微生物学报

口蹄疫O型重组病毒的构建及其免疫原性分析

PDF下载

黄书伦 ¹^,² , 查晶晶 ¹^,² , 孙普 ¹^,² , 章兴赜 ¹^,² , 李冬 ¹^,² , 曹轶梅 ¹^,² , 白兴文 ¹^,² , 付元芳 ¹^,² , 马雪青 ¹^,² , 李坤 ¹^,² , 袁红 ¹^,² , 卢曾军 ¹^,² , 刘在新 ¹^,² , 李平花 ¹^,²^,^*

微生物学报 | 研究报告 2024,64(7): 2493-2501

收起

微生物学报 | 研究报告 2024, 64(7): 2493-2501

口蹄疫O型重组病毒的构建及其免疫原性分析

全屏

黄书伦¹^,², 查晶晶¹^,², 孙普¹^,², 章兴赜¹^,², 李冬¹^,², 曹轶梅¹^,², 白兴文¹^,², 付元芳¹^,², 马雪青¹^,², 李坤¹^,², 袁红¹^,², 卢曾军¹^,², 刘在新¹^,², 李平花¹^,²^,^*

作者信息

1 中国农业科学院兰州兽医研究所/兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室, 甘肃兰州 730000

2 甘肃省病原生物学基础学科研究中心, 甘肃兰州 730046

Construction and immunogenicity of serotype O recombinant foot-and-mouth disease virus

Shulun HUANG¹^,², Jingjing ZHA¹^,², Pu SUN¹^,², Xingze ZHANG¹^,², Dong LI¹^,², Yimei CAO¹^,², Xingwen BAI¹^,², Yuanfang FU¹^,², Xueqing MA¹^,², Kun LI¹^,², Hong YUAN¹^,², Zengjun LU¹^,², Zaixin LIU¹^,², Pinghua LI¹^,²^,^*

Affiliations

1 State Key Laboratory for Animal Disease Control and Prevention, College of Veterinary Medicine, Lanzhou University, Lanzhou Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Lanzhou 730000, Gansu, China

2 Gansu Province Research Center for Basic Disciplines of Pathogen Biology, Lanzhou 730046, Gansu, China

出版时间: 2024-07-04 doi: 10.13343/j.cnki.wsxb.20230803

文章导航

摘要

收起

【目的】利用反向遗传操作技术，构建含O型口蹄疫病毒(food-and-mouth disease virus, FMDV) 3个拓扑型免疫优势结构蛋白基因的重组FMDV，评估其作为猪O型口蹄疫(food-and-mouth disease, FMD)疫苗候选株的潜力。【方法】通过基因合成，在FMD疫苗株O/HN/CHA/93 (古典中国拓扑型)的基因中嵌合流行株O/NXYCh/CHA/2018 (东南亚拓扑型) VP1结构蛋白的重组病毒骨架上，用O/TUR/5/2009疫苗株(中东-南亚拓扑型) VP1蛋白的G-H环基因替换其对等基因，构建含O型3个拓扑型FMDV结构蛋白基因的重组全长质粒，Not Ⅰ线性化后转染表达T7 RNA聚合酶的BSR/T7细胞，拯救重组病毒。通过RT-PCR、序列测定、间接免疫荧光鉴定重组病毒；噬斑试验和一步生长曲线分析重组病毒的生物学特性。重组病毒制备疫苗免疫猪，用病毒中和试验分析其对当前流行的O型3个拓扑型FMDV的交叉反应性。【结果】成功拯救到含O型3个拓扑型FMDV结构蛋白基因的重组病毒，重组病毒与亲本病毒具有相似的生物学特性。亲本病毒和重组病毒制备的疫苗免疫猪，均能够对中东-南亚型(Middle East-South Asia, ME-SA)拓扑型和东南亚型(South-East Asia, SEA)拓扑型病毒株产生保护性平均中和抗体(> 1.65log₁₀)；均不能对古典中国型(Cathay)拓扑型流行株产生保护性平均中和抗体(< 1.65log₁₀)，但与亲本病毒相比，O/TUR/5/2009疫苗株G-H环基因的替换显著提高了对ME-SA和SEA拓扑型病毒株的交叉反应性(P < 0.05)。【结论】本研究对未来FMD疫苗的设计具有重要的指导意义。

关键词

口蹄疫(FMD) / 重组病毒 / 构建 / 免疫原性

Abstract

收起

[Objective] To construct a recombinant food-and-mouth disease virus (FMDV) strain carrying the genes encoding three topotypes of immunodominant structural proteins of serotype O FMDV by reverse genetic manipulation and evaluate the potential of the recombinant strain serving as a vaccine candidate for porcine food-and-mouth disease (FMD) type O. [Methods] Based on the gene of the recombinant FMDV with the replacement of the VP1 structural protein of O/NXYCh/CHA/2018 epidemic strain, the recombinant full-length plasmid featuring substitution of G-H loop genes of the structural protein VP1 of O/TUR/5/2009 vaccine strain was constructed by gene synthesis. The recombinant virus was rescued after transfection of the linearized recombinant plasmid into BSR/T7 cells expressing T7 RNA polymerase, and then identified by RT-PCR, sequencing, and indirect immunofluorescence. The plaque assay and one-step growth curve building were employed to characterize the recombinant virus. Pigs were vaccinated with the vaccines prepared from the recombinant virus and the parental virus, and then virus neutralization tests were carried out to examine the cross-reactive responses against the epidemic serotype O FMDV isolates of three topotypes. [Results] The recombinant FMDV strain carrying the structural protein genes of three topotypes was successful rescued. The recombinant strain showed similar biological properties to the parental virus. Pigs vaccinated with the vaccines prepared from the recombinant virus and the parental virus produced protective neutralizing antibodies with the mean titer of > 1.65log₁₀ against the viruses of the Middle East-South Asia (ME-SA) and South-East Asia (SEA) topotypes. The pigs did not produce protective neutralizing antibodies against the Cathay topotype (< 1.65log₁₀). The substitution of O/TUR/5/2009 G-H loop gene improved the cross-reactivity against the viruses of ME-SA and SEA topotypes compared with the parental virus (P < 0.05). [Conclusion] This study has guiding significance for the design of FMD vaccines in the future.

Key words

foot-and-mouth disease (FMD) / recombinant virus / construction / immunogenicity

引用本文

黄书伦, 查晶晶, 孙普, 章兴赜, 李冬, 曹轶梅, 白兴文, 付元芳, 马雪青, 李坤, 袁红, 卢曾军, 刘在新, 李平花. 口蹄疫O型重组病毒的构建及其免疫原性分析. 微生物学报, 2024 , 64 (7) : 2493 -2501 . DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.20230803

Shulun HUANG, Jingjing ZHA, Pu SUN, Xingze ZHANG, Dong LI, Yimei CAO, Xingwen BAI, Yuanfang FU, Xueqing MA, Kun LI, Hong YUAN, Zengjun LU, Zaixin LIU, Pinghua LI. Construction and immunogenicity of serotype O recombinant foot-and-mouth disease virus[J]. Acta Microbiologica Sinica, 2024 , 64 (7) : 2493 -2501 . DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.20230803

正文

收起

口蹄疫(foot-and-mouth disease, FMD)是侵害猪、牛和羊等重大动物的烈性传染病。该病传播迅速、传染性极强、发病率极高，世界动物卫生组织(World Organization for Animal Health, WOAH)将其列为必报动物疫病，我国将其列为一类动物传染病之首。FMD的暴发和流行严重影响发病地区的畜牧业生产，阻碍社会经济发展，制约健康养殖，是全球畜牧业生产急需解决的重大动物疫病之一。

口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus, FMDV)属小RNA病毒科(Picornaviridae)、口蹄疫病毒属(Aphthovirus)成员。FMDV粒子由结构蛋白VP4、VP2、VP3和VP1各60分子组成的二十面体衣壳与单股正链RNA组成，其中结构蛋白VP4位于衣壳的内部，VP2、VP3和VP1位于衣壳的外部^[1]。O型FMDV粒子表面至少含有5个抗原位点：VP2和VP3各有1个抗原位点(位点2和4)，VP1含有3个抗原位点(位点1、3和5)，这些抗原位点是诱导保护性抗体产生的主要免疫原^[1-3]。其中位于VP1蛋白130−160位氨基酸的G-H环是诱导动物产生中和抗体最主要的抗原表位，在疫苗免疫保护应答中发挥着关键性作用^[4-5]。因此，FMDV G-H环一直是表位疫苗、合成肽疫苗等新型疫苗研究的热门靶点^[6-7]。

我国是FMD流行的国家，其中O型FMD流行最广，也最难防控。目前我国流行的O型FMDV主要分为3个拓扑型：古典中国型(Cathay)、中东-南亚型(Middle East-South Asia, ME-SA)和东南亚型(South-East Asia, SEA)^[8]。O型多拓扑型病毒株共同流行加剧了FMDV的变异，导致新变异毒株不断出现，使现用疫苗与流行毒株的抗原匹配性下降或抗原不匹配，容易导致免疫失败而引发新疫情的流行，给我国FMD防控提出了前所未有的挑战。因此，迫切需要筛选高效、广谱的FMD疫苗候选毒株。

为了发展能更好地防控当前流行的O型3个拓扑型FMD流行株，本研究借助FMDV的反向遗传操作技术，在已建立含2个拓扑型(Cathay+SEA) FMDV结构蛋白基因全长克隆基础上，将ME-SA拓扑型疫苗株G-H抗原表位基因替换其对等基因，构建含3个拓扑型FMDV结构蛋白基因的重组全长克隆，拯救重组FMDV，研究其作为猪疫苗候选株的潜力。

1 材料与方法

收起

1.1 质粒、细胞和病毒

FMDV疫苗株O/HN/CHA/93 (Cathay拓扑型)全长感染性克隆^[9]嵌合当前流行毒株O/NXYCh/CHA/2018 (SEA拓扑型) VP1基因的全长质粒pOFS/NXVP1和半长质粒pSK-Z123/NXVP1^[10]均为中国农业科学院兰州兽医研究所构建保存。表达T7 RNA聚合酶的BSR/T7细胞和BHK-21细胞均为本实验室保存。FMDV O/GXCX/CHA/2018 (MH791316.1)、O/HB/HK/99、O/XJ/CHA/2017 (MF461724.1)、O/NXYCh/CHA/2018 (MH791315.1)均由国家口蹄疫参考实验室分离保存。

1.2 主要试剂

琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒、DNA片段回收试剂盒、质粒抽提试剂盒、大肠杆菌(Escherichiacoli) JM109感受态细胞、高保真DNA聚合酶、限制性核酸内切酶(Bgl Ⅱ、Spe Ⅰ、Not Ⅰ、Pst Ⅰ)，宝生物工程(大连)有限公司；转染试剂Lipofectamine^TM 2000、MEM培养基、2×MEM培养基，Invitrogen公司；RNA提取试剂盒，QIAGEN公司；灭活剂二乙烯亚胺(2-bromoethylamine hydrobromide, BEI)，Sigma-Aldrich公司。

1.3 G-H基因替换重组FMDV全长质粒的构建

以pSK-Z123/NXVP1为骨架，替换FMDV疫苗株O/TUR/5/2009 (KP202878.1，ME-SA拓扑型)长约30个氨基酸G-H环基因的半长质粒pSK-Z123/NXVP1/TURG-H，由苏州金唯智生物科技有限公司合成。pSK-Z123/NXVP1/TURG-H和嵌合全长质粒pOFS/NXVP1经Spe Ⅰ和Bgl Ⅱ双酶切后分别回收约5 400 bp (pSK-Z123/ NXVP1/TURG-H)和2个大小均接近3 000 bp (pOFS/NXVP1)的DNA片段，然后用T4 DNA连接酶连接、转化，构建重组全长质粒pOFS/NXVP1/TURG-H。全长质粒用Pst Ⅰ进行酶切鉴定，将符合预期的质粒送苏州金唯智生物科技有限公司进行测序验证。重组质粒含FMDV的基因组示意见图1A，G-H环氨基酸差异见图1B。

1.4 重组FMDV的拯救

重组质粒pOFS/NXVP1/TURG-H经Not Ⅰ内切酶37 ℃消化3 h后，用DNA片段回收试剂盒回收，具体步骤参照试剂盒说明书。取2 μg回收的pOFS/NXVP1/TURG-H线性化DNA片段用Lipofectamine^TM 2000介导转染至80%−90% BSR/T7细胞，并置于37 ℃、5% CO₂培养。转染4−5 h后，每孔加1 mL的MEM培养基。每隔12 h观察细胞状态，当转染细胞出现明显的致细胞病变效应(cytopathogenic effect, CPE)后，将其反复冻融后的上清液接种BHK-21细胞进行传代，子代病毒用于后续试验。

1.5 重组FMDV的鉴定

1.5.1 RT-PCR和序列测定

取转染细胞上清液，用RNA提取试剂盒提取总RNA，通过一步法RT-PCR试剂盒扩增病毒VP1蛋白基因。回收、纯化目标PCR产物后送苏州金唯智生物科技有限公司进行序列测定。PCR扩增和测序引物为VP1-F (5′-AGATAACA CAGGGAAAGCC-3′)和VP1-R (5′-CTGATGGC CTTCACTCCAGT-3′)。

1.5.2 间接免疫荧光试验(immunofluorescence assay, IFA)

将转染细胞培养上清和亲本病毒分别接种70%−80%满单层BHK-21细胞。37 ℃孵育6 h后细胞用4%多聚甲醛4 ℃固定20 min，PBS漂洗3次；用Triton X-100室温通透10 min，PBS洗涤3次；加入小鼠抗FMDV 3A单抗(1:200倍稀释)，37 ℃孵育1 h，PBS洗3次；加入二抗(山羊抗小鼠IgG-FITC稀释比例为1:400)，37 ℃作用1 h，洗去游离二抗后用荧光显微镜观察结果并保存图片。

1.6 重组FMDV噬斑表型鉴定和生长特性测定

将10倍比系列稀释的第6代重组FMDV和亲本病毒各200 μL/孔，分别接种培养于6孔板的BHK-21细胞，放在37 ℃条件下孵育，每10 min轻轻摇动1次，1 h后加入2 mL黄芪胶混合液(1份2×MEM，1份1.2%黄芪胶)。细胞静置培养48 h后，加入固定液(甲醇: 丙酮=1:1，体积比)固定30 min，经0.1%结晶紫37 ℃染色2 h后进行噬斑计数和噬斑直径测量，并计算病毒噬斑形成单位(PFU/mL)。

将第6代重组FMDV和亲本病毒的病毒滴度稀释至5×10⁶ PFU/mL，分别接种BHK-21细胞置于37 ℃孵育1 h。弃去未结合病毒液，补加5 mL MEM培养液继续培养。每隔4 h收取样品至16 h，冻融样品后通过噬斑形成单位测定不同时间点的病毒滴度(PFU/mL)并评价其一步生长特性。

1.7 灭活疫苗的制备

取第6代亲本病毒和重组病毒各100 mL，反复冻融2−3次，4 ℃、6 000 r/min离心30 min，去除细胞碎片。收集的病毒液分别加入5 mmol BEI于28 ℃灭活30 h。灭活后的病毒接种BHK-21细胞进行安全性检验，检验合格的病毒抗原按照常规方法纯化、浓缩后，按抗原: 佐剂等体积比配制疫苗(146S抗原终浓度为6 μg/mL)，疫苗制品置于4−8 ℃保存备用。

1.8 猪的免疫

筛选FMDV结构蛋白/非结构蛋白抗体阴性的3月龄健康仔猪共计12头，随机分为2组，每组6头，分别接种亲本病毒疫苗和重组病毒疫苗，接种剂量为2 mL/头份。免疫28 d后采血，分离血清，−20 ℃保存备用。

1.9 病毒中和试验

取免疫后28 d的免疫血清进行微量病毒中和试验检测针对3个拓扑型的4个谱系FMDV株(O/GXCX/CHA/2018、O/HB/HK/99、O/XJ/ CHA/2017和O/NXYCh/CHA/2018)的交叉中和抗体水平。微量病毒中和试验操作如下：免疫血清在96孔板中进行2倍比连续梯度稀释；加入50 µL病毒稀释液[滴度为200半数组织培养感染剂量(tissue culture infective dose, TCID₅₀)/0.1 mL]，同时设置病毒回归对照(100 TCID₅₀、10 TCID₅₀、1 TCID₅₀、0.1 TCID₅₀)和细胞对照。待测血清和病毒稀释液混匀后，37 ℃孵育1 h，加入100 µL浓度约为1×10⁶个/mL的BHK-21细胞悬液。培养72 h后观察CPE，按Karber法计算血清中和抗体滴度。

2 结果与分析

收起

2.1 重组质粒的构建及鉴定

凝胶电泳鉴定正确的重组质粒pOFS/NXVP1/TURG-H用Pst Ⅰ进行酶切鉴定，凝胶电泳结果表明，产生了约591、3 282、7 200 bp的条带，与预期大小相符。测序结果表明重组质粒含有预期替换的G-H环基因。

2.2 重组FMDV的拯救

重组质粒pOFS/NXVP1/TURG-H经Not Ⅰ酶线性化，转染BSR/T7细胞2 d后，部分细胞可见典型的FMDV致细胞病变效应，而未转染线性DNA的细胞未出现CPE。当约80%−90%的转染细胞出现CPE时收集细胞，反复冻融后继续在BHK-21细胞上连续传代。

2.3 重组FMDV的鉴定

2.3.1 RT-PCR

收集的转染样品以VP1-F和VP1-R为引物，RT-PCR扩增VP1结构蛋白基因。琼脂糖凝胶电泳显示扩增出符合预期大小的白亮条带。对该PCR产物进行序列分析，结果表明重组病毒rHN/NXVP1/TURG-H含有替换的基因片段，说明成功构建了重组FMDV。

2.3.2 免疫荧光试验

免疫荧光试验如图2所示，拯救的重组病毒感染的BHK-21细胞能与FMDV 3A单抗反应，可见特异绿色荧光，而对照细胞与FMDV 3A单抗作用未见荧光，表明拯救的重组病毒为FMDV。

2.4 重组FMDV的噬斑表型鉴定和生长曲线

重组FMDV和亲本病毒的噬斑表型如图3所示，rHN/NXVP1 [(4.27±1.44) nm]和rHN/NXVP1/ TURG-H [(4.11±1.39) nm]均可形成形态相似、平均直径相近的噬斑；一步生长曲线表明重组FMDV的复制动力学与亲本病毒相似，但重组FMDV的病毒滴度略低于(P > 0.05)亲本病毒，说明FMD疫苗毒株G-H环基因的替换未明显影响病毒在BHK-21细胞上的复制。

2.5 病毒中和试验

免疫猪28 d的血清用微量中和试验检测针对ME-SA、SEA和Cathay共3个拓扑型的4个谱系病毒株的中和抗体水平。如图4所示，该结果表明亲本病毒rHN/NXVP1和重组病毒rHN/NXVP1/TURG-H疫苗均产生了针对ME-SA、SEA拓扑型病毒保护性中和抗体(WOAH规定中和抗体≥1.65log₁₀为保护)，其中亲本病毒rHN/NXVP1疫苗免疫的猪(5/6)产生了针对O/NXYCh/CHA/2018和O/XJ/CHA/2017病毒保护性中和抗体，3/6免疫猪产生了针对O/HB/HK/99病毒保护性的中和抗体，但未产生针对O/GXCX/CHA/2018保护性中和抗体；而重组病毒rHN/NXVP1/TURG-H疫苗免疫猪均产生了针对O/NXYCh/CHA/2018、O/XJ/CHA/2017和O/HB/HK/99病毒保护性的中和抗体，但只有1/6的猪产生了针对O/GXCX/CHA/2018病毒保护性的中和抗体。结果说明，疫苗株G-H环基因的替换显著提高了重组病毒对当前流行的O型SEA和ME-SA拓扑型FMDV的交叉反应性(P < 0.05)。

3 讨论与结论

收起

近年来，反向遗传操作技术的发展为RNA病毒蛋白功能、致病机制机理以及新型疫苗创制等方面的研究提供了便利。通过反向遗传操作技术嵌合RNA病毒不同血清型、亚型毒株主要免疫蛋白或者优势抗原表位，能够提高疫苗株与流行毒株的交叉反应性，拓展病毒的抗原谱。如Kim等以禽流感病毒(avian influenza viruses, AIV) Apdm09株(H1N1亚型)为骨架，构建了嵌合H9N2亚型AIV的HA1区域和H5N8亚型AIV的HA2区域的重组AIV，该病毒制备的灭活疫苗免疫动物能诱导产生高水平抗H9和H5亚型AIV的中和抗体，并能够保护小鼠免遭这2个亚型AIV的攻击^[11]。Liao等在猪瘟病毒(classic swine fever virus, CSFV) (C株，基因1型)感染性克隆的基础上，构建了嵌合CSFV流行毒株(基因型2) E2蛋白N端抗原高变区1 (90 bp)的重组病毒RecC-HAR1，该病毒的抗血清能很好地中和基因1型和2型的CSFV，表明嵌合CSFV高变抗原区，提高了不同基因型CSFV之间的交叉反应性^[12]。Rieder等发现嵌合O型或C型A12 FMDV G-H环的豚鼠抗血清能同时中和A型和O型或A型和C型FMDV，而嵌合C型G-H环A12 FMDV疫苗免疫猪也能产生交叉中和抗体，能完全保护猪免遭A型FMDV的攻击，部分保护猪免遭C型FMDV的攻击^[13]。鉴于此，本研究也利用已建立FMDV的感染性克隆，构建含3个拓扑型(Cathay+ME-SA+SEA)病毒株结构蛋白，主要免疫基因的嵌合FMDV，以期筛选抗原高效、广谱拓展的FMD疫苗候选毒株。

FMD疫苗株的筛选方法主要有2种：体内试验和体外试验^[14]。其中体内试验耗时、费力，而且需要价格昂贵的靶动物和高级别生物安全实验室，而体外实验操作简单，成本低廉。另外，FMD疫苗诱导机体产生中和抗体的水平与免疫动物的保护密切相关。一般情况下，动物中和抗体水平越高，保护率越高。因此，本研究首选体外微量病毒中和试验检测重组病毒和亲本病毒疫苗免疫猪血清对3个拓扑FMDV的交叉中和能力，初步评价其作为猪O型FMD疫苗候选株的潜力。本研究结果表明，与亲本病毒疫苗一样，重组病毒疫苗免疫猪均能产生抵抗SEA和ME-SA拓扑型病毒保护性平均交叉中和抗体水平(> 1.65log₁₀)，不能对Cathay谱系病毒产生保护性平均交叉中和抗体水平(< 1.65log₁₀)，但O/TUR/5/2009疫苗株G-H环基因的替换显著提高了重组病毒对当前流行的SEA和ME-SA拓扑型FMDV的交叉反应性(P < 0.05)，推测这种免疫差异可能与G-H环上包含的免疫优势的抗原表位有关，但具体的机制有待进一步研究。

本研究构建的含3个拓扑型FMDV结构蛋白基因的重组病毒疫苗免疫猪显著提高了对O型SEA和ME-SA拓扑型FMDV的交叉反应性，对未来FMD疫苗的设计具有重要的指导意义。

基金

收起

国家重点研发计划(2023YFD1802501)

参考文献

收起

文献

收起

参考文献引证文献

排序方式：

[1]

GRUBMAN MJ, BAXT B.Foot-and-mouth disease[J].Clinical Microbiology Reviews,2004,17(2):465-493.

https://doi.org/10.1128/CMR.17.2.465-493.2004

[2]

BARNETT PV, OULDRIDGE EJ, ROWLANDS DJ, BROWN F, PARRY NR.Neutralizing epitopes of type O foot-and-mouth disease virus. I. Identification and characterization of three functionally independent, conformational sites[J].The Journal of General Virology,1989,70(Pt 6):1483-1491.

[3]

CROWTHER JR, FARIAS S, CARPENTER WC, SAMUEL AR.Identification of a fifth neutralizable site on type O foot-and-mouth disease virus following characterization of single and quintuple monoclonal antibody escape mutants[J].The Journal of General Virology,1993,74(Pt 8):1547-1553.

[4]

PARRY N, FOX G, ROWLANDS D, BROWN F, FRY E, ACHARYA R, LOGAN D, STUART D.Structural and serological evidence for a novel mechanism of antigenic variation in foot-and-mouth disease virus[J].Nature,1990,347:569-572.

https://doi.org/10.1038/347569a0

[5]

MATEU MG, CAMARERO JA, GIRALT E, ANDREU D, DOMINGO E.Direct evaluation of the immunodominance of a major antigenic site of foot-and-mouth disease virus in a natural host[J].Virology,1995,206(1):298-306.

https://doi.org/10.1016/S0042-6822(95)80045-X

[6]

WONG HT, CHENG SC, CHAN EW, SHENG ZT, YAN WY, ZHENG ZX, XIE Y.Plasmids encoding foot-and-mouth disease virus VP1 epitopes elicited immune responses in mice and swine and protected swine against viral infection[J].Virology,2000,278(1):27-35.

https://doi.org/10.1006/viro.2000.0607

[7]

ZHANG ZW, PAN L, DING YZ, ZHOU P, LV JL, CHEN HT, FANG YZ, LIU XS, CHANG HY, ZHANG J, SHAO JJ, LIN T, ZHAO FR, ZHANG YG, WANG YL.Efficacy of synthetic peptide candidate vaccines against serotype-a foot-and-mouth disease virus in cattle[J].Applied Microbiology and Biotechnology,2015,99(3):1389-1398.

https://doi.org/10.1007/s00253-014-6129-1

[8]

ZHU Z, YANG F, HE J, LI J, CAO W, LI J, XIA Y, GUO J, JIN Y, ZHANG K, ZHENG H, LIU X.First detection of foot-and-mouth disease virus O/ME-SA/Ind2001 in China[J].Transboundary and Emerging Diseases,2018,65(6):2027-2031.

https://doi.org/10.1111/tbed.12895

[9]

LI PH, BAI XW, SUN P, LI D, LU ZJ, CAO YM, FU YF, BAO HF, CHEN YL, XIE BX, LIU ZX.Evaluation of a genetically modified foot-and-mouth disease virus vaccine candidate generated by reverse genetics[J].BMC Veterinary Research,2012,8:57.

https://doi.org/10.1186/1746-6148-8-57

[10]

LI PH, HUANG SL, ZHA JJ, SUN P, LI D, BAO HF, CAO YM, BAI XW, FU YF, MA XQ, LI K, YUAN H, ZHANG J, ZHAO ZX, WANG J, ZHANG KQ, CHEN YL, ZHANG Q, QI SY, LIU ZX, et al.Evaluation of immunogenicity and cross-reactive responses of vaccines prepared from two chimeric serotype O foot-and-mouth disease viruses in pigs and cattle[J].Veterinary Research,2022,53(1):56.

https://doi.org/10.1186/s13567-022-01072-7

[11]

KIM SM, KIM YI, PARK SJ, KIM EH, KWON HI, SI YJ, LEE IW, SONG MS, CHOI YK.Vaccine efficacy of inactivated, chimeric hemagglutinin H9/H5N2 avian influenza virus and its suitability for the marker vaccine strategy[J].Journal of Virology,2017,91(6):e01693-16.

[12]

LIAO X, WANG ZH, CAO T, TONG C, GENG SC, GU YX, ZHOU YS, LI XL, FANG WH.Hypervariable antigenic region 1 of classical swine fever virus E2 protein impacts antibody neutralization[J].Vaccine,2016,34(33):3723-3730.

https://doi.org/10.1016/j.vaccine.2016.06.007

[13]

RIEDER E, BAXT B, LUBROTH J, MASON PW.Vaccines prepared from chimeras of foot-and-mouth disease virus (FMDV) induce neutralizing antibodies and protective immunity to multiple serotypes of FMDV[J].Journal of Virology,1994,68(11):7092-7098.

https://doi.org/10.1128/jvi.68.11.7092-7098.1994

[14]

MAHAPATRA M, PARIDA S.Foot and mouth disease vaccine strain selection: current approaches and future perspectives[J].Expert Review of Vaccines,2018,17(7):577-591.

https://doi.org/10.1080/14760584.2018.1492378

2024年第64卷第7期

PDF下载

106

引用本文

BibTeX

文章信息

doi: 10.13343/j.cnki.wsxb.20230803

接收时间：2023-12-27
首发时间：2026-03-19
出版时间：2024-07-04

补充材料

相关文章

文章信息

作者

出版历史

收稿日期：2023-12-27
录用日期：2024-04-22

基金

National Key Research and Development Program of China(2023YFD1802501)

国家重点研发计划(2023YFD1802501)

作者信息

1 中国农业科学院兰州兽医研究所/兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室, 甘肃兰州 730000

2 甘肃省病原生物学基础学科研究中心, 甘肃兰州 730046

通讯作者:

参考文献

分享链接

https://castjournals.cast.org.cn/joweb/wswxb/CN/10.13343/j.cnki.wsxb.20230803

分享至

全文二维码

扫描看全文

引用本文

BibTeX

本文的引用情况

2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

关闭全屏

BibTeX
EndNote
RefWorks
TxT