微生物学报

基因 Genes	引物序列 Primer sequences (5′→3′)	片段大小 Target fragment (bp)	退火温度 Annealing temperature (℃)	参考文献References
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广东省宠物源肺炎克雷伯菌耐药、毒力基因的检测与药物敏感性测定

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吴素娟 ¹^,² , 林昌成 ¹^,² , 万鹏 ¹^,² , 胡健欣 ¹^,² , 黄鸿昊 ¹^,² , 李杰 ¹^,² , 熊文广 ¹^,² , 曾振灵 ¹^,²

微生物学报 | 研究报告 2025,65(7): 2976-2987

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微生物学报 | 研究报告 2025, 65(7): 2976-2987

广东省宠物源肺炎克雷伯菌耐药、毒力基因的检测与药物敏感性测定

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吴素娟¹^,², 林昌成¹^,², 万鹏¹^,², 胡健欣¹^,², 黄鸿昊¹^,², 李杰¹^,², 熊文广¹^,², 曾振灵¹^,²

作者信息

^1.华南农业大学，广东省兽药研制与安全评价重点实验室，广东广州

^2.国家兽医微生物耐药性风险评估实验室，广东广州

Resistance and virulence genes and antimicrobial susceptibility of pet-derived Klebsiella pneumoniae from Guangdong Province

Sujuan WU¹^,², Changcheng LIN¹^,², Peng WAN¹^,², Jianxin HU¹^,², Honghao HUANG¹^,², Jie LI¹^,², Wenguang XIONG¹^,², Zhenling ZENG¹^,²

Affiliations

^1.Guangdong Provincial Key Laboratory of Veterinary Pharmaceutics Development and Safety Evaluation, South China Agricultural University, Guangzhou, Guangdong, China

^2.China National Risk Assessment Laboratory for Antimicrobial Resistance of Animal Original Bacteria, Guangzhou, Guangdong, China

出版时间: 2025-07-04 doi: 10.13343/j.cnki.wsxb.20240819

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摘要

收起

【目的】 探究广东省部分地区宠物源肺炎克雷伯菌的耐药和毒力情况。 【方法】 采集犬猫粪便拭子，通过分离培养、PCR扩增16S rRNA和khe基因进行菌株鉴定。采用琼脂扩散法测定肺炎克雷伯菌分离株对17种抗菌药物的敏感性；通过PCR检测β-内酰胺类(bla_SHV、bla_CTX、bla_TEM)、碳青霉烯类(bla_KPC、bla_NDM)、氨基糖苷类(rmtB)、喹诺酮类(qnrS、oqxAB)、磺胺类(Sul1、Sul2)、酰胺醇类(floR)、四环素类[tet(A)]、磷霉素(fosA3)耐药基因以及部分毒力基因(rmpA、maga、fimH、mrkD、uge、WabG、kfu、Aerobactin、ureA)。 【结果】 从采集的428份粪便样品中分离得到126株肺炎克雷伯菌，分离率为29.4%。琼脂扩散法结果显示，126株分离菌对阿莫西林(75.40%)、氨苄西林(73.81%)、复方新诺明(61.90%)耐药率高，对头孢他啶、阿米卡星、安普霉素和恩诺沙星较为敏感，对替加环素、黏菌素、美罗培南敏感。耐药基因检测结果显示，磺胺类耐药基因oqxAB检出率最高，为86.51%；其次为β-内酰胺酶耐药基因bla_SHV(73.81%)、四环素类耐药基因tet(A) (52.68%)；其他耐药基因均有不同程度检出(0.79%-46.03%)，碳青霉烯类耐药基因bla_KPC、黏菌素耐药基因mcr-1和氨基糖苷类耐药基因rmtB未检出。毒力基因检测结果显示，尿素酶相关基因ureA检出率为100.00%，脂多糖相关基因uge检出率为95.54%，菌毛相关基因ﬁmH的检出率为91.07%，其他毒力基因均有不同程度检出(2.70%-8.90%)，荚膜相关基因magA与菌毛相关基因mrkD未检出。 【结论】 广东省部分地区宠物源肺炎克雷伯菌耐药状况严重，但致病性较弱，应加强对其耐药性与致病力的监测。此外，临床上应严格管理和合理使用抗生素，避免多重耐药肺炎克雷伯菌的产生与传播。

关键词

肺炎克雷伯菌 / 宠物源 / 耐药基因 / 毒力基因

Abstract

收起

[Objective] To investigate the antibiotic resistance and virulence of pet-derived Klebsiella pneumoniae in some areas of Guangdong Province. [Methods] Fecal swabs were collected from dogs and cats for strain isolation, and 16S rRNA and khe genes were amplified by PCR to identify the strains. The sensitivity of K. pneumoniae isolates to 17 antibiotics was determined by the agar diffusion method. PCR was employed to detect resistance genes to β-lactams (bla_SHV, bla_CTX, and bla_TEM), carbapenems (bla_KPC and bla_NDM), aminoglycosides (rmtB), quinolones (qnrS and oqxAB), sulfonamides (Sul1 and Sul2), amphenicols (floR), tetracyclines (tet(A)), and fosfomycin (fosA3) and some virulence genes (rmpA, maga, fimH, mrkD, uge, WabG, kfu, Aerobactin, and ureA). [Results] A total of 126 strains of K. pneumoniae were isolated from 428 fecal samples, with an isolation rate of 29.4%. The 126 isolates had high resistance rates to amoxicillin (75.40%), ampicillin (73.81%), and cotrimoxazole (61.90%). They were moderately sensitive to ceftazidime, amikacin, apramycin, and enrofloxacin, and they were sensitive to tigecycline, colistin, and meropenem. The detection rate of the resistance gene oqxAB was the highest, which was 86.51%, followed by those of the β-lactam resistance gene bla_SHV (73.81%) and the tetracycline resistance gene tet(A) (52.68%). Other resistance genes were detected to varying degrees (0.79%-46.03%) and the carbapenem resistance gene bla_KPC, colistin resistance gene mcr-1, and aminoglycoside resistance gene rmtB were not detected. Among the virulence genes, the urease gene urea, lipopolysaccharide-related gene uge, and fimbria-related gene fimH showed the detection rates of 100.00%, 95.54%, and 91.07%, respectively. Other virulence genes were detected to varying degrees (2.70%-8.90%), while the capsule-related gene magA and the fimbria-related gene mrkD were not detected. [Conclusion] In some areas of Guangdong Province, the antibiotic resistance of pet-derived K. pneumoniae is serious, but its pathogenicity is relatively weak. Monitoring of its drug resistance and pathogenicity should be strengthened. In addition, antibiotics should be strictly managed and rationally used in the clinical practice, so as to avoid the generation and dissemination of multidrug resistant strains of K. pneumoniae.

Key words

Klebsiella pneumoniae / pet-derived / resistance genes / virulence genes

引用本文

吴素娟, 林昌成, 万鹏, 胡健欣, 黄鸿昊, 李杰, 熊文广, 曾振灵. 广东省宠物源肺炎克雷伯菌耐药、毒力基因的检测与药物敏感性测定. 微生物学报, 2025 , 65 (7) : 2976 -2987 . DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.20240819

Sujuan WU, Changcheng LIN, Peng WAN, Jianxin HU, Honghao HUANG, Jie LI, Wenguang XIONG, Zhenling ZENG. Resistance and virulence genes and antimicrobial susceptibility of pet-derived Klebsiella pneumoniae from Guangdong Province[J]. Acta Microbiologica Sinica, 2025 , 65 (7) : 2976 -2987 . DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.20240819

正文

收起

肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)是一种常见的革兰阴性菌和条件致病菌，属肠杆菌科克雷伯属^[1]，广泛分布于自然界，主要存在于动物及人的消化道、呼吸道与泌尿生殖道等部位^[2]。肺炎克雷伯菌是引起社区和医院获得性感染的常见机会致病菌，人类感染肺炎克雷伯菌后可导致多系统、多器官感染^[3]；宠物感染肺炎克雷伯菌后易引发各种炎症及生殖系统疾病，严重感染可致死^[4]。近年来，国内养宠群体不断扩大，宠物在人们精神寄托中的替代作用日益凸显，这是导致宠物数量不断增长的主要内在驱动因素^[5]。同时，宠物诊疗行业的兴起进一步促使抗菌药物广泛用于治疗宠物临床上由各类细菌引起的感染，如消化道、呼吸道和皮肤等部位的感染。然而，由于抗菌药物的不规范使用，甚至滥用，使肺炎克雷伯菌出现了产超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum beta-lactamases, ESBLs)和碳青霉烯酶耐药的多重耐药表型，已逐渐成为除大肠杆菌之外的另一重要耐药致病菌^[4,6-7]，导致治疗用药的局限性增加。

宠物与主人及其家庭成员之间的密切接触，为多重耐药细菌在人和宠物之间的传播创造了有利条件，可能对人类健康造成一定威胁，对公众健康构成潜在风险^[8]。宠物医疗作为宠物经济产业链的下游环节之一^[9]，而花鸟市场作为人群潜在购买宠物的地点都具有重要的参考价值。因此，本研究选取宠物医院和花鸟市场采集的犬猫粪便拭子进行肺炎克雷伯菌的分离鉴定，并对其耐药性和毒力基因进行检测，旨在为防控宠物因肺炎克雷伯菌引起的相关疾病及临床合理用药提供参考依据。

1 材料与方法

收起

1.1 样品来源

2022年和2023年分别从不同区域采集到393份和35份新鲜犬猫粪便拭子，共428份粪便样品，其中广州市部分宠物医院319份、广州市某花鸟市场76份及东莞市某宠物医院33份。将样品装入样品袋中并编号，置于4 ℃保存备用。质控菌株大肠杆菌ATCC 25922由华南农业大学广东省兽药研制与安全评价重点实验室保存。

1.2 主要试剂

BHI肉汤(brain heart infusion broth)、MH肉汤(mueller hinton broth)、LB琼脂和MH琼脂 (mueller hinton agar)均购自广东环凯微生物科技有限公司；麦康凯肌醇阿东醇羧苄青霉素(MacConkey inositol adonitol carbenicillin agar, MIAC)培养基购自青岛海博生物技术有限公司；DL2000 bp DNA marker、2×Taq PCR Master Mix均购自广东东盛生物科技有限公司；革兰染色试剂盒购自北京索莱宝科技有限公司。

1.3 抗菌药物

氨苄西林(纯度98%)、头孢他啶(纯度98%)、头孢噻呋(纯度98%)、多西环素(纯度97%)、替加环素(纯度98%)、氟苯尼考(纯度95%)、阿米卡星(纯度97%)、恩诺沙星(纯度98.5%)均购自生工生物工程(上海)股份有限公司；黏菌素(6 500 IU/mg)、庆大霉素(590 IU/mg)、安普霉素(纯度99%)、环丙沙星(纯度99%)、阿莫西林(纯度99%)、头孢噻肟(纯度98%)、新霉素(纯度92%)、美罗培南(纯度98%)均购自大连美仑生物技术有限公司；磺胺甲噁唑(纯度99%)、甲氧苄啶(纯度98%)均购自广州翔博生物科技有限公司，复方新诺明由磺胺甲噁唑和甲氧苄啶按比例混合而成。

1.4 细菌的分离培养与革兰染色镜检

将粪便样品加入无菌BHI肉汤2 mL，置于37 ℃、180 r/min培养过夜后，划线接种于MIAC培养基，37 ℃培养箱培养12 h。进一步挑取大小一致、粉红色中心发白的单个疑似菌落划线于MIAC进行纯化，37 ℃培养箱培养12 h；挑取单菌落并划线和涂布于LB琼脂，37 ℃培养过夜。取单菌落按照革兰染色试剂盒使用步骤进行革兰染色与镜检观察。

1.5 16S rRNA基因和特异性基因的检测

采用水煮法提取分离菌株的DNA，以其为模板，利用PCR扩增16S rRNA基因和khe基因。16S rRNA基因使用细菌通用引物^[10]；khe基因为肺炎克雷伯菌的特异性鉴定基因，参考文献[11]的基因序列，由北京擎科生物科技股份有限公司合成，引物信息见表1。PCR反应体系(25 μL)：上、下游引物(10 μmol/L)各1 μL，2×Taq PCR Master Mix 12.5 μL，模板DNA 2 μL，ddH₂O补足体系。PCR反应条件：94 ℃预变性4 min；94 ℃变性30 s，退火30 s (退火温度见表1)，72 ℃延伸90 s，共30个循环；72 ℃终延伸10 min。PCR产物进行1.0%琼脂糖凝胶电泳检测，并将产物送至广州擎科生物技术有限公司进行测序。将分离株的16S rRNA基因和khe基因序列上传至NCBI (www.ncbi.nlm.nih.gov)进行序列比对。

1.6 药物敏感性试验

采用琼脂扩散法对分离菌株进行17种抗菌药物(美罗培南、阿莫西林、头孢噻肟、头孢噻呋、氨苄西林、头孢他啶、新霉素、安普霉素、庆大霉素、阿米卡星、多西环素、黏菌素、环丙沙星、恩诺沙星、氟苯尼考、复方新诺明、替加环素)最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration, MIC)的测定，以大肠杆菌ATCC 25922作为质控菌，参考美国临床和实验室标准协会(Clinical and Laboratory Standards Institute, CLSI^[12])和欧洲药敏试验委员会(European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing, EUCAST^[13])的标准进行试验。其中，EUCAST用于分离株对替加环素敏感性结果的判读。

1.7 耐药基因PCR扩增

对分离出的目标菌株进行部分耐药基因的扩增，分别为黏菌素耐药基因mcr-1；β-内酰胺酶类耐药基因bla_SHV、bla_CTX、bla_TEM；碳青霉烯类耐药基因bla_KPC、bla_NDM；磺胺类耐药基因Sul1、Sul2；磷霉素耐药基因fosA3；酰胺醇类耐药基因floR；氨基糖苷类耐药基因rmtB；喹诺酮类耐药基因qnrS、oqxAB；四环素类耐药基因tet(A)。参照文献[14-23]合成基因，引物均由广州擎科生物技术有限公司合成，引物信息见表1。PCR反应体系和反应程序同1.5节。

1.8 毒力基因扩增

对分离出的目标菌株，选取部分毒力基因进行PCR扩增。参照文献[18,24-25]合成相关引物，引物序列信息见表2，引物均由广州擎科生物技术有限公司合成。PCR反应体系和反应条件同1.5节。

2 结果与分析

收起

2.1 细菌的分离培养与革兰染色

从428份粪便样品中分离得到126株疑似肺炎克雷伯菌，分离率为29.4%，按不同来源分别命名。疑似肺炎克雷伯菌在MIAC琼脂培养基上菌落大小一致，呈粉色、中心发白，表面光滑、中间凸起，菌落湿润(图1A)。将疑似菌落染色后，在油镜下观察细菌形态，为革兰阴性细菌，呈杆状(图1B)。

2.2 16S rRNA和 khe 基因检测

采用PCR方法对16S rRNA基因(图2A)和khe基因扩增结果(图2B)，进行1.0%琼脂糖凝胶电泳检测，结果显示均扩增出约1 500 bp和428 bp的目的片段，与预期片段大小相符。将16S rRNA和khe基因的测序结果上传至NCBI进行序列比对，证实分离到的菌株均为肺炎克雷伯菌。

2.3 药物敏感性试验结果

采用琼脂扩散法对126株肺炎克雷伯菌进行17种药物的敏感性测定。结果显示，分离株对阿莫西林、氨苄西林、复方新诺明的耐药率较高，分别为75.40%、73.81%、61.90%；其次对庆大霉素、头孢噻呋、多西环素、头孢噻肟、氟苯尼考、新霉素和环丙沙星具有不同程度的耐药，耐药率分别为44.44%、40.48%、34.13%、26.98%、24.60%、18.25%和16.67%；对头孢他啶、恩诺沙星、阿米卡星、安普霉素、较为敏感；对替加环素、黏菌素、美罗培南敏感(图3)。

2.4 耐药基因检测结果

耐药基因检测结果显示，β-内酰胺酶耐药基因bla_SHV检出率为73.81%，bla_CTX (26.98%)、bla_TEM (30.16%)也有不同程度的检出；碳青霉烯类耐药基因bla_NDM检出率为0.79%；氟喹诺酮类耐药基因oqxAB检出率最高，为86.51%，qnrS检出率为27.78%；磺胺类耐药基因Sul1检出率为16.67%，Sul2 (46.03%)检出率较高；四环素类耐药基因tet(A)检出率较高，为52.68%；磷霉素耐药基因fosA3检出率为21.43%；氟苯尼考耐药基因floR检出率为24.60%；黏菌素耐药基因mcr-1、碳青霉烯酶类bla_KPC和氨基糖苷类耐药基因rmtB未检出(图4)。

2.5 毒力基因检测结果

毒力基因检测结果显示：荚膜相关基因rmpA的检出率为6.30%，magA未检出；脂多糖相关基因wabG、uge的检出率分别为8.90%、95.54%；菌毛相关基因fimH检出率为91.07%，mrkD未检出；铁载体相关基因kfu、Aerobactin检出率分别为7.10%、2.70%；尿素酶相关基因ureA检出率最高，为100.00% (图5)。

3 讨论

收起

近年来，中国养宠数量持续上升，肺炎克雷伯菌引起的人和动物患病的相关报道也在迅速增多。已有报道从不同患病动物中分离出高致病性、高水平多重耐药的肺炎克雷伯菌^[26]，该菌可不同程度地引起人和动物的创伤、呼吸系统和泌尿系统感染，甚至引发败血症、脑膜炎和腹膜炎^[27]。Chen等^[28]收集2015年9月至2020年10月的一对健康夫妇及其宠物的粪便，研究表明观察的家庭成员之间存在肺炎克雷伯菌的低水平传播。粪便已被证明是耐药菌传播的媒介，细菌在粪便中可持留6个月以上^[29]。人类对宠物日常生活的管理以及人宠直接的近距离接触均有利于细菌传播。这会对人类健康与公共环境造成潜在风险，需重视宠物将耐药菌传播给人类的可能性。因此，本研究以宠物犬猫为采集对象，共采集428份粪便样品，分离得到126株肺炎克雷伯菌(分离率为29.4%)。其中，广州地区宠物医院共分离得到68株，分离率为21.3% (68/319)；广州市花鸟市场共分离得到29株，分离率为38.2% (29/76)。花鸟市场中肺炎克雷伯菌的分离率较宠物医院高，可能由于花鸟市场的宠物管理及卫生情况较宠物医院差，而且商店与医院的盈利方式不同，人员流动相对较大，更容易造成细菌的传播。

目前，抗菌药物仍是临床治疗宠物细菌性疾病的首选方式。宠物临床主要用药包括：阿莫西林克拉维酸钾用于敏感菌引起的各种感染，如皮肤、软组织、呼吸道、尿道和肠道感染；新霉素常用于眼部感染，如结膜炎和角膜炎等；恩诺沙星首选用于泌尿系统疾病，如膀胱炎和猫下泌尿道综合征；当犬猫支原体和衣原体感染致呼吸道疾病时，常用多西环素联合阿莫西林克拉维酸钾。宠物抗生素使用指南是限制细菌耐药性发生与耐药细菌在人畜共患病传播的重要工具^[30]，须严格遵守抗菌药物的使用原则，掌握药物的使用机理、临床症状，结合宠物自身的生长习性、饮食习惯等，合理用药并发挥最大化的治疗效果^[31]。

已有研究发现，分离于宠物医院的犬源肺炎克雷伯菌的耐药程度有不断攀升的趋势，从对一代头孢菌素类抗生素耐药到对二代和三代头孢菌素类、四环素类、喹诺酮类及磺胺类等抗菌药物耐药^[32]。产ESBLs细菌通过超广谱β-内酰胺酶耐药基因可以水解β-内酰胺类抗生素从而使细菌获得相关耐药表型^[33]。本研究分离得到的肺炎克雷伯菌对阿莫西林(75.40%)和氨苄西林(73.81%)具有高耐药率。对超广谱β-内酰胺酶耐药基因检测发现，bla_SHV(73.81%)较bla_CTX(26.98%)与bla_TEM (30.16%)检出率最高，推测这与犬猫治疗中使用阿莫西林等青霉素类药物造成的抗生素压力有关。张聪等^[18]对南宁市犬源肺炎克雷伯菌耐药性进行分析，发现该研究分离得到的3株(3/4)犬分离株均携带耐药基因bla_SHV，该结果与本研究中肺炎克雷伯菌中bla_SHV检出率高一致。floR与氟苯尼考耐药检出率一致，均为24.60%。然而rmtB未检出，分离菌株却具有对庆大霉素(44.44%)和阿米卡星(3.97%)耐药表型，可能是存在能介导氨基糖苷类耐药的其他耐药基因，如aac(6′)-Ia与ant(3″)-Ia等。值得注意的是，本研究中四环素类耐药基因tet(A) (52.68%)检出率高于多西环素耐药表型 (34.13%)；而磺胺类耐药基因Sul1 (16.67%)、Sul2 (46.03%)检出情况却低于复方新诺明的耐药表型 (61.90%)。喹诺酮类耐药基因oqxAB的高检出率(86.51%)和qnrS (27.78%)的相对低检出，与恩诺沙星(8.73%)、环丙沙星(16.67%)的耐药表型检出情况差距较大。这表明细菌耐药表型的形成并非单一因素所能决定，而是受到多种复杂因素的共同影响。耐药表型可能存在一定的波动性和不确定性，使细菌耐药表型难以预测。这也提醒我们在评估细菌耐药性时，不能仅依赖耐药基因的检测结果，还需要综合考虑多种因素的影响。

随着宠物行业的迅猛发展，动物诊疗机构中药品管理与使用问题越来越突出，人药兽用也引发了社会各界的高度关注^[34]。磷霉素未被批准用于宠物临床用药，但分离菌株中fosA3检出率为21.43%，可能与β-内酰胺类、氨基糖苷类等药物使用压力下，磷霉素耐药基因通过质粒共传播导致该基因检出，这与易梦颖等^[20]研究宠物源大肠埃希菌中fosA3检出原因相似。美罗培南是半合成碳青霉烯类抗生素，为人医临床上治疗多种不同感染的常用药。新型金属β-内酰胺酶耐药基因bla_NDM介导美罗培南等碳青霉烯类抗生素耐药，与其传播相关的常见质粒通常携带各种耐药基因，从而导致细菌呈现多重耐药表型。该基因于2008年在前往新德里的瑞典患者中首次报道，目前，亚洲大陆(主要是印度和中国)是NDM生产者的主要储存库，其次是英国^[35]。本研究中药敏试验结果显示有1株表现出美罗培南耐药，bla_NDM耐药基因检出率为0.79% (1/126)，需要进一步探究其可能的来源并评估其进一步传播的风险。

肺炎克雷伯菌感染机体的能力与菌毛、荚膜、铁载体与脂多糖等毒力基因相关。肺炎克雷伯菌主要表达Ⅰ型、Ⅲ型菌毛。Ⅰ型菌毛由fim基因群表达(如fimH)，介导菌株黏附并侵入宿主细胞，是尿路感染的关键原因；Ⅲ型菌毛由mrk基因群表达(如mrkD)，主要是黏附于内皮细胞及呼吸道和泌尿生殖道上皮细胞^[36]。本研究中fimH与mrkD检出率具有明显差异，推测本研究分离的肺炎克雷伯菌主要为产Ⅰ型菌毛细菌，还需进一步研究菌毛分型与各毒力基因之间的关联性。荚膜相关基因rmpA可导致高黏膜黏度，促进细菌生物膜的形成，与毒力的增强及耐药性的形成有关^[37-38]，目前认为rmpA基因是鉴定高毒力肺炎克雷伯菌的重要生物标志物之一。Abbas等^[39]表明，Aerobactin在各种小鼠模型、人类腹水和血液中起到增强细菌铁获取、生长和/或毒力方面的关键作用，它也被认为是检测高毒力肺炎克雷伯菌的有用生物标志物。本研究从宠物源分离得到的肺炎克雷伯菌rmpA和Aerobactin检出率低，提示广东省部分地区宠物源高毒力肺炎克雷伯菌流行率低。

4 结论

收起

本研究表明，广东省部分地区宠物源肺炎克雷伯菌对常用抗菌药物耐药情况严重，但致病性较弱。提示兽用临床上应检测肺炎克雷伯菌的致病力变化，加强对抗生素的管理及使用，避免多重耐药高毒力肺炎克雷伯菌的广泛传播。

作者利益冲突公开声明

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作者声明不存在任何可能会影响本文所报告工作的已知经济利益或个人关系。

基金

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国家重点研发计划(2022YFD1800400)

参考文献

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文献

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2025年第65卷第7期

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doi: 10.13343/j.cnki.wsxb.20240819

接收时间：2024-12-17
首发时间：2026-02-06
出版时间：2025-07-04

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收稿日期：2024-12-17
录用日期：2025-02-18

基金

National Key Research and Development Program of China(2022YFD1800400)

国家重点研发计划(2022YFD1800400)

作者信息

^1.华南农业大学，广东省兽药研制与安全评价重点实验室，广东广州

^2.国家兽医微生物耐药性风险评估实验室，广东广州

参考文献

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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基因 Genes	引物序列 Primer sequences (5′→3′)	片段大小 Target fragment (bp)	退火温度 Annealing temperature (℃)	参考文献References
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Genes

引物序列

Primer sequences (5′→3′)

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1 076

[16]

R: GACAGTTACCAATGCTTAATC

bla_SHV

F: TTATCTCCCTGTTAGCCACC

795

[17]

R: GATTTGCTGATTTCGCTCGG

bla_KPC

F: CGTCTAGTTCTGCTGTCTTG

566

[18]

R: CTTGTCATCCTTGTTAGGCG

bla_NDM

F: GGTTTGGCGATCTGGTTTTC

621

[18]

R: CGGAATGGCTCATCACGATC

Sul1

F: TCGGACAGGGCGTCTAAG

925

[18]

R: GGGTATCGGAGCGTTTGCA

Sul2

F: CGGCATCGTCAACATAACCT

721

[19]

R: TGTGCGGATGAAGTCAGCTC

fosA3

F: GCGTCAAGCCTGGCATTT

282

[20]

R: GCCGTCAGGGTCGAGAAA

floR

F: CTGAGGGTGTCGTCATCTAC

673

[20]

R: GCTCCGACAATGCTGACTAT

rmtB

F: ACATCAACGATGCCCTCAC

725

[20]

R: AAGTTCTGTTCCGATGGTC

oqxAB

F: GTCCAGCGATAATCAGGC

669

[21]

R: GGTCTCGGCAATCACTTT

qnrS

F: ACGACATTCGTCAACTGCAA

417

[22]

R: TAAATTGGCACCCTGTAGGC

tet(A)

F: CCAATCCATCGACAATCACC

583

[23]

R: CAGCCGAATACAGTGATCC

基因 Genes	引物序列 Primer sequences (5′→3′)	片段大小 Target fragment (bp)	退火温度 Annealing temperature (℃)	参考文献 References
rmpA	F: ACTGGGCTACCTCTGCTTCA	535	55	[24]
R: CTTGCATGAGCCATCTTTCA
mrkD	F: ATGTCGCTGAGGAAATTACTAACGC	958	56	[24]
R: TTAATCGTACGTAAGGTTAAAGATCAT
WabG	F: ACCATCGGCCATTTGATAGA	683	54	[24]
R: CGGACTGGCAGATCCATATC
maga	F: GGTGCTCTTTACATCATTGC	1 283	53	[18]
R: GCAATGGCCATTTGCGTTAG
uge	F: TCTTCACGCCTTCCTTCACT	535	55	[18]
R: GATCATCCGGTCTCCCTGTA
fimH	F: TGCTGCTGGGCTGGTCGATG	550	57	[18]
R: GGGAGGGTGACGGTGACATC
kfu	F: GAAGTGACGCTGTTTCTGGC	520	57	[18]
R: TTTCGTGTGGCCAGTGACTC
Aerobactin	F: GCATAGGCGGATACGAACAT	556	56	[18]
R: CACAGGGCAATTGCTTACCT
ureA	F: GCTGACTTAAGAGAACGTTATG	337	54	[25]
R: GATCATGGCGCTACCTCA

基因

Genes

引物序列

Primer sequences (5′→3′)

片段大小

Target fragment (bp)

退火温度

Annealing temperature (℃)

参考文献

References

rmpA

F: ACTGGGCTACCTCTGCTTCA