畜牧兽医学报

基因 Gene	正向引物（5′→3′） Forward primer	反向引物（5′→3′） Reverse primer
β-actin	CGTCCGTGACATCAAGGAGAAGC	GGAACCGCTCATTGCCGATGG
IL-17A	AGTCTGGTGGCTCTTGTGAAGG	CATGCTGCGGGAAGTTCTTGTC
IL-17RA	CTTACAGACGCCAATGAAGGTGAG	CTCCTCGTGCCGCCTGAC
Act1	TCCTCCGCCTGCCTCTCC	TCTCACAGCCGACACATAGCC
TRAF6	GGAGGCTGGCAGGCTGAAG	GGTGGTGGCAGTGAGGAGAC
ALB	GTGTTCTCTGCTTGACCTGATGTG	GGTGTAACGAACTATGAGCCTGTAAC
MMP9	AAGCGTGATTGTGAAGACCATACTC	GAAGTGATCCTGGCAGAAGTAAGC
IL-1β	ATGAAGAGCTGCATCCAACACCTG	ACCGACACCACCTGCCTGAAG
TNF-α	CTGGCGGAGGAGGTGCTCTC	GGAGGAAGGAGAAGAGGCTGAGG
IL-6	CACTGACCTGCTGGAGAAGATGC	CCGAATAGCTCTCAGGCTGAACTG
IL-8	ACACATTCCACACCTTTCCAC	ACCTTCTGCACCCACTTTTC
IL-10	GGACCAACTGCACAGCTT	GTGGCATCACCTCTTCCA
IFN-γ	GGCAGCTAACCTAAGCAAGA	CAAAGTAGTGGCTCAGAATCC

基因 Gene	正向引物（5′→3′） Forward primer	反向引物（5′→3′） Reverse primer
β-actin	CGTCCGTGACATCAAGGAGAAGC	GGAACCGCTCATTGCCGATGG
IL-17A	AGTCTGGTGGCTCTTGTGAAGG	CATGCTGCGGGAAGTTCTTGTC
IL-17RA	CTTACAGACGCCAATGAAGGTGAG	CTCCTCGTGCCGCCTGAC
Act1	TCCTCCGCCTGCCTCTCC	TCTCACAGCCGACACATAGCC
TRAF6	GGAGGCTGGCAGGCTGAAG	GGTGGTGGCAGTGAGGAGAC
ALB	GTGTTCTCTGCTTGACCTGATGTG	GGTGTAACGAACTATGAGCCTGTAAC
MMP9	AAGCGTGATTGTGAAGACCATACTC	GAAGTGATCCTGGCAGAAGTAAGC
IL-1β	ATGAAGAGCTGCATCCAACACCTG	ACCGACACCACCTGCCTGAAG
TNF-α	CTGGCGGAGGAGGTGCTCTC	GGAGGAAGGAGAAGAGGCTGAGG
IL-6	CACTGACCTGCTGGAGAAGATGC	CCGAATAGCTCTCAGGCTGAACTG
IL-8	ACACATTCCACACCTTTCCAC	ACCTTCTGCACCCACTTTTC
IL-10	GGACCAACTGCACAGCTT	GTGGCATCACCTCTTCCA
IFN-γ	GGCAGCTAACCTAAGCAAGA	CAAAGTAGTGGCTCAGAATCC

基于网络药理学和分子对接技术分析马齿苋对奶牛乳腺炎的抗炎机制

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丁涛 ¹^,² , 苗宇航 ¹^,² , 辛杰 ¹^,² , 马文妍 ¹^,² , 浮怀琳 ³ , 胡菊梅 ⁴ , 杜军 ¹^,²

畜牧兽医学报 | 临床兽医 2026,57(1): 500-512

收起

畜牧兽医学报 |临床兽医 2026 , 57 (1) : 500 -512

基于网络药理学和分子对接技术分析马齿苋对奶牛乳腺炎的抗炎机制

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丁涛¹^,², 苗宇航¹^,², 辛杰¹^,², 马文妍¹^,², 浮怀琳³, 胡菊梅⁴, 杜军¹^,²

作者信息

^1.宁夏大学生命科学学院，银川 750021

^2.西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室，银川 750021

^3.青海省海西州农牧特色产业指导服务中心，海西 817000

^4.青海省循化县农业农村和科技局，海东 811100

通讯作者:

杜军，主要从事动物病原生物学研究，E-mail：dujun@nxu.edu.cn

作者简介:

丁涛，硕士生，主要从事病原生物学与宿主免疫研究，E-mail：taoding113@163.com

Analysis of the Anti-inflammatory Mechanism of Portulaca oleracea L. on Mastitis in Dairy Cows Based on Network Pharmacology and Molecular Docking Technology

Tao DING¹^,², Yuhang MIAO¹^,², Jie XIN¹^,², Wenyan MA¹^,², Huailin FU³, Jumei HU⁴, Jun DU¹^,²

Affiliations

^1.College of Life Sciences，Ningxia University，Yinchuan 750021，China

^2.Key Laboratory of Conservation and Utilization of Biological Resources with Western Characteristics，Ministry of Education，Yinchuan 750021，China

^3.Haixi Farming and Animal Husbandry Characteristic Guidance Service Centre，Haixi 817000，China

^4.The Agriculture，Rural Affairs and Science and Technology Bureau of Xunhua County，Qinghai Province，Haidong 811100，China

Corresponding Author:

DU Jun， E-mail： dujun@nxu.edu.cn

出版时间: 2026-01-23 doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2026.01.044

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摘要

收起

基于网络药理学、分子对接技术挖掘马齿苋主要活性成分抑制奶牛乳腺炎的关键靶点，体外细胞试验验证其可能的作用机制。利用TCMSP数据库检索马齿苋的活性成分及对应靶点，使用GeneCards数据库和OMIM数据库检索奶牛乳房炎的疾病靶点，并于马齿苋活性成分靶点进行交集整合，并构建PPI网络。DAVID数据库进行GO功能富集分析和KEGG通路富集分析，AutoDock软件进行分子对接验证。最后，CCK-8法测定马齿苋提取物对奶牛乳腺上皮细胞的影响，LPS诱导MAC-T构建体外炎症模型，RT-qPCR检测关键靶点、IL-17信号通路以及炎症相关因子表达情况。结果显示：共筛选到马齿苋10种活性成分及188个对应靶点，从GeneCards和OMIM数据库中筛选出2 495个奶牛乳腺炎的相关靶点，通过Venn平台共找到40个共表达靶点。通过PPI网络得到ALB、TNF、IL6、IL1B、MMP9等10个关键靶点，涉及AGE-RAGE、脂质和动脉粥样硬化、癌症、IL-17、PI3K-AKT等信号通路。体外细胞试验表明，马齿苋能够增加MAC-T中ALB的含量，并提供IL-17信号通路下调炎症因子MMP9、TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-8、IFN-γ基因的转录，上调抑炎因子IL-10基因的转录。本研究揭示了马齿苋中能够通过抑制IL-17信号通路来抑制炎症因子的释放，从而抑制奶牛乳腺炎症反应。

关键词

网络药理学 / 马齿苋 / 分子对接 / 奶牛乳腺炎

Abstract

收起

Based on network pharmacology and molecular docking technology， the key targets of the main active components of Portulaca oleracea L. （POL） to inhibit mastitis in dairy cows were explored， and the possible mechanism of action was verified by in vitro cell experiments. The TCMSP database was used to search the active ingredients and corresponding targets of POL. The GeneCards database and OMIM database were used to search the disease targets of dairy cow mastitis， and the intersection and integration of the active ingredient targets of POL were carried out， and the PPI network was constructed. DAVID database was used for GO function enrichment analysis and KEGG pathway enrichment analysis， and AutoDock software was used for molecular docking verification. Finally， the effect of purslane extract on bovine mammary epithelial cells was determined by CCK-8 method. LPS induced MAC-T to construct an in vitro inflammation model. RT-qPCR was used to detect the expression of key targets， IL-17 signaling pathway and inflammation-related factors. Results showed that a total of 10 active components and 188 corresponding targets of POL were screened. A total of 2 495 targets related to mastitis in dairy cows were screened from the GeneCards and OMIM databases， and a total of 40 co-expressed targets were found through the Venn platform. Ten key targets such as ALB， TNF， IL6， IL1 B， and MMP9 were obtained through the PPI network， involving AGE-RAGE， lipid and atherosclerosis， cancer， IL-17， PI3K-AKT and other signaling pathways. In vitro cell experiments showed that purslane could increase the content of ALB in MAC-T， and provide IL-17 signaling pathway to down-regulate the transcription of inflammatory factors MMP9， TNF-α， IL-6， IL-1β， IL-8 and IFN-γ genes， and up-regulate the expression of anti-inflammatory factor IL-10 gene. This study revealed that purslane can inhibit the release of inflammatory factors by inhibiting the IL-17 signaling pathway， thereby inhibiting the inflammatory response of dairy cow mammary gland.

Key words

network pharmacology / Portulaca oleracea L. / molecular docking / dairy cow mastitis

引用本文

丁涛, 苗宇航, 辛杰, 马文妍, 浮怀琳, 胡菊梅, 杜军. 基于网络药理学和分子对接技术分析马齿苋对奶牛乳腺炎的抗炎机制. 畜牧兽医学报, 2026 , 57 (1) : 500 -512 . DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2026.01.044

Tao DING, Yuhang MIAO, Jie XIN, Wenyan MA, Huailin FU, Jumei HU, Jun DU. Analysis of the Anti-inflammatory Mechanism of Portulaca oleracea L. on Mastitis in Dairy Cows Based on Network Pharmacology and Molecular Docking Technology[J]. Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica, 2026 , 57 (1) : 500 -512 . DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2026.01.044

正文

收起

奶牛乳腺炎是由奶牛乳腺组织感染引起的炎症反应，它影响奶牛健康，降低奶牛生产性能，导致奶产量下降，给奶牛养殖行业带来巨大的经济损失^［1⁃2］。引起奶牛乳腺炎的病原微生物主要有细菌、真菌、放线菌、支原体和病毒^［3⁃4］。当前抗生素是治疗奶牛乳腺炎的主要手段，但抗生素广泛使用导致的病原菌耐药率增加和在奶制品中的残留问题困扰着奶牛产业的发展^［5］。寻找能够代替抗生素的中草药及其活性成分成为了研究热点。

马齿苋（Portulaca oleracea L.），一种药食同源的植物，其味酸、性寒，具有凉血解毒、除湿通淋、止痢等功效。现代医学研究表明马齿苋含有丰富的活性物质，具有抗菌、抗氧化、抗衰老、降血压、增强免疫等活性功能，常用于治疗细菌性痢疾、疮疡痈疖、湿癣、湿疹等^［6⁃7］。有研究表明，在奶牛的饲料中每日添加1 500 mg·kg^-1的马齿苋干粉，15 d后对其奶量进行测定，发现产奶量比对照组的提高了近1.2倍^［8］。此外，通过抑菌实验发现马齿苋对大肠杆菌及金黄色葡萄球菌有较好的抑菌作用，而在中药复方中，含有马齿苋、鱼腥草、蒲公英这三种中药对奶牛乳腺炎的临床治愈具有较好的效果^［9］。但马齿苋抑制奶牛乳腺炎症的确切机制尚未明晰。

网络药理学基于“疾病-基因-靶点-药物”相互作用的关系，能够系统综合地观察药物对于疾病的干预与影响^［10］。分子对接技术能够在短时间内对大量化合物进行筛选，快速找到与受体结合能力强的分子，并且可以直观地展示分子与受体的结合方式，可以更好地理解药物与靶标之间的相互作用机制^［11］。因此本文利用药理学数据库，结合疾病靶点数据库，分析马齿苋中抑制炎症反应的主要活性成分、作用的核心靶点以及主要的信号通路，并通过体外细胞试验验证马齿苋抑制奶牛乳腺炎症的作用机制，为马齿苋的开发与利用提供科学依据，为奶牛乳腺炎的防治提供新的思路。

1　材料与方法

收起

1.1　数据库与软件

中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP，https：//old.tcmsp-e.com/tcmsp.php）；UniProt数据库（https：//www.uniprot.org/）；GeneCards数据库（https：//www.genecards.org/）；OMIM数据库（https：//www.omim.org/）；Venn平台（https：//bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/Venn/）；STRING是数据库（https：//cn.string-db.org/）；DAVID数据库（https：//davidbioinformatics.nih.gov/）；微生信在线分析平台（https：//www.bioinformatics.com.cn/）；Cytoscape3.9.1软件；AutoDock1.5.7软件；PyMOL3.1软件。

1.2　细胞

奶牛乳腺上皮细胞（bovine mammary epithelial cells，MAC-T）由本实验室保存。

1.3　药物与试剂

马齿苋购自上海源叶生物科技有限公司；Cell Counting Kit-8试剂盒购自赛文创新（北京）生物科技有限公司；DMEM-High Glucose培养液、胎牛血清（FBS）、胰蛋白酶ED-TA（2.5 g·L^-1胰蛋白酶，0.2 g·L^-1 EDTA，酚红）均购自以色列BI公司；HiScript^® III All-in-one RT SuperMix Perfect for qPCR和ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix均购自南京诺唯赞生物科技股份有限公司。

1.4　网络药理学

1.4.1　马齿苋活性成分的筛选及其对应靶点筛选

通过TCMSP数据库检索马齿苋成分，将搜索结果按照口服利用度（oral bioavailability，OB）≥30%，类药性（drug-likeness，DL）≥0.18进行筛选，在Related Targets选项中获取筛选得到的活性成分所对应的靶点蛋白名称，删除重复靶点后，使用UniProt数据库中的UniProtKB检索选项将蛋白名称转换成基因名称，通过Cytoscape3.9.1软件构建“马齿苋活性成分-潜在靶点”网络图。

1.4.2　奶牛乳腺炎相关靶点的获取

以“bovine mastitis”为关键词，通过使用GeneCards数据库和OMIM数据库检索奶牛乳腺炎的相关靶点，将结果记录在表格中；将“1.4.1”获得的马齿苋相关活性成分靶点与奶牛乳腺炎相关靶点导入Venn平台构建韦恩图。

1.4.3　蛋白质互作网络的绘制

将“1.4.2”获得的交集靶点导入STRING数据库构建蛋白质互作（Protein-protein interaction，PPI）网络图，将结果导入Cytoscape 3.9.1软件进行可视化分析。

1.4.4　交集靶点的GO功能注释和KEGG通路富集分析

将交集靶点导入DAVID数据库，选择物种Bos taurus，以P≤0.05为标准，进行GO功能和KEGG信号通路分析，并使用微生信平台进行可视化。

1.4.5　分子对接验证

从Uniport数据库中下载关键靶点的晶体结构，在TCMSP数据库中下载马齿苋活性成分的MOL2格式文件，利用AutoDock软件对蛋白进行加氢，对活性组分进行加电荷、确定配体的路径以及进行可旋转键的搜索与定义，随后使用AutoDock Vina对马齿苋活性成分与关键靶点展开半柔性对接，选取对接结合能打分排序前5位的最佳结合构象用于对接结合模式分析，并用PyMOL软件进行分子对接作图。

1.5　细胞试验

1.5.1　细胞复苏与培养

将冻存的MAC-T置于37 ℃无菌水中水浴30 s。待细胞完全融化后离心（1 000 r·min^-1，5 min），弃上清，用1 mL完全培养基重悬后接种于细胞培养皿中，放入37 ℃，5% CO₂培养箱内培养。当细胞生长至培养皿80%~90% 时进行消化后传代。

1.5.2　马齿苋提取物的制备

称取马齿苋药材120 g，粉碎机粉碎，加入10倍体积的蒸馏水煎煮2 h，过滤得到的水提液放在烧杯中备用，向残渣中再次加入10倍体积的蒸馏水煎煮2 h，过滤，重复两次后将得到的水提液合并，浓缩干燥得到4 g马齿苋干粉。

1.5.3　试验分组

取生长状态良好的MAC-T，设置4个试验组：1）空白对照组；2）模型组：1 μg·mL^-1 LPS处理MAC-T 24 h；3）试验组：不同浓度马齿苋（0、2.5、5、10、20、40、80 μg·mL^-1）处理组。

1.5.4　CCK-8法筛选马齿苋作用浓度和时间

96孔板每孔接种1×10⁴个MAC-T，待细胞贴壁后用不同浓度（0、2.5、5、10、20、40、80 μg·mL^-1）的马齿苋处理细胞，37 ℃、5% CO₂培养箱中培养3、6、12、24 h后，加入CCK-8工作液，继续培养2 h，酶标仪检测OD_{450 nm}值，根据公式计算细胞活力。

1.5.5　qRT-PCR检测相关基因的转录情况

将各处理组按4×10⁵·孔^-1接种至6孔板中，待处理时间完毕后，收集细胞，Trizol法提取总RNA，反转录后，采用Bio-Rad iQ5 Real-time PCR检测系统，使用ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix以β-actin为内参、对排名前5的关键靶点ALB、TNF、IL-6、IL-1β、MMP9，IL-17信号通路相关基因IL-17A、IL-17RA、Act1、TRAF6和炎症相关基因IL-8、IFN-γ和IL-10基因进行检测，反应体系为20 μL，反应条件：95 ℃预变性30 s；95 ℃10 s变性，60 ℃30 s退火/延伸，共40个循环；熔解曲线：90 ℃15 s，60 ℃ 1 min，95 ℃15 s，扩增结束后得到Ct值，以2^-ΔΔ^Ct 法计算每个基因的相对转录水平。引物委托上海生工生物公司合成，引物序列见表1。

2　结果

收起

2.1　马齿苋活性成分与对应靶点

通过TCMSP数据库检索马齿苋，以OB≥30%，DL≥0.18为筛选条件，由表2可知，共筛选到木犀草素、槲皮素、β-谷甾醇、山奈酚、花生四烯酸、β-胡萝卜素、环阿屯醇、5，7-二羟基-2-（3-羟基-4-甲氧基苯基）色满-4-酮、异甜菜素和异甜菜甙10种活性成分及188个对应靶点。通过构建马齿苋活性成分-潜在作用靶点网络（图1），发现马齿苋的10个活性成分与预测靶点之间存在着错综复杂的相互作用关系。

2.2　奶牛乳腺炎靶点的获取

在GeneCards数据库检索到177个奶牛乳腺炎靶点，OMIN数据库检索到2 343个奶牛乳腺炎靶点。将以上数据库获得的靶点合并删除重复值后，最终得到2 495个奶牛乳腺炎靶点。将筛选的188个马齿苋活性成分对应靶点与2 495个奶牛乳腺炎靶点上传至Venn平台，绘制韦恩图，得到交集靶点40个（图2）。

2.3　蛋白质互作网络构建

将“2.2”获得的40个靶点导入STRING数据库构建蛋白质互作网络图，将结果以TSV格式导出到Cytoscape3.9.1软件，使用度值大小来表示节点大小，度值越大，节点越大，说明其所代表的靶点越重要，结果如图3所示。

2.4　交集靶点的GO功能注释和KEGG通路富集分析

通过使用DAVID数据库对马齿苋活性成分抑制奶牛乳腺炎的靶点进行GO注释分析，共得出114条条目，其中BP有74条，CC有19条，MF有21条，各取前10条进行可视化处理得到GO生物学模块（图4）。KEGG分析得出98条通路，取前20条通路在微生信平台进行可视化处理（图5）。

2.5　分子对接结果

根据度值，将马齿苋的活性成分以及马齿苋抑制奶牛乳腺炎的关键靶点进行排序，从中选取度值排名前5的活性成分（槲皮素、山奈酚、木犀草素、β-谷甾醇和花生四烯酸）和关键靶点（ALB、TNF、IL6、IL1B和MMP9）进行分子对接，结果见图6所示，除TNF靶点与花生四烯酸结合能高于-20.92 kJ·mol^-1外，其余结合能均低于-20.92 kJ·mol^-1，表明对接结果良好，其中ALB靶点与β-谷甾醇的结合能最低，为-39.33 kJ·mol^-1，结合最稳定。选取结合能最低的前5个组合利用PyMOL软件进行对接可视化，使分子对接结果更直观（图7）。

2.6　马齿苋作用浓度和时间

通过CCK-8法检测各处理组在不同时间下对MAC-T活力的影响。结果如图8所示，与空白对照组相比，在作用6 h时，马齿苋浓度为20 μg·mL^-1时，细胞活力显著高于空白对照组，因此后续试验选取马齿苋作用浓度为20 μg·mL^-1，作用时间为12 h。

2.7　马齿苋对关键靶点ALB、TNF、IL-6、IL-1B、MMP9的影响

qRT-PCR检测马齿苋作用后MAC-T关键靶点ALB、TNF、IL-6、IL-1β、MMP9基因转录情况。结果如图9所示，相较于模型组，试验组TNF-α、IL-6、IL-1β和MMP9基因转录水平显著下降（P<0.05），而ALB基因显著上调（P<0.05）。

2.8　马齿苋对MAC-T IL-17信号通路相关基因的影响

通过对马齿苋作用后MAC-T中IL-17信号通路关键基因的测定，结果如图10所示，使用马齿苋干预后，IL-17A、IL-17RA、Act1、TRAF6基因转录水平均较模型组均显著下降（P<0.05），提示马齿苋可能通过IL-17信号通路抑制MAC-T炎症的发生。

2.9　马齿苋对MAC-T炎症的影响

为进一步验证马齿苋对MAC-T炎症的影响，使用qRT-PCR法检测马齿苋作用后MAC-T促炎因子IL-8、IFN-γ和抑炎因子IL-10基因转录情况。结果如图11所示，相较于模型组，试验组IL-8、IFN-γ基因的转录水平均显著下调（P<0.05），抑炎因子IL-10基因的转录水平显著上调（P<0.05），提示马齿苋可以抑制LPS诱导的MAC-T炎症反应。

3　讨论

收起

奶牛乳腺炎目前已成为奶牛最普遍的疾病，不仅给畜牧业造成严重的经济损失，而且对人类和动物的健康也造成了极大的威胁。马齿苋已被证明具有防治奶牛乳腺炎的作用，但其作用的活性成分、作用靶点及相关作用机制研究较少。本研究采用网络药理学和分子对接技术以及体外细胞试验探讨马齿苋抑制奶牛乳腺炎的作用机制。

通过TCMSP数据库共检索到木犀草素、槲皮素、β-谷甾醇、山奈酚等10个活性成分。其中木犀草素作为类黄酮，具有良好的抗炎作用，对小鼠乳腺炎的发生具有一定的保护作用^［12］。槲皮素能够通过肿瘤坏死因子信号通路治疗小鼠乳腺炎^［13］。且体外试验表明槲皮素能够通过TLR4-NF-κB信号通路减轻LPS诱导的MAC-T的炎症反应^［14］。β-谷甾醇是一种天然植物类固醇，可以通过检索ROS积累和恢复抗氧化酶活性来减少氧化应激，通过NF-κB信号通路抑制MAC-T炎症反应^［15］。此外，β-谷甾醇还能够抑制LPS诱导的小鼠乳腺上皮细胞炎症反应，并且能够促进乳蛋白的合成^［16］。非靶向脂质组学分析发现花生四烯酸可以影响MAC-T甘油脂类和鞘脂类代谢过程发生变化^［17］。β-胡萝卜素属于天然胡萝卜素或类胡萝卜素家族，具有抗炎和抗氧化作用，能够通过降低STIM1/ORAI1的表达抑制NF-κB的活化，从而减轻LPS诱导的MAC-T炎症^［18］。体外试验证明，β-胡萝卜素能够通过调节NLRP3炎症小体抑制小鼠乳腺炎^［19］。本研究检索到马齿苋含有木犀草素、槲皮素、β-谷甾醇、山奈酚等多种活性成分，这些活性成分能够在不同程度上抑制组织和细胞炎症反应。因此，马齿苋有望成为一种治疗奶牛乳腺炎的潜在药物。

在马齿苋减轻奶牛乳腺炎的40个靶点中，ALB、TNF、IL-6、IL-1B和MMP9被认为是核心靶点，可能在马齿苋抑制奶牛乳腺炎中起主要作用。ALB是奶牛乳腺炎的一个重要血清生化指标，其含量的降低与乳腺炎的发生和病情严重程度密切相关，可作为奶牛乳腺炎的血液学诊断指标^{［20⁃21］}。TNF、IL-6和IL-1B能够促进炎症反应并参与免疫调节，是导致奶牛乳腺炎的主要炎症因子^{［22⁃23］}。IL-6被认为是检测奶牛乳腺炎的标志物，奶牛血清中TNF-α、IL-1B的含量变化可以作为奶牛隐性乳腺炎的诊断指标^{［24⁃25］}。MMP9属于基质金属蛋白酶家族，主要由中性粒细胞和巨噬细胞合成和分泌，在炎症反应中起重要作用^［26］。研究表明，MMP9作为IL-17信号通路下游炎症因子的一种，分泌过多会促进炎症发生^［27］。此外，在患有乳腺炎的奶牛的牛奶中MMP9的含量也显著高于健康奶牛^［28］。

GO功能富集分析显示，马齿苋活性成分能够在细胞外空间、胞外区、枝晶膜等部位通过参与炎症反应的正调控、IL-6和IL-8产生的正调控等生物进程发挥作用。KEGG功能富集显示，IL-17信号通路可能是马齿苋治疗奶牛乳腺炎的关键信号通路。IL-17主要由辅助性T细胞（TH17）产生，可以直接或间接诱导多种细胞因子、趋化因子和炎症因子的表达。IL-17能够泛素化TRAF6，进而激活NF-κB和MAPK通路，进一步诱导TNF、IL-1β、IL-6分泌的增加，参与炎症反应^［29］。研究表明，槲皮素能够抑制TH17细胞和IL-17的产生，从而减轻机体炎症反应^［30］。山奈酚能够显著抑制IL-1β、IL-6、TNF-α和TGF-β1的表达，并恢复Th17/Treg失衡^［31］。与之相反，IL-17信号通路的激活会加剧炎症反应的发生，IL-6、IL-1β与IL-8的分泌^［32］。

因此，本研究通过体外试验对网络药理学结果进行验证，结果发现，马齿苋能够显著增加MAC-T中ALB的含量，并且能够通过抑制IL-17信号通路，抑制下游炎症因子的释放，表明马齿苋可以通过IL-17信号通路来调节细胞因子的表达，从而降低MAC-T的炎症水平。

综上所述，本研究通过网络药理学对马齿苋调控奶牛乳腺炎的潜在作用靶点及通路进行预测，并结合体外细胞试验验证了马齿苋能够通过IL-17信号通路下调奶牛乳腺上皮细胞促炎因子的表达，从而抑制奶牛乳腺炎的炎症反应，为后续奶牛乳腺炎的治疗提供新的实验依据。

4　结论

收起

本研究通过网络药理学筛选得到ALB、TNF、IL-6、IL-1B和MMP9是马齿苋治疗奶牛乳腺炎的核心靶点，并且KEGG富集分析显示IL-17信号通路是其发挥调控作用的重要通路，qRT-PCR验证结果表明，马齿苋可以通过IL-17信号通路抑制下游炎症因子的表达，进而减轻奶牛乳腺炎的炎症反应，为今后奶牛乳腺炎的防治策略研究提供理论依据。

基金

收起

宁夏自然科学基金项目(2024AAC03118)
国家自然科学基金项目(32160044)

参考文献

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文献

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2026年第57卷第1期

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doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2026.01.044

接收时间：2025-01-20
首发时间：2026-09-16
出版时间：2026-01-23

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收稿日期：2025-01-20

基金

宁夏自然科学基金项目(2024AAC03118)

国家自然科学基金项目(32160044)

作者信息

^1.宁夏大学生命科学学院，银川 750021

^2.西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室，银川 750021

^3.青海省海西州农牧特色产业指导服务中心，海西 817000

^4.青海省循化县农业农村和科技局，海东 811100

通讯作者:

杜军，主要从事动物病原生物学研究，E-mail：dujun@nxu.edu.cn

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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