热带作物学报

引物名称Primer name	序列（5′–3′）Sequence（5′–3′）	备注Note
RT-qPCR引物	FF	AATCAACYAGTGCTGGTCGTAAC	cp基因全长引物
	FB	CATCGSCGAAAGATCATACA
	RTF	AGTGCYGGTCGTARCCGTCG	cp基因RT-qPCR引物
	RTB	GACCAGYTGCTAACGTCTTRTTAA
	probe	（VIC）TCGCGAAAGTTGCTGCGACAAG（BHAQ-1）	VIC为荧光基团，BHQ-1为淬灭基团
RT-LAMP引物	F3	TCWACCGTGTGGGTGACA
	B3	CGGSGKACTTTCTCATGTCR
	FIP	CCGTCCGCGAACATAGCAGAGGTCCGTAAAGTTCCTGCCTC
	BIP	CAGTATGCAGCATCCGGAGTCCCGCATCGCCGAAAGATCA

引物名称Primer name	序列（5′–3′）Sequence（5′–3′）	备注Note
RT-qPCR引物	FF	AATCAACYAGTGCTGGTCGTAAC	cp基因全长引物
	FB	CATCGSCGAAAGATCATACA
	RTF	AGTGCYGGTCGTARCCGTCG	cp基因RT-qPCR引物
	RTB	GACCAGYTGCTAACGTCTTRTTAA
	probe	（VIC）TCGCGAAAGTTGCTGCGACAAG（BHAQ-1）	VIC为荧光基团，BHQ-1为淬灭基团
RT-LAMP引物	F3	TCWACCGTGTGGGTGACA
	B3	CGGSGKACTTTCTCATGTCR
	FIP	CCGTCCGCGAACATAGCAGAGGTCCGTAAAGTTCCTGCCTC
	BIP	CAGTATGCAGCATCCGGAGTCCCGCATCGCCGAAAGATCA

DNA浓度 DNA concentration/（copies·µL^–1）	组内重复Reproducibility of intra-assay	组间重复Reproducibility of inter-assay
1.8×10⁸	17.528	0.074	0.421	17.559	0.086	0492
1.8×10⁷	21.011	0.069	0.329	21.061	0.115	0.674
1.8×10⁶	24.374	0.084	0.346	24.435	0.140	0.703
1.8×10⁵	27.552	0.062	0.224	27.661	0.223	1.106
1.8×10⁴	30.683	0.055	0.179	30.812	0.261	1.177
1.8×10³	33.661	0.094	0.280	33.951	0.548	2.392

DNA浓度 DNA concentration/（copies·µL^–1）	组内重复Reproducibility of intra-assay	组间重复Reproducibility of inter-assay
1.8×10⁸	17.528	0.074	0.421	17.559	0.086	0492
1.8×10⁷	21.011	0.069	0.329	21.061	0.115	0.674
1.8×10⁶	24.374	0.084	0.346	24.435	0.140	0.703
1.8×10⁵	27.552	0.062	0.224	27.661	0.223	1.106
1.8×10⁴	30.683	0.055	0.179	30.812	0.261	1.177
1.8×10³	33.661	0.094	0.280	33.951	0.548	2.392

2种检测兰花黄瓜花叶病毒方法的建立与比较

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杜见南 ¹ , 何建升 ² , 黎伟文 ² , 李艳嫦 ² , 吴洁秋 ¹ , 傅海平 ¹ , 李早文 ¹ , 范俊强 ¹ , 谭志勇 ¹ , 徐匆 ¹^,^*

热带作物学报 | 植物保护与生物安全 2025,46(10): 2500-2507

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热带作物学报 | 植物保护与生物安全 2025, 46(10): 2500-2507

2种检测兰花黄瓜花叶病毒方法的建立与比较

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杜见南¹, 何建升², 黎伟文², 李艳嫦², 吴洁秋¹, 傅海平¹, 李早文¹, 范俊强¹, 谭志勇¹, 徐匆¹^,^*

作者信息

1.东莞市农业科学研究中心，广东东莞　523086

2.东莞市大岭山镇农业技术服务中心，广东东莞　523770

杜见南（1986—），女，学士，农艺师，研究方向：观赏植物。

通讯作者:

*徐匆，E-mail：10306967@qq.com。

Establishment and Comparison of Two Methods for Detecting Cucumber Mosaic Virus in Orchid

Jiannan DU¹, Jiansheng HE², Weiwen LI², Yanchang LI², Jieqiu WU¹, Haiping FU¹, Zaowen LI¹, Junqiang FAN¹, Zhiyong TAN¹, Cong XU¹^,^*

Affiliations

1. Dongguan Agricultural Science Research Center, Dongguan, Guangdong 523086, China

2. Dalingshan Agricultural Technology Service Center, Dongguan, Guangdong 523770, China

出版时间: 2025-10-25 doi: 10.3969/j.issn.1000-2561.2025.10.020

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摘要

收起

黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus，CMV）是一种可侵染多种单、双子叶植物的病毒，宿主范围非常广泛。本研究针对兰花中黄瓜花叶病毒建立了2种高效检测技术：反转录实时荧光定量PCR（RT-qPCR）和反转录环介导等温扩增（RT-LAMP）。RT-qPCR采用TaqMan探针法，根据外壳蛋白（coat protein，cp）基因保守序列设计引物及探针，cp克隆质粒为标准品建立标准曲线；RT-LAMP同样以cp基因保守区域为模板设计内、外引物；以CMV、建兰花叶病毒（Cymbidium mosaic virus，CymMV）、齿兰环斑病毒（Odontoglossum ringspot virus，ORSV）的病毒RNA为模板进行RT-qPCR及RT-LAMP特异性检测；以10倍梯度稀释的CMV RNA为模板进行灵敏性检测；使用2种方法对田间兰花样品进行CMV感染情况监测。结果显示：本研究建立的CMV RT-qPCR、RT-LAMP检测法仅能检出CMV阳性模板，其余模板检测结果为阴性，2种方法均具有特异性；RT-qPCR与RT-LAMP的灵敏度一致，为原液稀释10⁶倍；田间兰花样品的CMV阳性植株检出率均为26.7%。这表明本研究建立的RT-qPCR和RT-LAMP均具有特异性强、灵敏度高的特点，且适合在实际生产过程中监测兰花感染CMV的情况。

关键词

兰花 / 黄瓜花叶病毒 / 外壳蛋白基因 / 反转录荧光定量PCR / 反转录环介导等温扩增

Abstract

收起

Cucumber mosaic virus (CMV) is a virus that can infect various monocotyledonous and dicotyledonous plants. Two efficient detection methods for CMV in orchids, real-time quantitative PCR (RT-qPCR) and reverse transcription loop-mediated isothermal amplification (RT-LAMP) were developed in the study. For RT-qPCR, a TaqMan probe-based assay was designed using conserved regions of the coat protein (cp) gene, with a cloned cp plasmid serving as the standard for calibration curve construction. For RT-LAMP, specific inner and outer primers were designed based on the cp gene conserved sequences too. Both methods specificity detection were performed using virus RNA from CMV, Cymbidium mosaic virus (CymMV), and Odontoglossum ringspot virus (ORSV) as templates, and for sensitivity detection was performed using 10-fold serial dilutions of CMV RNA as a template. Additionally, field-collected orchid samples were screened for CMV infection using both techniques. The CMV RT-qPCR and RT-LAMP detection methods established in this study detected only CMV-positive samples without cross-reactivity with CymMV or ORSV. The sensitivity of RT qPCR and RT LAMP was consistent with a dilution of 10⁶ times the original solution. The positive rate of CMV in field orchid samples was 26.7%. The results demonstrate that the RT-qPCR and RT-LAMP established in this study have strong specificity and high sensitivity, and are suitable for monitoring CMV infection in orchids in actual production processes.

Key words

Orchid / Cucumber mosaic virus (CMV) / coat protein gene / RT-qPCR / RT-LAMP

引用本文

杜见南, 何建升, 黎伟文, 李艳嫦, 吴洁秋, 傅海平, 李早文, 范俊强, 谭志勇, 徐匆. 2种检测兰花黄瓜花叶病毒方法的建立与比较. 热带作物学报, 2025 , 46 (10) : 2500 -2507 . DOI: 10.3969/j.issn.1000-2561.2025.10.020

Jiannan DU, Jiansheng HE, Weiwen LI, Yanchang LI, Jieqiu WU, Haiping FU, Zaowen LI, Junqiang FAN, Zhiyong TAN, Cong XU. Establishment and Comparison of Two Methods for Detecting Cucumber Mosaic Virus in Orchid[J]. Chinese Journal of Tropical Crops, 2025 , 46 (10) : 2500 -2507 . DOI: 10.3969/j.issn.1000-2561.2025.10.020

正文

收起

兰花具有很高的观赏价值和经济价值。近年来，我国兰花产业发展迅速，但在种植过程中一旦发生病毒感染和传播，可能使产业面临重大风险。除最常见的建兰花叶病毒（Cymbidium mosaic virus，Cym MV）、齿兰轮斑病毒（Odontoglossum ringspot virus，ORSV）外，黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus，CMV）也被发现能够感染兰花^[1-3]。黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus，CMV）属于雀麦花叶病毒科（Bromoviridae），黄瓜花叶病毒属（Cucumovirus)，在植物病毒中宿主范围最大，居“世界十大植物病毒”的第4位，能够侵染100多科500个属的1300多种植物，是危害蔬菜生产和观赏植物栽培的重要病毒之一^[4-6]，主要传播途径有蚜虫、汁液、种子^[7]等。在观赏植物中，CMV可导致叶片镶嵌和扭曲、发育迟缓、颜色断裂和花朵畸形^[5]。每年均有报道新的CMV宿主^[8-9]，但是目前对于病毒病的防治手段十分有限，因此对CMV的防控研究主要集中于抗性植物的品种培育^[10-13]及病毒检测方法^[2,14-16]的建立。兰花病毒检测方法可以分为4类：生物学检测^[17]、电镜观察法^[18-20]、免疫学检测^[20-22]以及分子生物学检测^[23-26]。4类方法中，生物学检测法操作简单，易上手，但弊端突出，如操作环境严格，周期长等；电镜检测取样简单，所需时间短，但对技术要求高，不易上手，电镜价格昂贵；免疫学检测法具有特异性高、耗时短的优点，但需高质量的抗体，容易出现假阴性，且成本较高，不易推广；分子生物学检测法特异性强，灵敏度高，被应用于多种动植物病原体的检测。CMV的分子生物学检测方法多有报道^[27-30]，但针对兰花感染CMV的分子生物学检测方法较少。

本研究以感染兰花的CMV cp基因为目的基因建立了一步法RT-qPCR及RT-LAMP检测方法，以便能快速、有效地监测兰花大规模生产中CMV感染情况，减少因CMV引起的经济损失。

1　材料与方法

收起

1.1　材料

黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus，CMV）、齿兰环斑病毒（Odontoglossum ringspot virus，ORSV）、兰花建兰花叶病毒（Cymbidium mosaic virus，CymMV）来自美国Agdia公司及东莞市农业科学研究中心花卉大棚。

RNA提取试剂盒（SteadyPure Virus DNA / RNA Extraction Kit）、质粒抽提试剂盒、一步法RT-PCR试剂盒、一步法RT-qPCR试剂盒、核酸染料GoldView购自艾科瑞生物工程有限公司；PCR产物纯化试剂盒购自天根生化科技（北京）有限公司；WarmStart^® LAMP试剂盒（DNA & RNA）购自基因有限公司；克隆质粒pMD-20T、感受态细胞DH5α购自宝生物工程（大连）有限公司。

主要设备包括超微量核酸蛋白分析仪（BioDrop DUO+，英国柏楉有限公司），荧光定量PCR仪（QuantStudio1，美国应用生物系统公司），凝胶成像系统（Biospetrum AC 410，美国UVP公司），电泳仪（DYY-12，北京六一生物有限公司）。

1.2　方法

1.2.1　引物设计

从NCBI下载CMV cp基因序列，利用ClustalX比对后，选取保守序列使用PrimerExplorer V5设计LAMP简并引物，利用Primer Primer 5.0软件设计RT-qPCR引物、TaqMan荧光探针及全长引物，引物序列如表1所示。

1.2.2　RNA提取

根据RNA提取试剂盒（Steady-Pure Virus DNA/RNA Extraction Kit）说明书提取RNA，对植物组织样品具体操作步骤如下：取100 mg植物组织置于液氮中研磨，研磨后加入200 μL PBS溶液，然后转移至1.5 mL离心管中；依次加入250 μL Buffer VLS、20 μL Proteinase K和1.0 μL Carrier RNA，充分混匀，56 ℃水浴15 min；12 000 r/min离心3 min，吸取上清液至新的离心管中，加入250 μL无水乙醇，充分吸打混匀；转移溶液至Mini Column中，静置2 min，12 000 r/min离心2 min；RWA、RWB清洗后用50 μL无菌水洗脱，得到RNA溶液。

对于病毒液的RNA提取，无需进行第1步研磨操作，后续操作相同。

1.2.3　质粒构建

以表1所列FF/FB为CMV cp基因全长扩增引物，使用一步法RT-PCR试剂盒扩增目的片段，目的片段大小为501 bp。回收目的片段，连接至pMD-20T，转化进入DH5α，抽提阳性质粒。

RT-PCR体系组成：2 µL酶，12.5 µL缓冲液，1 µL引物（终浓度0.4 µmol/L），1 µL模板RNA，补充H₂O至终体积为25 µL。扩增条件：50 ℃预变性30 min；94 ℃变性30 s，52 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，30个循环；72 ℃再延伸5 min。

1.2.4　标准曲线的建立

以RTF/RTB为qPCR引物，probe为TaqMan荧光探针，10倍梯度稀释的质粒DNA为模板，每个浓度3个重复。qPCR体系组成：0.4 µL DNA聚合酶，10 µL缓冲液，0.4 µL引物（终浓度为0.2 µmol/L），0.8 µL探针（终浓度为0.4 µmol/L），0.4 µL ROX染料（终浓度为0.08 µmol/L），1 µL质粒DNA，补充H₂O至终体积为20 µL。扩增条件：95 ℃变性5 min，95 ℃退火5 s，52 ℃延伸30 s，40个循环。

1.2.5　RT-qPCR检测

以RTF/RTB为RT-qPCR引物，probe为TaqMan探针，使用一步法RT-qPCR试剂盒进行反转录荧光定量PCR。

RT-qPCR体系组成：0.4 µL DNA聚合酶，0.4 µL反转录酶，10 µL缓冲液，0.4 µL引物（终浓度为0.2 µmol/L），0.8 µL探针（终浓度为0.4 µmol/L），0.4 µL ROX染料（终浓度为0.08 µmol/L），1 µL模板RNA，补充H₂O至终体积为20 µL。扩增条件：42 ℃预变性5 min，95 ℃变性30 s，95 ℃退火5 s，52 ℃延伸30 s，40个循环。

1.2.6　RT-LAMP检测

以F3/B3为外引物，FIP/BIP为内引物，使用一步法RT-LAMP试剂盒进行反转录环介导等温扩增反应。

RT-LAMP反应体系：12.5 µL反应混合物（Warmstart Lamp Kit，NEB，USA），2.5 µL外引物（F3/B3）（终浓度为0.2 µmol/L），2.5 µL内引物（FIP/BIP）（终浓度为1.6 µmol/L），1 µL模板RNA，补充H₂O至终体积为25 µL。混匀后加入20 µL石蜡油，60 ℃反应1 h，85 ℃保持5 min终止反应。

1.2.7　田间样品采集

对在市场随机购买的兰花进行样品采集，使用无菌剪刀剪下兰花叶片，除去表面灰尘等，每个样品称取100 mg，按1.2.2的方法提取RNA，并进行后续试验。

2　结果与分析

收起

2.1　检测方法的建立

2.1.1　 cp基因质粒的构建及RT-qPCR标准曲线的建立

抽提CMV阳性材料RNA，以FF/FB为引物扩增cp基因全长用于构建质粒，片段长度为501 bp；RTF/RTB扩增的目的片段长度为127 bp（结果未显示）。利用PCR回收试剂盒回收cp基因全长扩增产物，与pMD-20T连接，转化至DH5α，菌落PCR验证后，挑取阳性菌落扩大培养，抽提质粒。测定OD₂₆₀，根据吸光值及质粒碱基数计算得到质粒浓度为1.8×10⁹ copies/µL。10倍梯度稀释该质粒母液至1.8×10³~1.8×10⁸ copies/µL，建立标准曲线如图1所示，标准曲线方程为y=–3.244x+44.359（R²=0.999），扩增效率（E）为104.24%，结果显示本研究中的梯度稀释质粒模板与Ct值具有良好的线性关系。对组内Ct及组间Ct进行变异系数分析发现，组内及组间重复性良好（表2）。

2.1.2　RT-LAMP检测方法的建立

抽提CMV阳性材料RNA，以F3/B3为外引物，FIP/BIP为内引物建立RT-LAMP检测方法。对内外引物比、反应温度、反应时长进行优化（结果未显示），根据CMV RT-LAMP反应条件得出结果如图2所示，产物经过凝胶电泳后出现明显梯形条带，说明成功建立RT-LAMP检测方法。

2.2　特异性检测

2.2.1　RT-qPCR特异性检测

以CMV、ORSV、CymMV病毒RNA作为模板检测RT-qPCR的特异性，结果如图3所示，以CMV RNA为模板的扩增体系出现典型扩增曲线，ORSV、CymMV为模板的体系均未出现扩增曲线，扩增结果与预期一致，显示CMV RT-qPCR检测方法特异性良好。

2.2.2　RT-LAMP特异性检测

使用CMV RT-LAMP引物对CMV RNA、CymMV RNA、ORSV RNA进行RT-LAMP扩增，检测该方法的特异性。结果如图4所示，凝胶电泳未检测到以CymMV RNA及ORSV RNA为模板的扩增产物，而以CMV RNA为模板的体系产物呈现明显梯形条带，说明RT-LAMP检测方法具有针对CMV的特异性，结果与预期一致。

2.3　灵敏性检测及比较

10倍梯度稀释CMV RNA母液，以10¹、10²、10³、10⁴、10⁵、10⁶稀释液为模板进行RT-qPCR和RT-LAMP的灵敏性检测。根据图5A中的RT-qPCR扩增曲线可知，当RNA稀释度在10¹~10⁵时出现明显扩增，Ct值分布在13.467~33.016之间，判读为阳性；模板为10⁶稀释液时Ct值为36.094>35，判读为阴性。RT-LAMP产物的凝胶电泳结果（图5B）显示，以10¹~10⁵稀释液为模板的泳道均出现明显梯形条带，10⁶稀释液为模板的泳道未出现DNA条带。综合图5结果可知，RT-qPCR和RT-LAMP对CMV RNA检测的灵敏度保持一致。

2.4　田间样品检测

为了检验建立的RT-qPCR和RT-LAMP检测方法在实际生产中的应用性，对市场随机购买的15株兰花样品进行CMV检测。结果如图6所示，RT-qPCR（图6A）与RT-LAMP（图6B）从15个同样的样品中检出4个CMV阳性，阳性检出率为26.7%。

3　讨论

收起

CMV常规的病毒检测方法主要有免疫学^[31]和分子生物学检测^[23-30]。其中，免疫学检测法需高质量的抗体，容易出现假阴性，且成本较高，不易推广^[32-33]。近年来，使用分子生物学方法进行检测的报道居多，分子生物学检测法主要以PCR和LAMP为基础，如谭建锡等^[23]利用多重RT-PCR方法扩增兰花5种病毒目的片段，将扩增产物与特异性探针杂交，建立可视化基因芯片检测方法，该方法可检测出病毒阳性质粒最低浓度为10³ copies/µL，但该研究未进行田间样品的检测，其实际应用性尚未可知；袁英哲等^[24]建立了甜瓜种子中的黄瓜花叶病毒RT-LAMP可视化检测方法，建立的LAMP法灵敏度较常规RT-PCR高10倍；涂小云等^[2]建立了针对兰花CymMV、ORSV和CMV的三重RT-PCR检测法，利用该方法对17个蝴蝶兰样品进行检测后发现13个样品感染CymMV、2个样品感染ORSV、1个样品感染CMV；XUE等^[25]对大豆的黄瓜花叶病毒、大豆花叶病毒、大豆普通花叶病毒建立了多重RT-PCR检测法，利用该方法检测了251份大豆样品，黄瓜花叶病毒感染率为15.9%，大豆花叶病毒阳性率为35%，大豆普通花叶病毒阳性率为17.9%；ZHANG等^[26]对莴苣的CMV病毒建立了RT-LAMP检测法，利用CMV cp质粒测得该方法的检测极限为20 fg/mL，较传统的RT-PCR高100倍，对田间样品检出62.5%为CMV阳性。

以往的CMV检测研究或仅建立一种检测方法^[2,18,20]，或仅将RT-LAMP与RT-PCR进行比较^[19,26]。本研究考虑到qPCR为目前主流的分子检测技术，而LAMP作为较新兴的分子检测技术也受到了诸多的关注，因此建立了针对兰花黄瓜花叶病毒的一步法RT-qPCR和一步法RT-LAMP检测方法，并对这2种检测方法进行了比较。2种检测方法包括核酸提取在内的检测时长为2 h左右，且均具有针对CMV检测的特异性；灵敏性检测显示，2种方法对CMV RNA的检测限保持一致；对田间15株样品进行检测，RT-qPCR与RT-LAMP的阳性检出率为26.7%，检出率一致，互证2种方法能够在检疫和实际生产中对植株感染CMV的情况进行监测。目前分子生物学检测方法是建立在对DNA检测的基础上，在针对RNA病毒的检测时，需要先将RNA反转录为cDNA，但在这个过程中影响反转录效率的因素较多，反转录之后的cDNA不能真实反映RNA丰度。因此本研究采用一步法检测方法，一方面是为了简化检测过程，另一方面是为了最大限度减小RNA转录为cDNA过程中对RNA丰度的影响，以更真实地反映样品中是否有待测病毒。

RT-qPCR探针法是一种基于PCR技术和荧光共振能量转移的方法，该方法在DNA扩增的同时产生荧光信号，根据荧光信号可对其模板进行定性和定量检测，具有灵敏性强、准确度高、污染少的特点，但需要特定仪器。RT-LAMP从2000年建立以来^[34]，因其具有快速、特异和灵敏，同时还有低成本和对设备低要求的特点而受到广泛的关注，适合基层和实验室使用，但该方法存在气溶胶污染的可能性，易造成样品的假阳性，且不能定量。2种方法可根据检测要求和试验条件互补使用，为生产中的兰花CMV病毒监测及植物检疫等提供快速、准确、灵敏的分子生物学监控、检疫手段。

CMV是危害蔬菜生产和观赏植物栽培的重要病毒之一，其分子检测方法常被报道，但针对兰花CMV的分子生物学检测方法不常见。本研究建立的2种CMV分子生物学检测方法针对兰花CMV病毒的cp基因进行扩增，具有特异性强、灵敏性高，且具有实际应用性的特点。2种方法的检测过程耗时仅1 h左右，但病毒RNA的抽提过程需耗时1 h，后期研究希望能在保证检测效果的前提下，简化试验步骤，省略RNA抽提，以期为兰花CMV的检测、防疫提供更快捷、准确、经济的检测手段。

基金

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东莞市社会科技发展（重点）项目(2020507101164)

参考文献

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文献

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排序方式：

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2025年第46卷第10期

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文章信息

doi: 10.3969/j.issn.1000-2561.2025.10.020

接收时间：2025-04-21
首发时间：2026-03-09
出版时间：2025-10-25

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作者

出版历史

收稿日期：2025-04-21
录用日期：2025-05-26

基金

东莞市社会科技发展（重点）项目(2020507101164)

作者信息

1.东莞市农业科学研究中心，广东东莞　523086

2.东莞市大岭山镇农业技术服务中心，广东东莞　523770

通讯作者:

*徐匆，E-mail：10306967@qq.com。

参考文献

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https://castjournals.cast.org.cn/joweb/rdzwxb/CN/10.3969/j.issn.1000-2561.2025.10.020

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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TxT

DNA浓度 DNA concentration/（copies·µL^–1）	组内重复Reproducibility of intra-assay			组间重复Reproducibility of inter-assay
DNA浓度 DNA concentration/（copies·µL^–1）	平均值 Mean value	标准差 Standard deviation	变异系数 Coefficient of variation/%	平均值 Mean value	标准差 Standard deviation	变异系数 Coefficient of variation/%
1.8×10⁸	17.528	0.074	0.421	17.559	0.086	0492
1.8×10⁷	21.011	0.069	0.329	21.061	0.115	0.674
1.8×10⁶	24.374	0.084	0.346	24.435	0.140	0.703
1.8×10⁵	27.552	0.062	0.224	27.661	0.223	1.106
1.8×10⁴	30.683	0.055	0.179	30.812	0.261	1.177
1.8×10³	33.661	0.094	0.280	33.951	0.548	2.392