陆军军医大学学报

曲古抑菌素A通过重塑CD4⁺T细胞免疫稳态缓解大肠杆菌感染性炎症

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夏雨 ¹ , 余静 ¹ , 陈代琦 ¹^,² , 刘国昌 ¹ , 王韵 ³ , 严军 ¹

陆军军医大学学报 | 论著·军事医学 2025,47(21): 2591-2601

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陆军军医大学学报 |论著·军事医学 2025 , 47 (21) : 2591 -2601

曲古抑菌素A通过重塑CD4⁺T细胞免疫稳态缓解大肠杆菌感染性炎症

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夏雨¹, 余静¹, 陈代琦¹^,², 刘国昌¹, 王韵³, 严军¹

作者信息

¹陆军军医大学大坪医院特殊环境战伤防治研究室，创伤与化学中毒全国重点实验室，重庆

²西南交通大学生命科学与工程学院，四川成都

³陆军军医大学（第三军医大学）基础医学院细胞生物学教研室，重庆

通讯作者:

王韵，E-mail：yunwang@tmmu.edu.cn

严军，E-mail：13883092250@163.com

WANG Yun，E-mail：yunwang@tmmu.edu.cn

YAN Jun，E-mail：13883092250@163.com

Trichostatin A attenuates E.coli-induced inflammation by modulating CD4⁺T cell homeostasis

Yu XIA¹, Jing YU¹, Daiqi CHEN¹^,², Guochang LIU¹, Yun WANG³, Jun YAN¹

Affiliations

¹Department of Special War Wound，State Key Laboratory of Trauma and Chemical Poisoning，Daping Hospital，Army Medical University， Chongqing

²School of Life Science and Engineering，Southwest Jiaotong University，Chengdu，Sichuan

³Department of Cell Biology，College of Basic Medical Sciences，Army Medical University （Third Military Medical University），Chongqing，China

出版时间: 2025-11-15 doi: 10.16016/j.2097-0927.202507014

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摘要

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目的

探讨曲古抑菌素A（trichostatin A，TSA）调控CD4⁺T细胞亚群在大肠杆菌（Escherichia coli，E.coli）感染性炎症中的作用。

方法

采用完全随机设计，将8周龄、雄性小鼠（体质量22~25 g）分为（n=16）：对照组（DMSO组）、感染组（DMSO+E.coli组）及干预组（E.coli+TSA组），其中E.coli+TSA组根据TSA不同浓度分为2.5、5.0、10.0 mg/kg 3个亚组。腹腔注射3×10⁸ CFU/mL E.coli，构建感染模型，并在TSA干预不同时间点（12、24、48、96 h）取材。通过生存率观察、体质量监测、小肠组织病理染色、ELISA、转录组测序、流式细胞术以及RT-qPCR等手段，评估TSA对E.coli感染性炎症的疗效及与CD4⁺T细胞亚群的关系。

结果

与DMSO+E.coli组相比，5.0 mg/kg TSA可显著提高感染小鼠的生存率，抑制体质量下降，改善小肠病理损伤，降低感染24 h小鼠血清中肿瘤坏死因子-α水平（P<0.000 1），提升白细胞介素-10水平（P<0.05）。转录组结果表明5.0 mg/kg TSA干预24 h后可以影响调控FoxO、Th17、Th1/2等T细胞分化的信号通路，同时流式细胞术和RT-qPCR结果显示相较于DMSO+E.coli组，5.0 mg/kg TSA能下调感染96 h后小鼠Th17细胞标志分子RORγt表达，同时明显上调Treg细胞标志分子Foxp3表达（P<0.05）。

结论

TSA可能是通过调控CD4⁺T细胞朝向Treg亚群分化同时抑制其向Th17亚群分化，从而抑制促炎因子释放来缓解细菌感染性炎症疾病。

关键词

曲古抑菌素A / CD4⁺T细胞 / 大肠杆菌 / 感染性炎症

Abstract

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Objective

To investigate the role of trichostatin A (TSA) in regulating CD4⁺T cell subpopulations during Escherichia coli (E.coli) inflammatory infections.

Methods

Male mice (8 weeks old, weighing 22~25 g) were randomly divided into 3 groups (n=16): a dimethyl sulfoxide (DMSO) control group, an infection group (DMSO+E.coli), and an intervention group (E.coli+TSA). E.coli was administered via intraperitoneal injection at a concentration of 3×10⁸ CFU/mL to establish an infection model. The E.coli+TSA group was further subdivided into 3 subgroups based on different TSA concentrations (2.5, 5.0, 10.0 mg/kg). Then the samples were collected at different time points (12, 24, 48, 96 h) after TSA intervention. The efficacy of TSA in treating E.coli-induced inflammatory responses and its relationship with CD4⁺T cell subsets were evaluated by survival rate observation, body weight monitoring, histopathological staining for small intestine, ELISA detection, transcriptomics sequencing, flow cytometry and RT-qPCR analysis.

Results

Compared with the E.coli group, 5 mg/kg TSA significantly increased survival rate, suppressed body weight loss, improved pathological damage in the small intestinal, reduced serum TNF-α level in 24 h after infection (P<0.000 1), and elevated IL-10 level (P<0.05). Transcriptomic analysis revealed that 5 mg/kg TSA intervention for 24 h modulated the T cell differentiation signaling pathways, including those regulating FoxO, Th17, and Th1/2. Flow cytometry and RT-qPCR results showed that compared to the E.coli group, 5 mg/kg TSA down-regulated the expression of the Th17 cell marker RORγt in mice 96 h after infection while significantly up-regulated the expression of the Treg cell marker Foxp3 (P<0.05).

Conclusion

TSA may alleviate bacterial infectious inflammatory diseases by regulating the differentiation of CD4⁺T cells toward the Treg subset while simultaneously inhibiting their differentiation toward the Th17 subset, thereby suppressing the release of proinflammatory cytokines.

Key words

trichostatin A （TSA） / CD4⁺T cells / Escherichia coli / infectiousinflammation

引用本文

夏雨, 余静, 陈代琦, 刘国昌, 王韵, 严军. 曲古抑菌素A通过重塑CD4⁺T细胞免疫稳态缓解大肠杆菌感染性炎症. 陆军军医大学学报, 2025 , 47 (21) : 2591 -2601 . DOI: 10.16016/j.2097-0927.202507014

Yu XIA, Jing YU, Daiqi CHEN, Guochang LIU, Yun WANG, Jun YAN. Trichostatin A attenuates E.coli-induced inflammation by modulating CD4⁺T cell homeostasis[J]. Journal of Army Medical University, 2025 , 47 (21) : 2591 -2601 . DOI: 10.16016/j.2097-0927.202507014

正文

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细菌感染是全球范围内影响人群健康的重要原因，其中大肠埃希菌（Escherichia coli，E.coli）致死率位居前列^［1］。E.coli作为一种常见的肠道条件致病菌，正常情况下与人类共生，维护肠道微生态平衡^［2］。然而，当机体免疫力下降或细菌数量异常增多时，E.coli将引发感染性炎症，导致机体免疫失衡，引起一系列疾病，如胃肠炎、结肠炎等^［3-4］，严重影响人们生活质量甚至危及生命。

T细胞是机体重要的适应性免疫细胞之一，可分为CD4⁺T细胞和CD8⁺T细胞，在维持机体免疫平衡和防止自身免疫疾病中发挥着重要作用^［5-6］。细菌感染发生后，树突状细胞（dendritic cell，DC）通过抗原递呈使初始T细胞（naïve T cell，Th0）分化形成多种CD4⁺T细胞亚群，包括辅助性T细胞（helper T cell，Th）1、Th2、调节性T细胞（regulatory T cell，Treg）和Th17等，参与免疫应答，尤其是Treg的作用不容忽视。研究表明，在细菌感染初期，Treg能够通过分泌抑制性细胞因子如白细胞介素-10（interleukin-10，IL-10）和转化生长因子β（transforming growth factor-β，TGF-β）来抑制Th1和Th17的活化，从而减轻炎症反应^［7-8］。在细菌感染后期，Treg的作用则更为复杂，既要继续抑制过度免疫反应，又要促进免疫记忆的形成^［9-13］。尽管包括Treg在内的CD4⁺T细胞在感染导致的免疫失衡中起着重要作用，但现有研究仍不清楚调控其功能的关键因子。

曲古抑菌素A（trichostatin A，TSA）是一种有效的组蛋白脱乙酰酶（histone deacetylase，HDAC）抑制剂和抗真菌抗生素。近年来，越来越多的研究表明，TSA能够通过多种途径调控细胞凋亡、细胞周期等生物学过程，从而影响肿瘤和炎症性疾病的进展^［14-16］；CUI等^［17］发现TSA可通过增强细胞自噬，促进巨噬细胞向抗炎M2表型极化，从而减轻多种微生物引起的脓毒症期间的炎症反应；胡晓兰等^［18］研究发现TSA预处理后能显著降低LPS诱导的巨噬细胞中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、IL-1β等促炎因子的生成并降低TLR4的表达。此外，TSA还被发现能够影响多种CD4⁺T细胞亚群的活性^［19］。但TSA是否对CD4⁺T细胞亚群分化具备调控作用尚不清楚。

本研究将探讨TSA对E.coli感染性炎症的治疗作用及与CD4⁺T细胞亚群之间的关系，为细菌感染性炎症的治疗提供实验依据和新策略。

1　材料和方法

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1.1　实验动物与菌株

C57BL/6野生型（wild type，WT）雄性小鼠购自陆军特色医学中心实验动物中心，所有小鼠在无特定病原体（specific pathogen free，SPF）条件下饲养，正常喂食水和饲料。采用完全随机设计，将8周龄、雄性小鼠（体质量22~25 g）分为（n=16）：对照组（DMSO组）、感染组（DMSO+E.coli组）及干预组（E.coli+TSA组），其中E.coli+TSA组根据TSA不同浓度分为2.5、5.0、10.0 mg/kg 3个亚组；E.coli由陆军军医大学基础医学院微生物教研室惠赠。各组采用完全随机设计挑选8只用于观测小鼠生存率；剩余用于后续建模取材实验。本实验获陆军军医大学实验动物福利伦理审查委员会批准（AMUWEC20237369）。

1.2　实验试剂

TSA购自上海碧云天生物技术公司；DMSO购自美国MCE公司；PBS、RPMI 1640培养基购自武汉博士德生物工程有限公司；TNF-α和IL-10 ELISA试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司；TRIzol Reagent、Primer Script RT reagent Kit with gDNA Eraser和SYBR Premix Ex Taq Ⅱ购自日本TaKaRa公司；引物由上海捷瑞生物工程有限公司合成；红细胞裂解液购自北京天根生化科技（北京）有限公司；多聚甲醛购自北京索莱宝科技有限公司；LB固体和液体培养基购自上海碧云天生物技术公司；0.9%生理盐水购自四川科伦药业股份有限公司；Biotin-Antibody Cocktail和Anti-Biotin Mirobeads购自德国Miltenyi公司；胎牛血清购自以色列BI公司；三抗（青霉素、链霉素和两性霉素B）购自上海达特希尔生物科技公司；70 µm细胞筛网购自无锡耐思生物科技股份有限公司；细胞因子刺激试剂盒（500X）购自美国Invitrogen公司；APC-TGF-β、PerCP/Cy5.5-IL-17、FITC-CD4及相应染料的同型对照均购自美国Biolegend公司；Fixation/Permeabilization solution和Perm/Wash buffer购自美国eBioscience公司。

1.3　生存率观察

建模前称量各组小鼠体质量，建模后正常喂食水和饲料。每隔1小时观察各组小鼠生存状况，每天称量各组小鼠体质量并记录，连续观察14 d。

1.4　 E.coli感染模型的建立及取材

接种环勾取菌液涂板至预先配置好的LB固体培养皿中，倒置放于37 ℃孵箱内，过夜；挑取培养皿中的单菌落2~4个放入装有20 mL LB液体培养基的50 mL离心管内，在37 ℃下以200 r/min摇床过夜；以3 000 r/min离心10 min，弃上清，加入5 mL生理盐水吹打混匀重悬；取200 µL菌液于96孔板内，检测600 nm波长条件下的光密度［OD（600）］值；根据测量结果加入适量生理盐水稀释至3×10⁸ CFU/mL浓度待用。

预先使用无菌0.9%生理盐水配置2%DMSO，然后以DMSO为溶剂，分别配置2.5、5.0、10.0 mg/kg TSA。造模前称量各组小鼠体质量，E.coli+TSA组按各组每只10 µL/g腹腔注射TSA，DMSO组和DMSO+E.coli组腹腔注射等体积2%DMSO，随后立即腹腔注射200 µL E.coli（E.coli+TSA组和DMSO+E.coli组），正常喂食水和饲料。分别于12、24、48、96 h时间点取各组小鼠眼眶血、小肠组织（无菌PBS冲洗干净，取盲肠上方15 cm处一小段肠组织放入多聚甲醛中固定用于病理染色）、周围淋巴结（腹股沟、腋窝、颈部）、脾组织，加入无菌PBS放入细胞网筛中，1 mL注射器尾杆研磨后收集，以4 ℃ 2 000 r/min离心10 min，弃上清，视红细胞量，加入红细胞裂解液处理3 min，以4 ℃ 2 000 r/min离心10 min，弃上清，加入TRIzol裂解。

1.5　小肠组织病理染色

按1.4方法建模和取材，将各组固定24 h以上的小肠组织经流水过夜，然后依次经50%、70%、80%、95%、95%、100%、100%酒精梯度进行脱水，氯仿透明2 h，浸石蜡1 h（石蜡Ⅰ和石蜡Ⅱ共2次），然后进行包埋、切片、染色、封片，显微镜观察组织病理结果并拍照。

1.6　ELISA法检测细胞因子水平

按1.4方法建模和取材，取各组小鼠眼眶血，室温静置30 min。以4 ℃ 3 000 r/min离心10 min，吸取上清黄色澄清液体（即血清），采用ELISA法检测血清中TNF-α和IL-10的水平。

1.7　CD4⁺T细胞收集和转录组测序

按1.4方法建模，根据实验结果确认最佳E.coli菌液体积和TSA最佳剂量。在最佳E.coli菌液体积感染小鼠及TSA最佳剂量干预后，取各组小鼠周围淋巴结（腹股沟、腋窝、颈部）、脾组织，加入无菌PBS放入细胞网筛中，利用1 mL注射器尾杆研磨后收集细胞。经裂红离心计数后的细胞按照每1×10⁷个细胞10 µL标准加入适量Biotin-Antibody Cocktail，4 ℃避光孵育10 min，按1×10⁷个细胞30 µL标准加入RMPI 1640 （89%RPMI 1640+10%胎牛血清+1%三抗），再按每1×10⁷个细胞20 µL标准加入适量Anti-Biotin Mirobeads混匀，4 ℃避光孵育15 min。加入适量RMPI 1640混匀，离心后按照每1×10⁸个细胞500 µL RMPI 1640标准制成悬液备用。预加入3 mL RMPI 1640润湿分选柱，将细胞悬液过柱3次，最终获得CD4⁺T细胞。由杭州联川生物公司进行转录组测序，分析测序结果，确定CD4⁺T细胞亚群发生明显变化的各类免疫细胞。

1.8　RT-qPCR检测CD4⁺T细胞亚群基因表达

按1.4方法建模和取材，根据前述实验结果确定的TSA最佳剂量和最佳作用时间，RT-qPCR检测各组小鼠周围免疫器官（淋巴结和脾组织）中Foxp3、RORγt的相对表达，验证转录组测序结果。

1.9　流式细胞术分析

按1.4方法建模，根据前述确定最佳剂量的TSA干预后，在96 h时取各组小鼠周围淋巴结和脾组织，研磨后离心裂红，计数重悬，每组分装1 mL培养基至1.5 mL EP管内，按试剂盒说明书每管内加入2 μL细胞因子刺激试剂（500X）；涡旋混合，在37 ℃、5%CO₂培养4~6 h。细胞孵育后，以2 000 r/min离心10 min去上清；每孔内加入200 μL大鼠血清，混匀后室温封闭20 min；加入FITC-CD4抗体冰浴20 min；加入适量PBS洗涤后2 000 r/min离心10 min去上清；各管加入100 μL Fixation/Permeabilization solution试剂，混匀过夜；第2天用1 mL 1×BD Perm/Wash buffer洗2次（2000 r/min，10 min，弃上清）；每管加入200 μL大鼠血清，混匀后室温封闭20 min；按组别每管加入1 μL抗体（APC-TGF-β；PerCP/Cy5.5-IL-17）；冰浴20 min，加入1 mL 1×BD Perm/Wash buffer洗1次，混匀，以2 000 r/min离心10 min，弃上清，每管各加入500 μL 1×BD Perm/Wash buffer/PBS，混匀送检。

1.10　统计学分析

所有结果采用GraphPad Prism 10.1.2软件进行统计和作图，计量资料用

x ¯

±s表示。不同组别之间采用单因素方差分析，P<0.05表示差异具有统计学意义。生存率分析采用Log-rank检验方法。

2　结果

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2.1　TSA提升E.coli感染小鼠生存率和体质量

通过向小鼠腹腔注射不同剂量体积的3×10⁸ CFU/mL E.coli，发现注射剂量200 µL菌液后小鼠死亡率为50%~60%，低于其它剂量（图1A）。故后续实验均选择该注射剂量。与DMSO+E.coli组相比，E.coli+TSA组生存率明显提高，其中5.0 mg/kg TSA组小鼠在感染后14 d内全部存活（图1B）。尽管在建模后2 d内，DMSO+E.coli组和E.coli+TSA组（含不同浓度TSA亚组）体质量均大幅度下降，但E.coli+TSA组感染后第14天均恢复至与DMSO组无明显差异（图1C）。

2.2　TSA减轻E.coli感染小鼠小肠组织损伤

相较于DMSO组，DMSO+E.coli组小肠绒毛受损严重、萎缩并伴随肠绒毛上皮脱落坏死，12和48 h可见明显的肠绒毛水肿，绒毛固有层与绒毛上皮细胞分离，组织间隙变大；此外感染后12 h，DMSO+E.coli组小肠可见明显出血，24 h出现炎性细胞浸润；干预组（E.coli+TSA）可减轻小肠受损情况，改善出血和炎性因子浸润，小肠绒毛恢复正常（图2）。采用不同剂量TSA干预后，小肠病理均得到改善，但仍有绒毛倒伏等情况。与2.5和10.0 mg/kg TSA干预相比，采用5.0 mg/kg TSA干预，小肠病理状态恢复最佳（图3）。

2.3　TSA改变E.coli感染小鼠TNF-α和IL-10表达水平

根据生存率结果，选择TSA剂量为5.0 mg/kg进行时效实验，分别于12、24、48 h时间点取各组血清进行ELISA检测。血清检测结果显示，12和24 h时DMSO+E.coli组TNF-α和IL-10水平均显著高于DMSO组（P<0.000 1），其中感染后24 h，E.coli+5.0 mg/kg TSA组TNF-α水平明显低于DMSO+E.coli组（P<0.000 1），并且伴随着IL-10水平的显著升高（P<0.05，图4）。基于以上结果，选择感染后24 h时间点进行量效实验，采用2.5、5.0、10.0 mg/kg TSA干预，ELISA检测感染后24 h各组血清炎性因子分泌水平。结果发现，DMSO+E.coli组血清TNF-α显著高于DMSO组和E.coli+TSA组（P<0.000 1）；其中5.0 mg/kg TSA干预24 h后血清中TNF-α水平均较2.5、10.0 mg/kg TSA干预低，而血清IL-10水平5.0 mg/kg TSA组明显高于10.0 mg/kg TSA干预（P<0.05，图5）。

2.4　TSA调控E.coli感染小鼠CD4⁺T细胞分化基因表达

根据前述实验结果，以E.coli菌液（3×10⁸ CFU/mL）剂量为200 µL造模，TSA干预浓度为5.0 mg/kg，感染24 h后取DMSO组、DMSO+E.coli组和E.coli+5.0 mg/kg TSA组周围淋巴结和脾组织进行研磨，而后收集细胞，并通过磁珠富集CD4⁺T细胞进行转录组测序。结果显示，组内相关性好，组间差异显著（图6A~B）。TNF-α和IL-10等基因表达趋势与前期ELISA结果一致，同时KEGG通路富集图可以看出，TSA干预后可以影响调控FoxO、Th17、Th1/2等T细胞分化的信号通路（图6C~D）。

2.5　TSA调控E.coli感染小鼠CD4⁺T细胞亚群

为了进一步检测TSA是否影响了CD4⁺T细胞各亚群比例的变化，小鼠E.coli感染建模和5.0 mg/kg TSA处理后96 h，取小鼠淋巴结和脾组织的混合细胞进行流式细胞分析。结果显示在CD4⁺T细胞中E.coli+5.0 mg/kg TSA组TGF-β表达高于DMSO+E.coli组；而IL-17表达低于DMSO+E.coli组（图7），表明CD4⁺T细胞亚群中可能出现Treg细胞比例增多，而Th17细胞比例降低。

根据前述实验结果，利用RT-qPCR检测5.0 mg/kg TSA处理后各组小鼠E.coli感染12、24、48、96 h后的CD4⁺T细胞亚群基因表达情况。结果如图8显示，12 h时DMSO+E.coli组Foxp3表达水平高于DMSO组（P<0.000 1），24、48、96 h时均低于DMSO组（P<0.000 1），而12、24、96 h时E.coli+5.0 mg/kg TSA组Foxp3表达水平均高于DMSO+E.coli组（P<0.05），与流式细胞检测结果一致，TSA处理增加了Treg细胞比例。与DMSO组相比，DMSO+E.coli组和E.coli+5.0 mg/kg TSA组的RORγt表达在12、24、48 h均降低，但差异不具有统计学意义；96 h时DMSO+E.coli组和E.coli+5.0 mg/kg TSA组的RORγt表达显著增加（P<0.000 1）；但E.coli+5.0 mg/kg TSA组RORγt表达低于DMSO+E.coli组，提示感染引起Th17细胞比例升高，而TSA起到降低Th17细胞比例，发挥调节CD4⁺T细胞亚群平衡的作用。

3　讨论

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本研究围绕全球常见病原菌感染对机体造成的严重后果，以E.coli引发的感染性炎症为例，在前期工作基础上，探讨TSA对E.coli感染小鼠预后的影响，并从免疫学角度阐释其作用机制，可为细菌感染性炎症的治疗策略提供实验依据和新思路。

3.1　 E.coli引发的感染性炎症与免疫失衡

E.coli是临床上消化系统疾病最常见的致病菌，亚型众多且具有复杂多样的性质，随着临床药物的滥用，其不断从非致病性演变为高致病性，引起严重疾病的爆发^［20］。致病性E.coli感染是全球细菌感染发病率和死亡率的重要诱因，其病理核心在于宿主免疫反应的失衡^［2-4］。细菌感染会启动机体先天免疫和适应性免疫的应答，经DC抗原递呈作用，使Th0分化为多种CD4⁺T细胞亚群，如Th1、Th2、Treg、Th17等，通过多种免疫平衡如Treg-Th17、Th1-Th2、Treg-Th1等发挥作用。不同CD4⁺T细胞亚群发挥的作用各不相同。例如，作为适应性免疫细胞的重要角色之一，Treg在E.coli感染免疫中扮演着复杂的“双刃剑”作用：OKEKE等^［21］发现Treg能下调炎症免疫反应并帮助维持免疫平衡，即使在非致命性大肠杆菌感染中，Treg的耗竭也会导致死亡，并伴随血清中促炎细胞因子水平的升高；SHA等^［22］发现大肠杆菌 LF82感染可加剧小鼠结肠炎症，破坏肠道黏膜屏障，增加肠道黏膜通透性，并加剧Th17-Treg失衡和肠道菌群紊乱。因此，挖掘调控包括Treg在内的CD4⁺T细胞亚群功能的关键药物可能是有效治疗E.coli感染的新路径。

3.2　TSA与炎症反应和免疫细胞功能

TSA相关研究多集中在表观遗传学领域。近年来，越来越多的研究显示，TSA与炎症反应关系密切，而且可能参与了对机体免疫细胞功能的调控。本团队前期工作发现，TSA能够抑制脂多糖（lipopolysaccharides，LPS）刺激淋巴细胞的分泌功能，其机制可能与新型转录因子Musculin（MSC）、IL-17和IL-22的表达变化有关^［23］。另有研究发现，TSA能增加Treg数量，阻止Treg向Th17转分化^［24-25］。新近研究还发现，TSA具有抗炎抗菌的作用：LI等^［26］发现TSA与丁酸盐一样能明显抑制炎症性肠病（inflammatory bowel disease，IBD）中性粒细胞产生促炎细胞因子、趋化因子和钙卫蛋白。

本研究发现，5.0 mg/kg TSA能够显著提高E.coli感染小鼠生存率，有效缓解E.coli感染导致的体质量下降，显著改善小肠肠道病理损伤。这些保护效应与炎症状态的改善直接相关，也与前述文献报道一致。另外，TSA干预（尤其5 mg/kg）在E.coli感染关键期（即感染后24 h）能显著降低血清中的促炎因子TNF-α水平，明显提升抗炎因子IL-10水平。由于IL-10是维持免疫稳态、限制过度炎症的关键因子，主要由Treg等免疫细胞分泌，而Treg是CD4⁺T细胞的重要亚群之一。该结果提示，TSA的抗炎作用机制有可能与包括Treg在内的CD4⁺T细胞亚群有关。

3.3　TSA通过调控CD4⁺T细胞亚群改善E.coli感染小鼠预后

作为HDAC抑制剂，TSA可能通过改变染色质构象（如增加Foxp3基因位点的组蛋白乙酰化水平），解除对Foxp3基因的转录抑制，从而促进Foxp3的表达和Treg的功能^{［13，19］}。本研究通过转录组测序和RT-qPCR检测发现，TSA对CD4⁺T细胞分化具有明显调控作用，特别是对Treg的激活。E.coli感染96 h后，5.0 mg/kg TSA干预可显著上调脾组织和周围淋巴结（腹股沟、腋窝、颈部）中Treg关键转录因子Foxp3的mRNA表达水平，并伴随着RORγt（Th17标志转录因子）表达的下调。Foxp3是Treg发育和功能执行的核心调控因子，其表达水平直接决定了Treg的免疫抑制能力^［5-7］，Th17细胞在介导细菌感染，尤其是肠道炎症中扮演着促炎角色，TSA可能通过抑制Th17的分化，协同Treg的增强，即TSA可能通过调控Treg-Th17平衡促进炎症消退和组织修复。RT-qPCR检测发现，在感染早期即48 h以前，DMSO+E.coli组和E.coli+5.0 mg/kg TSA组Foxp3（除12 h时）和RORγt的表达都明显低于DMSO组，可能由于细菌感染后引起机体内T细胞分化需要时间；在感染时长达96 h时，RORγt在E.coli+5.0 mg/kg TSA组和DMSO+E.coli组的表达均显著高于DMSO组，且E.coli+5.0 mg/kg TSA组表达水平低于DMSO+E.coli组；而96 h时Foxp3在E.coli+5.0 mg/kg TSA组表达高于DMSO+E.coli组；96 h流式细胞检测结果也与RT-qPCR结果趋势一致。这提示在感染中后期，TSA可能是通过调控CD4⁺T细胞朝向Treg亚群分化同时抑制其向Th17亚群分化，从而抑制促炎因子释放来缓解细菌感染性炎症疾病。在感染后24 h，E.coli+5.0 mg/kg TSA组小鼠状态明显优于DMSO+E.coli组，可能是由于在感染急性期，TSA还参与调控巨噬细胞、树突状细胞等先天免疫细胞分泌炎性因子所致。

3.4　不足与展望

本研究仅完成了小鼠在体实验。体内因素错综复杂，虽然在反映TSA缓解E.coli引发的感染性炎症方面能够得到科学有效结果，但在机制探讨中，未能简化干扰因素，尚无法阐释CD4⁺T细胞亚群在此过程中的精准作用。因此，在未来的工作中，开展体外实验，尤其是通过体外定向诱导实验来确定CD4⁺T细胞亚群的动态分化和转分化过程仍是必要的。

细菌感染性疾病的防控始终是全球范围面临的重要卫生课题^［27］。本研究发现，5.0 mg/kg TSA能够对E.coli感染小鼠小肠肠道病理起保护作用，抑制炎症反应，修复小肠损伤，改善预后，其机制可能与TSA可调控CD4⁺T细胞亚群（尤其是Treg-Th17平衡）有关。本研究揭示了TSA在抗菌抗炎方面的新作用，可为其在炎症与免疫领域的机制探讨奠定基础，促进细菌感染性疾病的防治进程。

参考文献

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文献

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参考文献引证文献

排序方式：

IKUTA

K S

，SWETSCHINSKI

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2025年第47卷第21期

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doi: 10.16016/j.2097-0927.202507014

接收时间：2025-07-03
首发时间：2026-10-30
出版时间：2025-11-15

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作者

出版历史

收稿日期：2025-07-03
修回日期：2025-10-21

基金

作者信息

¹陆军军医大学大坪医院特殊环境战伤防治研究室，创伤与化学中毒全国重点实验室，重庆

²西南交通大学生命科学与工程学院，四川成都

³陆军军医大学（第三军医大学）基础医学院细胞生物学教研室，重庆

通讯作者:

王韵，E-mail：yunwang@tmmu.edu.cn

严军，E-mail：13883092250@163.com

WANG Yun，E-mail：yunwang@tmmu.edu.cn

YAN Jun，E-mail：13883092250@163.com

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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