微生物学报

Primers name	Oligonucleotide sequences (5′→3′)
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单核细胞增生李斯特菌二硫键形成蛋白DsbA调控胞间迁移的机制

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王喆 ¹^,^# , 蒋国 ¹^,^# , 李静静 ¹ , 王建峰 ² , 许礼冬 ¹ , 徐加利 ¹ , 付展鸿 ¹ , 秦潜 ¹ , 宋厚辉 ¹ , 程昌勇 ¹^,^* , 夏菁 ¹^,^*

微生物学报 | 研究报告 2024,64(11): 4308-4318

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微生物学报 | 研究报告 2024, 64(11): 4308-4318

单核细胞增生李斯特菌二硫键形成蛋白DsbA调控胞间迁移的机制

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王喆¹^,^#, 蒋国¹^,^#, 李静静¹, 王建峰², 许礼冬¹, 徐加利¹, 付展鸿¹, 秦潜¹, 宋厚辉¹, 程昌勇¹^,^*, 夏菁¹^,^*

作者信息

1 浙江农林大学动物科技学院·动物医学院, 浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室, 动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心, 浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地, 中澳动物健康大数据分析联合实验室, 浙江杭州 311300

2 宁波检验检疫科学技术研究院, 宁波海关技术中心, 浙江宁波 315100

The disulfide bond formation protein DsbA in Listeria monocytogenes regulates cell-to-cell spread

Zhe WANG¹^,^#, Guo JIANG¹^,^#, Jingjing LI¹, Jianfeng WANG², Lidong XU¹, Jiali XU¹, Zhanhong FU¹, Qian QIN¹, Houhui SONG¹, Changyong CHENG¹^,^*, Jing XIA¹^,^*

Affiliations

1 Key Laboratory of Applied Technology on Green-Eco-Healthy Animal Husbandry of Zhejiang Province, Zhejiang Provincial Engineering Research Center for Animal Health Diagnostics & Advanced Technology, Zhejiang International Science and Technology Cooperation Base for Veterinary Medicine and Health Management, China-Australia Joint Laboratory for Animal Health Big Data Analytics, College of Animal Science and Technology & College of Veterinary Medicine, Zhejiang A & F University, Hangzhou 311300, Zhejiang, China

2 Technical Center of Ningbo Customs, Ningbo Academy of Quarantine & Inspection Science and Technology, Ningbo 315100, Zhejiang, China

出版时间: 2024-09-04 doi: 10.13343/j.cnki.wsxb.20240304

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摘要

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【目的】实验室前期研究发现单核细胞增生李斯特菌(单增李斯特菌，Listeria monocytogenes)二硫键形成蛋白DsbA缺失后，细菌胞间迁移能力增强，本研究旨在深入解析DsbA介导该生物学过程的具体机制。【方法】通过荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹(Western blotting)方法比较单增李斯特菌野生株和dsbA缺失株毒力基因的转录和表达水平差异；利用免疫荧光共定位方法观察DsbA缺失后对单增李斯特菌胞间迁移相关毒力因子ActA招募宿主肌动蛋白能力的影响(分析ActA与肌动蛋白共定位在细菌一侧形成“彗星状尾巴”的长短和数量)；通过等温滴定量热法(isothermal titration calorimetry, ITC)研究DsbA与ActA互作情况。【结果】dsbA缺失后，毒力基因转录水平无显著差异，但毒力因子InlA、InlB、PlcA和PlcB的分泌均显著降低，而ActA、溶血素O (listeriolysin O, LLO)分泌量显著升高。缺失株形成的彗星尾巴数量显著高于野生株且平均长度也较野生株增加，说明dsbA缺失导致细菌招募肌动蛋白能力明显增强。ITC试验发现DsbA与ActA结合存在吸热反应，说明二者互作。【结论】本研究证实单增李斯特菌DsbA通过调控毒力蛋白减弱了对肌动蛋白募集，进而影响细菌胞间迁移。研究结果有助于系统理解单增李斯特菌在宿主感染过程中的毒力调控机制，对人兽共患胞内病原菌的污染控制具有重要公共卫生学意义。

关键词

单增李斯特菌 / 二硫键形成蛋白DsbA / 胞间迁移 / 肌动蛋白募集

Abstract

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[Objective] In view of the enhanced cell-to-cell spread ability of the dsbA-deleted strain (ΔdsbA) of Listeria monocytogenes, this study aims to elucidate the mechanism that how the disulfide bond formation protein DsbA mediates this biological process. [Methods] The mRNA and protein levels of virulence factors in the wild type and ΔdsbA were compared by RT-qPCR and Western blotting, respectively. The immunofluorescence co-localization analysis method was employed to observe the impact of DsbA deficiency on the actin recruitment by the virulence factor ActA in the cell-to-cell spread of L. monocytogenes (analyzing the length and quantity of the comet tails formed on one side of the bacteria by co-localization of ActA and actin). The presence or absence of interaction between DsbA and ActA was determined by isothermal titration calorimetry (ITC). [Results] Compared with the wild type, ΔdsbA showed no significant changes in the mRNA levels of virulence factors, downregulated protein levels of InlA, InlB, PlcA, and PlcB, and upregulated protein levels of ActA and LLO. In addition, ΔdsbA showed increased number and average length of comet tails, which indicated that the actin recruitment of ΔdsbA was enhanced. The ITC results revealed that DsbA bound to ActA, which gradually showed endothermic reactions, suggesting the presence of interaction between DsbA and ActA. [Conclusion] This study proved for that DsbA attenuated the recruitment ability of actin by regulating virulence proteins, thus affecting the cell-to-cell spread of L. monocytogenes. The findings help to further dissect the virulence regulatory mechanisms of L. monocytogenes during host infection, which is of great importance for controlling the contamination of zoonotic intracellular pathogens threatening public health.

Key words

Listeria monocytogenes / disulfide bond formation protein DsbA / cell-to-cell spread / actin recruitment

引用本文

王喆, 蒋国, 李静静, 王建峰, 许礼冬, 徐加利, 付展鸿, 秦潜, 宋厚辉, 程昌勇, 夏菁. 单核细胞增生李斯特菌二硫键形成蛋白DsbA调控胞间迁移的机制. 微生物学报, 2024 , 64 (11) : 4308 -4318 . DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.20240304

Zhe WANG, Guo JIANG, Jingjing LI, Jianfeng WANG, Lidong XU, Jiali XU, Zhanhong FU, Qian QIN, Houhui SONG, Changyong CHENG, Jing XIA. The disulfide bond formation protein DsbA in Listeria monocytogenes regulates cell-to-cell spread[J]. Acta Microbiologica Sinica, 2024 , 64 (11) : 4308 -4318 . DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.20240304

正文

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单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)，简称单增李斯特菌(L. monocytogenes)，是一种重要的人兽共患食源性病原菌^[1]。人或动物食用被单增李斯特菌污染的食物后，细菌可穿过机体的肠道屏障、血脑屏障及胎盘屏障，在临床上表现为发热型肠炎、菌血症、脑膜炎以及孕妇的胎儿-胎盘感染等症状，致死率可达20%−30%^[2-4]。因此，对该病原体的防控研究具有重要的公共卫生学意义。

作为胞内寄生菌，单增李斯特菌拥有一套完整的毒力因子参与胞内感染和胞间迁移。在感染过程中，单增李斯特菌首先利用表面蛋白内化素A (internalin A, InlA)和内化素B (internalin B, InlB)分别与细胞表面受体E-钙黏蛋白(E-cadherin)和肝细胞生长因子(cellular-mesenchymal epithelial transition factor, c-MET)进行结合，并侵入宿主细胞^[5]，然后在溶血素O [listeriolysin O (LLO)，由hly编码]、磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C (phosphatidylinositol-specific phospholipase C，PlcA)和金属蛋白酶Mpl的参与下裂解吞噬体膜^[6]，在进入宿主胞浆后利用胞内营养物质进行增殖，最后通过肌动蛋白聚集因子(actin assembly-inducing protein, ActA)募集宿主肌动蛋白(actin)形成肌动蛋白尾巴(形似“彗星状”)，推动细菌向邻近细胞迁移，进入次级感染的细胞再次通过LLO、非特异性磷脂酰胆碱磷脂酶C (non-specific phosphotidylcholine phospholipase C, PlcB)裂解双层膜结构的次级吞噬体，从而开始新一轮的细胞感染周期^[7-8]。

单增李斯特菌毒力蛋白的合成分泌需要多种蛋白和系统的调控，例如肽基-脯氨酰顺反异构酶PrsA2能促进毒力蛋白的折叠，保证其活性^[9]；硫氧化蛋白TrxA的缺失能够通过降低毒力基因的转录水平，从而影响毒力蛋白的表达，降低细菌的毒力^[10]。然而二硫键形成蛋白(disulfide bond formation protein, Dsb)的缺失也会影响单增李斯特菌的毒力，说明其可能参与单增李斯特菌毒力蛋白的表达过程^[11]。二硫键形成蛋白是一类能够催化新生肽链形成二硫键的蛋白^[12]。含有半胱氨酸(cysteine, Cys)的新生肽链通过形成二硫键进行折叠，形成具有成熟构象的功能蛋白在生命活动中发挥作用。对于许多细菌来说，Dsb蛋白与细菌毒力功能的表达息息相关。多数细菌表达广泛的二硫化物结合的毒力因子，如黏附素、菌毛、分泌毒素等，参与了细菌黏附、对宿主细胞调控、胞间迁移和存活等多方面^[13-16]。

本实验室前期通过对单增李斯特菌基因组分析并进行功能验证，发现单增李斯特菌lmo1059编码DsbA蛋白(该蛋白原本命名为DsbG^[17]，后通过结构和功能试验结果的分析，与DsbA更相似，因此更名为DsbA^[11])。同时，本实验室的前期研究发现，缺失蛋白DsbA后，单增李斯特菌的胞间迁移能力显著增强^[11]，但具体机制未知。因此，本研究通过对毒力蛋白的转录水平、表达水平、免疫荧光试验以及等温滴定量热法，研究二硫键形成蛋白DsbA影响单增李斯特菌胞间迁移的机制，这为后续深入研究单增李斯特菌感染机制提供更多理论依据。

1 材料与方法

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1.1 材料

本研究所涉单增李斯特菌野生株EGD-e、缺失株ΔdsbA (缺失DsbA蛋白)和带有GFP荧光标签蛋白的野生株和缺失株，人宫颈癌上皮细胞(HeLa)，毒力蛋白相关抗体均由本实验室保存。

BHI (brain and heart infusion broth)，Oxoid公司；DMEM细胞培养基、血清(fetal bovine serum, FBS)、0.25% Trypsin-EDTA、鬼笔环肽和4′, 6-二脒基-2-苯基吲哚(4′, 6-diamidino-2-phenylindole, DAPI)染料，赛默飞世尔科技公司；氯霉素，上海阿拉丁生化科技股份有限公司；BCA蛋白浓度试剂盒，上海碧云天生物技术股份有限公司；柱式细菌总RNA抽提纯化试剂盒、Kisser’s封片剂、Goat Anti-Rabbit lgG(H+L)HRP-tag、Goat Anti-Mouse lgG(H+L) HRP-tag，生工生物工程(上海)股份有限公司；Taq Pro Universal SYBR qPCR Master Mix，TaKaRa公司。

李斯特菌裂解液：称量SDS 10 g、NaCl 5.84 g、EDTA 0.292 g，用800 mL ddH₂O溶解后，再加入20 mL Triton X-100和终浓度为10 mmol/L的Tris-HCl，将pH调至8.0后，用ddH₂O补足至1 L。分泌蛋白溶解液：称量EDTA 2.92 g、尿素360 g和SDS 5 g，用800 mL ddH₂O溶解后，再加入终浓度为200 mmol/L的Tris-HCl，调pH至8.0后，用ddH₂O补足1 L^[18]。

1.2 引物合成

本研究所用引物均由杭州有康生物科技有限公司合成，序列详见表1。

1.3 荧光定量分析毒力基因的转录水平

1.3.1 野生株EGD-e和缺失株ΔdsbA的总RNA提取

将野生株EGD-e及缺失株ΔdsbA单克隆接种至含有BHI液体培养基的细菌瓶中，37 ℃、200 r/min振荡培养过夜，次日，按1:100转接至10 mL BHI液体培养基中，37 ℃、200 r/min扩大培养4−5 h，使OD₆₀₀达到0.5，收集菌体，10 mmol/L PBS洗涤后，用20 mg/mL溶菌酶重悬，室温反应10 min，采用柱式细菌总RNA抽提纯化试剂盒提取RNA，之后利用多功能酶标仪检测RNA含量和纯度，所得RNA放至−80 ℃保存。

1.3.2 RT-qPCR

以所提的RNA为模板，通过反转录试剂盒进行逆转录，获得的产物cDNA即为RT-qPCR的模板。按照SYBR qPCR Master Mix试剂说明书对与细菌感染相关的毒力因子actA、hly、plcA、plcB、inlA、inlB、mpl、prfA及rpoB rRNA基因(作为内参基因)进行RT-qPCR。转录水平变化使用2^−ΔΔCt方法分析，利用GraphPad Prism 8软件对所得数据进行处理分析，相对差异倍数用log₂ fold change表示。

1.4 野生株EGD-e和缺失株ΔdsbA的全菌蛋白和分泌蛋白的提取

将野生株EGD-e及缺失株ΔdsbA单克隆接种至含有BHI液体培养基的细菌瓶中，37 ℃、200 r/min振荡培养过夜，12 000 r/min离心2 min分离得到上清液和菌体。用10 mmol/L PBS洗涤菌体后重新收集菌体，加入配制好的500 µL李斯特菌裂解液重悬菌体，静置5 min，加入研磨珠进行充分研磨，4 ℃、10 000 r/min离心2 min，离心所得上清即为全菌蛋白。另将过夜培养细菌离心分离得到的上清液用0.22 µm过滤器进行过滤，向滤液中加入终体积10%的三氯乙酸，冰上静置过夜，4 ℃、12 000 r/min离心30 min，弃上清后，向沉淀中加入1 mL配制好的分泌蛋白溶解液，溶解沉淀得到分泌蛋白^[18]。

1.5 Western blotting分析毒力蛋白的表达水平

提取野生株EGD-e和缺失株ΔdsbA的全菌蛋白和分泌蛋白，利用10 mmol/L PBS对蛋白进行定量，取等量蛋白进行SDS-PAGE。将蛋白转印至PVDF膜上，用5%的脱脂奶粉室温封闭1 h后，分别加入ActA、LLO、PlcA、PlcB、InlA、InlB、Mpl和内参GAPDH、P60抗体(杭州华安生物技术有限公司)，4 ℃孵育过夜；分别加入HRP标记的羊抗兔IgG (对应蛋白PlcA、PlcB、InlA、InlB、Mpl、GAPDH和P60)和羊抗鼠IgG (对应蛋白ActA和LLO)，室温孵育1 h；避光滴加显影液，化学发光成像仪曝光并保存结果，利用ImageJ对整个条带面积进行灰度分析，并利用GraphPad Prism 8软件对所得数据进行处理分析并绘图。

1.6 免疫荧光共定位观察彗星尾巴

将经消毒后的细胞爬片添加到24孔的细胞培养板中，对HeLa细胞进行细胞计数，将细胞以每孔1.5×10⁵个的密度平均分散地铺在放置了细胞爬片的24孔细胞培养板；培养基为10% FBS的DMEM培养基，置于37 ℃、5% CO₂的细胞培养箱中培养12 h。将过夜培养的野生株EGD-e和缺失株ΔdsbA按照MOI=1 000:1感染HeLa细胞，将细胞放于不含血清的DMEM培养基中，置于含有37 ℃、5% CO₂的细胞培养箱中培养1 h；结束后每孔加入500 µL终浓度为50 µg/mL庆大霉素的DMEM细胞培养基，用以杀灭胞外菌；杀灭胞外菌1 h后，加入500 µL终浓度为5 µg/mL庆大霉素的DMEM细胞培养基继续培养3 h。然后用多聚甲醛固定30 min、Triton X-100透化10 min；接着用鬼笔环肽对肌动蛋白染色1 h，再用DAPI染色液对细胞核染色10 min。染色完成后，制片并利用共聚焦显微镜观察拍摄，统计分析彗星尾巴的长短、数量，并利用GraphPad Prism 8软件对所得数据进行处理分析制图。

1.7 等温滴定量热法(isothermal titration calorimetry, ITC)判断DsbA和ActA是否互作

利用实验室构建好的DsbA和ActA蛋白原核表达菌株^{[11, 19]}进行蛋白诱导表达与纯化，得到高纯度、高浓度的DsbA和ActA蛋白。利用等温滴定量热仪进行滴定，注射器内加入蛋白的量为0.5 mL，样品池为1.4 mL，将高浓度(140 μmol/L)的DsbA蛋白按照每次15 μL、间隔180 s滴定至低浓度(10 μmol/L)的ActA蛋白中，反应在25 ℃、25 mmol/L Tris-HCl和100 mmol/L NaCl缓冲液(pH为7.5)中进行。试验结束后，对所得到的数据进行拟合分析，通过对ΔH和ΔS的分析^[20-21]，判断DsbA是否与ActA相互作用。

1.8 数据处理

数据使用GraphPad Prism 8软件进行t test统计学分析，数据用mean±SD表示。其中ns表示P > 0.05，^*表示P < 0.05，^**表示P < 0.01，^***表示P < 0.001。

2 结果与分析

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2.1 dsbA缺失对细菌感染相关毒力因子转录水平的影响

提取37 ℃中无应激条件下野生株EGD-e和缺失株ΔdsbA的RNA并定量进行反转录，以得到的cDNA为模板，用RT-qPCR对相关毒力基因的转录水平进行测定、分析，结果如图1所示。RT-qPCR结果表明，缺失dsbA后，actA、hly等毒力基因转录水平均无显著性差异(P > 0.05)，说明dsbA缺失对胞间迁移相关的毒力基因在转录水平上均无显著影响。

2.2 dsbA缺失对细菌感染相关毒力蛋白表达量的影响

为进一步验证DsbA蛋白缺失后毒力蛋白表达水平，提取37 ℃中无应激条件下野生株EGD-e和缺失株ΔdsbA的全菌蛋白和分泌蛋白，取等量蛋白进行Western blotting检验，并用ImageJ软件进行灰度分析，结果分别如图2和图3所示。与野生株相比，缺失株ΔdsbA的全菌蛋白中InlA、InlB和LLO表达显著降低(P < 0.01)，ActA表达量无显著差异(P > 0.05)。然而在分泌蛋白中，PlcA、PlcB、InlA和InlB表达显著降低(P < 0.01或P < 0.001)，LLO、ActA表达却显著升高(P < 0.01或P < 0.001)。因为LLO和ActA主要通过分泌到细菌体外发挥作用，所以分泌蛋白的结果表明DsbA缺失后，可能通过介导与胞间迁移功能密切相关的蛋白(LLO、ActA)合成分泌，从而影响细菌的胞间迁移能力。

2.3 dsbA缺失对细菌肌动蛋白募集能力影响

鉴于ActA是肌动蛋白募集因子，能够在细菌细胞间迁移过程中募集肌动蛋白，从而形成“彗星状尾巴”。为进一步验证DsbA对ActA表达量的调控是否会影响细菌的胞间迁移，使用带有GFP荧光标签的野生株EGD-e和缺失株ΔdsbA感染HeLa细胞，之后再对细胞进行F-actin染色，通过共聚焦显微镜进行观察拍摄，统计“彗星状尾巴”的大小和数量，选取了20个视野对“彗星状尾巴”的形态、数量进行统计分析，每个视野细胞数量在8−12个，结果如图4所示。分析结果表明，缺失了DsbA后，各形态下的“彗星状尾巴”的数量都显著增加(P < 0.05或P < 0.001)，说明细菌募集肌动蛋白的能力显著增强，即缺失DsbA后，细菌因肌动蛋白募集能力提高而增强胞间迁移能力。

2.4 DsbA与ActA蛋白相互作用关系探究

通过Western blotting试验和共聚焦显微镜观察可以发现，在DsbA缺失后ActA蛋白的表达量显著升高，并且细菌肌动蛋白募集能力显著上升，为了明确DsbA是否与ActA存在相互作用，本研究进一步利用ITC对蛋白之间的关系进行了探究。如图5所示，随着ITC试验的进行，DsbA和ActA反应逐步呈现吸热反应，表明在这一过程中，这2个蛋白通过互作时化学键的断裂和形成，吸收大量的化学能量，呈现吸热反应，说明DsbA和ActA存在互作。

3 讨论与结论

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目前关于Dsb蛋白与细菌毒力相关的研究在革兰阴性菌中报道较多。例如，在铜绿假单胞菌中，DsbA对于毒力因子的表达和细菌正常感染能力的维持起重要作用^[22]。当副溶血弧菌的2个dsbA基因缺失后，对Caco-2细胞的黏附及HeLa细胞的毒性都降低了^[23]。幽门螺杆菌的HP0231具有DsbA活性，它对于HcpE的折叠、溶解、生成和分泌非常重要，而这种蛋白被认为有助于提高细菌的毒力^[24]。Dsb或类Dsb蛋白参与革兰阳性菌感染过程也有少量报道。例如，硫醇-二硫键氧化还原酶MdbA对于白喉棒状杆菌菌毛蛋白和毒力蛋白的折叠起到至关重要的作用^[25]；在炭疽芽胞杆菌中，硫醇-二硫键氧化还原酶蛋白CcdA可以通过影响主要毒力调节因子AtxA的转录水平，从而影响细菌毒力^[26]。这些研究都说明Dsb蛋白可以通过影响细菌毒力因子的转录或表达来影响细菌的致病性，并且Dsb蛋白对毒力因子的影响通常都是正向的。

单增李斯特菌的主要毒力岛(Listeria pathogenicity island 1, LIPI-I)是由毒力基因(prfA-plcA-hly-mpl-actA-plcB)组成^[27]。这些毒力因子和InlA、InlB等在单增李斯特菌感染非吞噬细胞时发挥主要作用^[28]。在细胞感染过程中，ActA能够募集肌动蛋白形成“彗星状尾巴”，推动细菌在胞质和细胞间运动，从而使细菌逃脱先天免疫，并引起邻近细胞的持续性感染^[29]。在实验室的前期研究中发现，缺失二硫键形成蛋白DsbA后，单增李斯特菌的细胞间迁移能力显著增强^[11]，而细胞间迁移能力与毒力蛋白的表达量有关。二硫键形成蛋白DsbA对单增李斯特菌胞间迁移的“负向”影响与之前其他菌株中的报道存在差异，因此，本研究针对DsbA影响细菌胞间迁移的机制展开研究。

本研究首先发现缺失株ΔdsbA中毒力基因的转录水平未发生显著变化(图1)，但是毒力蛋白表达量特别是LLO、ActA蛋白分泌量较野生株有显著升高(图3)，说明DsbA的缺失会影响毒力蛋白的分泌，并且DsbA对LLO、ActA的分泌呈负调控作用。由于这些毒力蛋白的转录水平并未发生显著变化，所以毒力蛋白表达量的变化证明DsbA可能参与毒力蛋白如ActA的转录后或翻译后修饰^{[24, 27]}。我们还通过共聚焦显微镜观察发现，在缺失了DsbA后，“彗星状尾巴”数量显著增多，表明细菌肌动蛋白的募集能力显著增强(图4)，单增李斯特菌胞间迁移能力与细菌募集肌动蛋白能力直接相关^[29]。因此这可能是DsbA缺失后，细菌胞间迁移能力增强的原因。同时，这一结果与前面蛋白表达量验证的结果一致，证明DsbA确实参与ActA的分泌或修饰过程。因为ActA是影响细菌募集肌动蛋白的主要毒力因子，因此为进一步探究DsbA与ActA之间是否存在相互作用，本研究进行了ITC试验，结果发现DsbA与ActA呈吸热反应(ΔH > 0)，且ΔS > 0，表明DsbA与ActA存在互作反应^[20-21]。

Footer等研究证明ActA是一个未折叠的单体蛋白^[30]，而且ActA可以与自身相互作用在细菌表面交联形成同源二聚体^[31]。当二聚体是平行二聚体时，并不会影响其结构功能，但当ActA在N端形成反平行二聚体时，ActA会在细菌表面形成环状，影响肌动蛋白尾部的形成以及体内细菌表面ARP2/3复合物的募集^[32]，从而影响本身的结构与功能^[30]。在2个ActA中的半胱氨酸互相交联形成二聚体的这一过程中，DsbA作为二硫键形成蛋白，可能会促进半胱氨酸之间形成二硫键，促进ActA之间形成二硫键，进而影响ActA的功能^[30]。即单增李斯特菌二硫键形成蛋白DsbA对ActA功能的负向作用与之前报道的其他细菌中Dsb蛋白对毒力因子的正向影响完全不同。然而，具体DsbA如何影响ActA蛋白结构和功能还无法明确，需要进一步研究。

本研究证明了在单增李斯特菌中，二硫键形成蛋白DsbA可以通过调控毒力蛋白的表达量及细菌募集肌动蛋白的能力来影响细菌的胞间迁移能力，并且DsbA与ActA存在互作。本研究有助于进一步解析单增李斯特菌在宿主感染过程中的调控机制，为后续深入研究单增李斯特菌感染机制提供更多理论依据。

基金

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国家重点研发计划(2023YFD1801800)
浙江省自然科学基金(LQ22C180001)
国家级大学生创新创业训练计划(202310341018)
宁波市自然科学基金(2022J200)

参考文献

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文献

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参考文献引证文献

排序方式：

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2024年第64卷第11期

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doi: 10.13343/j.cnki.wsxb.20240304

接收时间：2024-05-16
首发时间：2026-03-21
出版时间：2024-09-04

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收稿日期：2024-05-16
录用日期：2024-09-03

基金

National Key Research and Development Program of China(2023YFD1801800)

国家重点研发计划(2023YFD1801800)

Natural Science Foundation of Zhejiang Province(LQ22C180001)

浙江省自然科学基金(LQ22C180001)

National College Students' Innovation and Entrepreneurship Training Program(202310341018)

国家级大学生创新创业训练计划(202310341018)

Ningbo Natural Science Foundation(2022J200)

宁波市自然科学基金(2022J200)

作者信息

2 宁波检验检疫科学技术研究院, 宁波海关技术中心, 浙江宁波 315100

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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