海洋学报

样品	序列数	质控数据总碱基数/bp	GC含量/%	Q20/%	Q30/%
AA1	19 805 256	5 921 771 252	36.81	97.42	92.53
AA2	21 015 864	6 280 860 796	36.94	97.54	92.78
AA3	19 731 774	5 901 090 298	37.18	97.5	92.68
BB1	20 674 908	6 180 447 036	37.45	97.76	93.27
BB2	20 510 382	6 131 925 988	37.4	96.53	90.69
BB3	20 992 198	6 275 544 498	35.81	97.11	91.92
CC1	21 890 314	6 542 576 532	36.44	97.11	91.92
CC2	26 002 371	7 775 975 502	36.79	97.55	92.78
CC3	19 225 650	5 747 607 418	36.92	97.76	93.31
DD1	26 236 765	7 799 003 780	37.5	97.66	93.08
DD2	21 474 785	6 390 329 892	36.4	97.52	92.79
DD3	20 597 574	6 154 866 696	36.74	97.27	92.24

样品	序列数	质控数据总碱基数/bp	GC含量/%	Q20/%	Q30/%
AA1	19 805 256	5 921 771 252	36.81	97.42	92.53
AA2	21 015 864	6 280 860 796	36.94	97.54	92.78
AA3	19 731 774	5 901 090 298	37.18	97.5	92.68
BB1	20 674 908	6 180 447 036	37.45	97.76	93.27
BB2	20 510 382	6 131 925 988	37.4	96.53	90.69
BB3	20 992 198	6 275 544 498	35.81	97.11	91.92
CC1	21 890 314	6 542 576 532	36.44	97.11	91.92
CC2	26 002 371	7 775 975 502	36.79	97.55	92.78
CC3	19 225 650	5 747 607 418	36.92	97.76	93.31
DD1	26 236 765	7 799 003 780	37.5	97.66	93.08
DD2	21 474 785	6 390 329 892	36.4	97.52	92.79
DD3	20 597 574	6 154 866 696	36.74	97.27	92.24

差异表达基因类型	GO条目	p值
上调基因	DNA整合	1.48 × 10⁻⁵	1.61 × 10⁻¹⁰	1.84 × 10⁻⁴	3.79 × 10⁻⁵	5.59 × 10⁻⁵	5.03 × 10⁻⁹
	膜的组成部分	1.85 × 10⁻²	5.85 × 10⁻⁴	0.43	1.13 × 10⁻²	5.07 × 10⁻⁴	1.04 × 10⁻²
	核糖体	5.99 × 10⁻⁵	0.92	1.37 × 10⁻²	1.49 × 10⁻²	1.54 × 10⁻⁴	0.14
	RNA定向DNA聚合酶活性	0.59	1.24 × 10⁻²	1.17 × 10⁻⁴	1.93 × 10⁻⁵	7.16 × 10⁻²	1.52 × 10⁻⁴
下调基因	包涵体组装的负调节	4.74 × 10⁻⁵	0.70	0.34	4.79 × 10⁻⁵	3.45 × 10⁻⁴	0.68
	蛋白水解	5.32 × 10⁻⁵	3.70 × 10⁻⁷	6.20 × 10⁻⁶	2.48 × 10⁻²	5.14 × 10⁻²	9.56 × 10⁻²
	细胞外区域	1.61 × 10⁻¹¹	8.53 × 10⁻¹²	1.83 × 10⁻⁴	2.79 × 10⁻¹²	4.18 × 10⁻¹⁴	1.55 × 10⁻⁹
	细胞外空间	1.56 × 10⁻⁸	1.57 × 10⁻⁵	2.52 × 10⁻²	5.41 × 10⁻⁷	1.36 × 10⁻⁵	2.79 × 10⁻⁴
	内肽酶抑制剂活性	2.06 × 10⁻⁷	7.27 × 10⁻⁸	1.16 × 10⁻⁷	6.57 × 10⁻²	0.29	2.26 × 10⁻³

差异表达基因类型	GO条目	p值
上调基因	DNA整合	1.48 × 10⁻⁵	1.61 × 10⁻¹⁰	1.84 × 10⁻⁴	3.79 × 10⁻⁵	5.59 × 10⁻⁵	5.03 × 10⁻⁹
	膜的组成部分	1.85 × 10⁻²	5.85 × 10⁻⁴	0.43	1.13 × 10⁻²	5.07 × 10⁻⁴	1.04 × 10⁻²
	核糖体	5.99 × 10⁻⁵	0.92	1.37 × 10⁻²	1.49 × 10⁻²	1.54 × 10⁻⁴	0.14
	RNA定向DNA聚合酶活性	0.59	1.24 × 10⁻²	1.17 × 10⁻⁴	1.93 × 10⁻⁵	7.16 × 10⁻²	1.52 × 10⁻⁴
下调基因	包涵体组装的负调节	4.74 × 10⁻⁵	0.70	0.34	4.79 × 10⁻⁵	3.45 × 10⁻⁴	0.68
	蛋白水解	5.32 × 10⁻⁵	3.70 × 10⁻⁷	6.20 × 10⁻⁶	2.48 × 10⁻²	5.14 × 10⁻²	9.56 × 10⁻²
	细胞外区域	1.61 × 10⁻¹¹	8.53 × 10⁻¹²	1.83 × 10⁻⁴	2.79 × 10⁻¹²	4.18 × 10⁻¹⁴	1.55 × 10⁻⁹
	细胞外空间	1.56 × 10⁻⁸	1.57 × 10⁻⁵	2.52 × 10⁻²	5.41 × 10⁻⁷	1.36 × 10⁻⁵	2.79 × 10⁻⁴
	内肽酶抑制剂活性	2.06 × 10⁻⁷	7.27 × 10⁻⁸	1.16 × 10⁻⁷	6.57 × 10⁻²	0.29	2.26 × 10⁻³

差异表达基因类型	通路名称	基因数目
上调基因	真核生物中的核糖体生物发生	41	6	1	33	45	6
	核糖体	85	25	42	57	76	33
	Notch信号传导途径通路	18	21	15	17	15	15
	NOD-like受体信号通路	13	16	13	17	19	15
	泛素介导的蛋白水解	32	21	20	44	43	26
下调基因	吞噬体	41	25	20	42	35	20
	内质网中的蛋白加工	12	7	8	21	14	2
	细胞外基质受体作用	17	16	10	23	16	8
	C-型凝集素受体信号通路	14	7	9	13	19	14

差异表达基因类型	通路名称	基因数目
上调基因	真核生物中的核糖体生物发生	41	6	1	33	45	6
	核糖体	85	25	42	57	76	33
	Notch信号传导途径通路	18	21	15	17	15	15
	NOD-like受体信号通路	13	16	13	17	19	15
	泛素介导的蛋白水解	32	21	20	44	43	26
下调基因	吞噬体	41	25	20	42	35	20
	内质网中的蛋白加工	12	7	8	21	14	2
	细胞外基质受体作用	17	16	10	23	16	8
	C-型凝集素受体信号通路	14	7	9	13	19	14

CO₂驱动的海水酸化对菲律宾蛤仔组织、免疫和抗氧化酶活及转录水平的影响

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林毅 ¹^,² , 陈强 ¹^,²^,^* , 周思顺 ¹^,² , 孔鲁闽 ¹^,² , 黄张帆 ¹^,²

海洋学报 | 论文 2024,46(1): 88-100

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海洋学报 | 论文 2024, 46(1): 88-100

CO₂驱动的海水酸化对菲律宾蛤仔组织、免疫和抗氧化酶活及转录水平的影响

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林毅¹^,², 陈强¹^,²^,^*, 周思顺¹^,², 孔鲁闽¹^,², 黄张帆¹^,²

作者信息

1.集美大学水产学院，福建厦门 361021

2.福建省海洋渔业资源与生态环境重点实验室，福建厦门 361021

林毅（1999—），男，福建省永安市人，主要从事贝类养殖研究。E-mail：202111908039@jmu.edu.cn

通讯作者:

*陈强，博士，硕士生导师，主要从事生态环境修复研究。E-mail: ahcq@jmu.edu.cn

Effects of CO₂-driven seawater acidification on tissue, immune and antioxidant enzyme activity and transcription levels of Ruditapes philippinarum

Yi Lin¹^,², Qiang Chen¹^,²^,^*, Sishun Zhou¹^,², Lumin Kong¹^,², Zhangfan Huang¹^,²

Affiliations

1. Fisheries College, Jimei University, Xiamen 361021, China

2. Fujian Provincial Key Laboratory of Marine Fishery Resources and Eco-environment, Xiamen 361021, China

出版时间: 2024-01-31 doi: 10.12284/hyxb2024010

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摘要

收起

随着CO₂的大量排放，海洋酸化效应不断加重，为探究未来海水酸化情况对菲律宾蛤仔产生的影响，设置对照组（pH为8.1）和酸化组（pH为7.7、7.1和6.4），研究周期为42 d，测定菲律宾蛤仔在酸化条件下组织结构、免疫和抗氧化酶活性的变化情况，以及在分子水平上产生的影响。结果表明：菲律宾蛤仔置于酸化海水环境中，鳃丝间距随pH的降低而扩大，鳃丝纤毛黏合，水管和外套膜外表皮褶皱逐渐加深；鳃组织中酸性磷酸酶（ACP）和超氧化物歧化酶（SOD）活性变化情况为先降后升，碱性磷酸酶（AKP）活性各组变化趋势不同，总抗氧化能力（T-AOC）、过氧化氢酶（CAT）和溶菌酶（LZM）活性趋势为先升后降；鳃和内脏团谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性变化规律皆为持续上升；内脏团组织中LZM活性变化趋势各不相同，ACP活性变动趋势为先降后升，AKP、SOD和CAT活性变化规律为先升后降，T-AOC趋势为持续下降；通过转录组的分析得到，鳃组织GO功能主要富集在DNA整合、膜的组成部分和RNA定向DNA聚合酶活性等条目中，KEGG通路主要富集在吞噬体和与蛋白合成的相关通路中。海水酸化使菲律宾蛤仔组织呈现不同程度的损伤，破坏其内环境稳态，改变其代谢水平和与免疫相关基因表达，引发菲律宾蛤仔染病乃至死亡的风险上升。

关键词

二氧化碳 / 菲律宾蛤仔 / 免疫 / 抗氧化 / 转录水平

Abstract

收起

The ocean acidification effect is increasing with the large amount of CO₂ emissions. To investigate the effects of future seawater acidification on Ruditapes philippinarum, a control group (pH = 8.1) and acidification group (pH = 7.7, 7.1 and 6.4) were set up for 42 days. The changes in tissue structure, immune and antioxidant enzyme activities of Ruditapes philippinarum under acidification conditions were measured, as well as the effects produced at the molecular level. The results show that when Ruditapes philippinarum are placed in an acidified seawater environment, gill filament spacing expands with decreasing pH, gill filament cilia adhere, and the pipes and outer epidermal folds of the mantle gradually deepen. The activities of acid phosphatase (ACP) and superoxide dismutase (SOD) in gill tissues show a pattern of decreasing followed by increasing. Alkaline phosphatase (AKP) activities exhibit different trends in each group. Total antioxidant capacity (T-AOC), catalase (CAT), and lysozyme (LZM) activities show a pattern of increasing followed by decreasing. Glutathione peroxidase (GSH-Px) activities in gill and visceral masses show a continuous increase. LZM activity in the viscera group displays varying trends, while ACP activity shows a decreasing and then increasing pattern. AKP, SOD, and CAT activities exhibited an increasing and then decreasing pattern, while T-AOC activity shows a continuous decrease. Analysis of the transcriptome reveals that the GO functions in gill tissue are mainly enriched in DNA integration, integral components of the membrane, and RNA-directed DNA polymerase activity, among others. The KEGG pathway analysis shows enrichment in the phagosome pathway and pathways related to protein processing in the endoplasmic reticulum. The acidification of seawater caused varying degrees of damage to the tissues of Ruditapes philippinarum, disrupting its internal environmental homeostasis and altering metabolic levels and immune-related gene expression, and led to an increased risk of disease and even death in Ruditapes philippinarum.

Key words

carbon dioxide / Ruditapes philippinarum / immunity / antioxidant / transcript levels

引用本文

林毅, 陈强, 周思顺, 孔鲁闽, 黄张帆. CO₂驱动的海水酸化对菲律宾蛤仔组织、免疫和抗氧化酶活及转录水平的影响. 海洋学报, 2024 , 46 (1) : 88 -100 . DOI: 10.12284/hyxb2024010

Yi Lin, Qiang Chen, Sishun Zhou, Lumin Kong, Zhangfan Huang. Effects of CO₂-driven seawater acidification on tissue, immune and antioxidant enzyme activity and transcription levels of Ruditapes philippinarum[J]. Haiyang Xuebao, 2024 , 46 (1) : 88 -100 . DOI: 10.12284/hyxb2024010

正文

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1 引言

收起

随着人类活动排放大量CO₂，空气中CO₂的占比在不断升高，海洋被迫吸收了1/4～1/3的CO₂^[1]，导致海水pH下降，这种因海水被迫吸收大量CO₂降低pH的过程被称为海洋酸化^[2]。自工业革命后，CO₂急剧增长的排放量已经大幅度超过了海洋碳循环的自我平衡调节能力，目前海洋表层海水的pH已经比工业革命前下降了0.1^[3]。Calderia和Wickett^[4]根据政府间气候变化专门委员会（Intergovernmental Panel on Climate Change, IPCC）发表的评估报告，预测在21世纪末海水pH可能会下降0.3～0.4，如果CO₂排放量还未得到控制，到2300年pH可能下降到7.1～7.2，到2500年pH将会下降到6.4～6.5。海洋酸化会影响海洋生态系统的平衡，对各级海洋生物产生影响，大多数软体动物依赖碳酸盐形成贝壳保护自身，因此海洋酸化对软体动物的生理活动将造成严重的影响。

菲律宾蛤仔（Ruditapes philippinarum），隶属于软体动物门，双壳纲，帘蛤目，帘蛤科，蛤仔属，在我国广泛分布于辽宁大连，福建厦门，广东海门，山东青岛、烟台等地，是我国四大传统养殖贝类之一^[5]，《2022中国渔业统计年鉴》^[6]显示，到2021年，我国蛤养殖产量已到428.9万t。目前关于海洋酸化对贝类的研究主要是在贝壳的形成、生长和酶活性的影响上，海洋酸化会减缓贝类贝壳的形成^[7]，抑制贝类的生长^[8]，限制贝类的免疫力^[9]等，严重影响贝类的生存，进而影响贝类养殖业的发展。本文研究了CO₂驱动酸化对菲律宾蛤仔不同组织结构、免疫酶活性、抗氧化酶活性和转录水平的影响，探讨菲律宾蛤仔对海水酸化的响应，期望在日益酸化的水环境中为菲律宾蛤仔的养殖提供参考。

2 材料与方法

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2.1 材料

菲律宾蛤仔（之后统称“蛤仔”）购自厦门市高崎水产批发市场，选取活泼健康无损伤个体，测得蛤仔平均壳长为（3.3 ± 0.2）cm，平均壳宽为（2.1 ± 0.1）cm，平均壳高为（1.8 ± 0.2）cm，平均湿重为（8.5 ± 0.5）g。实验开始前蛤仔均在水箱（200 L）中暂养1周，暂养期间保持连续充氧，每日定时投喂足量小球藻（Chlorella sp.）1次，每天100%换水1次，暂养用水温度为（25 ± 1）℃，盐度为（31 ± 2），pH为8.1 ± 0.1。

2.2 实验设计

模拟2100年、2300年和2500年海洋将到达的海水pH，将实验pH设置为：8.1 ± 0.1（DD组）对照组、7.7 ± 0.1（CC组）、7.1 ± 0.1（BB组）和6.4 ± 0.1（AA组）；每组3个重复。将暂养7 d的蛤仔随机分组，每组50个，随机放入装有20 L配置海水的玻璃缸中。通过控制CO₂通入量的方法降低水体pH。实验在室内进行，共进行42 d，每天定时投喂小球藻，1 h后换水1/3，在实验的第14天、第28天和第42天采样。

2.3 样品采集

用已灭菌剪刀和镊子在冰盒中快速取蛤仔的内脏团和鳃组织，用预冷的生理盐水（0.9%）冲洗，滤纸吸干水分，每组分别取6个蛤仔，3个蛤仔的鳃组织分装放入冻存管中，用于后续的转录组分析。此外，每组取3个蛤仔的鳃、外套膜和水管样本放置于4%多聚甲醛溶液中固定，用于组织形态观察分析。

2.4 切片制作

将组织样品迅速取材成规定大小后放入多聚甲醛中，固定24 h。水洗后脱水：75%乙醇2 h，85%乙醇2 h，90%乙醇2 h，100%乙醇45 min，乙醇+二甲苯（1∶1）10 min，二甲苯8 min，石蜡3 h。脱水后进行包埋，经室温冷却后切片，最后使用苏木精伊红染色。使用显微镜观察切片，用WT-1000GM软件拍照记录。

2.5 生理生化指标分析

酸性磷酸酶（ACP）和碱性磷酸酶（AKP）活性均采用微量酶标法检测，通过比浊法检测溶菌酶（LZM）活性，总抗氧化能力（T-AOC）通过ABTS法检测，过氧化氢酶（CAT）活性使用钼酸铵法检测，超氧化物歧化酶（SOD）活性通过WST-1检测。测定使用的试剂盒购自南京建成生物工程研究所，具体操作按试剂盒说明书进行。

2.6 RNA提取及建库

采用TRIzol试剂提取第28天鳃组织的总RNA；使用Nanodrop2000（赛默飞Nanodrop2000）对于提取的RNA进行浓度检测，并使用Agient2100和LabChip GX对RNA完整性进行检测，为后续建库和质量检测做准备。使用NEBNext®Ultra™ RNA文库制备试剂盒为Illumina®（美国NEB）生成测序文库，即使用聚T寡核苷酸附着磁珠从总RNA中纯化mRNA。cDNA经过纯化、加尾和富集后，在北京百迈客生物有限公司的Illumina NovaSeq6000测序平台上对文库进行测序。

2.7 微量表达及功能富集分析

Illumina高通量测序平台对cDNA文库进行测序，产出大量的原始数据（Raw reads），去除原始数据含接头和低质量碱基（Q < 10，Q为碱基质量分值）的数据，获得高质量数据（Clean reads）进行组装。使用DESeq2^[10]软件包对两个条件组进行差异表达分析，使用Benjamini和Hochberg控制错误发现率的方法得到了矫正后的p值，即错误发现率（False Discovery Rate，FDR）值。以基因差异表达信数值（Fold Change） ≥ 2且FDR < 0.01作为筛选标准，对筛选得到的差异表达基因（Differential Expressed Genes, DEGs）进行GO功能富集和KEGG通路富集分析，富集分析使用cluster Profiler^[11]软件完成。

2.8 实时荧光定量PCR验证

随机选取24个DEGs，通过实时荧光定量PCR（qPCR）对转录组测序结果进行验证。以18S为参考基因^[12]，利用软件Primer Premier 5设计DEGs的特异性引物。先将所有引物进行普通PCR扩增后，选取特异性强的引物进行后续qPCR验证。所有引物序列由福州瑞真生物技术有限公司合成。

2.9 数据处理

实验数据于EXCEL中进行数据统计，之后使用SPSS 19.0软件进行方差分析。运用Duncan test对数据进行显著性检验，显著性水平为0.05。实验数据以平均值 ± 标准差表示。

3 结果

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3.1 组织切片观察

通过组织切片观察经过42 d酸化胁迫的蛤仔的鳃组织的主要结构，发现酸化组中鳃丝间距扩大（图1B中a处），鳃丝纤毛紊乱（图1C中b处），鳃丝出现弯曲（图1C中c处），在极端酸化时鳃丝出现断裂（图1D中d处）。水管的内外表皮由单层柱状上皮细胞、少量杯状细胞组成，表皮下的结缔组织中含有大量的黏液细胞。正常海水时，蛤仔水管外表皮的柱状细胞排列紧密且表皮褶皱较少；当蛤仔处于酸化条件时，柱状细胞间出现间隙（图1F中e处），表皮凹陷增多（图1G中f处）；极端酸化下蛤仔水管外表皮柱状细胞和黏液细胞开始混合（图1H中g处），且黏液细胞数量和肌纤维变少。正常海水中外套膜的外表皮为水平状，细胞排列整齐；酸化组中外表皮开始出现不规则的褶皱（图1J中h处），肌纤维间出现空泡（图1K中i处），结缔组织紊乱；随着酸化的加重，外表皮的褶皱逐渐明显（图1L中j处）。

3.2 酸化胁迫对免疫酶活性的影响

由图2可知，经42 d酸化胁迫后鳃组织LZM活性趋势为先升后降；第14天AA组显著低于CC组、DD组（p < 0.05），BB组显著低于DD组（p < 0.05），CC组显著低于DD组（p < 0.05）；第28 天AA组显著低于其他组（p < 0.05），BB组、CC组和DD组间无显著差异；第42天各组间无显著差异。第14天与第0天相比，AA组与第0天初始组无显著差异，其他组显著高于第0天初始组（p < 0.05）；第28天与第0天相比，AA组显著低于第0天初始组（p < 0.05），BB组、DD组显著高于第0天初始组（p < 0.05），CC组与第0天初始组无显著差异；第42天与第0天相比，BB组、DD组显著高于第0天初始组（p < 0.05），AA组、CC组与第0天初始组无显著差异。

ACP活性趋势为先降后升；第14天各组间无显著差异；第28天AA组显著低于BB组和DD组（p < 0.05），BB组和DD组间无显著性，BB组显著高于CC组（p < 0.05），CC组与DD组差异不显著（p > 0.05）；第42天AA组显著高于CC组和DD组（p < 0.05），BB组与CC组、DD组差异不显著（p > 0.05），CC组、DD组间无显著差异。第14 天与第0天相比，各组与第0天初始组无显著差异；第28天与第0天相比，AA组显著低于第0天初始组（p < 0.05），其他组与第0天初始组无显著差异；第42天与第0天相比，AA组、BB组显著高于第0天初始组（p < 0.05），DD组显著低于第0天初始组（p < 0.05），CC组与第0天初始组无显著差异。

AKP活性趋势各组不相同；第14天AA组显著低于其他组（p < 0.05），BB组显著低于CC组、DD组（p < 0.05），CC组、DD组间无显著差异；第28天AA组与BB组差异不显著（p > 0.05），显著低于CC组、DD组（p < 0.05），CC组、DD组间无显著差异；第42天AA组、BB组间无显著差异，且皆显著高于CC组、DD组（p < 0.05），CC组、DD组间无显著差异。第14天与第0天相比，AA组、BB组显著低于第0天初始组（p < 0.05），CC组显著高于第0天初始组（p < 0.05），DD组与第0天初始组无显著差异；第28天与第0天相比，其他组显著低于第0天初始组（p < 0.05），DD组与第0天初始组无显著差异；第42天与第0天相比，其他组显著低于第0天初始组（p < 0.05），BB组与第0天初始组间无显著差异。

由图3可知，内脏团LZM活性趋势各组不相同；第14天酸化组间无显著差异，且皆显著低于DD组（p < 0.05）；第28天AA组显著低于BB组（p < 0.05），BB组与CC组、DD组差异不显著（p > 0.05），CC组、DD组间无显著差异；第42天各组间无显著差异。第14天与第0天相比，DD组显著高于第0天初始组（p < 0.05）；其他组与第0天初始组无显著性差异；第28天和42天与第0天相比，各组与第0天初始组间无显著性差异。

ACP活性趋势为先降后升；第14天AA组显著高于BB组（p < 0.05），BB组显著低于AA组和CC组（p < 0.05）；第28天、第42天各组间无显著差异。第14天与第0天相比，AA组显著高于第0天初始组（p < 0.05），BB组显著低于第0天初始组（p < 0.05），其他组与第0天初始组无显著差异；第28天第0天相比，各组间无显著差异。

AKP活性趋势为先升后降；第14天酸化组间无显著差异，且皆显著高于DD组（p < 0.05）；第28天酸化组显著高于DD组（p < 0.05），AA组显著高于CC组（p < 0.05），BB组与CC组无显著差异（p > 0.05）；第42天各组间无显著差异。第14天、第28天与第0天相比，DD组与第0天初始组无显著差异，其他组显著高于第0天初始组（p < 0.05）；第42天与第0天相比，AA组显著低于第0天初始组（p < 0.05），其他组与第0天初始组无显著差异。

3.3 酸化胁迫对抗氧化酶活性的影响

由图4可知，鳃组织SOD活性趋势为先降后升；第14天AA组活性显著低于DD组（p < 0.05），AA组显著低于BB组（p < 0.05），BB组与CC组间无显著差异（p > 0.05）；第28天AA组显著低于其他组（p < 0.05），BB组、CC组间无显著差异，且皆显著高于DD组（p < 0.05）；第42天各组间无显著差异。第14天、第28天与第0天相比，AA组显著低于第0天初始组（p < 0.05），其他组与第0天初始组无显著差异；第42天与第0天相比，各组间无显著差异。

T-AOC趋势为先升后降；第14天酸化组显著低于DD组（p < 0.05），AA组显著低于BB组、CC组（p < 0.05），BB组显著低于CC组（p < 0.05）；第28天AA组、DD组间无显著差异，且皆显著低于BB组（p < 0.05），BB组与CC组差异不显著（p > 0.05）；第42天AA组显著低于其他组（p < 0.05），BB组显著低于CC组（p < 0.05），CC组与DD组差异不显著（p > 0.05）。第14天与第0天相比，AA组显著低于第0天初始组（p < 0.05），其他组与第0天初始组无显著差异；第28天、第42天与第0天相比，各组间无显著差异。

CAT活性趋势为先升后降；第14天酸化组显著低于DD组（p < 0.05），AA组显著低于BB组和DD组（p < 0.05），CC组与BB组差异不显著（p > 0.05）；第28天酸化组低于DD组（p < 0.05），AA组显著低于DD组（p < 0.05），BB组、CC组间无显著差异；第42天各组间无显著差异。第14天与第0天相比，BB组、DD组显著高于第0天初始组（p < 0.05），AA组、CC组与第0天初始组无显著差异；第28天与第0天相比，AA组、DD组显著高于第0天初始组（p < 0.05），BB组、CC组与第0天初始组无显著差异。第42天与第0天相比，各组间无显著差异。

GSH-Px活性趋势为持续上升；第14天AA组和BB组活性显著低于DD组（p < 0.05），AA组、BB组、CC组间无显著差异，AA组、BB组显著低于DD组（p < 0.05）；第28天AA组显著低于BB组（p < 0.05），BB组与CC组、DD组差异不显著（p > 0.05），CC组、DD组间无显著差异；第42天各组间无显著差异。第14天、第28天与第0天相比，AA组与第0天初始组无显著差异, 其他组显著高于第0天初始组（p < 0.05）；第42天与第0天相比，其他组显著高于第0天初始组（p < 0.05），CC组与第0天初始组无显著差异。

由图5可知，内脏团SOD活性趋势为先升后降；第14天AA组显著高于其他组（p < 0.05），BB组、CC组和DD组间无显著差异；第28天AA组、DD组间无显著差异，且皆显著低于BB组、CC组（p < 0.05），BB组与CC组差异不显著（p > 0.05）；第42天各组间无显著差异。第14天与第0天相比，AA组显著高于第0天初始组（p < 0.05），其他组与第0天初始组无显著差异；第28天与第0天相比，BB组显著高于第0天初始组（p < 0.05），其他组与第0天初始组无显著差异；第42天与第0天相比，各组间无显著差异。

T-AOC趋势为先升后降；第14天BB组和CC组皆显著高于DD组（p < 0.05），AA组显著低于BB组（p < 0.05），BB组与CC组差异不显著（p > 0.05）；第28天酸化组皆显著高于DD组（p < 0.05），酸化组之间无显著差异（p > 0.05）；第42天AA组、BB组间无显著差异，且皆显著高于CC组、DD组（p < 0.05）。第14天与第0天相比，AA组、BB组与第0天初始组无显著差异，CC组显著高于第0天初始组（p < 0.05），DD组显著低于第0天初始组（p < 0.05）；第28天与第0天相比，AA组、BB组显著高于第0天初始组（p < 0.05），CC组、DD组与第0天初始组无显著差异；第42天与第0天相比，CC组、DD组显著低于第0天初始组（p < 0.05），AA组、BB组与第0天初始组无显著差异。

CAT活性趋势为先升后降；第14天AA组显高于其他组（p < 0.05），BB组、CC组和DD组间无显著差异；第28天BB组显著高于DD组（p < 0.05），AA组、CC组和DD组间无显著差异（p > 0.05）；第42天各组间无显著差异。第14天与第0天相比，AA组显著高于第0天初始组（p < 0.05），其他组与第0天初始组无显著差异；第28天与第0天相比，AA组、BB组显著高于第0天初始组（p < 0.05），CC组、DD组与第0天初始组无显著差异；第42天与第0天相比，各组间无显著差异。

GSH-Px活性趋势为持续上升；第14天酸化组皆显著低于DD组（p < 0.05），AA组显著高于BB组、CC组（p < 0.05），BB组、CC组间无显著差异；第28天酸化组显著低于DD组（p < 0.05），各酸化组间无显著差异；第42天酸化组低于DD组，AA组、BB组和CC组无显著差异（p > 0.05）。第14天与第0天相比，各组间无显著差异；第28天与第0天相比，AA组显著低于第0天初始组（p < 0.05），其他组与第0天初始组无显著差异；第42天与第0天相比，BB组显著低于第0天初始组（p < 0.05），其他组与第0天初始组无显著差异。

3.4 转录组数据统计分析

4组鳃组织的cDNA文库经Illumina测序质控后共产生77.10 Gb高质量数据，各样品高质量数据均达到5.75 Gb，Q30碱基百分比在90.69%及以上，GC含量平均值为36.86%（表1）。

3.5 差异表达基因

将AA组、BB组和CC组的鳃表达基因与DD组表达基因进行差异分析（图6）。结果显示：在AA vs. DD组中DEGs共有7 053个，其中上调基因3 906个，下调基因3147个；BB vs. DD组中DEGs共有5 690个，上调基因2 534个，下调基因3 156个；CC vs. DD组中DEGs共有5 543个，上调基因2 619个，下调基因2 924个；AA vs. BB组中DEGs共有7 070个，上调基因3 876个，下调基因3 194个；AA vs. CC组中DEGs共有7 250个，上调基因3 941个，下调基因3 194个；BB vs. CC组中DEGs共有5 157个，上调基因2 466个，下调基因2 691个。

3.6 差异表达基因GO功能富集分析

在差异表达基因GO功能分析中，AA vs. DD组中AA组上调表达基因富集到35个GO条目中，下调表达基因富集到34个GO条目中；BB vs. DD组中BB组上调表达基因富集到37个GO条目中，下调表达基因富集到35个GO条目中；CC vs. DD组中CC组上调表达基因富集到37个GO条目中，下调表达基因富集到33个GO条目中；AA vs. BB组中AA组上调表达基因富集到50个GO条目中，下调表达基因富集到51个GO条目中；AA vs. CC组中AA组上调表达基因富集到50个GO条目中，下调表达基因富集到53个GO条目中；BB vs. CC组中BB组上调表达基因富集到49个GO条目中，下调表达基因富集到51个GO条目中。选取每组前20个最显著富集的GO条目，发现其生物学过程类别主要富集在DNA整合、包涵体组装的负调节和蛋白水解，细胞组分类别主要富集在膜的组成部分、核糖体、细胞外区域和细胞外空间，分子功能类别主要富集在RNA定向DNA聚合酶活性和内肽酶抑制剂活性（表2）。

3.7 差异表达基因KEGG信号通路富集分析

通过对各组DEGs的KEGG通路富集分析，确定了蛤仔在酸化胁迫的过程中显著富集的代谢途径和信号转导途径，在所有组中并未发现有显著富集的KEGG通路。在AA vs. DD组中AA组差异基因主要富集在吞噬体和核糖体等通路；在BB vs. DD组中BB组差异基因主要富集在吞噬体、泛素介导的蛋白水解和Notch信号传导途径等通路中；在CC vs. DD组中CC组主要富集在泛素介导的蛋白水解等通路；AA vs. BB组中AA组差异基因主要富集在泛素介导的蛋白水解和内质网中的蛋白加工等通路；AA vs. CC组中AA组差异基因主要富集在核糖体等通路；BB vs. CC组中BB组差异基因主要富集在吞噬体、核糖体和泛素介导的蛋白水解等通路（表3）。

3.8 实时荧光定量PCR分析

为证明转录组测序结果的准确性，随机选取24个DEGs使用qPCR方法对测序结果进行验证。结果表明：运用2^–ΔΔCt方法对不同组中的DEGs进行相对表达水平定量分析，qPCR与RNA-seq获得的差异基因表达量趋势一致（图7）。以上结果说明，qPCR验证结果与转录组测序结果一致，本次转录组测序结果可信度高。

4 讨论

收起

4.1 海水酸化对菲律宾蛤仔组织的影响

鳃是贝类的呼吸和摄食器官，本研究通过组织学观察发现，经过42 d海水酸化胁迫后，蛤仔鳃丝间距扩大、鳃丝弯曲，严重的还导致鳃丝断裂。宋晓楠等^[13]研究盐度骤降对蛤仔胁迫时发现蛤仔鳃丝间连接被破坏，鳃表面无法形成褶皱；梁健等^[14]研究海洋酸化对缢蛏（Sinonovacula constricta）的影响发现，鳃组织表现出鳃丝间隔扩大，鳃丝纤毛变短等问题。海水酸化会影响蛤仔鳃丝和纤毛的变化从而造成对摄食的影响。外套膜是贝类背侧一部分皮肤褶皱形成，起到保护内脏器官、分泌贝壳成分、辅助呼吸和形成外套腔的作用。一般情况下外套膜外表皮平整，能更好地包裹器官，在本研究中随着酸化的加深，蛤仔外表皮褶皱明显，出现脱离现象，周瑶等^[15]对褶纹冠蚌（Cristaria plicata）的研究发现，煤矸石使褶纹冠蚌外套膜外表皮出现组织间空泡和肌纤维的变化，严重影响了外套膜的作用。

4.2 海水酸化胁迫对菲律宾蛤仔酶活性的影响

ACP、AKP和LZM是溶酶体参与体液免疫的水解酶^[16]。本研究中ACP活性呈先降后升的趋势，郑萍萍等^[17]研究发现低盐胁迫下锯缘青蟹（Scylla serrata）血清中ACP活性也呈相同趋势，推测酸化胁迫下蛤仔组织产生损伤致使ACP活性降低，而随着对酸化条件的适应，ACP活性升高。鳃组织AKP活性呈不同的变化趋势，但极端酸化中AKP活性持续上升，房子恒等^[18]研究发现淡水至盐度20范围内，半滑舌鳎（Cynoglossus semilaevis）幼鱼肝脏中AKP活性随盐度升高而升高，AKP活性升高可能是为了提高膜运输能力来维持内环境稳定^[19]。刘璐等^[20]研究发现，随酸化时间的延长，拟穴青蟹（Scylla paramamosain）血清中AKP活性呈先升后降的趋势，本文内脏团中AKP的变化趋势与其相似，推测酸化胁迫前期蛤仔的免疫系统被激活，AKP活性升高来应对机体对能量的需求，后期AKP活性降低是组织适应了环境变化不再需要额外的调控^[21]。鳃组织LZM活性趋势为先升后降，后期可能是随着胁迫时间延长，蛤仔体内多种生理功能紊乱，降低了自身的免疫力^[22]，导致LZM活性下降，本研究对鳃组织的研究结果与姜令绪等^[23]的研究结果相似。

鳃组织中SOD活性趋势为先降后升，水体pH下降导致机体内的H⁺升高，破坏机体内的活性氧平衡使SOD活性下降^[24]。在内脏团中SOD活性趋势为先升后降，猜测水体环境变化使机体内活性氧突增，蛤仔通过提高SOD活性抵御活性氧的增多^[25]。pH对日本三角涡虫（Dugesia japonica）影响的研究发现，pH在6.5～7.5之间SOD活性变化与本研究相似^[26]。CAT活性变化总体先升后降，本文研究结果与李晨辉等^[27]研究结果相似。CAT活性决定了体内O₂的产生速率^[28]，推测前期蛤仔在酸化条件下对能量代谢的需求较高，需加大O₂的利用率，后期活性降低可能是机体对能量的分配完成不再需要大量的O₂。鳃组织中GSH-Px活性趋势为持续上升，与Tiedke等^[29]研究酸胁迫对斑马鱼（Danio rerio）鳃影响结果一致，GSH-Px活性上升是为了加快对过氧化物的清除，减少细胞在不良环境下的损伤^[30–31]。

4.3 海水酸化胁迫对菲律宾蛤仔鳃组织基因通路的影响

通过GO富集分析显示，上调基因主要富集在DNA整合、膜组分、蛋白活性和与凋亡相关酶活性等相关的条目中。上调基因富集在膜的组成部分可能会提高膜的通透性，对某些离子的吸收产生影响，引起蛤仔机体的渗透压改变。凋亡与维持内环境稳定和多个系统的发育有着密切的关系，在极端环境下细胞受到损伤，而细胞损伤会启动与凋亡相关的基因上调，可能是鳃组织在维持细胞的内环境稳定，不使机体受到损伤。下调基因主要富集在包涵体的组装调节、细胞外基质反应和代谢相关的条目中。下调基因富集在包涵体的组装过程中，对包涵体的组装产生了抑制作用，有利于蛋白的表达，Villar-Piqué和Ventura^[32]的研究发现蛋白质聚集会引发疾病，所以抑制包涵体的组装有利于机体健康。细胞外基质是由细胞周围的大分子组成的复杂网络，在组织细胞的结构和功能上起到了重要的作用，本研究下调基因富集在细胞外基质，原因可能是酸化胁迫对蛤仔鳃组织细胞的代谢活动产生负面影响^[33]，与之不同，Wang等^[34]的研究发现海水酸化会使鲈鱼（Lateolabrax japonicus）幼鱼鳃组织中与代谢途径相关基因上调。

通过KEGG富集分析显示，富集到上调基因数目较多的KEGG通路为：核糖体、Notch信号通路、NOD-like受体信号通路和泛素介导的蛋白水解等，下调基因主要富集到：吞噬体、细胞外基质受体作用和C-型凝集素受体（CLRs）信号通路等。酸化胁迫下与核糖体相关的通路富集表达，机体需要合成大量的蛋白质以维持各类生理机能来适应酸化条件^[35]，与本研究相同的是，在低氧胁迫下斑马鱼鳃组织中核糖体蛋白基因显著上调^[36]。Notch信号通路通过相邻细胞间的“对接”来调节细胞分化、增殖、凋亡等细胞行为^[37]，Notch信号通路相关基因上调说明在外界环境变化时会通过调节此信号通路以维持组织的稳定。细胞内NOD-like受体能使机体受到病原体侵入或处于极端环境时启动炎症反应或免疫应答^[38]，本研究中NOD-like受体信号通路富集基因上调表达，与Johnson和Hofmann^[39]的研究结果相似。泛素−蛋白酶体途径能降解机体因刺激产生的异常蛋白质^[40]，本研究中泛素介导的蛋白水解通路上调，说明鳃组织在积极适应环境的变化，维持体内内环境的稳态^[41–42]。细胞外基质（Extra Cellular Matrix, ECM）指的是组织中细胞以外的部分，在他人研究中发现ECM与免疫细胞相互依赖^[43]，ECM能调节免疫细胞的生存和功能，而本研究中的ECM基因下调，可能会导致免疫反应的减弱。CLRs可以被自身损伤信号激活，CLRs与其各自的配体结合后能够导致几种细胞反应和炎症反应的启动^[44]，CLRs在机体的免疫反应和对外界病原的侵袭中起到重要作用，而在本研究中CLRs基因下调表达，可能是机体受到酸化损伤导致。在抗氧化相关通路中，酸化下调了CAT基因表达量，上调了SOD、过氧化物氧化还原蛋白 6（Prdx6）基因表达量。Prdx6在抗氧化防御（基于其减少过氧化膜磷脂的能力）和磷脂稳态（基于其产生溶血磷脂底物以重塑磷脂合成途径的能力）中具有重要作用，能使谷胱甘肽（GSH）含量上升增加鳃组织的抗氧化作用。磷酸肌醇-3-激酶（PI3K）调节亚基p85和催化亚基p110构成二聚体，PI3K一般与AKT组成信号通路激活相关的免疫通路。本研究结果显示，酸化使PI3K基因表达量下调，由此影响NF-KB通路，使鳃组织免疫能力下降。通过对鳃组织转录组的分析发现酸化下调了CAT、PI3K基因表达，上调了SOD、Prdx6基因表达，提高了SOD活性和GSH含量，降低了CAT和免疫酶活性。综上所述，机体能够通过调节相关基因的表达来适应水环境pH的变化。

5 结论

收起

经过42 d酸化胁迫后，菲律宾蛤仔鳃组织出现不同程度的损伤，随着酸化程度的加深损伤也逐渐严重。在酸化胁迫下，菲律宾蛤仔的免疫和抗氧化酶活性都受到了不同程度的刺激，随着酸化时间加长，代谢水平被打破，机体内的离子交换平衡紊乱，进一步使免疫系统受损，最终可能会导致蛤仔死亡。通过GO功能分类和KEGG信号通路分析筛选到的相关通路大部分与免疫相关。

基金

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福建省自然科学基金项目(2020J01668)

参考文献

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文献

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参考文献引证文献

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2024年第46卷第1期

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doi: 10.12284/hyxb2024010

接收时间：2023-05-20
首发时间：2025-11-25
出版时间：2024-01-31

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作者

出版历史

收稿日期：2023-05-20
修回日期：2023-10-09

基金

福建省自然科学基金项目(2020J01668)

作者信息

1.集美大学水产学院，福建厦门 361021

2.福建省海洋渔业资源与生态环境重点实验室，福建厦门 361021

通讯作者:

*陈强，博士，硕士生导师，主要从事生态环境修复研究。E-mail: ahcq@jmu.edu.cn

参考文献

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https://castjournals.cast.org.cn/joweb/hyxb/CN/10.12284/hyxb2024010

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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TxT

样品	序列数	质控数据总碱基数/bp	GC含量/%	Q20/%	Q30/%
AA1	19 805 256	5 921 771 252	36.81	97.42	92.53
AA2	21 015 864	6 280 860 796	36.94	97.54	92.78
AA3	19 731 774	5 901 090 298	37.18	97.5	92.68
BB1	20 674 908	6 180 447 036	37.45	97.76	93.27
BB2	20 510 382	6 131 925 988	37.4	96.53	90.69
BB3	20 992 198	6 275 544 498	35.81	97.11	91.92
CC1	21 890 314	6 542 576 532	36.44	97.11	91.92
CC2	26 002 371	7 775 975 502	36.79	97.55	92.78
CC3	19 225 650	5 747 607 418	36.92	97.76	93.31
DD1	26 236 765	7 799 003 780	37.5	97.66	93.08
DD2	21 474 785	6 390 329 892	36.4	97.52	92.79
DD3	20 597 574	6 154 866 696	36.74	97.27	92.24

样品

序列数

质控数据总碱基数/bp

GC含量/%

Q20/%

Q30/%

AA1

19 805 256

5 921 771 252

36.81

97.42

92.53

AA2

21 015 864

6 280 860 796

36.94

97.54

92.78

AA3

19 731 774

5 901 090 298

37.18

97.5

92.68

BB1

20 674 908

6 180 447 036

37.45

97.76

93.27

BB2

20 510 382

6 131 925 988

37.4

96.53

90.69

BB3

20 992 198

6 275 544 498

35.81

97.11

91.92

CC1

21 890 314

6 542 576 532

36.44

97.11

91.92

CC2

26 002 371

7 775 975 502

36.79

97.55

92.78

CC3

19 225 650

5 747 607 418

36.92

97.76

93.31

DD1

26 236 765

7 799 003 780

37.5

97.66

93.08

DD2

21 474 785

6 390 329 892

36.4

97.52

92.79

DD3

20 597 574

6 154 866 696

36.74

97.27

92.24

差异表达基因类型	GO条目	p值
上调基因	DNA整合	1.48 × 10⁻⁵	1.61 × 10⁻¹⁰	1.84 × 10⁻⁴	3.79 × 10⁻⁵	5.59 × 10⁻⁵	5.03 × 10⁻⁹
	膜的组成部分	1.85 × 10⁻²	5.85 × 10⁻⁴	0.43	1.13 × 10⁻²	5.07 × 10⁻⁴	1.04 × 10⁻²
	核糖体	5.99 × 10⁻⁵	0.92	1.37 × 10⁻²	1.49 × 10⁻²	1.54 × 10⁻⁴	0.14
	RNA定向DNA聚合酶活性	0.59	1.24 × 10⁻²	1.17 × 10⁻⁴	1.93 × 10⁻⁵	7.16 × 10⁻²	1.52 × 10⁻⁴
下调基因	包涵体组装的负调节	4.74 × 10⁻⁵	0.70	0.34	4.79 × 10⁻⁵	3.45 × 10⁻⁴	0.68
	蛋白水解	5.32 × 10⁻⁵	3.70 × 10⁻⁷	6.20 × 10⁻⁶	2.48 × 10⁻²	5.14 × 10⁻²	9.56 × 10⁻²
	细胞外区域	1.61 × 10⁻¹¹	8.53 × 10⁻¹²	1.83 × 10⁻⁴	2.79 × 10⁻¹²	4.18 × 10⁻¹⁴	1.55 × 10⁻⁹
	细胞外空间	1.56 × 10⁻⁸	1.57 × 10⁻⁵	2.52 × 10⁻²	5.41 × 10⁻⁷	1.36 × 10⁻⁵	2.79 × 10⁻⁴
	内肽酶抑制剂活性	2.06 × 10⁻⁷	7.27 × 10⁻⁸	1.16 × 10⁻⁷	6.57 × 10⁻²	0.29	2.26 × 10⁻³

差异表达基因类型

GO条目

p值

AA vs. DD

BB vs. DD

CC vs. DD

AA vs. BB

AA vs. CC

BB vs. CC

上调基因

DNA整合

1.48 × 10⁻⁵

1.61 × 10⁻¹⁰

1.84 × 10⁻⁴

3.79 × 10⁻⁵

5.59 × 10⁻⁵

5.03 × 10⁻⁹

膜的组成部分

1.85 × 10⁻²

5.85 × 10⁻⁴

0.43

1.13 × 10⁻²

5.07 × 10⁻⁴

1.04 × 10⁻²

核糖体

5.99 × 10⁻⁵

0.92

1.37 × 10⁻²

1.49 × 10⁻²

1.54 × 10⁻⁴

0.14

RNA定向DNA聚合酶活性

0.59

1.24 × 10⁻²

1.17 × 10⁻⁴

1.93 × 10⁻⁵

7.16 × 10⁻²

1.52 × 10⁻⁴

下调基因

包涵体组装的负调节

4.74 × 10⁻⁵

0.70

0.34

4.79 × 10⁻⁵

3.45 × 10⁻⁴

0.68

蛋白水解

5.32 × 10⁻⁵

3.70 × 10⁻⁷

6.20 × 10⁻⁶

2.48 × 10⁻²

5.14 × 10⁻²

9.56 × 10⁻²

细胞外区域

1.61 × 10⁻¹¹

8.53 × 10⁻¹²

1.83 × 10⁻⁴

2.79 × 10⁻¹²

4.18 × 10⁻¹⁴

1.55 × 10⁻⁹

细胞外空间

1.56 × 10⁻⁸

1.57 × 10⁻⁵

2.52 × 10⁻²

5.41 × 10⁻⁷

1.36 × 10⁻⁵

2.79 × 10⁻⁴

内肽酶抑制剂活性

2.06 × 10⁻⁷

7.27 × 10⁻⁸

1.16 × 10⁻⁷

6.57 × 10⁻²

0.29

2.26 × 10⁻³

差异表达基因类型	通路名称	基因数目
上调基因	真核生物中的核糖体生物发生	41	6	1	33	45	6
	核糖体	85	25	42	57	76	33
	Notch信号传导途径通路	18	21	15	17	15	15
	NOD-like受体信号通路	13	16	13	17	19	15
	泛素介导的蛋白水解	32	21	20	44	43	26
下调基因	吞噬体	41	25	20	42	35	20
	内质网中的蛋白加工	12	7	8	21	14	2
	细胞外基质受体作用	17	16	10	23	16	8
	C-型凝集素受体信号通路	14	7	9	13	19	14

差异表达基因类型

通路名称

基因数目

AA vs. DD

BB vs. DD

CC vs. DD

AA vs. BB

AA vs. CC

BB vs. CC

上调基因

真核生物中的核糖体生物发生

核糖体

Notch信号传导途径通路

NOD-like受体信号通路

泛素介导的蛋白水解

下调基因

吞噬体

内质网中的蛋白加工

细胞外基质受体作用

C-型凝集素受体信号通路