.4.4　空肠菌群16S rRNA基因测序

将空肠内容物送至上海美吉生物医药科技有限公司检测与分析。使用Fast DNA SPIN 提取试剂盒提取总细菌基因组DNA，使用细菌16S rRNA特异性Barcode序列的正向引物338F（5’-ACTCCTAC- GGGAGGCAGCA-3’）和反向引物806R（5’- GGACTACHVGGG TWTCTAAT-3’）进行PCR扩增，利用DNA凝胶回收纯化试剂盒进行产物纯化。使用NEXTFLEX Rapid DNA-Seq Kit对纯化后的PCR产物进行建库。数据通过fastp质控、FLASH拼接后，使用UPARSE软件以97%相似度进行OTU聚类并去除嵌合体；通过RDP classifier结合Silva数据库（阈值70%）完成物种注释。采用QIIME计算α多样性指数（Chao1与Shannon指数），并通过PCoA分析群落结构差异，结合ANOSIM检验显著性。

1.4.5　肠道组织形态

取空肠及回肠组织制作石蜡切片，并进行苏木素-伊红染色（HE染色）。在10×4倍下进行显微镜摄影，每张切片随机选取3个视野采集图片，并采用Image J对图片中的肠绒毛长度及隐窝深度进行测量。空肠杯状细胞检测：取空肠组织制作石蜡切片，并进行过碘酸雪夫染色（PAS染色）。在10×40倍下进行显微镜摄影，每张切片随机选取5个视野采集图片，并采用 Image Pro Plus 6.0统计每张图片杯状细胞数量。

1.4.6　组织中沙门菌载量测定

取回肠、肝脏和脾脏组织使用DNA提取试剂盒提取总DNA，根据鸡伤寒沙门菌特异性引物glgC（F：5’-AGA- GTTTGATCCTGGCTCAG-3’； R：5’-GGTTA- CCTTGTTACGACTT-3’）进行荧光定量PCR反应，每个试验数据做3次技术重复。以10²~10⁶ CFU·mL^-1鸡伤寒沙门菌菌液为模板，建立标准曲线。

1.4.7　回肠炎症通路相关基因转录检测

取回肠组织使用RNAiso Plus提取总RNA，使用反转录试剂盒（RR036A）将RNA逆转录合成cDNA，使用荧光定量PCR试剂盒（RR820A）进行实时荧光定量，以鸡的β-actin为内参，运用2^-ΔΔ^Ct 法计算mRNA的相对转录水平，每个试验数据做3次技术重复。引物由上海生工生物工程有限公司合成，具体的引物序列如表1所示。

1.5　统计学分析

采用GraphPad Prism 9.5软件对数据进行统计分析并作图。定量数据以平均数±标准误（Mean±SEM）表示，两组数据间进行t检验分析（Student’s t test），三组及三组以上数据使用单因素方差分析（one-way ANOVA）评价各组间的统计学意义。显著性标准为，ns. P>0.05，表示差异无显著性；*. P<0.05，表示差异显著；**. P<0.01；***. P<0.001；****. P<0.000 1均表示差异极显著。

2　结果

收起

2.1　27株乳酸杆菌菌株的分离与鉴定

在MRS培养基上，所筛菌株的菌落特征如下：圆形，凸起，乳白色或透明，湿润，边缘整齐，直径为1~2 mm（图2A）。革兰染色阳性，呈球杆状或长杆状（图2B）。其中S1、S2、S6和S20因生长性能较弱或PCR扩增产物检测不合格而淘汰，剩余36株经1492R/27F引物PCR扩增其16S rRNA基因序列，琼脂糖凝胶电泳观察其产物片段长度约为1 500 bp，符合预期（图2C）。测序比较并排除重复菌株后共鉴定27株乳酸杆菌，包括11株罗伊氏黏液乳杆菌（Limosilactobacillus reuteri）、13株唾液联合乳杆菌（Ligilactobacillus salivarius）、2株约氏乳杆菌（Lactobacillus johnsonii）和1株格氏乳杆菌（Lactobacillus gasseri）。

2.2　唾液联合乳酸杆菌S23和S31菌株抗鼠伤寒沙门菌能力较强

为了筛选抗鼠伤寒沙门菌的候选菌株，将27株乳酸杆菌菌株分别与鼠伤寒沙门菌菌株共培养。结果显示，有18株可抑制鼠伤寒沙门菌（图3A）（直径>10 mm）。对抑菌圈直径进行排序发现，唾液联合乳杆菌S31（13.43 mm±0.38 mm）和S23（12.97 mm±0.35 mm）的抑菌效果较好，且S31菌株抗鼠伤寒沙门菌能力显著大于S16、S14、S35、S17、S5、S28、S18和S10等8株乳酸杆菌菌株（图3B）。

2.3　唾液联合乳杆菌S23和S31菌株抗鸡伤寒沙门菌能力较强

为了筛选抗鸡伤寒沙门菌的候选菌株，将27株乳酸杆菌菌株分别与鸡伤寒沙门菌菌株共培养。结果显示，有20株可抑制鼠伤寒沙门菌（图4A）（直径>10 mm）。对抑菌圈直径比较发现，唾液联合乳杆菌S21（15.53 mm±0.87 mm）、S31（15.30 mm±0.79 mm）、S24（15.13 mm±0.54 mm）和S23（15.08 mm±1.22 mm）的抑菌效果较好，且S31菌株抗鸡伤寒沙门菌能力显著大于S17、S3、S9、S37、S7、S19、S13、S14、S35、S28、S10、S16和S18等13株乳酸杆菌菌株（图4B）。

2.4　唾液联合乳杆菌S23和S31通过产酸和抑菌物质发挥抑菌功能

为了探究唾液联合乳杆菌是否通过产酸和抑菌物质发挥抑菌功能，测定不同时间点菌液pH值与抑菌效果的关系，以及pH值相同时抑菌效果差异，同时比较了菌液和无菌上清液的抑菌效果差异。结果显示，不同种属乳酸杆菌菌液pH值随培养时间延长持续降低，其中唾液联合乳杆菌S31和S23菌液pH值达最低3.80，并与其他种属乳酸杆菌菌液pH值有显著差异（P<0.000 1）（图5A），且抑菌圈直径随培养时间增加而增大，其中唾液联合乳杆菌S31菌株的抑菌能力较强，与约氏乳杆菌S5的抑菌圈直径大小有显著差异（P<0.05）（图5B）。将不同种属乳酸杆菌的菌液pH均调为3.80时，唾液联合乳杆菌的抑菌圈直径显著大于约氏乳杆菌和格氏乳杆菌抑菌圈（P<0.01）（图5C），提示唾液联合乳杆菌除了产酸外，可能还产生抑菌物质。进一步研究发现，无菌上清液与菌液的抑菌能力无显著差异（P>0.05）（图5D），且抑菌能力随着无菌上清液浓度的增加而提升，其中唾液联合乳杆菌S23和S31在低浓度（c=0.10）时抑菌性能显著优于其他种属菌株（与罗伊氏黏液乳杆菌相比，P<0.001；与格氏乳杆菌相比，P<0.01；与约氏乳杆菌相比，P<0.000 1）（图5E）。以上研究提示，唾液联合乳杆菌S23和S31具有较强的抑菌能力，且主要通过产酸和抑菌物质发挥抑菌功能。

2.5　唾液联合乳杆菌S31菌株具有较强体外益生特性

为了探究唾液联合乳杆菌S23和S31的益生功能，测试产酶能力、抗逆性能和凝集能力。结果显示，唾液联合乳杆菌S31和S23菌株均具有产蛋白酶（图6A）和脂肪酶（图6B）能力，不具有产淀粉酶能力（图6C）。其中菌株S31产蛋白酶直径达到30 mm以上，显著优于S23（P<0.05）（图6D）。经pH 3.0 MRS培养基处理2 h后，唾液联合乳杆菌S31菌株的存活率显著高于S23菌株（P<0.01）（图6E）。唾液联合乳杆菌S31的自凝集能力显著大于S23（P<0.001），两株菌对鸡伤寒沙门菌和鼠伤寒沙门菌的共聚集能力均大于80%，两株无显著差异（P>0.05）（图6 F）。以上研究结果表明，唾液联合乳杆菌S31菌株具有较强益生功能和胃肠道适应性。

2.6　唾液联合乳杆菌S31移植可显著改善鸡生长性能

为进一步探究唾液联合乳杆菌S31菌株是否能在体内发挥益生作用，进行菌株移植试验。结果显示，唾液联合乳杆菌S31菌株移植组的鸡体重（P<0.000 1）、胸肌重（P<0.01）、腿肌重（P<0.001）（图7A）、空肠肠绒毛高度（图7B）和杯状细胞数量（图7C）均显著高于对照组（P<0.05）。唾液联合乳杆菌S31菌株移植组鸡空肠菌群群落结构与对照组存在显著差异（图7D）。进一步分析发现，唾液联合乳杆菌S31菌株移植组空肠乳杆菌属（Lactobacillus）的相对丰度高于对照组（85.74% vs 64.50%）（图7E），且与鸡的体重、腿肌重以及胸肌重均显著正相关（图7F）。以上研究表明，唾液联合乳杆菌菌株S31移植改变空肠菌群的组成结构，促进肠道乳酸杆菌增殖以提升鸡的生长性能。

2.7　唾液联合乳杆菌S31菌株移植可显著增强对沙门菌的抑制能力

为了探究唾液联合乳杆菌S31菌株对沙门菌感染的抵抗效果，从对照组和S31菌株移植组分别选取体重相近的鸡进行沙门菌感染试验。结果显示，S31菌株移植组的症状较轻，体重显著大于对照组（P<0.05）（图8 A），脾脏中沙门菌载量显著降低（P<0.05）（图8B），空肠和回肠结构较完整，肠绒毛长（P<0.05）、隐窝深且腺体多（图8C），回肠中TLR-4信号通路相关基因的转录水平（P<0.01）（图8D）和促炎因子IL-1β、IL-6和IL-12的转录水平（P<0.05）（图8E）均显著低于对照组。以上研究结果表明，唾液联合乳酸杆菌S31菌株可通过抑制肠道炎症相关基因及促炎因子表达，有效缓解沙门菌感染引发的肠道组织损伤，维持肠道结构完整性。

3　讨论

收起

3.1　乳酸杆菌可有效抑制沙门菌并具有种属特异性

乳酸杆菌作为鸡小肠的优势菌属，种类多样，常见种类有嗜酸乳杆菌、干酪乳酪杆菌、副干酪乳酪杆菌、鼠李糖乳酪杆菌、植物乳植杆菌、唾液联合乳杆菌、发酵黏液乳杆菌、罗伊氏黏液乳杆菌以及德氏乳杆菌保加利亚亚种等菌种^{［13⁃14］}。本研究采用MRS培养基从鸡空肠内容物中分离了27株乳酸杆菌并通过16S rRNA进行了详细分类，它们分别属于罗伊氏黏液乳杆菌（Limosilactobacillus reuteri）、唾液联合乳杆菌（Ligilactobacillus salivarius）、约氏乳杆菌（Lactobacillus johnsonii）和格氏乳杆菌（Lactobacillus gasseri）这4个种。为进一步丰富鸡肠道乳酸杆菌菌种资源，需要进一步优化分离培养条件或使用先进分离技术^{［15⁃16］}。乳酸杆菌对促进消化吸收、抑制有害菌生长及维持肠道微环境平衡方面发挥重要作用^{［17⁃18］}。研究表明唾液联合乳杆菌XP132、UO.C109和UO.C121对禽沙门菌生物膜的形成具有较强的抑制效果^{［19⁃20］}。另有研究发现，不同乳酸杆菌菌株对沙门菌的抑制能力存在显著差异^［21］。本研究发现，唾液联合乳杆菌菌株对沙门菌的抑制效果尤为突出，而罗伊氏黏液乳杆菌、约氏乳杆菌和格氏乳杆菌菌株抑制效果相对较弱。以上研究结果表明，不同种属乳酸杆菌对沙门菌的抑制能力存在差异。

3.2　唾液联合乳杆菌通过多种方式抗沙门菌感染

唾液联合乳酸杆菌作为一种广泛存在于动物口腔及消化道的益生菌，可能通过直接和间接方式抑制沙门菌感染^［22］。第一，通过产酸抑制沙门菌感染。有研究表明，唾液联合乳杆菌具有较强的产酸能力，可产生乳酸及短链脂肪酸等，破坏致病菌细胞膜结构、影响其代谢活动，从而直接抑制病原菌的生长^{［23⁃24］}。本研究发现，唾液联合乳杆菌的产酸能力优于其它种属的乳酸杆菌，提示唾液联合乳杆菌可通过产酸直接抑制沙门菌感染。第二，通过产生其它抑菌物质抗沙门菌感染。有研究表明，唾液联合乳杆菌分泌的细菌素可破坏细胞膜结构或进入胞内扰乱正常代谢，发挥直接抑菌作用^［25］。唾液联合乳杆菌也可通过上调肠道紧密连接蛋白基因表达，增强黏膜屏障，减少沙门菌的感染^［26］。为了探究唾液联合乳杆菌是否可产生其它抑菌物质直接抑制沙门菌感染，本研究将其它种属菌株菌液pH值调至与唾液联合乳杆菌一致时，其抑菌能力虽有提升，但仍不及唾液联合乳杆菌。表明唾液联合乳杆菌不仅可通过产酸抑制沙门菌感染，还可通过产生其它抑菌物质发挥抑菌功能，但具体是哪些抑菌物质还有待于进一步的研究。第三，唾液联合乳杆菌通过促进机体生长发育和肠道菌群平衡间接抑制沙门菌感染。有研究证实唾液联合乳杆菌能够产生多种消化酶，包括淀粉酶、蛋白酶、β-半乳糖苷酶和胆汁盐水解酶等^{［27⁃29］}，在促进碳水化合物、蛋白质、脂肪以及胆汁酸的分解代谢中发挥重要作用，进而促进肉鸡生长并提高其抗氧化水平，增强动物健康及免疫力^［30］。本研究发现唾液联合乳杆菌S31菌株具有产蛋白酶和脂肪酶能力，移植后促进肠道菌群平衡，改善肠道健康，促进肉鸡生长。在沙门菌感染时，可降低脾脏内的载菌量，降低TLR-4及其下游MyD88、AP-1信号分子及促炎因子IL-1β、IL-6、IL-12转录，说明唾液联合乳酸杆菌可通过维护鸡肠道健康间接抑制沙门菌感染。

4　结论

收起

从生长性能优良的桂山凰鸡空肠内容物中分离鉴定了27株乳酸杆菌。其中唾液联合乳杆菌S31菌株在体外可有效抑制鼠伤寒沙门菌和鸡伤寒沙门菌。唾液联合乳杆菌S31菌株移植时，可显著促进鸡生长发育，抵御鸡伤寒沙门菌感染，具有良好应用潜力。

基金

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湖北省国际科技合作项目(2024EHA058)

参考文献

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文献

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2026年第57卷第2期

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doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2026.02.041

接收时间：2025-05-23
首发时间：2026-09-16
出版时间：2026-02-23

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收稿日期：2025-05-23

基金

湖北省国际科技合作项目(2024EHA058)

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华中农业大学动物医学院，武汉 430070

通讯作者:

刘华珍，主要从事家禽肠道微生物及家禽免疫研究，E-mail：lhz219@mail.hzau.edu.cn

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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