畜牧兽医学报

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gD基因插入增强gI/gE/gM缺失重组伪狂犬病病毒对小鼠的免疫效果

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陆灵光 , 刘家齐 , 卢佩琪 , 吴瑞彬 , 黄丹妮 , 刘佳悦 , 梁婉琪 , 琚春梅

畜牧兽医学报 | 预防兽医 2026,57(1): 327-336

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畜牧兽医学报 |预防兽医 2026 , 57 (1) : 327 -336

gD基因插入增强gI/gE/gM缺失重组伪狂犬病病毒对小鼠的免疫效果

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陆灵光，博士生，主要从事病毒致病机制与防控研究，E-mail：lulingguang0401@163.com

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陆灵光，博士生，主要从事病毒致病机制与防控研究，E-mail：lulingguang0401@163.com

刘家齐，硕士生，主要从事病毒致病机制与防控研究，E-mail：ljq18853852097@163.com

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刘家齐，硕士生，主要从事病毒致病机制与防控研究，E-mail：ljq18853852097@163.com

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陆灵光, 刘家齐, 卢佩琪, 吴瑞彬, 黄丹妮, 刘佳悦, 梁婉琪, 琚春梅

作者信息

华南农业大学兽医学院广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点实验室，广州 510642

通讯作者:

琚春梅，主要从事病毒致病机制与防控研究，E-mail：juchunmei@scau.edu.cn

作者简介:

陆灵光和刘家齐为同等贡献作者

陆灵光，博士生，主要从事病毒致病机制与防控研究，E-mail：lulingguang0401@163.com

刘家齐，硕士生，主要从事病毒致病机制与防控研究，E-mail：ljq18853852097@163.com

Immune Effect of gD Gene Insertion-enhanced gI/gE/gM Deleted Recombinant Pseudorabies Virus in Mice

Lingguang LU, Jiaqi LIU, Peiqi LU, Ruibin WU, Danni HUANG, Jiayue LIU, Wanqi LIANG, Chunmei JU

Affiliations

Guangdong Provincial Key Laboratory of Zoonosis Prevention and Control，College of Veterinary Medicine，South China Agricultural University，Guangzhou 510642，China

Corresponding Author:

JU Chunmei， E-mail： juchunmei@scau.edu.cn

出版时间: 2026-01-23 doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2026.01.028

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摘要

收起

本研究旨在构建双拷贝gD基因的重组伪狂犬病病毒rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-/gD⁺，并对其免疫效力进行评价。以rPRV-AH-gI^-/gE^-为亲本毒株，利用同源重组技术，缺失gM基因并在其缺失位置插入PRV gD基因表达盒，构建重组病毒rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-/gD⁺。用10^7.0 TCID₅₀ 的rPRV-AH-gI^-/gE^-、rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-、rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-/gD⁺制备灭活疫苗，免疫4周龄昆明小鼠2次，间隔3周，并设商品化疫苗和DMEM对照组，免疫后定期采血，通过中和试验检测小鼠血清中和抗体水平，ELISA试验检测小鼠血清总抗体水平，在首免后6周用10^5.5 TCID₅₀ PRV-AH进行攻毒试验。结果显示：rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-/gD⁺中插入的gD基因获得了表达，表达蛋白大小约为53 ku；rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-/gD⁺组小鼠在首免后4、6周中和抗体及血清总IgG抗体水平均显著高于rPRV-AH-gI^-/gE^-、rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-组（P<0.01），但与商品化疫苗组相比差异不显著（P>0.05）；用PRV-AH攻毒后，rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-/gD⁺、rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-、rPRV-AH-gI^-/gE^-和商品化疫苗组的攻毒保护率分别为100%、70%、60%和90%。综上表明，gD基因的插入可以提高重组病毒的免疫保护效果，为PRV流行毒株候选疫苗的研制奠定了一定的基础。

关键词

伪狂犬病病毒 / 双拷贝gD / 同源重组 / 免疫效力

Abstract

收起

In this study， we aimed to develop recombinant PRV rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-/gD⁺ with double gD and evaluate its immune efficacy. The recombinant virus rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-/gD⁺ was constructed by deleting gM gene and inserting gD expression cassette at the deficient region. Four-week-old Kunming mice were immunized twice with 10^7.0 TCID₅₀ inactivated rPRV-AH-gI^-/gE^-， rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-， rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-/gD⁺ at an interval of 3 weeks. Commercial vaccine and DMEM were as the control group. After immunization， regular blood was collected， neutralizing antibody levels in sera were detected by neutralization test， and total antibody levels were detected by ELISA. At 6 weeks of first immunization， mice were challenged with 10^5.5TCID₅₀ PRV-AH. The inserted gD gene was expressed with the molecular weight of 53 ku in the rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-/gD⁺. The neutralizing and total IgG antibody levels of rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-/gD⁺ group were significantly higher than those of rPRV-AH-gI^-/gE and rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^- at 4 and 6 weeks after first immunization （P<0.01）. However， compared with the commercial vaccine group， the difference was not significant （P>0.05）. After challenged with PRV-AH， the protection rates were 100%， 70%， 60% and 90% of the rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-/gD⁺， rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-， rPRV-AH-gI^-/gE^- and commercial vaccine groups respectively. The results showed that the insertion of gD gene can improve the immune protection effect of the recombinant virus which is helpful in developing vaccine candidate for PRV control.

Key words

pseudorabies virus / double gD / homologous recombination / immune efficacy

引用本文

陆灵光, 刘家齐, 卢佩琪, 吴瑞彬, 黄丹妮, 刘佳悦, 梁婉琪, 琚春梅. gD基因插入增强gI/gE/gM缺失重组伪狂犬病病毒对小鼠的免疫效果. 畜牧兽医学报, 2026 , 57 (1) : 327 -336 . DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2026.01.028

Lingguang LU, Jiaqi LIU, Peiqi LU, Ruibin WU, Danni HUANG, Jiayue LIU, Wanqi LIANG, Chunmei JU. Immune Effect of gD Gene Insertion-enhanced gI/gE/gM Deleted Recombinant Pseudorabies Virus in Mice[J]. Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica, 2026 , 57 (1) : 327 -336 . DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2026.01.028

正文

收起

猪伪狂犬病（pseudorabies，PR）是由伪狂犬病病毒（pseudorabies virus，PRV）引起的重要传染病，对全球养猪业危害巨大，其症状主要表现为母猪流产、产死胎、木乃伊胎，仔猪神经症状及成年猪呼吸道症状等^［1⁃3］。国内主要采用疫苗免疫来防控PR，但2011年后出现了毒力更强的PRV变异毒株，导致PR疫情再度暴发，给我国养猪业造成了巨大的经济损失^［4］。多项研究表明，以Bartha-K61为代表的传统PRV疫苗已不能对变异毒株提供完全有效的保护^［5⁃6］。

PRV gE、gI、gM均为病毒的毒力基因，且为病毒增殖的非必需基因，缺失这些基因可使病毒的毒力降低^［7⁃8］。gD蛋白位于成熟的病毒粒子囊膜表面，分为胞外区和跨膜区，是病毒识别靶细胞受体所必需的糖蛋白，参与病毒的吸附和穿入过程^［9⁃10］。同时，gD糖蛋白也是PRV的主要保护性抗原，作为受体结合蛋白，无论补体是否存在，均能诱导机体产生高水平的中和抗体^{［11⁃12］}。本研究拟以rPRV-AH-gI^-/gE^-为亲本毒株，利用同源重组技术，缺失gM基因并在其缺失位置插入gD基因表达盒，构建重组病毒rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-/gD⁺，并对其免疫效力进行评价，以探讨提高gD表达量是否可增加PRV重组病毒疫苗的免疫效果，为PRV流行毒株候选疫苗的研制提供新思路。

1　材料与方法

收起

1.1　毒株、细胞与质粒

rPRV-AH-gI^-/gE^-重组病毒株与pcDNA-gD均由本实验室前期构建。PRV-AH毒株、幼年叙利亚地鼠肾细胞（BHK-21）、pEGFP-N1质粒均由华南农业大学兽医学院微生物学教研室保存。商品化疫苗为猪伪狂犬病灭活疫苗（HN1201-ΔgE株），购于普莱柯生物工程股份有限公司。

1.2　实验动物

4周龄SPF级雌性昆明鼠购自于南方医科大学实验动物中心。

1.3　引物设计

参考GenBank中登录的伪狂犬病病毒ZJ01株（GI：746719444）基因序列，设计引物gM-LA1-F/R和gM-F/R。根据Sosoo无缝克隆技术引物设计原则，设计引物Sosoo-EGFP-F/R和Sosoo-gD-F/R（表1）。

1.4　重组转移质粒的构建及鉴定

以PRV-AH基因组DNA为模板，分别使用引物gM-LA1-F/R和gM-RA1-F/R进行PCR，扩增同源臂gM-LA1、gM-RA1。将gM-LA1与pMD18-T进行连接得到质粒pMD-gM-LA1，然后将gM-RA1插入pMD-gM-LA1 Hind Ⅲ和Pst Ⅰ酶切位点之间，构建质粒pMD-LA1-RA1。以pEGFP-N1为模板，使用引物Sosoo-EGFP-F/R扩增EGFP基因表达盒；以pcDNA-gD为模板，使用引物Sosoo-gD-F/R扩增gD基因表达盒。将pMD-LA1-RA1经Pst Ⅰ线性化，采用无缝克隆试剂盒将线性化的pMD-LA1-RA1分别与EGFP、gD基因表达盒进行无缝克隆，得到质粒pMD-LA1-EGFP-RA1和pMD-LA1-gD-RA1。对重组质粒pMD-LA1-RA1、pMD-LA1-EGFP-RA1和pMD-LA1-gD-RA1均进行PCR及测序鉴定。

1.5　重组病毒的构建与鉴定

将pMD-LA1-EGFP-RA1转染至BHK-21细胞中，然后用重组病毒rPRV-AH-gI^-/gE^-接种转染细胞，使pMD-LA1-EGFP-RA1和rPRV-AH-gI^-/gE^-在BHK-21细胞中进行同源重组。48 h后收获细胞培养液，再接种于BHK-21细胞中，以EGFP为筛选标记进行2~3次空斑纯化得到rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-/EGFP⁺。提取rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-/EGFP⁺ DNA，使用gM-LA1-F与gM-RA1-R进行PCR鉴定及测序鉴定。同样，使用上述方法将pMD-LA1-RA1、pMD-LA1-gD-RA1分别与rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-/EGFP⁺进行同源重组，通过空斑纯化筛选不出现绿色荧光的感染细胞即可得到重组病毒rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-、rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-/gD⁺，提取病毒DNA，使用gM-LA1-F与gM-RA1-R进行PCR鉴定及测序鉴定。重组病毒rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-、rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-/gD⁺构建如图1所示。

1.6　重组病毒rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-/gD⁺中gD蛋白的表达检测

将重组病毒rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-/gD⁺感染BHK-21后，提取细胞蛋白进行SDS-PAGE，然后将凝胶中的蛋白电转至PVDF膜上，以His鼠源一抗和HRP标记的山羊抗鼠二抗进行Western blot，检测重组病毒中插入gD蛋白的表达；用PRV gD单克隆抗体和AMCA标记的山羊抗小鼠IgG抗体对重组病毒感染的BHK-21细胞进行间接免疫荧光实验检测总gD蛋白的表达。

1.7　动物试验

将4周龄的昆明小鼠随机分为5组（A~E组），每组8只。A~C组分别在后腿肌肉接种10^7.0 TCID₅₀的rPRV-AH-gI^-/gE^-、rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-和rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-/gD⁺灭活疫苗。D组接种商品化灭活疫苗，接种病毒量为10^7.0 TCID₅₀，E组接种DMEM作为对照组，接种剂量均为100 μL。首免后3周进行二免，免疫后0、2、4、6周分别对小鼠进行眼眶采血，采用中和试验检测血清中和抗体水平，ELISA方法检测血清总IgG抗体水平。二免3周后对小鼠进行攻毒，每组小鼠接种10^5.5 TCID₅₀的PRV-AH毒株。攻毒后14 d内每天观察小鼠的临床症状及死亡情况并记录。

1.8　统计分析

试验数据用GraphPad Prismversion 6.0，通过ｔ检验对不同组别之间的数据进行统计分析。统计学上显著性分别表示为*. P<0.05，**. P<0.01，***. P<0.001，****. P<0.000 1。

2　结果

收起

2.1　同源臂gM-LA1、gM-RA1和gD基因的PCR扩增

以PRV-AH基因组DNA为模板，分别使用引物gM-LA1-F/R和gM-RA1-F/R扩增gM同源臂gM-LA1和gM-RA1，PCR产物经1.0%琼脂糖凝胶进行电泳检测，结果如图2A、2B所示，gM-LA1大小约为730 bp，gM-RA1约为750 bp。以pcDNA-gD为模板，使用引物Sosoo-gD F/R扩增gD基因表达盒，结果如图2C所示，片段大小约为2 203 bp。

2.2　重组转移质粒pMD-LA1-EGFP-RA1的PCR鉴定

使用gM-LA1-F与gM-RA1-R对pMD-LA1-EGFP-RA1进行PCR鉴定，结果如图3所示，重组转移质粒pMD-LA1-EGFP-RA1的扩增片段大小约为3 166 bp，而pMD-LA1-RA1扩增片段约为1 455 bp，与预期大小相符。经测序鉴定，证实pMD-LA1-EGFP-RA1与pMD-LA1-RA1构建正确。

2.3　重组转移质粒pMD-LA1-gD-RA1的PCR鉴定

使用gM-LA1-F与gM-RA1-R对pMD-LA1-gD-RA1进行PCR鉴定，结果如图4所示，重组转移质粒pMD-LA1-gD-RA1的扩增片段大小约为3 783 bp，质粒pMD-LA1-RA1扩增片段约为1 455 bp，与预期大小相符。经测序鉴定，证实pMD-LA1-EGFP-RA1构建正确。

2.4　重组病毒rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-/gD⁺的PCR及荧光鉴定

提取重组病毒rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-/gD⁺基因组DNA为模板，使用引物gM-LA1-F与gM-RA1-R进行PCR扩增，以鉴定gD表达盒是否成功插入到gM缺失区域，结果如图5所示，重组病毒rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-/gD⁺扩增片段大小约为3 783 bp，而重组病毒rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-/EGFP⁺扩增片段大小约为3 166 bp，亲本毒株rPRV-AH-gI^-/gE^-和野毒株PRV-AH扩增片段大小约为1 455 bp，结果显示扩增片段大小与预期相符。

将重组病毒接种于BHK-21细胞中，待病变细胞达到80%~90%时进行观察，细胞病变主要表现为细胞变圆，细胞间隙变大，折光率改变并聚集成团。采用荧光显微镜观察，rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-/EGFP⁺感染的细胞出现绿色荧光，而rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-/gD⁺和PRV-AH感染的细胞观察不到绿色荧光，如图6所示。以上结果表明重组转移质粒pMD-LA1-gD-RA1已与rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-/EGFP⁺发生了同源重组，EGFP基因被gD表达盒替换，成功获得了双拷贝gD基因的重组病毒rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-/gD⁺。

2.5　重组病毒rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-/gD⁺中gD基因的表达检测

将rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-/gD⁺接种于BHK-21细胞中，待细胞病变完全时提取细胞总蛋白。因为在插入的gD基因编码区5’端引入了His标签序列，用鼠源His-tag单抗作为一抗，可通过Western blot检测外源gD基因的表达情况，结果如图7所示：重组病毒rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-/gD⁺中插入的gD基因获得了表达，蛋白大小约为53 ku，而rPRV-AH-gI^-/gE^-和PRV-AH以及BHK-21细胞中均未见相应目的条带的表达；同时以PRV gD单克隆抗体和AMCA标记的山羊抗小鼠IgG抗体对重组病毒感染细胞进行间接免疫荧光检测，可以看出rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-/gD⁺株中gD蛋白表达水平比rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-更高（图8），表明插入的gD基因获得成功表达。

2.6　rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-/gD⁺灭活疫苗免疫小鼠血清中和抗体检测

在首免后第0、2、4、6周分别对各组小鼠进行眼眶采血并分离血清，通过中和试验检测血清样品中PRV中和抗体水平。结果如图9所示，各组小鼠中和抗体水平在首免后2~6周均呈上升趋势。在首免后2周，各组免疫小鼠的血清中和抗体水平均不高；在首免4周与6周，血清中和抗体水平增长明显，特别是rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-/gD⁺组，显著高于rPRV-AH-gI^-/gE^-和rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-免疫组（P<0.000 1），但与商品化疫苗组相比差异不显著（P>0.05）。

2.7　rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-/gD⁺灭活疫苗免疫小鼠血清总IgG抗体检测

以纯化的PRV-AH病毒为包被抗原，对免疫后第0、2、4、6周小鼠血清进行200倍稀释后，采用间接ELISA对血清总IgG抗体进行检测，结果如图10所示，rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-/gD⁺和rPRV-AH-gI^-/gE^-灭活疫苗组抗体水平在0~6周均逐渐升高，而rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-和商品化疫苗组在首免后4周达到高峰后开始降低；在首免4~6周，rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-/gD⁺组与rPRV-AH-gI^-/gE^-和rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-组相比，IgG抗体水平差异显著（P<0.01），与商品化疫苗组相比差异不显著（P>0.05）。

2.8　rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-/gD⁺灭活疫苗免疫小鼠攻毒保护效果检测

在首免后第6周，用PRV-AH毒株对各组小鼠进行攻毒，攻毒剂量为10^5.5 TCID₅₀。攻毒后14 d内每天观察小鼠的临床症状及死亡情况，并记录绘制生存曲线。结果如图11所示，DMEM组小鼠在攻毒后第2天出现奇痒症状，3 d后小鼠全部死亡。rPRV-AH-gI^-/gE^-和商品化疫苗组小鼠均在攻毒第3天后陆续出现临床症状和部分死亡，rPRV-AH-gI^-/gE^-免疫组小鼠死亡时间在攻毒后3~6 d，存活率为60%，rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-组死亡时间在攻毒后4~6 d，存活率为70%，商品化疫苗免疫组有1只小鼠在攻毒后第6天出现临床症状并死亡，存活率为90%。rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-/gD⁺免疫组小鼠在攻毒后未出现死亡，攻毒保护率为100%，与rPRV-AH-gI^-/gE^-组（60%）和rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-组（70%）相比差异显著（P<0.05），与商品化疫苗免疫组攻毒保护率（90%）相比，差异不显著（P>0.05）。

3　讨论

收起

伪狂犬病病毒可以感染大多数哺乳动物，除猪外，PRV感染通常会导致严重瘙痒、中枢神经系统功能障碍^{［13⁃14］}。猪是其唯一的贮藏宿主^［15］，且不同年龄段猪感染后会表现出不同的临床症状，如新生仔猪表现神经症状和死亡，母猪出现流产、死胎、产木乃伊胎，公猪丧失种用能力，成年猪多表现呼吸道症状^{［16⁃17］}。疫苗接种是防控该病的有效措施，国内外多采用基因工程技术缺失PRV毒力基因以研制基因工程疫苗^{［18⁃19］}。gE、gI基因是PRV的毒力基因，也是病毒增殖过程中的非必需基因，缺失gE、gI基因后可使病毒的毒力降低，但不影响病毒在宿主细胞内的复制，因此gE和gI基因常作为PRV基因缺失疫苗的候选基因^{［20⁃21］}。此外，PRV gE基因缺失株免疫动物不产生抗gE糖蛋白的抗体，因此配合gE鉴别诊断方法可鉴别野毒感染动物与疫苗免疫动物，有利于猪场PRV的净化^{［22⁃24］}。

gM蛋白由PRV UL10基因编码，是PRV增殖的一种非必需糖蛋白，缺失gM基因的PRV可在细胞中正常复制，但由于gM参与病毒的膜融合过程，因此缺失gM基因会影响PRV在细胞间的扩散，从而导致空斑减小^{［25⁃26］}。gM也是PRV重要的毒力相关因子，可通过Caspase-3介导的细胞凋亡参与病毒的复制及致病过程，缺失gM基因可使PRV毒力明显降低，因此可作为基因缺失疫苗的候选基因^［8，27］。gD糖蛋白是PRV的重要保护性抗原，能刺激机体产生中和抗体，对控制PRV感染起着重要的作用^{［28⁃29］}。有研究表明，使用表达PRV-gD基因的DNA疫苗对小鼠进行免疫，可以诱导PRV特异性淋巴细胞增殖反应和血清中和抗体的产生^［30］。本实验室前期研究显示rPRV-AH-gI^-/gE^-对小鼠仍具有一定毒力^［31］，因此本研究将重组病毒灭活制备灭活疫苗进行免疫效果评价。小鼠免疫及攻毒试验结果显示，重组病毒rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-/gD⁺免疫组小鼠产生的血清中和抗体和血清IgG总抗体水平显著高于rPRV-AH-gI^-/gE^-和rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-免疫组；rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-/gD⁺免疫组小鼠在攻毒后未出现死亡，攻毒保护率为100%，与rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-组（70%）和rPRV-AH-gI^-/gE^-组（60%）相比差异显著（P<0.05）。研究结果表明，通过在PRV gM基因缺失位置插入gD表达盒的方式提高gD蛋白表达量可以增强基因缺失疫苗的免疫保护效果。

4　结论

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本研究通过同源重组获得了双拷贝gD基因的重组病毒rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-/gD⁺，并评价了重组病毒灭活疫苗对小鼠的免疫效力。结果表明，rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-/gD⁺灭活疫苗免疫效果优于rPRV-AH-gI^-/gE^-和rPRV-AH-gI^-/gE^-/gM^-，对小鼠的免疫保护率可达100%，研究结果可为PRV变异株候选疫苗的研制提供一定的新思路。

基金

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国家重点研发计划项目(2022YFD1800100)

参考文献

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文献

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2026年第57卷第1期

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doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2026.01.028

接收时间：2024-11-08
首发时间：2026-09-16
出版时间：2026-01-23

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收稿日期：2024-11-08

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国家重点研发计划项目(2022YFD1800100)

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华南农业大学兽医学院广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点实验室，广州 510642

通讯作者:

琚春梅，主要从事病毒致病机制与防控研究，E-mail：juchunmei@scau.edu.cn

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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