畜牧兽医学报

序号 Number	株系 Strain	登录号 Accession No.	基因型 Gene type	国家 Country	分离年份 Isolation year
1	AUS/NSW/CAT_2-12/2007	KX357674.1	GI.4	澳大利亚	2007
2	AUS/NSW/LWR-1/2010	KX357676.1	GI.4	澳大利亚	2010
3	AUS/VIC/BM-60/2009	KX357705.1	GI.4	澳大利亚	2009
4	CD/China	AY523410.1	GI.1	中国	2004
5	GI.3/O cun/FR/2006/06-11	MN737115.1	GI.3	法国	2006
6	GI.3/Ocun/FR/2008/08-133	MN746289.1	GI.3	法国	2008
7	GI.3/O cun/FR/2009/09-48	MN737116.1	GI.3	法国	2009
8	HB	KY437668.1	GI.1	中国	2016
9	Italy-90	EU003579.1	GI.1	意大利	1990
10	LIB	MN853659.1	GI.2	波兰	2018
11	NJ-2009	HM623309.1	GI.1	中国	2009
12	RHDV2-NL2016	MN061492.1	GI.2	荷兰	2016
13	RHDV-V351	U54983.1	GI.1	捷克	1996
14	RHDV-N11	KM878681.1	GI.2	西班牙	2011
15	Rij06-12	KP129395.1	GI.2	西班牙	2014
16	RHDV2-SC2020/0401	MT586027.1	GI.2	中国	2020
17	SOS404	MG763950.1	GI.2	葡萄牙	2015
18	ZD0	KU882095.1	GI.1	波兰	2000

序号 Number	株系 Strain	登录号 Accession No.	基因型 Gene type	国家 Country	分离年份 Isolation year
1	AUS/NSW/CAT_2-12/2007	KX357674.1	GI.4	澳大利亚	2007
2	AUS/NSW/LWR-1/2010	KX357676.1	GI.4	澳大利亚	2010
3	AUS/VIC/BM-60/2009	KX357705.1	GI.4	澳大利亚	2009
4	CD/China	AY523410.1	GI.1	中国	2004
5	GI.3/O cun/FR/2006/06-11	MN737115.1	GI.3	法国	2006
6	GI.3/Ocun/FR/2008/08-133	MN746289.1	GI.3	法国	2008
7	GI.3/O cun/FR/2009/09-48	MN737116.1	GI.3	法国	2009
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17	SOS404	MG763950.1	GI.2	葡萄牙	2015
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1	0.130 9	11	0.096 5	21	0.191 9	31	0.070 4
2	0.115 7	12	0.109 8	22	0.072 5	32	0.102 5
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基于RdRp蛋白的兔出血症病毒感染与免疫鉴别诊断ELISA方法的建立

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朱薇 ¹^,²^,³^,⁴ , 仇汝龙 ²^,³^,⁴ , 陈萌萌 ²^,³^,⁴ , 胡波 ²^,³^,⁴ , 魏后军 ²^,³^,⁴ , 范志宇 ²^,³^,⁴ , 葛雷 ²^,³^,⁴ , 伍孟婷 ²^,³^,⁴ , 宋艳华 ¹^,²^,³^,⁴ , 王芳 ¹^,²^,³^,⁴

畜牧兽医学报 | 预防兽医 2026,57(1): 414-422

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畜牧兽医学报 |预防兽医 2026 , 57 (1) : 414 -422

基于RdRp蛋白的兔出血症病毒感染与免疫鉴别诊断ELISA方法的建立

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朱薇¹^,²^,³^,⁴, 仇汝龙²^,³^,⁴, 陈萌萌²^,³^,⁴, 胡波²^,³^,⁴, 魏后军²^,³^,⁴, 范志宇²^,³^,⁴, 葛雷²^,³^,⁴, 伍孟婷²^,³^,⁴, 宋艳华¹^,²^,³^,⁴, 王芳¹^,²^,³^,⁴

作者信息

^1.南京农业大学动物医学院，南京 210095

^2.江苏省农业科学院兽医研究所，南京 210014

^3.农业农村部兽用生物制品工程重点实验室，南京 210014

^4.兽用生物制品（泰州）国泰技术创新中心，泰州 225300

通讯作者:

王芳，主要从事家兔重要疫病致病机制及防控技术研究，E-mail：rwangfang@126.com

宋艳华，主要从事家兔重要疫病致病机制及防控技术研究，E-mail：songyanhua8507@126.com

作者简介:

朱薇与仇汝龙为同等贡献作者

朱薇，硕士生，主要从事兔瘟病毒致病机制研究，E-mail：1276306080@qq.com

仇汝龙，助理研究员，硕士，主要从事家兔呼吸道疾病致病机制及防控技术研究，E-mail：307821498@qq.com

Establishment and Application of Indirect ELISA Method based on RHDV RdRp Protein

Wei ZHU¹^,²^,³^,⁴, Rulong QIU²^,³^,⁴, Mengmeng CHEN²^,³^,⁴, Bo HU²^,³^,⁴, Houjun WEI²^,³^,⁴, Zhiyu FAN²^,³^,⁴, Lei GE²^,³^,⁴, Mengting WU²^,³^,⁴, Yanhua SONG¹^,²^,³^,⁴, Fang WANG¹^,²^,³^,⁴

Affiliations

^1.College of Veterinary Medicine，Nanjing Agricultural University，Nanjing 210095，China

^2.Institute of Veterinary Medicine，Jiangsu Academy of Agricultural Sciences，Nanjing 210014，China

^3.Key Laboratory of Veterinary Biological Products Engineering，Ministry of Agriculture and Rural Affairs，Nanjing 210014，China

^4.Veterinary Biological Products （Taizhou） Guotai Technology Innovation Center，Taizhou 225300，China

Corresponding Author:

WANG Fang，E-mail：rwangfang@126.com

SONG Yanhua，E-mail：songyanhua8507@126.com

出版时间: 2026-01-23 doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2026.01.036

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摘要

收起

为建立区别兔出血症病毒（RHDV）感染与疫苗免疫的诊断ELISA方法，本研究通过原核表达系统表达RHDV1和RHDV2 RdRp蛋白，成功纯化获得这两种可溶性RdRp蛋白，并以RdRp蛋白作为包被抗原，建立检测抗RdRp血清抗体的间接ELISA方法。结果显示，经纯化和酶切后，获得不含标签蛋白的RdRp蛋白，约为57 ku。经Western blot验证，2种RdRp蛋白均与RHDV1 或RHDV2感染血清发生特异性反应且无型别间差异。因此，选择RHDV2-RdRp作为包被抗原，包被浓度为2.5 μg·mL^-1；最佳血清稀释度为1∶100，孵育时间为37 ℃ 60 min；酶标抗体的最佳稀释度为1∶10 000；临界值为0.225。经验证，该ELISA方法具有较好的特异性和敏感性；其批内、批间重复性试验变异系数均小于10%，具有较好的稳定性。通过对RHDV攻毒后样本及基因工程疫苗免疫后血清样本进行检测。结果显示，RHDV感染后可以诱导机体产生针对RdRp蛋白的血清抗体，而基因工程疫苗免疫后血清检测为阴性。本研究基于RHDV-RdRp蛋白所建立的ELISA方法可以对基因工程疫苗免疫和RHDV感染进行区分，为筛查RHDV的临床感染提供有效的检测方法。

关键词

兔出血症病毒 / RNA依赖性RNA聚合酶（RdRp） / 间接ELISA

Abstract

收起

To establish a diagnostic ELISA method for distinguishing RHDV infection and vaccination， the RdRp proteins of RHDV1 and RHDV2 were expressed by prokaryotic expression system. And these two soluble RdRp proteins were successfully purified. RdRp protein was used as coated antigen， an indirect ELISA method was established to detect serum antibody against RdRp. After purification and restriction enzyme digestion， the RdRp protein without tag was obtained with a size of 57 ku. Western blot analysis confirmed that both RdRp proteins reacted specifically with RHDV1 or RHDV2 infection sera. And there was no difference between the types of RdRp proteins. So RHDV2-RdRp was selected as a coating antigen at a coating concentration of 2.5 μg·mL^-1. The optimal serum dilution was 1∶100 and the incubation was 60 min at 37 ℃. The optimal dilution of enzyme-labeled antibody was 1∶10 000. The cut-off value was 0.225. It was proved that the ELISA method has good specificity and sensitivity. The coefficient of variation in both intra-batch and inter-batch repeatability test was less than 10%， which indicating a good stability. The samples after RHDV challenge and the serum samples after genetic engineering vaccine immunization were tested， and the results showed that RHDV infection can induce the production of serum antibodies against RdRp protein， but the serum tests after genetic engineering vaccine immunization were negative. In this study， the ELISA method based on RHDV-RdRp protein can distinguish between genetic engineering vaccine immunity and RHDV infection， which provides an effective detection method for clinical screening of RHDV infection.

Key words

RHDV / RNA-dependent RNA polymerase （RdRp） / indirect ELISA

引用本文

朱薇, 仇汝龙, 陈萌萌, 胡波, 魏后军, 范志宇, 葛雷, 伍孟婷, 宋艳华, 王芳. 基于RdRp蛋白的兔出血症病毒感染与免疫鉴别诊断ELISA方法的建立. 畜牧兽医学报, 2026 , 57 (1) : 414 -422 . DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2026.01.036

Wei ZHU, Rulong QIU, Mengmeng CHEN, Bo HU, Houjun WEI, Zhiyu FAN, Lei GE, Mengting WU, Yanhua SONG, Fang WANG. Establishment and Application of Indirect ELISA Method based on RHDV RdRp Protein[J]. Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica, 2026 , 57 (1) : 414 -422 . DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2026.01.036

正文

收起

兔出血症（rabbit haemorrhagic disease，RHD）是一种兔的急性、烈性、高度致死性传染病，由兔出血症病毒（rabbit haemorrhagic disease virus，RHDV）感染引起^［1⁃2］，以呼吸系统出血，急性肝坏死，各实质器官水肿、淤血、出血为主要特征，其发病率及致死率较高^［3］。1984年，该病在中国首次出现，病原为RHDV1型毒株，造成数亿只兔子死亡，给我国养兔产业发展带来严重损失^［4］。2010年，法国报道检出一种新的RHDV变异株，与当地的RHDV流行毒株基因型不同，被命名为RHDV2^［5⁃6］。2020年4月，我国四川省兔场暴发严重兔出血症疫情，经病原分离鉴定，确认为RHDV2型毒株^［1，7］。

RHDV为杯状病毒科、兔病毒属的一种无囊膜单链RNA病毒^［8］，呈二十面体对称结构^［9⁃10］。其基因组RNA全长约7.5 kb，共包含两个开放阅读框（ORFs）^［11］。ORF1编码一个多聚蛋白，水解后形成p16、p23、2c 样解旋酶（p37）、p29、3c样蛋白酶（p15）、VPg（p13）、RNA依赖RNA聚合酶（p58）7种非结构蛋白和衣壳蛋白 VP60 ^{［12⁃13］}。RHDV分为GI.1（RHDV1）^［14］和GI.2（RHDV2）^［6］两种基因型，两者之间交叉反应性较低^{［15⁃17］}。我国的主要流行毒株为RHDVa（GI.1a）型和RHDV2（GI.2）型^［1］。与RHDV1相比，RHDV2对不同年龄段的家兔、野兔均具有感染性，对养兔业的发展危害更大^［18］。

RdRp蛋白，即RNA 依赖 RNA 聚合酶（p58），约57 ku，在病毒感染和复制中有着重要作用^{［13，19］}。研究者通过大肠杆菌对RdRp编码序列的表达和研究发现，该蛋白具有RNA依赖性RNA聚合酶活性^{［20⁃21］}。目前，对于RdRp，大多数研究集中在酶活性的探究及酶抑制剂的筛选^{［21⁃23］}。然而，在RHDV感染期间宿主对于RdRp的免疫反应尚未被研究。因此，本研究利用原核表达系统表达并纯化RdRp蛋白，建立间接ELISA检测方法，为分析RdRp蛋白在兔体内的抗体应答情况及RHD的流行病学调查、疫情监测提供辅助方法。

1　材料与方法

收起

1.1　试验材料

TB1感受态细胞；pMal-c6T原核表达载体；RHDV标准阳性血清（RHDV1-NJ2009株攻毒后血清）、阴性血清（SPF级兔血清）；抗RdRp蛋白高免兔阳性血清；RHDV1-NJ2009株病毒液攻击30日龄幼兔采集的攻毒后14 d、28 d血清样本及攻毒前对照血清各3份；RHDV2 SC株VP60基因工程疫苗^［16］免疫14 d血清样本共26份；纯化的RHDV1-WF-VP60和RHDV2-SC-VP60蛋白均由江苏省农业科学院兽医研究所保存。

1.2　主要试剂

增强型ECL化学发光检测试剂盒（诺唯赞生物科技有限公司）；SDS-PAGE凝胶快速试剂盒（上海万生昊天生物公司）；Marker（北京全式金生物技术股份有限公司）；MBP-直链淀粉树脂、Ni Resin（New England Biolabs）。

1.3　RdRp序列的同源性分析

为探究RdRp蛋白基因序列在兔病毒属中的同源性，本研究使用DNAStar软件中的MegAlign分析软件，采用Clustal W法对18株兔病毒属分离株的RdRp的氨基酸序列进行同源性分析。分离株信息如表1所示。

1.4　重组RdRp蛋白的原核表达及纯化

基于RHDV-NJ2009株菌株（GenBank登录号：HM623309.1）、RHDV2-SC2020株菌株（GenBank登录号：MT586027.1）的RdRp的基因序列，构建重组质粒pMal-c6T-RHDV1-RdRp和pMal-c6T-RHDV2-RdRp，交由南京金斯瑞生物公司合成并鉴定。将鉴定后的重组质粒转化入TB1感受态细胞并筛选出阳性重组菌。将菌液以5%的比例加入含有氨苄青霉素的LB培养基中，37 ℃，振摇培养至菌液OD_{600 nm}约为0.5时，加入终浓度为0.3 mmol·L^-1的IPTG，27 ℃诱导表达6 h。通过SDS-PAGE对表达产物进行可溶性分析。收集菌液并进行超声破碎，12 000×g离心15 min，去除不溶物后，使用直链淀粉树脂对产物进行亲和层析纯化^［24］。

1.5　重组蛋白的酶切、纯化与鉴定

麦芽糖结合蛋白（MBP）能与兔血清发生非特异性反应，为避免干扰试验，使用TEV酶对MBP蛋白进行切除。然后使用镍柱纯化获得RdRp蛋白。使用RHDV1和RHDV2感染血清分别对表达的RHDV1-RdRp和RHDV2-RdRp蛋白进行交叉Western blot反应。

1.6　间接ELISA方法的建立与条件优化

间接ELISA方法按上述程序对ELISA条件进行优化^［25］。具体如下，以纯化后的RdRp蛋白为包被抗原，以制备的RdRp兔多克隆抗体作为阳性参考血清。按照棋盘滴定法，使用包被液将RdRp蛋白分别按照10、5、2.5、1.25、0.625和0.312 5 μg·mL^-1的浓度进行稀释并包被酶标孔；用5%脱脂乳进行封闭；用5%脱脂乳对阴、阳性参考血清按照1∶50、1∶100、1∶200、1∶400的比例进行倍比稀释，37 ℃培养1 h；PBST洗涤3次后，加入100 μL的1∶10 000稀释的HRP-羊抗兔IgG抗体，37 ℃培养1 h；加入100 μL TMB显色液室温孵育10 min；加入50 μL终止液终止反应。结果判断标准：以阳性反应孔OD_{450 nm}值接近1，阴性反应孔OD_{450 nm}值接近0.1，P/N值最大为最佳反应条件。包被抗原和血清的稀释条件确定后，对封闭剂、血清作用时间、TMB显色时间等ELISA反应条件进行优化。使用单因素方差分析（ANOVA）及双因素方差分析（Two-way ANOVA）对ELISA条件优化结果进行比较。

1.7　间接ELISA的临界值确定

为确定阳性样本和阴性样本的临界值，采用上述优化的间接ELISA方法对40份RHDV阴性样本进行检测。判定标准：根据40份样本的检测结果，计算出40份样本的平均值X及标准差SD。以样本检测结果OD_{450 nm}≥X+3SD判断为阳性；以样本检测结果OD_{450 nm}<X+3SD则判断为阴性。

1.8　特异性试验

用上述建立的间接ELISA方法对兔多杀性巴氏杆菌、兔出血症病毒、兔肠炎沙门菌和兔轮状病毒的阳性血清样本进行检测，以制备的RHDV高免血清作为阳性对照，SPF兔血清作为阴性对照，重复测定3次，以评估该方法的特异性。

1.9　敏感性试验

用上述建立的间接ELISA方法，将标准阳性参考血清按1∶100、1∶200、1∶400、1∶800、1∶1 600、1∶3 200、1∶6 400、1∶12 800倍比稀释，设置阴性对照，测定其OD_{450 nm}值。同时利用相同稀释度的血清进行Western blot作为对比试验，以评价建立的ELISA检测方法的敏感性。

1.10　重复性试验

选取相同批次和不同批次包被的酶标板分别对3份RHDV阳性血清、3份RHDV阴性血清进行检测，每份样品作3个重复孔，测定OD_{450 nm}值并计算批内和批间试验变异系数，评估该方法的稳定性。

1.11　RHDV RdRp蛋白的免疫反应性分析

以VP60蛋白和RdRp蛋白为包被抗原，采集感染RHDV1的家兔14 d 及28 d的血清和RHDV2 SC株VP60基因工程疫苗免疫后14 d的血清，并进行检测。分析疫苗免疫及RHDV1感染后动物机体内的RdRp蛋白的抗体应答情况。

2　结果

收起

2.1　RHDV-RdRp氨基酸序列的同源性分析结果

6株GI.1型毒株间RdRp蛋白的氨基酸序列同源率为97.3%~99.0%；6株GI.2型毒株间RdRp蛋白的氨基酸序列同源率为97.5%~99.8%；GI.1与GI.2型毒株间的同源率为96.9%~97.5%。综上表明，GI.1、GI.2型RHDV的RdRp的氨基酸序列在不同基因型之间具有较好的保守性。

2.2　RdRp蛋白的表达、纯化与酶切鉴定

重组蛋白RHDV1-RdRp、RHDV2-RdRp可成功表达并纯化，分子量约103 ku。经酶切后，分子量约为57 ku，与预期分子量一致（图1）。Western blot结果表明，RHDV1-RdRp蛋白、RHDV2-RdRp蛋白均与RHDV1或RHDV2感染血清发生特异性反应，且无型别间差异，表明感染后机体内产生针对RdRp蛋白的特异性抗体（图2）。综上表明，2种RdRp蛋白均具有良好的反应原性，考虑到序列的保守性和Western blot结果，选择RHDV2-RdRp蛋白建立ELISA检测方法。

2.3　ELISA反应条件优化结果

通过点阵法筛选RdRp蛋白的最佳抗原包被浓度和血清稀释度，结果显示RHDV2-RdRp蛋白包被浓度为2.5 μg·mL^-1，血清稀释度为1∶100时，其阳性血清OD值接近于1，阴性血清OD值接近0.1，P/N值最大。因此，确定抗原的最佳包被浓度为2.5 μg·mL^-1，血清稀释度为1∶100。进一步对筛选封闭条件的ELISA反应结果进行分析，显示封闭1 h和2 h的结果无明显差异，根据P/N值最大的原则，选取5%脱脂乳封闭2 h为最优封闭条件。并确定最佳血清作用条件为37 ℃孵育60 min；二抗的最佳作用条件为1∶10 000倍稀释后作用30 min；TMB室温显色15 min和显色20 min的反应结果无显著差异，为避免显色时间过长对反应结果的影响，选取室温显色15 min作为TMB显色的最佳条件。

2.4　临界值的确定

利用建立的RdRp ELISA方法对40份阴性血清进行检测，40份阴性血清的平均值为0.121 8，标准差（SD）为0.034 3（表1）。以X+3SD=0.225为本ELISA的判定标准，即待检样品OD_{450 nm}值≥0.225判定阳性， OD_{450 nm}值<0.225判定阴性。

2.5　特异性鉴定结果

采用上述所建立的ELISA方法对兔多杀性巴氏杆菌、兔出血症病毒、兔肠炎沙门菌和兔轮状病毒的阳性血清进行检测。除RHDV感染血清检测结果为阳性外，其余兔病原阳性血清反应结果均小于临界值，表明该方法具有较好的特异性。

2.6　敏感性试验结果

采用上述所建立的RHDV-RdRp ELISA方法对倍比稀释后的RHDV标准阳性血清进行检测，同时利用相同稀释度血清进行Western blot作为比较试验（图3）。作为对比试验的Western blot结果显示，当阳性血清稀释度为1∶6 400时，出现了较弱的目的条带（图3B）。ELISA结果显示，当阳性血清稀释度为1∶6 400时，其OD_{450 nm}值仍大于临界值（图3A），判定为阳性，表明建立的ELISA方法具有较好的敏感性。

2.7　重复性试验结果

重复性试验结果显示，该方法的批内变异系数为2.09%~7.16%；批间变异系数为2.07%~7.72%，两者均小于10%，表明本研究所建立的RHDV-RdRp ELISA方法具有较好的稳定性。

2.8　RHDV RdRp蛋白的免疫反应性分析

使用本研究所建立的间接ELISA方法对RHDV RdRp蛋白的免疫反应性进行分析。结果显示，RHDV攻毒感染14、28 d后可以检测到抗RdRp蛋白的IgG抗体（图4），抗体效价分别是1∶400和1∶1 600。对26份RHDV2 SC株VP60基因工程疫苗免疫后血清抗体进行检测，反应结果均为阴性（图5）。结果表明，RHDV感染后可以诱导机体产生针对RdRp蛋白的IgG抗体反应，而基因工程疫苗免疫后不产生。

3　讨论

收起

兔出血症是威胁兔产业发展的重大疫病。国内外研究者通过病毒分离鉴定、致病机制和疫苗研制等多个方面对RHDV进行系统研究。由于缺乏适合RHDV感染和复制的体外细胞培养系，使得病毒的致病机制、免疫机制和毒理学等研究进展较缓慢。目前防控RHDV感染的有效方法是疫苗免疫。使用的疫苗包括组织灭活苗和基于VP60蛋白所制备的基因工程疫苗^{［16，26⁃27］}。VP60蛋白是RHDV的保护性抗原，同时也是设计RHDV基因工程疫苗和开发基于免疫的预防、治疗和诊断技术的靶蛋白，疫苗免疫和病毒感染均能检测到抗VP60抗体的存在^{［27⁃30］}。目前，尚无关于RHDV非结构蛋白抗体应答的研究报道，也无可用于区分疫苗免疫和病毒感染的抗体检测方法。

本研究通过对RHDV1-RdRp和RHDV2-RdRp的氨基酸序列进行同源性分析及特异性鉴定，发现两种蛋白氨基酸序列的同源性达到96.9%；且两种蛋白与RHDV1阳性血清和RHDV2阳性血清均能够发生特异性反应，组别间无显著差异；考虑到目前国内RHDV2型广泛流行且有取代RHDV1的趋势，因此本研究选用RHDV2-RdRp建立了检测RdRp蛋白抗体的ELISA方法。

RHDV2对所有年龄段兔均易感，且攻毒死亡率高达100%^［7］，而RHDV1对2月龄以上兔感染并致死，2月龄以下幼兔感染不致死，病毒能够在兔体内产生低水平复制，因此，本研究利用RHDV1攻毒30日龄断奶仔幼兔，发现幼兔可以存活，进而获得针对RdRp蛋白的阳性血清。通过对RHDV感染后和基因工程疫苗免疫后兔血清样本进行检测，发现当RHDV1感染机体后，可产生针对RHDV-RdRp蛋白的抗体，而基因工程疫苗免疫后不能刺激机体产生抗RdRp蛋白抗体。综上表明，本研究所建立的RHDV-RdRp ELISA方法既可用于检测RHDV1-RdRp蛋白抗体，也可用于检测RHDV2-RdRp蛋白抗体。基于样本分析，该方法可以区分基因工程疫苗免疫和病毒感染，具有特异性好、灵敏度高等优点，为临床监测RHDV感染提供有效方法。

4　结论

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本研究成功表达和纯化可溶性RdRp蛋白并建立ELISA检测方法，该方法可用于检测不同基因型RdRp蛋白的抗体应答情况，并且能够对RHDV基因工程疫苗免疫抗体和病毒感染抗体进行区分，为进一步研究RHDV-RdRp蛋白的抗体应答规律及疫苗免疫后的临床筛查提供方法。

基金

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现代农业产业技术体系建设专项资金(CARS-43-C-1)

参考文献

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文献

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排序方式：

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2026年第57卷第1期

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doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2026.01.036

接收时间：2024-09-25
首发时间：2026-09-16
出版时间：2026-01-23

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收稿日期：2024-09-25

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现代农业产业技术体系建设专项资金(CARS-43-C-1)

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^1.南京农业大学动物医学院，南京 210095

^2.江苏省农业科学院兽医研究所，南京 210014

^3.农业农村部兽用生物制品工程重点实验室，南京 210014

^4.兽用生物制品（泰州）国泰技术创新中心，泰州 225300

通讯作者:

王芳，主要从事家兔重要疫病致病机制及防控技术研究，E-mail：rwangfang@126.com

宋艳华，主要从事家兔重要疫病致病机制及防控技术研究，E-mail：songyanhua8507@126.com

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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TxT

序号 Number	株系 Strain	登录号 Accession No.	基因型 Gene type	国家 Country	分离年份 Isolation year
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5	GI.3/O cun/FR/2006/06-11	MN737115.1	GI.3	法国	2006
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7	GI.3/O cun/FR/2009/09-48	MN737116.1	GI.3	法国	2009
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序号

Number

株系

Strain

登录号

Accession No.

基因型

Gene type

国家

Country

分离年份

Isolation year

AUS/NSW/CAT_2-12/2007

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2010

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2009

CD/China

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2004

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法国

2006

GI.3/Ocun/FR/2008/08-133

MN746289.1

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法国

2008

GI.3/O cun/FR/2009/09-48

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GI.3

法国

2009

KY437668.1

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2016

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意大利

1990

LIB

MN853659.1

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波兰

2018

NJ-2009

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中国

2009

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MN061492.1

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荷兰

2016

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捷克

1996

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西班牙

2011

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西班牙

2014

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MT586027.1

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中国

2020

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编号

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