畜牧兽医学报

毒株 Strain	SD	C-KCE	CV	2085	CHv
C-KCE	96.64
CV	99.15	97.37
2085	93.07	92.22	93.60
CHv	99.10	97.37	99.95	93.58
QL2312	98.85	97.37	99.70	93.33	99.71

毒株 Strain	SD	C-KCE	CV	2085	CHv
C-KCE	96.64
CV	99.15	97.37
2085	93.07	92.22	93.60
CHv	99.10	97.37	99.95	93.58
QL2312	98.85	97.37	99.70	93.33	99.71

一株鸭瘟病毒的分离鉴定和基因组特征

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宋晓飞 ¹ , 李振 ¹ , 彭建云 ¹ , 贾爱琴 ¹ , 王苗利 ² , 李法凯 ² , 李磊 ¹ , 赵依晴 ¹ , 秦绪伟 ¹ , 赵妮 ¹ , 李富金 ¹ , 张青婵 ¹ , 刘华春 ¹ , 张连秀 ¹

畜牧兽医学报 | 研究简报 2026,57(2): 1171-1176

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畜牧兽医学报 |研究简报 2026 , 57 (2) : 1171 -1176

一株鸭瘟病毒的分离鉴定和基因组特征

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宋晓飞¹, 李振¹, 彭建云¹, 贾爱琴¹, 王苗利², 李法凯², 李磊¹, 赵依晴¹, 秦绪伟¹, 赵妮¹, 李富金¹, 张青婵¹, 刘华春¹, 张连秀¹

作者信息

^1.齐鲁动物保健品有限公司，济南 250100

^2.山东省动物疫病预防与控制中心（山东省人畜共患病流调监测中心），济南 250100

通讯作者:

张连秀，主要从事兽药疫苗研发工作，E-mail： lianxiu.zhang@qilu-pharma.com

作者简介:

宋晓飞，高级工程师，硕士，主要从事兽药疫苗研发工作，E-mail： xiaofei.song@qilu-pharma.com；Tel：0531-83129728

Isolation， Identification and Genomic Characterization of a Duck Plague Virus

Xiaofei SONG¹, Zhen LI¹, Jianyun PENG¹, Aiqin JIA¹, Miaoli WANG², Fakai LI², Lei LI¹, Yiqing ZHAO¹, Xuwei QIN¹, Ni ZHAO¹, Fujin LI¹, Qingchan ZHANG¹, Huachun LIU¹, Lianxiu ZHANG¹

Affiliations

^1.Qilu Animal Health Products Co. Ltd. ，Jinan 250100，China

^2.Shandong Provincial Animal Disease Prevention and Control Center Shandong Provincial Animal Disease Prevention and Control Center ［Shandong Provincial Zoonotic Disease Surveillance Center］，Jinan 250100，China

Corresponding Author:

ZHANG Lianxiu， E-mail： lianxiu.zhang@qilu-pharma.com

出版时间: 2026-02-23 doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2026.02.048

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摘要

收起

2023—2024年，江苏省某肉鸭养殖场的10~20日龄肉鸭疑似感染鸭瘟病毒（duck plaque virus，DPV）。本研究旨在分离鉴定该病毒并分析基因组特征。本研究对病料进行病毒分离、动物回归和基因组测序分析。结果显示：在内脏组织中检测到鸭瘟病毒，并成功分离一株鸭瘟毒株，命名为QL2312。与强毒株CV株具有同等致病力。通过基因组序列分析发现，QL2312株的UL56/LORF5基因与强毒株CV株相同，而UL2基因与疫苗株C-KCE株相同。本研究成功分离到一株鸭瘟变异株，为相关疾病的进一步研究提供基础。

关键词

鸭瘟病毒 / 分离鉴定 / 基因组分析

Abstract

收起

From 2023 to 2024， 10-20-day-old ducks in a meat duck farm in Jiangsu Province， were suspected of being infected with duck plague virus （DPV）. This study aims to isolate and identify the virus and analyze genomic characteristics. Viral isolation and genome sequencing analysis were performed on the disease material in this study. Results were as follows： Duck plague virus was detected in visceral tissue， and a duck plague strain was successfully isolated， named QL2312. It has the same pathogenicity as the virulent strain. Sequence analysis of the isolate genome revealed that the UL2 gene of QL2312 strain was the same as that of the vaccine strain C-KCE strain， while the UL56/LORF5 gene was the same as the classical strain CHv and CV strains. This study successfully isolated a duck plague mutant strain， providing a basis for further research on related diseases.

Key words

duck plague virus / separation and identification / genome analysis

引用本文

宋晓飞, 李振, 彭建云, 贾爱琴, 王苗利, 李法凯, 李磊, 赵依晴, 秦绪伟, 赵妮, 李富金, 张青婵, 刘华春, 张连秀. 一株鸭瘟病毒的分离鉴定和基因组特征. 畜牧兽医学报, 2026 , 57 (2) : 1171 -1176 . DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2026.02.048

Xiaofei SONG, Zhen LI, Jianyun PENG, Aiqin JIA, Miaoli WANG, Fakai LI, Lei LI, Yiqing ZHAO, Xuwei QIN, Ni ZHAO, Fujin LI, Qingchan ZHANG, Huachun LIU, Lianxiu ZHANG. Isolation， Identification and Genomic Characterization of a Duck Plague Virus[J]. Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica, 2026 , 57 (2) : 1171 -1176 . DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2026.02.048

正文

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鸭瘟病毒（duck plaque virus，DPV）是引起鸭、鹅和天鹅等禽类急性发病、败血性和高度致死性的一种传染病病原^［1］。该病毒疱疹病毒科α疱病毒亚科马立克病毒属鸭甲疱疹病毒Ⅰ型成员，基因组结构为UL-IRS-US-TRS，即长独特区域（unique long，UL）、内部反向重复序列（inverted repeat short，IRs）、短独特区域（unique short，US）及末端反向重复序列区域（terminal repeat short，TRs），长度158~162 kb的双链线性DNA，G+C含量44.9%，共编码78个开放阅读框（open reading frame，ORF）^［2］。

傅光华等^［3］对2016—2017年福建省37份鸭瘟病料分析，发现UL56/LORF5基因、TK/gH基因和UL2基因均未出现基因片段缺失，与我国鸭瘟强毒株CHv株、CV株（AV1221）的序列相似性均在99%以上，但是经分子系统进化分析发现毒株与我国参考强毒株处于不同进化分支。张瑞等^［4］在2020年福建省半番鸭中分离到鸭瘟病毒株的UL2基因与强毒株CHv株、CV株和2085株的核苷酸相似性为97.8%~99.0%；与疫苗株VAC株弱毒株相比，在UL2基因中存在528 bp的核苷酸插入。本研究从江苏省某鸭养殖场分离出一株鸭瘟毒株，通过对该毒株致病力和基因组特征分析，以明确近年来在江苏省鸭群中新流行的鸭瘟分子特征，为鸭瘟的快速确切诊断和防控提供科学依据。

1　材料与方法

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1.1　主要试剂、细胞和实验动物

DMEM培养基、胎牛血清和胰蛋白酶等均购自Gibco生物公司，病毒核酸提取试剂盒购自杭州博日科技股份有限公司，DNA Marker购自宝生物工程（大连）有限公司，2×Taq Master Mix（Dye Plus）购自南京诺唯赞生物科技股份有限公司，SPF鸭胚购自山东昊泰实验动物繁育有限公司，4周龄麻鸭购自山东省济南市某鸭养殖场，常见病原检测均为阴性。

1.2　病毒的分离

1.2.1　病料来源和样品处理

病料来源：2023—2024年江苏省某肉鸭养殖场疑似感染鸭瘟的10~20日龄肉鸭。样品处理：将病料按照1∶5比例加入无菌生理盐水，研磨制成匀浆，-70 ℃以下反复冻融3次，4 ℃ 10 000 ✕g离心10 min，加双抗作用30 min，取上清液转入无菌离心管中，置于-70 ℃以下保存备用。

1.2.2　引物的设计和合成

根据CV株基因组序列合成引物（DPV-F：3′-GCAAGCTTGGCTGG TATGCGTGACAT-5′；DPV-R：3′-TTCTGCAG GTATTGGTTTCTGAGTTGGC-5′）用于鉴定鸭瘟病毒；合成引物（UL2-F：3′-TGCAATCACGTT GCGTTGTACT-5′；UL2-R：3′-GATTTCTGGG TTTTTGCTGGAC-5′）用于扩增鸭瘟病毒的UL2基因。合成引物（UL56-F：3′-ATCTATCCTG TCTACCTCCG-5′；UL56-R：3′-CTGGCCTTGG ATATCATTGTC-5′）用于扩增鸭瘟病毒的UL56/LORF5基因。引物均由上海生工生物工程有限公司合成。

1.3　病毒的细胞培养和鉴定

将处理后的病料上清液接种6孔板单层DEF细胞，置37 ℃、含5% CO₂细胞培养箱中孵育1 h，弃掉培养液，更换含1%青霉素和链霉素、1%胎牛血清的DMEM细胞维持液。每天观察细胞状态，持续观察4 d，把接毒的细胞反复冻融3次，吸取400 μL上清液转移到新的单层细胞上，挑取出现细胞病变（CPE）的样品PCR鉴定。

按照病毒核酸提取试剂盒（MagaBio plus病毒DNA/RNA纯化试剂盒Ⅲ）说明书操作步骤提取核酸（DNA和RNA），按照2×Taq Master Mix（Dye Plus）试剂盒说明书鉴定样品。扩增引物见“1.2.2”，扩增条件反应体系为50 μL：上下游引物各2 μL，DNA 2 μL，2×Prime STAR Max 25 μL，加水至50 μL。反应程序：98 ℃ 5 min；98 ℃ 15 s；53 ℃ 15 s；72 ℃ 50 s；30个循环；72 ℃延伸10 min。PCR产物用0.8%的琼脂糖凝胶进行电泳检测，DPV阳性条带602 bp。

1.4　动物回归试验

取20只4周龄麻鸭肌肉注射接种QL2312株细胞毒，鸭瘟强毒株AV1221株，剂量为0.2 mL·只^-1，接种后隔离饲养，每日观察记录鸭的临床表现，连续观察7 d。解剖并观察气管、肝、肾和法氏囊等脏器病变情况。

1.5　病毒基因组测序、比对和分析

由上海生工工程有限公司完成全基因组测序和组装。利用MEGA11软件进行同源性分析和绘制遗传演化进化树。

2　结果

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2.3　病毒的分离与鉴定

取阳性病料上清液接种DEF单层细胞，盲传至第3代，显微镜下可见DEF细胞出现局灶性圆缩及空泡化病变，随病变区域逐渐扩大并伴随细胞脱落、死亡（图1B）。提取基因组PCR鉴定为鸭瘟病毒阳性（图1C），命名为QL2312。

2.4　动物回归试验

麻鸭接种QL2312后3 d出现精神沉郁、行走迟缓及喜卧等症状，第4天死亡4/10，第6天全部死亡，发病率和死亡率均为100%（图1D）。剖检见肝脏、脾脏、肺、法氏囊等实质脏器出血、淤血，食道弥漫性出血，肠道见出血环，气管有出血点。

2.5　全基因组序列比对分析

QL2312株基因组全长162 128 bp，GC含量44.6%。利用MEGA11软件将QL2312全基因序列与GenBank数据库中的部分DPV参考序列进行核酸同源性及演化分析。全基因组比对显示，该毒株与强毒株CHv株（JQ647509）、CV株（JQ673560）、2085株（NC075687）和SD株（MN518864）的核苷酸相似性分别为99.71%、99.70%、93.33%、98.85%；与鸡胚疫苗株C-KCE株（KF263690）的核苷酸相似性为97.37%（表1）。基于全基因核苷酸序列构建的系统进化树表明，QL2312与CHv株（JQ647509）、CV株（JQ673560）、2085株（NC075687）和SD株（MN518864）分属不同的分支，而与C-KCE株（KF263690）亲缘关系较近，归属同一分支（图2）。

2.6　病毒基因组结构分析

2.6.1　 UL56/LORF5基因序列分析

UL56/LORF5基因位于DPV基因组UL区起始端，弱毒株（如C-KCE株）中称LORF11基因。该基因对DPV细胞间传播至关重要，并且不同毒株的LORF5具有明显差异，能够区分强毒株和弱毒株。扩增CV株、C-KCE株和QL2312株的UL56/LORF5基因，结果显示，QL2312株与强毒株CV株扩增产物均为4 603 bp，而疫苗株C-KCE扩增产物仅1 090 bp，存在3 513 bp核苷酸的连续缺失（图3B）。测序发现LORF11基因的A段（647 bp）和B段（181 bp）分别与UL56基因的5^，端和LORF5的3^，端相似性100%。

2.6.2　 UL2基因序列分析

UL2基因编码尿嘧啶DNA糖基化酶，在神经元中的有效复制起重要作用，并且在强、弱毒株间同样存在显著差异。PCR结果显示，CV株UL2基因扩增产物为1 311 bp；QL2312株和C-KCE株UL2基因的扩增产物为783 bp，较CV株缺失528 bp核苷酸（图3C）。测序发现QL2312株、C-KCE株和CV株的UL2基因3’端具有277 bp序列的同源性100%。

3　讨论

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鸭瘟是鸭瘟病毒引起的一种禽类急性、热性、败血性传染病。目前国内外尚无针对该病的有效治疗药物，主要依赖疫苗免疫防控。然而，近年来临床频繁出现免疫疫苗后仍发病的现象，提示可能病毒变异导致免疫保护失败。2016年，张红丽等^［5］从浙江省某免疫失败的蛋鸭场分离出ZJ2016株，研究发现其LORF11、UL2、UL12、UL41、UL47、US10等基因特征均与强毒株CHv特征高度一致；但与疫苗株C-KCE相比，LORF11、UL2、UL12及US10基因存在碱基插入，导致基因结构及氨基酸改变。Shen等^［6］研究表明DPV基因组中的LORF5基因介导病毒在细胞间的移动，该基因可显著促进病毒增殖。推测弱毒株UL2基因缺失528 bp后不影响病毒在体外培养中的复制，但是导致病毒在体内神经元中无法有效复制、潜伏和再激活，从而降低了病毒的致病性^［7⁃8］。

本研究从病料中成功分离出鸭瘟病毒QL2312株。结合病毒分离、动物回归试验和基因组测序分析，发现该毒株所致临床症状和剖检病变与强毒株CV株高度相似，其全基因组与强毒株CHv株和CV株核苷酸相似性>99.7%。QL2312株的UL56/LORF5基因与CV株序列一致性达100%，复制传播能力等同强毒株；UL2基因存在528 bp缺失，与C-KCE株相似性100%。综上，QL2312为兼具强毒特征（UL56/LORF5基因序列未出现缺失）与弱毒株特征（UL2基因序列出现缺失528 bp）的DPV变异强毒株。

4　结论

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本研究从江苏省鸭场疑似鸭瘟病料中成功分离出鸭瘟病毒QL2312株，通过病毒分离、动物回归和基因组测序分析表明该毒株为变异强毒株，后续需要加强对该病毒的分子流行病学实时监测，避免鸭养殖业遭受巨大损失。

基金

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山东省重点研发计划（重大科技创新工程）(2023CXGC010704)

参考文献

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文献

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参考文献引证文献

排序方式：

[1]

于江玮，程慧敏，林健，等.鸭瘟病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及应用［J］.畜牧兽医学报，2025，56（2）：765-773.

YU J W，CHENG H M，LIN J，et al.Establishment and application of TaqMan fluorescent quantitative PCR detection method for duck plague virus［J］.Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica，2025，56（2）：765-773.（in Chinese）

[2]

AASDEV A，PAWAR S D，MISHRA A，et al.First complete genome characterization of duck plague virus from India［J］.Virus disease，2021，32（4）：789-796.

[3]

傅光华，陈翠腾，刘荣昌，等.鸭瘟病毒新近分离毒株部分基因变异分析［J］.畜牧兽医学报，2018，49（10）：2215-2222.

FU G H，CHEN C T，LIU R C，et al.Genetic variability of partial genes of duck plaque viruses currently isolated in ducks［J］.Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica，2018，49（10）：2215-2222.（in Chinese）

[4]

张瑞，刘荣昌，陈长福，等.一例半番鸭感染鸭瘟的病原分离鉴定及病理组织学观察［J］.福建农业学报，2021，36（3）：312-318.

ZHANG R，LIU R C，CHEN C F，et al.Pathogen identification and tissue histopathology on plague virus-infected mule ducks ［J］.Fujian Journal of Agricultural Sciences，2021，36（3）：312-318.（in Chinese）

[5]

张红丽，黄靖，刘霞，等.鸭瘟病毒ZJ2016强毒株部分基因序列的测定与分析［J］.浙江农业学报，2020，32（2）：226-233.

ZHANG H L，HUANG J，LIU X，et al.Sequencing and analysis of several genes of a virulent duck enteritis virus strain ZJ2016［J］.Acta Agriculturae Zhejiangensis，2020，32（2）：226-233.（in Chinese）

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蒋思.Ⅰ型单纯疱疹病毒UL2蛋白核输入信号和核输入机制的鉴定及其重组病毒的构建［D］.广州：广州医科大学，2018.

JIANG S.Identification of the subcellular import signal，nuclear import mechanism of herpes simplex virustype Ⅰ UL2 and construction of its recombinant virus［D］.Guangzhou：Guangzhou Medical University.2018.（in Chinese）

[8]

杨伏春，刘芮，李晓涵，等.鸭肠炎病毒UL41基因缺失株的构建及其体外增殖能力分析［J］.畜牧兽医学报，2022，53（8）：2689-2696.

YANG F C，LIU R，LI X H.et al.Construction of UL41 gene deletion strain of duck enteritis virus and analysis of its replication ability in vitro［J］.Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica，2022，53（8）：2689-2696.（in Chinese）

2026年第57卷第2期

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162

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doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2026.02.048

接收时间：2025-04-24
首发时间：2026-09-16
出版时间：2026-02-23

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收稿日期：2025-04-24

基金

山东省重点研发计划（重大科技创新工程）(2023CXGC010704)

作者信息

^1.齐鲁动物保健品有限公司，济南 250100

^2.山东省动物疫病预防与控制中心（山东省人畜共患病流调监测中心），济南 250100

通讯作者:

张连秀，主要从事兽药疫苗研发工作，E-mail： lianxiu.zhang@qilu-pharma.com

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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