阅读排行为解析小麦丝裂原活化蛋白激酶基因TaMAPK1-6A、TaMAPK1-6B和TaMAPK1-6D在苗期耐旱性中的功能及其同源基因之间的叠加效应,以春小麦品种Fielder及以其为遗传背景通过CRISPR/Cas9介导的小麦基因组编辑技术创制的TaMAPK1单基因突变体mapk1-aa、mapk1-bb和mapk1-dd(简称单突变体)为供试材料,通过杂交、自交及其后代分离群体的基因型检测,创制了双基因敲除突变体和三基因敲除纯合突变体(分别简称双突变体和三突变体),并对这些单突变体、双突变体和三突变体以及对照(野生型Fielder)苗期耐旱性进行了系统评价。结果表明,TaMAPK1单基因功能缺失突变导致小麦幼苗耐旱性显著降低,表现为叶片保水能力下降、渗透调节物质积累减少和膜脂过氧化加剧。双突变体和三突变体的耐旱性较单突变体进一步降低,生理生化指标恶化程度随突变基因拷贝数增加而加剧。综上,TaMAPK1基因正调控小麦苗期耐旱性,其同源基因具有累加调控作用。
R2R3-MYB转录因子家族是MYB转录因子中最大亚家族,在植物多种胁迫响应中扮演重要角色。为了筛选出与磷利用效率相关的R2R3-MYB成员,以最新组装的大麦MorexV3基因组对大麦中的R2R3-MYB转录因子家族进行了鉴定与生物信息学分析。结果表明,在大麦MorexV3基因组中鉴定出127个R2R3-MYB基因,并命名为Hv2RMYB-1~Hv2RMYB-127。这些基因分布于大麦7条染色体上,且启动子区富含激素响应顺式作用元件。经理化性质分析,大多数成员编码酸性且不稳定的蛋白质。通过系统发育及共线性分析将大麦R2R3-MYB家族划分为5个不同的分支及16对串联复制基因。结合转录组数据(RNA-Seq)和实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR),发现10个大麦R2R3-MYB基因在低磷胁迫下均有不同程度的差异性表达,其中Hv2RMYB-48显著上调表达。Hv2RMYB-48定位于细胞核,可以与MYB-ABRE-MYB顺式作用元件进行互作。
株高是影响小麦抗倒伏性和产量的重要农艺性状。为解析小麦株高的遗传基础并挖掘稳定调控位点,以来源于黄淮麦区的339份小麦自然群体为试验材料,结合9个环境下的株高表型数据和21K单核苷酸多态性(SNP)芯片基因型数据,采用混合线性模型开展全基因组关联分析(GWAS)。对关键关联区间进行连锁不平衡(LD)与单倍型分析,并利用包含327份材料、基于660K SNP芯片的自然群体进行跨群体验证,同时对关键区间进行基因注释并筛选候选基因。结果表明,共鉴定到66个与株高显著相关的稳定QTL。其中,在6D染色体490.34~492.42 Mb区间检测到一个新的主效稳定位点QPh. nwafu-6D,该位点在8个环境中稳定表达,平均表型变异解释率为8.23%;该区间可划分为2个LD区块,Block2中鉴定到3种单倍型,优势单倍型Block2_Hap1(频率84.1%)携带材料的株高显著低于其他单倍型,且在多个环境中与较高的千粒重显著相关。通过跨群体验证,核心SNP标记(SNP_Chr6D_492211566)Block2_Hap1基因型材料株高极显著低于Block2_Hap2基因型材料(P< 0.001)。在该区间(490.34~492.42 Mb)进一步注释筛选到8个候选基因,功能上主要涉及激酶信号、转录调控、泛素化降解与激素响应等过程。
ERECTA受体样激酶家族在植物气孔发育及非生物胁迫响应中具有重要作用。为明确大麦HvERECTA基因在气孔发育及干旱胁迫响应中的调控机制,挖掘大麦抗旱分子育种新靶点,克隆获得大麦HvERECTA基因并进行生物信息学分析,构建异源过表达载体转化拟南芥,系统测定转基因株系的气孔表型、关键基因表达水平及干旱胁迫下的生理指标。结果表明,HvERECTA基因编码区全长2 934 bp,编码977个氨基酸,编码蛋白定位于质膜且含典型丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶结构域,在禾本科植物中高度保守;该基因的启动子区域富含ABRE、MBS等逆境胁迫及激素响应元件。转基因拟南芥气孔密度显著降低,气孔发育关键转录因子SPCH、MUTE、FAMA的编码基因表达量下调幅度均超50%,MAPK通路核心基因YODA表达上调50%~80%;干旱胁迫下,转基因拟南芥株系超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)活性较对照提升25%~40%,丙二醛含量下降约30%,失水速率降低20%,胁迫响应基因AtKIN2、AtABF3、AtRD22表达量均显著上调。综上所述,大麦HvERECTA基因通过调控MAPK信号通路降低气孔密度、增强植株抗氧化能力,从而提升抗旱性,为大麦抗旱分子育种提供了重要的功能基因资源。
为探究高温下小麦全基因组水平mRNA二级结构重编程及其与翻译效率的关联,以小麦品种中国春为材料,利用SHAPE-MaP及多聚核糖体图谱技术,在不同条件下对苗期小麦进行了多组学联合分析。结果表明,小麦转录本起始与终止密码子位置的SHAPE反应活性显著高于两侧,呈现保守结构特征。与常温相比,高温胁迫导致全基因组转录本平均SHAPE反应活性降低,mRNA倾向于形成双链结构,且该变化在恢复期表现出可逆性。高温胁迫初期,起始密码子区域的结构变化最为显著。多聚核糖体图谱显示高温导致多聚核糖体峰值下降,全基因组水平的翻译受到抑制。经关联分析,全基因组水平上转录本各区域的SHAPE反应活性变化与翻译效率变化之间无显著相关性。综上所述,高温诱导小麦mRNA折叠程度增加可能是一种主动防御策略,其与翻译调控呈现非线性复杂关系。
为了解miRNA对小麦耐干热风胁迫的分子机制,以小麦干热风敏感种质新春14号和干热风耐受品种新春46号为材料,在灌浆期采用人工模拟干热风胁迫(昼温35 ℃/夜温25 ℃,相对湿度20%,风速5 m·s-1,连续处理5 d),结合高通量测序技术筛选差异表达miRNA,并通过qRT-PCR进行验证。结果表明,共有203个miRNA参与干热风胁迫下的表达,其中共表达miRNA 136个。经差异筛选,最终获得6个核心差异表达miRNA,分别为novel_miR_537、novel_miR_443、novel_miR_469、novel_miR_393、novel_miR_390和novel_miR_339,这些miRNA显著富集于甘露糖型O-聚糖的生物合成、多聚糖降解、过氧化物酶体和硒化合物代谢4个通路。靶基因预测揭示,这些miRNA靶向调控β-1,2-木糖基转移酶、α-1,3-阿拉伯糖基转移酶、GDSL酯酶/脂肪酶、α-L-岩藻糖苷酶、过氧化物酶等关键体膜蛋白的编码基因,参与细胞壁稳定性维持、活性氧清除及渗透调节过程。这说明小麦对干热风响应存在miRNA调控网络,并以“miRNA-靶基因”分子模块形式共同参与小麦对干热风胁迫的抵御过程。
高迁移率族蛋白(HMG)是真核生物染色质动态调控的关键因子。为了解小麦HMG家族在干旱和磷饥饿胁迫下的动态响应规律,基于普通小麦参考基因组(IWGSC Ref Seq V1.0),通过生物信息学方法鉴定TaHMG家族成员,对其理化性质、系统进化、共线性及启动子顺式作用元件进行分析,并整合公共转录组数据与qRT-PCR,检测该家族成员的组织表达特性,及其在干旱胁迫(15% PEG6000)和缺磷胁迫(0 μmol·L-1 Pi)不同时间(0、1、3、6、12、24 h)的表达模式。结果表明,共鉴定出32个TaHMG基因,系统进化分析将其划分为HMGA(9个)和HMGB(23个)两个亚家族;共线性分析表明该家族进化受纯化选择主导;启动子分析显示,TaHMG基因富含脱落酸(ABRE)及茉莉酸甲酯等激素与胁迫响应元件。qRT-PCR检测出Ta-6D-HMGB1、Ta-3D-HMGB1及Ta-7D-HMGB2在叶片中高表达,Ta-2D-HMGB1、Ta-5A-HMGB1和Ta-7D-HMGB1在茎中高表达。干旱胁迫下,5个TaHMG基因在处理早期(3或6 h)即被快速诱导,而Ta-7D-HMGB2呈现先抑制(0~3 h)后上调(6 h)的表达模式;缺磷胁迫下,不同TaHMG基因表达高峰出现在处理后12或24 h。综上,小麦HMG家族基因通过差异化表达适应非生物胁迫,其中Ta-7D-HMG2、Ta-3D-HMGB1等胁迫响应基因可作为抗逆分子育种的候选基因。
新疆的南疆地区降水稀少、气候干旱,耕地不同程度盐渍化,严重影响小麦生长并导致小麦产量下降,因此挖掘耐盐种质资源是提升南疆粮食产能的有效途径。本研究以宁夏引黄灌区及周边区域审定的42份春小麦品种为材料,在150 mmol·L-1 NaCl胁迫下测定萌发期、苗期的发芽指标及表型指标,综合评价42份春小麦品种的耐盐性。结果表明,大多数小麦品种在萌发期与苗期各指标相对值小于100%,萌发期发芽势、发芽指数、活力指数的变异系数大于20%;苗期苗高、地上部分鲜重和干重及根长的变异系数大于20%,不同性状间呈极显著或显著正相关。通过系统聚类分析将42份春小麦材料划分为3类,其中耐盐型材料15份,中间型材料20份,敏感型材料7份;宁春3号、宁春8号、宁春9号、宁春12号、宁春35号等耐盐性较好,表现出较强逆境适应性,初步验证了跨区域引进宁夏春小麦种质资源的可行性,为南疆耐盐品种选育提供基础材料与参考。
为探索新疆春小麦成熟期氮效率评价方法与指标,筛选氮高效种质资源,以期为小麦氮高效品种的选育提供参考。以适宜新疆广泛种植的20个春小麦品种为研究对象,设置0 kg·hm-2(N0)、100 kg·hm-2(N1)、200 kg·hm-2(N2)、300 kg·hm-2(N3)共4个施氮水平,测定不同施氮水平下小麦成熟期茎干重、叶干重、穗重、穗粒数、千粒重、籽粒产量、株高、叶绿素含量等11个性状,利用主成分分析法、隶属函数法对小麦品种进行综合评价并划分氮效率类型。结果表明,与N2、N3处理相比,N0、N1处理下小麦成熟期株高降低、茎叶细小且籽粒产量降低;N0、N1处理下多数指标的变异系数均大于N2、N3处理。相关性分析显示,4个施氮水平下茎干重与穗重、穗粒重均呈显著正相关;单位面积穗数与茎干重、穗重、穗粒重、千粒重均呈显著负相关。两年在4个施氮水平下分别提取4个主成分,其累计贡献率为75.63%~82.20%。根据不同氮水平下氮效率综合值(G)的大小将供试小麦品种分为氮高效型、氮低效型、低施氮量氮高效型、高施氮量氮高效型4类。综合氮效率综合值与籽粒产量,筛选出核春137、粮春1242、粮春1354、新春38号、新春47号、新春48号和新春6号共7个高产氮高效型品种。
小麦缺体-四体材料是一种重要的染色体遗传材料,通常被用来进行目的基因定位等研究,而对于缺体-四体小麦材料本身的农艺和品质性状的研究报道较少。为了解染色体缺失和重复对小麦主要农艺和品质性状的影响,对38份中国春缺体-四体材料进行了农艺、籽粒及面粉加工品质性状调查及分析。结果表明:缺体-四体材料的农艺性状变异系数表现为穗粒数>分蘖数>穗长>小穗数>株高;与对照(中国春)相比,N7D-T7A的小穗数显著增加(P<0.05),N2A-T2B和N6B-T6A的穗粒数极显著降低(P<0.01),N4B-T4A和N7D-T7A的株高显著增加,N6D-T6B的株高显著降低,N4A-T4B和N7A-T7B的穗长极显著变短,但是分蘖数上所有缺体-四体材料与对照无显著差异。缺体-四体材料的籽粒性状变异系数表现为千粒重>面积>长宽比>粒宽>粒长>周长;与对照相比,N3B-T3D、N3D-T3A、N3D-T3B、N6A-T6B、N6B-T6A的籽粒面积显著增加,N3B-T3A、N3B-T3D、N3D-T3B、N6A-T6B和N6B-T6A的粒宽极显著增加,N1B-T1A、N1B-T1D、N3A-T3D、N4A-T4B、N4A-T4D、N5B-T5A、N5B-T5D、N6A-T6D、N7A-T7B、N7A-T7D在长宽比上极显著降低,N2A-T2B的千粒重显著降低,在周长和粒长性状上所有缺体-四体材料与对照没有显著差异。缺体-四体材料的面粉品质性状变异系数表现为沉降值>湿面筋含量>粗蛋白含量>水分>淀粉;与对照相比,缺体-四体材料在面粉品质性状上存在差异,但不显著。缺体-四体材料的变异系数表现为稳定时间>形成时间>粉质质量指数>弱化度>吸水率;与对照相比,只有第一同源群缺体-四体材料在面团形成时间和稳定时间上表现出了显著差异,其中N1A-T1B面团稳定时间显著增加,N1A-T1D面团形成时间和面团稳定时间极显著增加,N1D-T1A面团形成时间显著增加,面团稳定时间极显著增加,而在其他指标上缺体-四体材料与对照均无显著差异。