陆军军医大学学报

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维莫德吉通过BRD9介导的PD-L1调控基底细胞癌微环境

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王皓 , 张磊 , 李君龙 , 李欣童 , 孙美艳

陆军军医大学学报 | 论著·基础医学 2025,47(21): 2641-2651

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陆军军医大学学报 |论著·基础医学 2025 , 47 (21) : 2641 -2651

维莫德吉通过BRD9介导的PD-L1调控基底细胞癌微环境

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王皓, 张磊, 李君龙, 李欣童, 孙美艳

作者信息

¹吉林医药学院检验学院，吉林吉林

通讯作者:

孙美艳，E-mail：sunmy990@163.com

SUN Meiyan，E-mail：sunmy990@163.com

Vismodegib regulates microenvironment of basal cell carcinoma via BRD9-mediated Hedgehog and PD-L1 signaling

Hao WANG, Lei ZHANG, Junlong LI, Xintong LI, Meiyan SUN

Affiliations

¹College of Medical Laboratory Science，Jilin Medical University，Jilin，Jilin，China

出版时间: 2025-11-15 doi: 10.16016/j.2097-0927.202508025

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摘要

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目的

探讨维莫德吉（vismodegib，Vis）通过染色质重塑因子BRD9影响基底细胞癌（basal cell carcinoma，BCC）发生发展的分子机制，分析BRD9在BCC中的表达特征及其与免疫检查点PD-L1及刺猬蛋白（Hedgehog，Hh）信号通路的关系。

方法

①通过SKH-1无毛背景的Ptch1^+/-；LacZ报告基因小鼠构建紫外线B（ultraviolet B，UVB）诱导的BCC模型，并给予Vis干预。通过X-gal染色、免疫组化、免疫荧光和Western blot检测肿瘤组织中BRD9与PD-L1的表达与定位，并评估免疫细胞浸润。②体外以小鼠BCC的ASZ001细胞株（简称ASZ细胞）进行Vis与BRD9降解剂（dBRD9）处理，并构建BRD9过表达细胞株；检测细胞活力及BRD9、PD-L1、Gli1、Ccnd1的蛋白与mRNA表达。同时开展染色质免疫沉淀-定量聚合酶链反应，在PD-L1启动子近端（P1）与上游活跃片段（P2）检测BRD9与H3K27ac的富集变化。

结果

①组织水平发现BRD9在BCC中呈显著阳性表达，肿瘤区域可见BRD9与PD-L1的共定位及免疫细胞浸润；而Vis显著抑制UVB诱导的小鼠BCC形成（P<0.01），降低大体积肿瘤发生率并减少X-gal阳性病灶面积（P<0.000 1），并下调BRD9的表达（P=0.024 9），减弱免疫细胞浸润。②细胞水平发现Vis处理降低ASZ细胞活力，下调BRD9、Gli1、Ccnd1的表达（P<0.000 1）；dBRD9剂量依赖性抑制ASZ细胞活力，并降低PD-L1、Gli1、Ccnd1表达（P<0.000 1）；BRD9过表达则提高上述分子水平（P<0.000 1）。ASZ细胞中BRD9与H3K27ac在PD-L1启动子P1/P2位点富集，经dBRD9或Vis处理后，P1/P2位点的BRD9与H3K27ac富集水平均降低（P<0.000 1）。

结论

BCC中BRD9维持PD-L1近端染色质活化并调节Hh/Gli1信号，促进免疫逃逸，Vis通过抑制Hh-BRD9-PD-L1通路重塑基底细胞癌微环境。

关键词

基底细胞癌 / 维莫德吉 / BRD9 / PD-L1 / 肿瘤微环境

Abstract

收起

Objective

To investigate how vismodegib (Vis) influences the pathogenesis of basal cell carcinoma (BCC) via a chromatin remodeling factor, bromodomain containing protein 9 (BRD9), and to analyze the expression profile of BRD9 in BCC and its relationship with the immune checkpoint, programmed cell death-1 ligand 1 (PD-L1) and the Hedgehog (Hh) signaling pathway.

Methods

① A UVB-induced BCC model was established in SKH-1 hairless background Ptch1^+/-; LacZ reporter mice. Then the mice were treated with Vis, and those without treatment served as control. X-gal staining, immunohistochemistry (IHC) staining, immunofluorescence (IF) assay, and Western blotting were used to assess the expression and localization of BRD9 and PD-L1 in tumor tissues and to evaluate immune-cell infiltration. ② In vitro, mouse BCC cell line ASZ001 (ASZ cells) were treated with Vis or a BRD9 degrader (dBRD9), and BRD9-overexpressing cells were generated. Cell viability and the protein and mRNA levels of BRD9, PD-L1, Gli1, and cyclin D1 (Ccnd1) were measured. ChIP-qPCR was performed to examine BRD9 and H3K27ac enrichment at the PD-L1 promoter, including the promoter-proximal site (P1) and an upstream active segment (P2).

Results

① At the tissue level, BRD9 was highly expressed in BCC, and co-localization of BRD9 and PD-L1 was observed within tumor regions, with evident immune-cell infiltration. Vis markedly suppressed UVB-induced BCC formation, reduced the probability of large-volume tumors (by probability-density analysis), decreased the X-gal-positive lesion area(P<0.000 1), down-regulated BRD9(P=0.024 9), and attenuated immune-cell infiltration. ② At the cellular level, Vis treatment reduced cell viability and down-regulated BRD9, Gli1, and Ccnd1 in ASZ cells(P<0.000 1). dBRD9 inhibited ASZ cell viability in a dose-dependent manner and decreased PD-L1, Gli1, and Ccnd1(P<0.000 1), whereas its overexpression increased the expression of these molecules(P<0.000 1). In ASZ cells, BRD9 and H3K27ac were enriched at the PD-L1 promoter P1/P2 regions. Treatment with dBRD9 or Vis reduced BRD9 and H3K27ac enrichment at P1/P2 regions(P<0.000 1).

Conclusion

In BCC, BRD9 maintains chromatin activation at the proximal PD-L1 promoter and modulates Hh/Gli1 signaling, thereby promoting immune evasion. Vis remodels the tumor immune microenvironment by inhibiting the Hh-BRD9-PD-L1 axis.

Key words

basal cell carcinoma / vismodegib / BRD9 / PD-L1 / tumor microenvironment

引用本文

王皓, 张磊, 李君龙, 李欣童, 孙美艳. 维莫德吉通过BRD9介导的PD-L1调控基底细胞癌微环境. 陆军军医大学学报, 2025 , 47 (21) : 2641 -2651 . DOI: 10.16016/j.2097-0927.202508025

Hao WANG, Lei ZHANG, Junlong LI, Xintong LI, Meiyan SUN. Vismodegib regulates microenvironment of basal cell carcinoma via BRD9-mediated Hedgehog and PD-L1 signaling[J]. Journal of Army Medical University, 2025 , 47 (21) : 2641 -2651 . DOI: 10.16016/j.2097-0927.202508025

正文

收起

基底细胞癌（basal cell carcinoma，BCC）是常见的皮肤恶性肿瘤之一，占所有皮肤恶性肿瘤的75%以上^［1］。据统计，全球范围内每年约有500万例非黑色素瘤新发病例，其中大部分为BCC^［2］。在中国，随着人们生活方式的变化及皮肤病理诊断水平的提升，BCC的发病率逐年上升，成为我国皮肤科临床中常见的皮肤肿瘤类型^［3-4］。有研究表明，BCC在我国南方沿海地区发病率相对较高，可能与强烈紫外线照射及人群皮肤类型相关^［5］。当前BCC的临床治疗手段以手术切除为主，然而对于病灶广泛、复发性或不可手术切除的病例，缺乏有效的药物治疗选择^［6］。

在分子水平上，刺猬蛋白（Hedgehog，Hh）信号通路的异常激活被认为是BCC发生与进展的核心驱动因素^［7］。该通路的关键抑癌基因PTCH1常在BCC中发生突变失活，从而解除对平滑受体蛋白（smoothened，SMO）的抑制，启动Gli1转录因子并激活多种下游致癌基因^［8-9］。SMO抑制剂维莫德吉（vismodegib，Vis）虽已应用于BCC治疗，但疗效有限且存在原发性与获得性耐药^［10］，其中SMO变体可解释相当比例的耐药病例^［11］，临床病例亦发现换药或联合治疗对克服耐药具有较好效果^{［10，12］}，提示除Hh通路外仍存在关键致癌环节亟待挖掘。

染色质重塑因子BRD9作为SWI/SNF复合体的重要组成，广泛参与多种肿瘤的发生与免疫逃逸过程，其异常表达与恶性进展密切相关^［13-14］。此外，PD-L1作为免疫检查点蛋白，其表达受多种信号通路及表观调控因子共同调控^［15］。在皮肤癌中PD-L1可介导T细胞免疫抑制，促进肿瘤逃逸^［16］，但其在Hh通路高活化背景下的调控机制尚未明确。已有报道提示BRD9或参与调节免疫微环境^［17］，本研究旨在揭示Vis作用下BRD9在BCC中的功能及其与PD-L1的关联，拓展对BCC致癌机制的理解，并为耐药病例的靶向免疫治疗提供潜在解决方案。

1　材料与方法

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1.1　实验动物及分组

本实验选用购自Jackson实验室的10只6周龄雄性Ptch1^+/-；LacZ报告基因小鼠（SKH-1无毛背景），体质量21~22 g，该小鼠品系以Ptch1基因杂合背景引入LacZ报告基因构建，可通过β-半乳糖苷酶染色对BCC进行示踪^［18］。采用简单随机分组，将小鼠分为（n=5）：对照组（Con组）和Vis处理组（Vis组）。实验动物饲养于吉林医药学院SPF级动物实验室，环境温度维持在22~25 ℃，湿度50%~60%，给予标准灭菌饲料和饮用水，自由摄食。动物许可证号为：SCXK（吉）2022-0001，所有实验过程通过吉林医药学院伦理委员会审批（2025-LW004）。

1.2　紫外线照射与药物干预

小鼠于实验开始后接受紫外线B（ultraviolet B，UVB）照射诱导皮肤BCC形成。UVB每次照射强度为180 mJ/cm²，每周3次，连续8周。Vis配制于0.5%HPMC+0.1%Tween-80的无菌水溶液中。自首次UVB照射起，Vis组按20 mg/kg Vis灌胃给药，每周3次，连续8周。Con组给予等体积灌胃溶剂（0.5%HPMC+0.1%Tween-80），频次周期与Vis组一致，药物处理持续至实验结束。实验过程中第3周起，每周记录一次背部皮肤肿瘤的形成情况，通过游标卡尺测量每只小鼠背部可见肿瘤的最大长径（L）和垂直短径（W），并计算肿瘤体积（V），用于评估肿瘤生长进程及药物干预效果。肿瘤体积的计算公式为：V=

L × W ² 2

。

1.3　细胞培养、转染、筛选及分组

实验所用细胞为源自小鼠BCC的ASZ001细胞株（简称ASZ细胞），于37 ℃、5%CO₂恒温培养箱中，以含10%胎牛血清和1%青链霉素的DMEM完全培养基进行常规培养。为构建BRD9过表达模型，使用慢病毒系统将BRD9基因导入ASZ细胞。所用慢病毒载体为｛pLV［Exp］-Hygro-CMV>mBrd9NM_001378947.1/FLAG：T2A：mCherry｝，由上海吉凯基因公司合成并包装。该载体在CMV启动子驱动下表达FLAG标签的小鼠BRD9，同时通过T2A元件共表达mCherry荧光蛋白用于阳性筛选，并携带 Hygromycin抗性基因。转染前，ASZ细胞接种于6孔板中，待细胞密度达40%~50%时，加入含病毒颗粒的感染液，按感染复数（multiplicity of infection，MOI）为10进行感染，并配合8 μg/mL Polybrene（Sigma-Aldrich，美国）增强感染效率。24 h后更换为新鲜完全培养基，48 h后添加100 μg/mL Hygromycin B（Invitrogen，美国）进行抗性筛选，连续筛选7 d，获得稳定表达BRD9的细胞株（命名为ASZ-BRD9），并检测细胞活力及过表达效果。对数生长期的ASZ细胞按1∶1∶1随机分为：对照（ASZ）组加入等体积载体（DMSO，终浓度为0.1%）；dBRD9（ASZ-dBRD9）组通过BRD9降解剂（dBRD9，10.0 nmol/L）处理24 h；Vis（ASZ-Vis）组通过Vis（10 μmol/L）处理24 h。除药物外其余培养条件一致，DMSO终浓度在各组为0.1%，通过染色质免疫沉淀-定量聚合酶链反应（chromatin immunoprecipitation quantitative polymerase chain reaction，ChIP-qPCR）分析。

1.4　细胞活力检测

采用细胞计数试剂盒（CCK-8，Dojindo，日本）检测Vis对ASZ细胞活力的影响。将ASZ细胞以5×10³个/孔的密度接种于96孔板中，贴壁后分别给予不同处理，其中Vis浓度为0、0.01、0.10、1.00、5.00、10.00、20.00、40.00 μmol/L，处理时间为24、48和72 h。BRD9降解剂（dBRD9）处理浓度为0、0.5、5.0、10.0、100.0、250.0、500.0和1 000.0 nmol/L，处理时间为24 h。每组设3个复孔。处理结束后，每孔加入10 μL CCK-8工作液，孵育2 h。通过酶标仪于450 nm波长处测定OD（450）值，以评估细胞活力。实验重复3次，并采用GraphPad Prism 10.0软件计算半数抑制浓度（half maximal inhibitory concentration，IC₅₀）。

1.5　免疫组化（immunohistochemistry，IHC）染色

小鼠经最后一次UVB照射后24 h在异氟烷麻醉下处死，自背部受照区域切取皮肤标本（含表皮、真皮及部分皮下组织，约8 mm×8 mm）。组织立即置于10%中性甲醛室温固定24 h，随后经梯度乙醇脱水、二甲苯透明后石蜡包埋，制备5 μm厚度的石蜡切片。切片脱蜡、复水后进行抗原修复（柠檬酸缓冲液pH=6.0，微波加热15 min），3%H₂O₂室温孵育15 min以阻断内源性过氧化物酶，5%BSA封闭1 h。随后加入一抗（抗BRD9，PA5-113488，Invitrogen，美国，1∶500）于4 ℃孵育过夜。第2天PBS洗涤后加入HRP标记的二抗，室温孵育1 h。经DAB显色、苏木素复染后脱水封片。切片经光学显微镜观察并拍照分析。

1.6　X-gal染色实验

取上述IHC步骤中制作的皮肤组织切片进行X-gal染色以检测β-半乳糖苷酶活性。组织切片经IHC步骤中的脱蜡复水后，在X-gal染色液［含5 mmol/L K₃Fe（CN）₆、5 mmol/L K₄Fe（CN）₆、2 mmol/L MgCl₂和1 mg/mL X-gal，溶于PBS］中于37 ℃避光孵育16 h。经常规苏木精-伊红（hematoxylin and eosin，HE）复染并脱水封片，镜下观察并拍照记录。

1.7　Western blot分析

皮肤组织及细胞经RIPA裂解液（含蛋白酶抑制剂）匀浆裂解后，在4 ℃下以12 000 r/min离心10 min，取上清并进行BCA蛋白定量，每孔加样30~50 μg蛋白，于10%SDS-PAGE凝胶电泳分离后转膜至PVDF膜。5%脱脂奶粉/TBST封闭1 h，加入一抗（抗BRD9：PA5-113488，Invitrogen，美国，1∶1 000；抗Cyclin D1：2978，Cell Signaling，美国，1∶2 000；抗PD-L1：13684，Cell Signaling，美国，1∶1 000；抗Gli1：2643，Cell Signaling，美国，1∶1 000）于4 ℃孵育过夜。TBST洗膜3次，每次10 min，加入HRP标记的二抗于室温孵育1 h。ECL发光液显影并使用成像系统检测蛋白条带。

1.8　RT-qPCR 检测

使用TRIzol试剂（Invitrogen，美国）从ASZ细胞中提取总RNA，按照SuperScript^TM Ⅲ First-Strand Synthesis System（Thermo Fisher，美国）试剂盒说明进行反转录反应，将RNA反转录为 cDNA。qPCR反应采用2×SYBR Green PCR Master Mix（TaKaRa，日本）进行扩增，使用 LightCycler^®96 Real-Time PCR System（Roche，德国）完成实时荧光定量检测。每个样本设3个技术重复孔，以β-actin作为内参基因，采用2^–ΔΔCt方法计算相对表达量。所用引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成，引物序列见表1。

1.9　免疫荧光染色

皮肤组织切片经IHC步骤中的脱蜡复水、抗原修复及封闭后，加入一抗混合液［兔抗-BRD9（PA5-113488，Invitrogen，1∶100）和鼠抗-PD-L1（66248-1-Ig，Proteintech，1∶200）；兔抗-Foxp3（12653，Cell Signaling，1∶200）和鼠抗-CD4（555349，BD Biosciences，1∶100）］，置于湿盒中4 ℃孵育过夜。次日回温并用PBS洗涤3次，每次5 min，分别孵育相应的荧光标记二抗（Alexa Fluor 488标记的兔抗IgG和Alexa Fluor 594标记的鼠抗IgG），室温避光孵育1 h。再次PBS洗涤后，用DAPI染核5 min，PBS洗净，封片后通过激光共聚焦显微镜（Leica STELLARIS 5）拍照观察。

1.10　ChIP-qPCR检测

ASZ细胞按1.3实验分组（Con、ASZ-dBRD9、ASZ-Vis）处理后进行ChIP，设置同源正常IgG作为阴性对照。1%甲醛室温交联10 min，125 mmol/L glycine终止5 min。PBS洗涤后收集细胞，于含蛋白酶抑制剂的裂解液中裂解；将染色质超声至200~500 bp，在4 ℃下以8 000 r/min离心取上清，各样本留出1%作为Input；4 ℃旋转孵育过夜，加入anti-BRD9（PA5-113488，Invitrogen，美国，1：200）、anti-H3K27ac（ab4729，Abcam，美国，1：500）；次日加入Protein A/G 磁珠继续孵育 2 h；依次用低盐、高盐、LiCl洗液及TE洗脱后65 ℃过夜逆交联，并依次RNase A（37 ℃，30 min）、Proteinase K（55 ℃，1 h）处理；柱式试剂盒纯化DNA，qPCR条件参照1.8；针对PD-L1启动子设置3个位点：上游活跃片段P2（-523~-436 bp）、启动子近端P1（-58~+41 bp）、N（+799~+937 bp）；引物序列见表 2。

1.11　统计学分析

使用 GraphPad Prism 10.0 进行统计分析。结果采用

x ¯

±s表示，两组间比较采用独立样本t检验，3组及以上比较采用单因素方差分析（one-way ANOVA），P<0.05表示差异有统计学意义。

2　结果

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2.1　Vis抑制Ptch1^+/-小鼠UVB诱导的BCC形成并下调BRD9表达

为了评估Vis对UVB诱导的BCC形成的抑制作用，本研究基于Ptch1^+/-背景的SKH-1无毛小鼠模型，通过连续UVB照射构建皮肤肿瘤模型，并在此过程中给予Vis药物干预，以分析皮肤肿瘤发生情况及相关分子表达变化。如图1A所示，Vis组小鼠皮肤表面肿瘤体积明显小于Con组。进一步通过肿瘤面积的概率密度函数分析发现，Vis能显著降低大体积肿瘤的发生率；以每只小鼠病灶体积中位数汇总后分析发现，Vis组肿瘤体积显著缩小（P<0.001，图1B），提示其在该模型中具有良好的抗肿瘤作用。X-gal染色结果显示，Con组皮肤中可见多个X-gal阳性信号聚集的BCC样病灶，而Vis组中阳性染色区域显著减少（P<0.000 1，图1C），进一步支持Vis具有抑制BCC 形成的作用。为探究该作用潜在的分子机制，进一步检测皮肤肿瘤组织中BRD9的表达水平。IHC分析显示BRD9在Con组肿瘤区域呈显著阳性表达，而在Vis组中显著减弱（图1D）。Western blot分析结果表明，Vis处理后BRD9蛋白表达水平显著下调（P=0.024 9，图1E）。上述结果提示BRD9可能在BCC的发生发展过程中发挥促进作用，其表达可能受Vis抑制的Hh信号通路调控。

2.2　Vis通过抑制Hh/BRD9通路显著抑制ASZ细胞增殖能力

为进一步验证Vis对BCC的作用机制，本研究利用BCC细胞系ASZ评估其细胞毒性及其对关键信号分子的调控作用。细胞活力检测结果显示，Vis对 ASZ 细胞呈浓度和时间依赖性抑制作用，随着处理时间延长，其IC₅₀逐渐下降，24、48及72 h的IC₅₀分别为7.326、3.842和0.910 μmol/L（图2A）。本研究检测了BRD9蛋白在不同剂量Vis处理下的表达变化。Western blot分析显示，BRD9表达水平随药物浓度升高逐渐降低（P<0.000 1），40 μmol/L时完全被抑制（图2B）。进一步在细胞水平及组织水平检测BRD9下游分子Gli1和Ccnd1的表达变化，结果表明Vis处理显著下调这2种蛋白的表达（P<0.001，图2C、D），提示其可能抑制Hh信号通路进而负向调控BRD9表达，抑制其介导的下游促增殖通路，从而发挥抗肿瘤作用。

2.3　BRD9在BCC中促进肿瘤进展并调控Hh通路及PD-L1表达

本研究进一步探究了BRD9在BCC发生发展中的功能及其信号机制。ASZ细胞经不同浓度的BRD9降解剂dBRD9处理24 h后，细胞活力呈剂量依赖性下降（图3A），提示dBRD9具有一定程度的抗肿瘤潜力。Western blot结果显示，与Con组相比，dBRD9处理显著下调BRD9蛋白表达，同时伴随Ccnd1、PD-L1和Gli1等关键增殖和免疫调控分子表达的降低（P<0.01，图3B），提示BRD9可能调控肿瘤细胞的增殖与免疫逃逸能力。为进一步验证BRD9的功能，本研究构建了BRD9过表达质粒并转染ASZ细胞（图3C）。BRD9过表达显著增强ASZ细胞中BRD9、PD-L1和Ccnd1蛋白表达（P<0.05，图3D），RT-qPCR结果也显示BRD9及其下游靶点Gli1的mRNA表达上调（P<0.000 1，图3E）。在此基础上，采用ChIP-qPCR检测PD-L1启动子区域3个位点的富集情况。结果显示，在ASZ细胞中，BRD9与H3K27ac在ChIP1/ChIP2处均有富集，而在阴性对照的ChIP3处接近背景；经dBRD9或Vis处理后，ChIP1/ChIP2处的BRD9与H3K27ac富集水平均显著降低（P<0.000 1，图3F）。以上结果表明，BRD9可能通过调控Hh通路并维持PD-L1启动子近端的染色质活化，从而促进BCC的发生发展，为其作为潜在治疗靶点提供实验依据。

2. 4　Vis处理对小鼠BCC中BRD9/PD-L1表达及免疫细胞分布的影响

免疫荧光染色结果显示，在UVB处理后Con组小鼠皮肤组织的BRD9和PD-L1均明显表达，其中BRD9的表达更为显著，在表皮和真皮组织中均有表达。图中箭头所示为二者在肿瘤周围区域存在的共定位现象；且经Vis处理后，组织中BRD9和PD-L1表达水平明显下降（图4A）。本研究进一步分析免疫相关细胞的分布情况，结果发现Con组中调节性T细胞标志物Foxp3⁺ Treg与CD4⁺ T细胞均显著聚集于肿瘤区域，而Vis处理显著减少了肿瘤微环境中Foxp3⁺ Treg细胞及CD4⁺ T细胞的浸润（图4B）。HE结果显示，Con组可见典型BCC胞巢，肿瘤及其周围间质内以小淋巴细胞为主的炎性细胞明显聚集；而Vis处理后，肿瘤巢体量/数量减少，瘤旁炎性细胞明显稀少（图4C）。结合图1D的IHC结果（表皮BRD9表达未见显著变化），可基本排除正常表皮BRD9的干扰，提示上述浸润变化发生于肿瘤/瘤旁区域，并与肿瘤组织BRD9下调相关，表明Vis在降低BRD9/PD-L1表达的同时，伴随肿瘤区域及瘤旁区域免疫细胞浸润的下降，从而重塑肿瘤免疫微环境。

3　讨论

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3.1　BRD9在肿瘤中的作用与意义

本研究从机制层面探讨了Vis抑制BRD9介导的免疫逃逸通路在BCC发生发展中的作用。已有研究表明，BRD9作为SWI/SNF染色质重塑复合物的辅助亚基，广泛参与染色质开放、转录激活等多种生物学过程，在肿瘤细胞中的表达常显著上调，并与多种癌症的增殖、迁移及免疫逃逸密切相关^［19-20］。泛癌分析也显示，BRD9在肺癌、肝癌、乳腺癌等实体瘤中高表达，且与患者不良预后显著相关^［13］。

3.2　免疫检查点PD-L1与联合治疗需求

PD-L1是重要的免疫检查点蛋白，其高表达常见于包括黑色素瘤、非小细胞肺癌、肾癌等多种恶性肿瘤，并已成为多个实体瘤中免疫治疗的核心靶点^［21］。近年来，免疫治疗尤其是抗PD-1/PD-L1单抗在多种肿瘤中的应用带来了革命性进展。一些此类免疫药物已获得美国食品药品监督管理局（Food and Drug Administration，FDA）批准上市，如治疗肺癌的纳武利尤单抗和帕博利珠单抗，以及用于乳腺癌的阿特珠单抗^［22-24］。然而，这些药物的治疗效果有限，部分患者存在原发性或获得性耐药^［25］，提示免疫治疗的单药策略仍有不足，需进一步探索联合治疗机制和耐药调控靶点。有研究发现，BRD9可通过影响肿瘤免疫微环境中髓源性抑制细胞浸润，调节PD-L1表达，并预测抗PD-1治疗患者的生存预后，提示其在免疫治疗响应中具有潜在调控作用^{［13，26］}。GEO数据集分析进一步表明，BRD9的表达在接受免疫治疗的黑色素瘤患者中具有良好的预后预测价值，提示其可能参与调控PD-L1介导的免疫逃逸，并作为潜在免疫治疗敏感性标志物^［13］。Vis也已获FDA批准，用于治疗局部晚期或转移性BCC，成为首个靶向Hh通路的上市药物^［27］。然而，关于Vis的药物作用机制尚不完全清楚，对于其是否可以通过介导BRD9调控PD-L1的表达，尚缺乏明确的实验证据。

3.3　BRD9与PD-L1的关联及表观机制推测

本研究在BCC模型中发现，BRD9与PD-L1在组织层面呈共表达趋势，且通过BRD9小分子抑制剂处理或过表达干预均可显著影响PD-L1的表达水平，提示 BRD9 可能通过表观遗传机制（如染色质重塑）促进PD-L1的转录，从而增强肿瘤免疫逃逸能力。这一发现具有重要意义：①揭示了BRD9与免疫检查点调控之间可能存在的功能关联，打破了传统上BCC被认为免疫原性较低的固有观念，提示即便在低免疫原性肿瘤中也可能存在可靶向的免疫逃逸机制^［28］；②为后续将BRD9抑制剂与免疫检查点抑制剂联合应用于BCC治疗提供了理论依据，为皮肤癌等实体瘤的联合免疫治疗提供了潜在新靶点。此外，本研究发现BRD9与PD-L1在组织层面呈共表达趋势。鉴于BRD9是ncBAF的标志性亚基参与染色质开放/增强子活化的已知功能^［29］，推测BRD9可能通过促进PD-L1启动子/近端增强子的染色质可及性，从而增强其转录。此外，Hh/Gli1通路与炎症-干扰素信号（如IRF1/STAT1）在多肿瘤中可共同上调PD-L1^［30］；本研究通过ChIP-qPCR发现，BRD9与H3K27ac在PD-L1启动子近端及上游活跃片段富集；经dBRD9或Vis处理后，ChIP1/ChIP2的BRD9与H3K27ac富集水平均下降，进一步支持BRD9作为转录协同因子，在这些因子占位处提供染色质支架，导致PD-L1表达增强，从而增强肿瘤的免疫逃逸能力。

3.4　肿瘤免疫微环境变化与Hh通路关联

本研究发现Con组Treg标志物显著浸润，而Vis干预可明显减少Foxp3⁺ Treg细胞和CD4⁺ T细胞在肿瘤中的聚集。这一观察结果提示，Vis除了通过BRD9/PD-L1轴下调免疫检查点分子外，还可能通过削弱Treg介导的免疫抑制来调节肿瘤免疫微环境，从而间接增强抗肿瘤免疫反应。由于Treg细胞在多种肿瘤中发挥免疫抑制作用，其富集常与免疫治疗耐药相关^［31］，因此，Vis可能在调控Treg细胞活性方面发挥关键作用。考虑到目前Vis虽已被广泛用于BCC治疗，但仍存在部分患者耐药、缓解不彻底等问题^［32］，进一步靶向BRD9/PD-L1通路，有望作为新的干预途径，实现免疫微环境重塑及治疗应答率提高。此外，Vis可通过抑制Hh信号通路而间接影响多种下游分子表达^［33］。本研究显示BRD9的表达水平也受到Hh通路调控，在Vis干预后显著下调，提示BRD9可能作为Hh通路的下游效应分子参与BCC发生过程，从而将经典信号通路与表观调控机制连接起来，进一步拓展了对BCC分子致癌机制的认识和理解。

综上所述，BRD9在BCC中显著表达，通过维持PD-L1启动子近端的染色质活化调节Hh/GLI1信号，调控PD-L1表达与肿瘤免疫逃逸。Vis可通过抑制Hh-BRD9-PD-L1通路发挥抗肿瘤作用并重塑肿瘤免疫微环境。

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2025年第47卷第21期

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doi: 10.16016/j.2097-0927.202508025

接收时间：2025-08-10
首发时间：2026-10-30
出版时间：2025-11-15

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作者

出版历史

收稿日期：2025-08-10
修回日期：2025-10-19

基金

作者信息

¹吉林医药学院检验学院，吉林吉林

通讯作者:

孙美艳，E-mail：sunmy990@163.com

SUN Meiyan，E-mail：sunmy990@163.com

参考文献

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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