热带作物学报

处理Treatment	株高Height/cm	叶面积Leaf area/cm²	地上部分鲜重Shoot fresh weight/g	地下部分鲜重Root fresh weight/g	地上部分干重Shoot dry weight/g	地下部分干重Root dry weight/g
CK0	20.75±1.36^b	194.09±33.05^b	55.51±7.38^b	27.99±3.29^b	5.42±0.67^b	4.25±0.46^b
CK200	16.06±1.16^c	108.01±12.79^c	23.38±5.27^c	7.41±2.68^c	1.55±0.15^d	1.11±0.10^c
RS0	29.11±1.83^a	374.60±39.07^a	112.35±12.01^a	50.67±11.51^a	8.98±0.90^a	6.39±0.67^a
RS200	19.36±2.67^b	178.23±28.49^b	46.32±11.51^b	20.88±7.83^b	2.91±0.51^c	1.71±0.45^c

处理Treatment	株高Height/cm	叶面积Leaf area/cm²	地上部分鲜重Shoot fresh weight/g	地下部分鲜重Root fresh weight/g	地上部分干重Shoot dry weight/g	地下部分干重Root dry weight/g
CK0	20.75±1.36^b	194.09±33.05^b	55.51±7.38^b	27.99±3.29^b	5.42±0.67^b	4.25±0.46^b
CK200	16.06±1.16^c	108.01±12.79^c	23.38±5.27^c	7.41±2.68^c	1.55±0.15^d	1.11±0.10^c
RS0	29.11±1.83^a	374.60±39.07^a	112.35±12.01^a	50.67±11.51^a	8.98±0.90^a	6.39±0.67^a
RS200	19.36±2.67^b	178.23±28.49^b	46.32±11.51^b	20.88±7.83^b	2.91±0.51^c	1.71±0.45^c

特基拉芽孢杆菌Bt-RS对盐胁迫环境下香蕉幼苗生长的影响

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冯钲权 ¹^,²^,³ , 邓娜 ¹^,²^,³ , 李启彪 ³ , 孙靖然 ¹^,²^,³ , 胡永华 ²^,³ , 莫坤联 ²^,^*

热带作物学报 | 作物栽培与生理生化 2024,45(8): 1613-1622

收起

热带作物学报 |作物栽培与生理生化 2024 , 45 (8) : 1613 -1622

特基拉芽孢杆菌Bt-RS对盐胁迫环境下香蕉幼苗生长的影响

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冯钲权¹^,²^,³, 邓娜¹^,²^,³, 李启彪³, 孙靖然¹^,²^,³, 胡永华²^,³, 莫坤联²^,^*

作者信息

^1.海南大学生命健康学院，海南海口　570228

^2.中国热带农业科学院热带生物技术研究所/海南热带农业资源研究院/海南省热带农业资源保护与利用重点实验室，海南海口　571101

^3.中国热带农业科学院湛江实验站，广东湛江　524013

通讯作者:

^* 莫坤联（MO Kunlian），E-mail：mokunlian@163.com。

Effect of Bacillus tequilensis Bt-RS on the Growth of Banana Seedling under Salt Stress

Zhengquan FENG¹^,²^,³, Na DENG¹^,²^,³, Qibiao LI³, Jingran SUN¹^,²^,³, Yonghua HU²^,³, Kunlian MO²^,^*

Affiliations

^1.School of Life and Health Sciences, Hainan University, Haikou, Hainan 570228, China

^2.Institute of Tropical Bioscience and Biotechnology, Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences / Hainan Institute for Tropical Agricultural Resources / Key Laboratory of Biology and Genetic Resources of Tropical Crops of Hainan Province, Haikou, Hainan 571101, China

^3.Zhanjiang Experimental Station, Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences, Zhanjiang, Guangdong 524013, China

出版时间: 2024-08-25 doi: 10.3969/j.issn.1000-2561.2024.08.010

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摘要

收起

土壤盐渍化是世界性生态环境问题，是阻碍作物生长并致使农业生产损失的潜在非生物胁迫因子之一。利用植物根际促生菌促进植物生长，提高植物耐盐性，缓解植物所受的非生物胁迫被视为1种新兴有效可行方法。本研究以实验室前期于南海岛礁根际土壤中分离到的1株特基拉芽孢杆菌（Bacillus tequilensis）Bt-RS为研究对象，利用功能培养基对其耐盐特性和耐盐促生性状进行定性定量分析，并进一步通过土壤盆栽实验评价该菌株在盐胁迫环境下对香蕉幼苗生长的影响。研究结果显示：Bt-RS菌株能够在NaCl含量为0~10%的条件下生长，能耐受多种类型盐分，具有产1-氨基环丙烷-1-羧酸（1-aminocyclopropane-1-carboxylate，ACC）脱氨酶能力；在1%~5%的NaCl浓度下能够分泌植物生长素吲哚-3-乙酸（indole-3-acetic acid，IAA），最大产量值为6.4 mg/L。盆栽实验结果显示：在正常条件下，接种菌株Bt-RS的香蕉幼苗相比未接种菌株其株高、叶面积、地上部分鲜重、地下部分鲜重、地上部分干重、地下部分干重分别提高40.30%、93.00%、102.38%、81.08%、65.82%、50.50%；在200 mmol/L盐胁迫环境下，接种菌株Bt-RS的香蕉幼苗与对照组相比在株高、叶面积、地上部分鲜重、地下部分鲜重、地上部分干重、地下部分干重方面分别提高20.55%、65.01%、98.14%、144.93%、87.85%、54.01%；在正常条件与盐胁迫下接种菌株均能显著提高香蕉幼苗的株高、叶面积以及生物量（P<0.05），盐胁迫环境下的实验组与正常条件下的对照组相比在株高和叶面积上均无显著差异，因此通过施用菌株Bt-RS能够有效缓解NaCl对香蕉幼苗的胁迫，促进香蕉幼苗的生长。综上结果表明，特基拉芽孢杆菌Bt-RS具有较强的耐盐性以及产IAA和ACC能力，能够促进香蕉幼苗生长并在盐胁迫环境下显著提高植物耐盐性，可为开发与利用盐渍土提供菌株资源。

关键词

土壤盐渍化 / 植物根际促生菌 / 盐胁迫 / 香蕉幼苗 / 耐盐促生 / 特基拉芽孢杆菌

Abstract

收起

Soil salinization is an ecological environment issue globally and is one of the major abiotic stress factors that cause crop loss worldwide as well as hindering crop productivity. Halotolerant plant growth-promoting rhizobacteria (PGPR) having potential to promote crop growth and increase salt tolerance in crops can be employed to counter this issue in a more effective and eco-friendly way. The recent study aimed to assess the salinity tolerance and growth-promoting capacity of Bacillus tequilenis Bt-RS isolated from the rhizosphere soil of islands in the South China Sea, for assessment, the corresponding media were used for qualitative and quantitative analysis. A pot trail was also conducted to further evaluated its bacterial consortium to promote banana seedlings growth under salinity stress. The results showed that strain Bt-RS could grow well under the condition of 0-10% NaCl content with various types of salts. The strain Bt-RS also possessed 1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid (ACC) deaminase activity along with indole acetic acid (IAA, up to 6.4 mg/L under the condition of 1%-5% NaCl). Base on the pot experiment, the banana seedlings that were inoculated with Bt-RS displayed a significant increase in height, leaf area, fresh weight of above ground and underground, as well as dry weight of above ground and underground (40.30%, 93.00%, 102.38%, 81.08%, 65.82% and 50.50%, respectively) compared to the control group under normal conditions; The 200 mmol/L NaCl-stress treatment significantly increased the growth of banana seedlings in height, leaf area, fresh and dry weight of both above ground and underground by 20.55%, 65.01%, 98.14%, 144.93%, 87.85% and 54.01% respectively, when compared with the control group. The plant height, leaf area and biomass of banana seedlings were significantly increased in both normal conditions and salt stress environment (P<0.05). There was no difference in plant height and leaf area between the experimental group under salt stress environment and the control group under normal conditions, indicating that applying Bt-RS can alleviated the adverse effects of NaCl stress and enhanced banana seedlings growth attributes. In conclusion, the strain B. tequilensis Bt-RS exhibits high salt tolerance and possess the ability to produce IAA and ACC deaminase, making it a valuable strain for improving banana seedling growth and salt tolerance, and also providing resources of strain for developing and utilizing in saline soil.

Key words

soil salinization / plant growth-promoting rhizobacteria / salt stress / banana seeding / salt tolerance and growth promotion / Bacillus tequilensis

引用本文

冯钲权, 邓娜, 李启彪, 孙靖然, 胡永华, 莫坤联. 特基拉芽孢杆菌Bt-RS对盐胁迫环境下香蕉幼苗生长的影响. 热带作物学报, 2024 , 45 (8) : 1613 -1622 . DOI: 10.3969/j.issn.1000-2561.2024.08.010

Zhengquan FENG, Na DENG, Qibiao LI, Jingran SUN, Yonghua HU, Kunlian MO. Effect of Bacillus tequilensis Bt-RS on the Growth of Banana Seedling under Salt Stress[J]. Chinese Journal of Tropical Crops, 2024 , 45 (8) : 1613 -1622 . DOI: 10.3969/j.issn.1000-2561.2024.08.010

正文

收起

土壤盐渍化现象是当下普遍存在的环境问题，是制约农业生产力的主要因素之一^[1]。我国盐渍化土地具有面积大、分布广、类型多等特点^[2]，在内陆及沿海地区均有分布，并呈现出持续扩大的趋势，如海南等沿海地区常因台风天气导致海水倒灌而引发土壤盐渍化，严重影响农业的可持续发展。

盐胁迫对植物生长的影响主要体现在渗透胁迫和离子毒害，进而造成植物代谢紊乱，严重影响植物形态及生理生化功能^[3]，且对土壤理化环境产生一定破坏，不利于作物的可持续发展。植物在盐胁迫环境下最先遭受渗透胁迫，高浓度离子环境造成植物细胞内外渗透压失衡，植物体内水分流失且难以吸收水分，从而出现生理性干旱，抑制根茎成长^[4]，导致叶片枯萎。盐胁迫环境下大量Na⁺与Cl^–在植物组织内积累，导致Na⁺/K⁺比值失衡，抑制植物对其他矿物质元素和必需营养物质的吸收^[5]，并积累大量的活性氧自由基于植物体内，过量的活性氧在植物体内造成蛋白质、DNA、脂质的氧化损伤，抑制植物生长^[6]。

香蕉（Musa spp.）作为热带地区的重要经济作物，是我国具有国际竞争力的优势农产品之一。香蕉属于盐敏感作物，蒋晶^[7]研究发现香蕉幼苗在盐胁迫环境下会导致其生长缓慢，叶片萎靡并出现灼烧状褐斑等。随着海水倒灌等因素，土壤盐渍化问题不断扩大，土壤中过量的盐分会导致香蕉生长缓慢，造成香蕉产量的严重损失^[8]，严重影响香蕉产业发展。

由于土壤盐渍化对于可利用耕地和作物的危害日益加剧，盐渍土的改良与利用问题亟需解决。治理土壤盐渍化措施主要有修复盐渍土、基因育种和应用微生物菌剂3种。传统治理盐渍土分为物理和化学2种方法，但施用化学改良剂、水利工程改良和更改灌溉方式等方法存在工程量大，成本高以及可能改变生态平衡等问题^[9]。选育耐盐品种也是改善香蕉在盐胁迫环境下生长的一个关键途径^[10]，但通过杂交育种或基因改造的方法提高植物耐盐性复杂且耗时耗力。近年来有研究提出施加微生物菌剂改善盐渍地土壤是一项经济且环保的理想方法，通过利用植物根际促生菌与植物互作，增强植物应对非生物胁迫逆境的能力、改善土壤生态环境^[11]。应用微生物菌剂诱导植物抗逆促生可以避免繁琐且高成本的工程操作，已经成为近年的研究热点^[12]，具有极大的研究与应用潜力。

植物促生菌（plant growth promoting rhizobacteria，PGPR）是指定殖于植物根际土壤中，具有促进植物生长特性，抑制病原菌及改善土壤环境的有益微生物^[13-14]。盐胁迫环境下植物对土壤中氮、磷、钾等养分的吸收和积累减少，而PGPR能够通过自身特性改善植物的营养吸收和转运^[15]，促进植物生长。PGPR通常具有产生植物生长素吲哚-3-乙酸（IAA）的能力，促进植物根系生长以便吸收土壤中养分^[16]。此外，PGPR还具有固氮、解钾、溶磷、产生铁载体等能力^[17]，提高土壤中速效氮、速效钾、速效磷等养分含量以便植物吸收。植物在胁迫环境下通常会释放过量的乙烯，低浓度的乙烯可以促进植物生长，但过量乙烯的存在会抑制植物生长甚至使之死亡^[18]，PGPR通过产生氨基环丙烷羧酸（ACC）脱氨酶降解植物在胁迫环境产生的乙烯前体—氨基环丙烷羧酸（ACC），从而降低植物体内乙烯含量^[19]，提高植物抗逆性。

芽孢杆菌属（Bacillus）是一类产芽孢的杆状革兰氏阳性菌，在自然环境中广泛存在，具有优良的抗逆能力且多数无毒无害可防可控。芽孢杆菌能够产生多种抗菌素维持自身的生态优势位，逐渐在植物根际生态位中成为优势菌株^[20]。部分芽孢杆菌因其能够缓解盐胁迫的有害影响，调节促进植物生长，成为当下新兴的研究热点，如安婉宁^[21]应用海洋生境贝莱斯芽孢杆菌CT2628在180 mmol/L盐胁迫下可以降低植物膜透性，通过提高植物抗氧化酶活性来诱导水稻耐盐；ALI等^[22-23]分别在0、300、600、900 mmol/L盐胁迫环境下接种苏云金芽孢杆菌（B. thuringiensis）PM25和蕈状芽孢杆菌（B. mycoides）PM35，能够提高玉米的茎部与根部生物量。芽孢杆菌属在农业生产中有重要地位，多种芽孢杆菌PGPR早已广泛应用于小麦^[5]、辣椒^[20]、棉花^[24]等作物的促生、抗逆、抗病上，但关于特基拉芽孢杆菌（B. tequilensis）及其应用在香蕉上的研究较少，因此本研究在盐胁迫环境下将特基拉芽孢杆菌Bt-RS接种于香蕉幼苗根系，评价其在盐胁迫环境下对香蕉幼苗耐盐性影响，为探索新菌种利用及盐渍土资源开发利用提供有效方法。

海洋环境复杂多样，具有丰富且未开发的微生物资源，因海洋生境的特殊性，海洋微生物通常具有耐受极端环境的能力。本研究以实验室前期从岛礁根际土壤环境分离出的一株特基拉芽孢杆菌Bt-RS为研究对象，初步探究该菌的耐盐特性及在盐胁迫环境下对香蕉幼苗的促生效果，为后续深入探究其耐盐促生机制和微生物菌剂研发提供参考。

1　材料与方法

收起

1.1　材料

1.1.1　供试菌株

供试菌株为特基拉芽孢杆菌（Bacillus tequilensis）Bt-RS，由本实验室前期于南海永兴岛礁银毛树根际土壤中分离并保存。枯草芽孢杆菌WB00和杀鱼爱德华式菌2F为本课题组保存的菌株，作为耐盐特性实验对照菌株。

1.1.2　供试香蕉品种

供试香蕉品种为巴西蕉（Musa AAA Cavendish var. Brazil），其组培袋育苗购自中国热带农业科学院组培中心，选取生长期相近，株高约10 cm的幼苗。盆栽实验种植于中国热带农业科学院热带生物技术研究所三楼平台。

1.1.3　培养基

LB培养基：胰蛋白胨10 g，酵母粉5 g，NaCl 10 g，pH 7.0±0.2，无菌蒸馏水定容至1 L，固体培养基添加琼脂粉20 g，于121 ℃高压灭菌20 min；基础发酵培养基：豆粕粉40 g，玉米粉15 g，糖蜜15 g，K₂HPO₄ 1 g，KH₂PO₄ 1 g，无水CaCl₂ 2 g，无菌蒸馏水定容至1 L，于121 ℃高压灭菌20 min；IAA检测培养基：将色氨酸溶于超纯水，0.22 μm除菌过滤器过滤后加入灭菌后的LB培养液，使色氨酸终浓度为100 mg/L；DF培养基：KH₂PO₄ 4 g，Na₂HPO₄ 6 g，MgSO₄·7H₂O 0.2 g，FeSO₄·7H₂O 0.2 g，葡萄糖2 g，葡萄糖酸2 mL，柠檬酸2 g，微量元素（MoO₃ 10 mg，H₃BO₃ 10 mg，MnSO₄·H₂O 11.19 mg，CuSO₄·5H₂O 78.22 mg，ZnSO₄·7H₂O 124.6 mg，溶于100 mL无菌蒸馏水）100 μL，pH 7.0±0.2，无菌蒸馏水定容至1 L，固体培养基添加20 g琼脂粉，于121 ℃高压灭菌20 min；ADF培养基：将ACC（氨基环丙烷羧酸）溶于超纯水，用0.22 μm滤膜过滤除菌，加入不含（NH₄）₂SO₄且预先灭菌的DF培养基中，pH 7.0±0.2，使ACC的终浓度为3.0 mmol/L。

1.2　方法

1.2.1　发酵液处理

种子液制备：将活化后的Bt-RS菌株接种于LB培养液，于37 ℃，200 r/min条件培养过夜。发酵液制备：将Bt-RS种子液以1∶100比例接入基础发酵培养基内，于37 ℃，200 r/min条件下发酵48 h，培养菌液浓度至10⁸ CFU/mL。

1.2.2　菌株Bt-RS耐盐特性

（1）菌株耐盐性。从LB培养基上挑取活化后的菌株转接至盐浓度分别为0、2%、4%、6%、8%、10%的LB培养液中，在37 ℃、200 r/min条件下培养，每隔2 h，检测OD₆₀₀值，使用高通量微生物生长曲线分析仪Bioscreen FP-1100-C绘制生长曲线。

（2）不同NaCl浓度对菌株形态的影响。通过对菌株在不同盐浓度平板上的生长状态进行评估，以枯草芽孢杆菌WB00为对照菌株。菌株接种于LB培养液，于37 ℃，200 r/min条件下培养过夜。取出菌液，调整菌液OD₆₀₀值为0.5，再分别稀释成5个浓度梯度（10^–1、10^–2、10^–3、10^–4、10^–5），各取1 μL点接至含有不同盐浓度（1%、3%、5%）的LB平板上，于37 ℃倒置培养1 d，观察其生长状态。

（3）不同类型无机盐对菌株生长的影响。向无NaCl的LB培养基中分别添加NaNO₃、NaNO₂、Na₂CO₃、NaHCO₃、NaCl、KCl、MgCl₂、CaCl₂等8种无机盐，控制培养基中添加Na⁺或Cl^-浓度均为0.17 mol/L。以1%接种量接种Bt-RS菌株，于37 ℃，180 r/min摇床培养24 h后检测菌液OD₆₀₀值，评估菌株对不同类型无机盐的耐受能力。

1.2.3　菌株Bt-RS促生潜能

（1）产ACC脱氨酶定性检测。参考孙建光等^[25]的方法，将Bt-RS菌株稀释涂布于ADF固体培养基上，于28~30 ℃倒置培养2~5 d，观察菌株生长状态，若能在ADF平板上生长，则表示该菌株能够利用ACC作为氮源，具有产ACC脱氨酶的能力。

（2）产IAA能力测定。配置IAA标准曲线：将浓度为100 mg/L IAA溶液稀释成0、10、20、30、40、50 mg/L六个浓度梯度，分别加入Salkowski显色液，暗处避光放置30 min显色，测定OD₅₃₀值，以IAA浓度为X轴，OD₅₃₀值为Y轴绘制标准曲线。将Bt-RS菌株取100 μL接种至含有100 mg/L色氨酸的5 mL LB培养液中，37 ℃，200 r/min培养48 h后在8000 r/min的条件下离心10 min，取上清液加入等体积Salkowski显色液，暗处避光放置30 min显色，测定OD₅₃₀值。以不加菌的含色氨酸LB培养液作空白对照（CK），按照上述方法，通过在含色氨酸LB培养液中添加不同浓度的NaCl（1%、3%、5%）测定盐胁迫对菌株产IAA能力的影响。

1.2.4　菌株Bt-RS在盐胁迫环境下对香蕉幼苗促生作用

（1）盆栽实验。采用盆栽土培模式，共设4个处理，每个处理10株重复。施加Bt-RS发酵液为实验组，施加基础发酵培养基作为对照组，浇灌200 mmol/L NaCl溶液以模拟盐胁迫环境。香蕉幼苗移栽定植7 d后，实验组每隔7 d浇灌1次Bt-RS发酵液，每次50 mL/株，连续7次；第一次浇灌发酵液5 d后开始添加NaCl溶液，每隔2 d添加1次NaCl溶液，每次100 mL/株；对照组浇灌相应的发酵培养基和清水。各处理组如下：

① CK0：清水+发酵培养基；RS0：清水+Bt-RS发酵液；

② CK200：200 mmol/L NaCl+发酵培养基；RS200：200 mmol/L NaCl+Bt-RS发酵液。

（2）生长指标记录。首次浇灌盐水记为0 d，每7 d测量株高，在实验末期测量处理组与对照组香蕉苗株高、叶长、叶宽、及生物量（鲜重、干重）指标。各指标测量标准如下：①株高，基部到最新完全展开叶与株茎的交叉点距离^[26]；②叶长，最新完全展开叶的最长部位距离；③叶宽，最新完全展开叶的最长部位距离；④叶面积=叶长×叶宽×0.75^[27]；⑤植物生物量鲜重，取地上部分（叶、茎）和地下部分（根）分别用清水清洗干净后称量；干重，取地上、地下部分于烘箱105 ℃杀青30 min，75 ℃烘干至恒重后称量。

1.3　数据处理

使用Excel、SPSS 23软件进行实验数据处理与差异显著性分析，采用Graphpad prism 8软件绘制图表。

2　结果与分析

收起

2.1　菌株Bt-RS耐盐特性

2.1.1　菌株耐盐能力的测定

Bt-RS在不同NaCl环境中的生长情况如图1所示，在0~10%盐浓度条件下菌株均能生长，随着培养基中盐浓度增加，菌株Bt-RS的生长逐渐受到抑制。菌株在盐浓度0~6%时停滞期较为短暂，约2 h；而在8%和10%盐浓度时停滞期将近4 h，表明菌株需要更长的时间去适应高浓度的盐环境。停滞期后，菌株进入指数生长期，菌株迅速生长，无盐时菌株约在16 h进入生长稳定期，2%盐浓度时约在26 h进入生长稳定期，4%盐浓度时约在20 h进入稳定期。结果表明菌株Bt-RS能够在0~10%的盐浓度下生长，在0~6%盐浓度环境中生长较好，在8%~10%盐度下生长变缓，其耐盐阈值约在10%~12%盐度具有良好的耐盐能力。

2.1.2　不同NaCl浓度对菌株形态的影响

以枯草芽孢杆菌WB00作为对照，比较2株菌株在不同盐浓度LB平板上菌株生长状态，评价其耐盐能力。在3% NaCl处理下，2株芽孢杆菌生长状况相近，但在中度盐胁迫（5% NaCl）处理下，菌株Bt-RS长势良好，优于WB00（图2），结果表明Bt-RS具有良好的耐盐性。

2.1.3　不同类型无机盐对菌株生长的影响

不同类型无机盐对菌株Bt-RS生长影响如图3所示，菌株Bt-RS在含有NaNO₂（1.730±0.02）、NaNO₃（1.910±0.01）、KCl（2.085±0.03）、MgCl₂（2.017±0.02）培养基中培养24 h后，其生长量与NaCl（2.024±0.09）培养基的生长量差异不显著，说明Bt-RS能够耐受并利用多种类型无机盐。但在含有Na₂CO₃和NaHCO₃的培养基中Bt-RS的OD₆₀₀值分别仅为0.079±0.01、0.071±0.01，说明这2种无机盐对菌株Bt-RS生长具有明显的抑制作用。

在含有CaCl₂的培养基中，菌株Bt-RS的OD₆₀₀值为2.322±0.16，生长量显著优于NaCl培养基（P<0.05），说明CaCl₂能有效促进菌株生长，可能是因为Ca⁺是多种酶的激活剂，并对细胞通透性起到影响，从而促进菌株生长。综上表明，菌株Bt-RS可以耐受多种类型的盐分，具有在盐渍土环境下生存的潜力。

2.2　菌株产ACC脱氨酶定性检测

胁迫环境下植物自身产生过量乙烯加速衰老，PGPR可以通过产生ACC脱氨酶降解植物体内乙烯合成前体ACC（氨基环丙烷羧酸），从而缓解植物衰老死亡^[18]。将菌株涂布于ADF培养基上，培养2 d后，发现菌株Bt-RS能够在以ACC为唯一氮源的ADF培养基平板上生长出明显的菌落，而菌株2F在ADF培养基上不生长（图4），表明菌株Bt-RS能够利用ACC作为唯一氮源生长，可能是由于产生ACC脱氨酶将植物体内乙烯合成前体ACC降解为氨和α-丁酮酸。

2.3　菌株在盐胁迫环境下产IAA能力

IAA是可受PGPR调控的重要植物生长激素，可促进植物根系发育和改变根系结构^[16]。本研究通过Salkowski显色法检测菌株在不同NaCl浓度下的产IAA能力。结果如图5所示，在含有100 mg/L色氨酸的正常（1% NaCl）LB培养液培养2 d后，菌株Bt-RS产生的IAA含量为6.4 mg/L，而在3%、5% NaCl浓度下，其分泌IAA含量分别下降至4.63 mg/L和4.03 mg/L。菌株产生IAA能力随着盐浓度增加而降低，但在中度盐胁迫（5% NaCl）下仍能够产生生长素，表明菌株Bt-RS在盐胁迫环境下具备促生的潜能。

2.4　菌株Bt-RS在盐胁迫环境下对香蕉幼苗的促生作用

综上结果表明，菌株Bt-RS可能通过自身产IAA和ACC脱氨酶等方式促进植物在盐胁迫环境下生长并缓解植物所受盐胁迫的影响。为进一步证明菌株对植物耐盐促生作用，通过施加200 mmol/L NaCl溶液模拟盐渍土评估盐胁迫环境下Bt-RS提高香蕉幼苗的耐盐性及促生作用。如图6所示，盐胁迫（CK200）抑制植株生长发育，造成叶片枯萎，叶面积变小，根系吸水困难而停止生长。而施加Bt-RS菌发酵液实验组（RS200）明显缓解了盐胁迫症状，根部侧根数量显著多于对照组（CK200），RS200处理组叶面积显著大于CK200对照组，表明菌株Bt-RS能够有效缓解植物所受盐胁迫危害。

由表1可见，200 mmol/L盐胁迫下对照组（CK200）香蕉幼苗的株高、叶面积、地上部分鲜重、地下部分鲜重、地上部分干重、地下部分干重显著下降（P<0.05），与CK0相比分别降低了22.60%、44.35%、57.88%、73.53%、71.40%、73.88%。在无盐胁迫的环境下，接种Bt-RS菌株后的香蕉幼苗（RS0）生长状态优于未接种对照（CK0），在株高、叶面积、地上部分鲜重、地下部分鲜重、地上部分干重、地下部分干重分别提高了40.30%、93.00%、102.38%、81.08%、65.82%、50.50%。在盐胁迫环境下接种菌株Bt-RS后（RS200），香蕉幼苗的生长状态明显优于未接种菌株的盐胁迫对照组（CK200），在株高、叶面积、地上部分鲜重、地下部分鲜重、地上部分干重、地下部分干重方面分别提高了20.55%、65.01%、98.14%、144.93%、87.85%、54.01%。

以上结果表明，在无盐胁迫环境下，接种Bt-RS菌株促进了香蕉幼苗生长指标，增加其生物量，在盐胁迫环境（200 mmol/L NaCl）下施加Bt-RS菌株能够缓解香蕉幼苗所受盐胁迫影响，使其生长恢复至与正常环境下一致。

3　讨论

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本研究的菌株Bt-RS为分离自南海永兴岛岛礁银毛树根际土壤的1株特基拉芽孢杆菌，独特的海洋环境，使海洋微生物能够耐受高盐、高温等极端环境，并产生许多陆地微生物所无法产生的生物活性物质^[28]，因此海洋微生物具有巨大的开发利用潜能。

盐渍土壤中Na⁺和Cl^-是主要的盐分离子，此外土壤中总可溶性盐的组成中有钠、钙、镁，及氯化物、碳酸盐、硝酸盐等多种成分^[29]。部分耐盐菌株可以在不同类型盐分中生长，而有的菌株只能在NaCl下生存，因此检测不同类型盐分对菌株生长的影响是评估菌株能否应用于实际的关键。本研究先对菌株Bt-RS进行耐盐能力研究，发现菌株Bt-RS能够在10% NaCl的环境生长，对NaNO₂、NaNO₃、KCl、MgCl₂、CaCl₂多种盐分具有耐受性，与常华等^[30]对耐盐菌研究结果一致，证明菌株Bt-RS除了可以耐受NaCl环境外，还对多种不同类型无机盐具有耐受性，具有在盐渍土环境中生长的能力。

盐胁迫作为一种主要的非生物胁迫，是农业可持续发展的关键问题之一^[31]，盐胁迫主要影响植物发育和生长生理形态的过程^[32]，抑制植物根系生长，通过离子毒害造成植物代谢紊乱，最直观地表现在植物生长指标及生物量的降低，香蕉苗期是香蕉生长整个生育期的基础^[33]，也是对盐胁迫的敏感时期，促进香蕉苗期生长是收获高产的关键。盆栽实验结果表明，菌株Bt-RS能够在盐胁迫环境（200 mmol/L NaCl）下有效促进香蕉幼苗生长，对香蕉幼苗株高、叶面积、根系鲜重等生物量均有显著的增益与改善作用，能够有效地缓解NaCl对香蕉幼苗的胁迫危害，使植株生长恢复至与正常环境下一致。CHEN等^[34]应用解淀粉芽孢杆菌SQR9在100 mmol/L NaCl胁迫下促进拟南芥和玉米幼苗生长，显著提高生物量指标；崔荣强等^[35]从海洋生境中分离出一株具有解钾、解磷能力的芽孢杆菌T28，能够在盐胁迫环境下提高番茄苗的叶绿素含量，并调节脯氨酸来诱导番茄苗抗盐。

植物根际促生菌（PGPR）能促进植株生长，改善土壤养分并提高植物诱导抗逆系统^[36]。大量研究证明PGPR能够通过产生植物生长素（IAA），分泌ACC脱氨酶等多种活性物质提高植物耐盐性，并将土壤中难溶性氮、磷、钾转为易吸收的可溶性氮、磷、钾来促进植株生长。IAA能够促进植物根系生长，是调节植物生长发育的重要信号物质，但是在胁迫环境下植物自身合成IAA能力受阻，通过促生菌合成外源IAA的介入能够促进植物根系、幼苗生长，提高植物抗胁迫能力^[37]，韦廷舟等^[38]从盐矿区分离出1株产IAA的运动芽孢杆菌，在0~4% NaCl条件下IAA产量为6.8~2.15 mg/L，能够在100 mmo/L盐胁迫下促进油菜种子萌发与幼苗生长。此外，胁迫环境下，PGPR通过分泌ACC脱氨酶将植物体内乙烯合成前体氨基环丙烷羧酸（ACC）降解，以缓解胁迫环境下植物体内代谢紊乱。KAMAL等^[39]在盐胁迫环境下接种具有ACC脱氨酶活性的特基拉芽孢杆菌SEN15N，显著改善盐胁迫下花生产量。本研究通过试验验证菌株Bt-RS能够在1%~5% NaCl环境下产生IAA，最高产量为6.4 mg/L，此外能够以ACC作为氮源生长，初步定性为产ACC脱氨酶阳性菌，上述结果与他人相关研究一致，由此可见，菌株Bt-RS具备在盐胁迫环境下促生的潜能。除了常规的生长指标外，植物幼苗抗氧化酶活性、渗透调节物质、丙二醛等指标均能反映植物耐盐性变化，此外，添加外源微生物对植物根际土壤微生物群落的影响及对土壤理化性质的影响也值得注意，耐盐促生菌被证明在盐胁迫环境下能够提高胞外多糖（EPS）产量，在植物根系形成生物保护膜，隔绝外界高盐环境并调控水分，保持根际土壤水分^[40]。上述表明，微生物提高植物对盐分耐受性的作用机制不是单一的，如枯草芽孢杆菌yl923^[41]同时兼具解磷、解钾、产IAA、产ACC脱氨酶和产铁载体的能力，在盐胁迫环境下能够显著促进玉米生长。因此在后续研究中，本课题组将对菌株提升香蕉幼苗耐盐性的多种机制进一步探索。

综上所述，菌株特基拉芽孢杆菌Bt-RS能耐受10% NaCl浓度及多种盐分条件，可利用ACC作为氮源生长，能够在盐胁迫环境下产IAA，因此菌株具备盐胁迫环境下促生以及有效缓解植物所受盐胁迫的能力。通过盆栽实验进一步验证了菌株Bt-RS在200 mmol/L盐胁迫下能够显著促进香蕉幼苗生长并缓解盐胁迫危害。说明该菌在盐胁迫环境下能够促进植物生长，有望在将来用于微生物肥料的制备，但实际生产中存在更加复杂多变的自然环境，因此还有待在大田环境下评估该菌株耐盐促生效果，且关于其诱导植物抗逆和促生机制还需进一步探究。

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参考文献引证文献

排序方式：

[1]

HA-TRAN

D M

, NGUYEN

T T M

, HUNG

S H

, HUANG

C C

. Roles of plant growth-promoting rhizobacteria (PGPR) in stimulating salinity stress defense in plants: a review[J]. International Journal of Molecular Sciences, 2021, 22(6): 3154.

[2]

杨劲松. 中国盐渍土研究的发展历程与展望[J]. 土壤学报, 2008(5): 837-845.

YANG

J S

. Development and prospect of the research on salt-affected soils in China[J]. Acta Pedologica Sinica, 2008(5): 837-845. (in Chinese)

[3]

HASSAN

, AMJAD

S F

, SALEEM

M H

, YASMIN

, IMRAN

, RIAZ

, ALI

, JOYIA

F A

, AHMED

, ALI

, ABDULLAH ALSAHLI

, NASSER ALYEMENI

. Foliar application of ascorbic acid enhances salinity stress tolerance in barley (Hordeum vulgare L.) through modulation of morpho-physio-biochemical attributes, ions uptake, osmo-protectants and stress response genes expression[J]. Saudi Journal of Biological Sciences, 2021, 28(8): 4276-4290.

[4]

MANISHANKAR

, WANG

, KÖSTER

, ALATAR

A A

, KUDLA

. Calcium signaling during salt stress and in the regulation of ion homeostasis[J]. Journal of Experimental Botany, 2018, 69(17): 4215-4226.

[5]

, SHABALA

, BARRY

. Ability of leaf mesophyll to retain potassium correlates with salinity tolerance in wheat and barley[J]. Physiol Plantarum, 2013, 149(4): 515-527.

[6]

KASHIF

M H

, TANG

D F

, LI

Z Q

, WEI

, LIANG

Z C

, CHEN

. Comparative cytological and gene expression analysis reveals potential metabolic pathways and target genes responsive to salt stress in kenaf (Hibiscus cannabinus L.)[J]. Journal of Plant Growth Regulation, 2020, 39(1): 1-16.

[7]

蔣晶. 盐胁迫对巴西蕉幼苗生长和生理影响及其钙的缓解效应研究[D]. 海口: 海南大学, 2011.

JIANG

. Growth and physiologic effects of brazil banana seedlings under salinity stress and alleviatory effect of calcium[D]. Haikou: Hainan University, 2011. (in Chinese)

[8]

WEI

J Y

, LIU

D B

, LIU

Y W

, WEI

S X

. Physiological analysis and transcriptome sequencing reveal the effects of salt stress on banana (Musa acuminata cv. BD) Leaf[J]. Frontiers in Plant Science, 2022, 13: 822838.

[9]

EGAMBERDIEVA

, WIRTH

, BELLINGRATH-KIMURA

S D

, MISHRA

, ARORA

N K

. Salt-tolerant plant growth promoting rhizobacteria for enhancing crop productivity of saline soils[J]. Frontiers in Microbiology, 2019, 18(10): 2791.

[10]

GOMES

, WILLADINO

, MARTINS

, TRC, SILVA

. Genotypes of banana (Musa spp.) under saline stress: tolerance and sensitivity[J]. The International Journal on Banana and Plantain, 2001, 11(2): 14-18.

[11]

GAMALERO

, BERTA

, MASSA

, GLICK

B R

, LINGUA

. Interactions between Pseudomonas putida UW4 and Gigaspora rosea BEG9 and their consequences for the growth of cucumber under salt-stress conditions[J]. Journal of Applied Microbiology, 2010, 108(1): 236-245.

[12]

KUMAR ARORA

, FATIMA

, MISHRA

, VERMA

, BHATTACHARYA

, VERMA

, MISHRA

, BHARTI

. Halo-tolerant plant growth promoting rhizobacteria for improving productivity and remediation of saline soils[J]. Journal of Advanced Research, 2020, 11(26): 69-82.

[13]

潘晶, 黄翠华, 彭飞, 尤全刚, 刘斐耀, 薛娴. 植物根际促生菌诱导植物耐盐促生作用机制[J]. 生物技术通报, 2020, 36(9): 75-87.

PAN

, HUANG

C H

, PENG

, YOU

Q G

, LIU

F Y

, XUE

. Mechanisms of salt tolerance and growth promotion in plant induced by plant growth-promoting rhizobacteria[J]. Biotechnology Bulletin, 2020, 36(9): 75-87. (in Chinese)

[14]

ETESAMI

, MAHESHWARI

D K

. Use of plant growth promoting rhizobacteria (PGPRs) with multiple plant growth promoting traits in stress agriculture: action mechanisms and future prospects[J]. Ecotoxicology and Environmental Safety, 2018, 156(7): 225-246.

[15]

ETESAMI

, BEATTIE

G A

. Halophytes for plant growth-promoting halotolerant bacteria to enhance the salinity tolerance of non-halophytic crops[J]. Frontiers in Microbiology, 2018, 9: 1-20.

[16]

穆文强, 康慎敏, 李平兰. 根际促生菌对植物的生长促进作用及机制研究进展[J]. 生命科学, 2022, 34(2): 118-127.

W Q

, KANG

S M

, LI

P L

. Advances in rhizosphere growth-promoting bacteria function on plant growth facilitation and their mechanisms[J]. Chinese Bulletin of Life Sciences, 2022, 34(2): 118-127. (in Chinese)

[17]

ISLAM

, YASMEEN

, ARIF

M S

, ALI

, HAMEED

, ZHOU

. Plant growth promoting bacteria confer salt tolerance in Vigna radiata by up-regulating antioxidant defense and biological soil fertility[J]. Plant Growth Regulation, 2016, 80(1): 23-36.

[18]

BERNARD

, GLICK. Bacteria with ACC deaminase can promote plant growth and help to feed the world[J]. Microbiological Research, 2014, 169(1): 30-39.

[19]

OROZCO-MOSQUEDA

, GLICK

B R

, SANTOYO

. ACC deaminase in plant growth-promoting bacteria (PGPB): an efficient mechanism to counter salt stress in crops[J]. Microbiological Research, 2020, 235(5): 126439.

[20]

王文飞. 萎缩芽孢杆菌WU-9与辣椒互作缓解盐胁迫机制及菌株相关功能基因解析[D]. 石河子: 石河子大学, 2022.

WANG

W F

. The salt stress alleviating mechanism of pepper via the interaction with Bacillus atrophicus WU-9 and its functional genes analysis[D]. Shihezi: Shihezi University, 2022. (in Chinese)

[21]

安婉宁. 海洋生境贝莱斯芽孢杆菌CT2628的促生长抗逆作用研究[D]. 杭州: 浙江农林大学, 2021.

W N

. Plant growth-promoting and stress tolerance effect of marine habitat Bacillus velezensis CT2628[D]. Hangzhou: Zhejiang A & F University, 2021. (in Chinese)

[22]

ALI

, HAFEEZ

, AHMAD

, JAVED

M A

, SUMAIRA, AFRIDI

M S

, DAWOUD

T M

, ALMAARY

K S

, MURESAN

C C

, MARC

R A

, ALKHALIFAH

D H M

, SELIM

. Bacillus thuringiensis PM25 ameliorates oxidative damage of salinity stress in maize via regulating growth, leaf pigments, antioxidant defense system, and stress responsive gene expression[J]. Frontiers in Plant Science, 2022, 28(13): 921668.

[23]

ALI

, WANG

, SALEEM

M H

, AZEEM

M A

, AFRIDI

M S

, NADEEM

, GHAZAL

, BATOOL

, QAYYUM

, ALATAWI

, ALI

. Bacillus mycoides PM35 reinforces photosynthetic efficiency, antioxidant defense, expression of stress-responsive genes, and ameliorates the effects of salinity stress in maize[J]. Life, 2022, 12(2): 219.

[24]

SALEEM

, IQBAL

, AHMED

, AHMAD

. Phytobeneficial and salt stress mitigating efficacy of IAA producing salt tolerant strains in Gossypium hirsutum[J]. Saudi Journal of Biological Sciences, 2021, 28(9): 5317-5324.

[25]

孙建光, 胡海燕, 刘君, 陈倩, 高淼, 徐晶, 周义清. 农田环境中固氮菌的促生潜能与分布特点[J]. 中国农业科学, 2012, 45(8): 1532-1544.

SUN

J G

, HU

H Y

, LIU

, CHEN

, GAO

, XU

, ZHOU

Y Q

. Growth promotion potential and distribution features of nitrogen-fxing bacteria in field environments[J]. Scientia Agricultura Sinica, 2012, 45(8): 1532-1544. (in Chinese)

[26]

于志强. 水分和盐分胁迫对香蕉生长、营养与生理特征的影响[D]. 广州: 华南农业大学, 2017.

Z Q

. Effects of water stress and salt stress on the growth, nutritional and physiological characteristics of banana[D]. Guangzhou: South China Agriculture University, 2017. (in Chinese)

[27]

王艳琼, 魏守兴. 不同种植模式对巴西香蕉生长及产量的影响[J]. 热带农业科学, 2009, 29(4): 20-25.

WANG

Y Q

, WEI

S X

. Effect of different planting patterns on the growth and yield of Brazil banana[J]. Chinese Journal of Tropical Agriculture, 2009, 29(4): 20-25. (in Chinese)

[28]

郑明刚, 刘峰, 王玲, 郑立, 臧家业. 海洋微生物资源的开发与应用研究[J]. 海洋开发与管理, 2010, 27(9): 76-79.

ZHENG

M G

, LIU

, WANG

, ZHENG

, ZANG

J Y

. Research on the development and application of marine microbial resources[J]. Ocean Development and Management, 2010, 27(9): 76-79. (in Chinese)

[29]

RENGASAMY

. Soil processes affecting crop production in salt-affected soils[J]. Functional Plant Biology, 2010, 37(7): 613-620.

[30]

常华, 李海红, 邹含情, 安凤秋. 一株耐盐菌NY1的耐盐特性及机理初探[J]. 中国沼气, 2022, 40(4): 69-74.

CHANG

, LI

H H

, ZOU

H Q

, AN

F Q

. Research on salt tolerance and mechanism of a salt-tolerant strain NY1[J]. China Biogas, 2022, 40(4): 69-74. (in Chinese)

[31]

SHABALA

, CUIN

T A

. Potassium transport and plant salt tolerance[J]. Physiologia Plantarum, 2008, 133(4): 651-669.

[32]

BISTGANI

Z E

, HASHEMI

, DACOSTA

, CRAKER

, MAGGI

, MORSHEDLOO

M R

. Effect of salinity stress on the physiological characteristics, phenolic compounds and antioxidant activity of Thymus vulgaris L. and Thymus daenensis Celak[J]. Industrial Crops and Products, 2019, 135: 311-320.

[33]

宁瑜, 张玉, 朱志堂, 禤维言, 冯斗. 不同减量施肥对香蕉幼苗生长的影响[J]. 农业研究与应用, 2017(2): 9-12.

NING

, ZHANG

, ZHU

Z T

, XUAN

W Y

, FENG

. The effect of different reduced fertilization on the growth of banana seedlings[J]. Agriculture Research and Application, 2017(2): 9-12. (in Chinese)

[34]

CHEN

, LIU

, WU

, ZHANG

, SHEN

, ZHANG

. Beneficial rhizobacterium Bacillus amyloliquefaciens SQR9 Induces plant salt tolerance through spermidine production[J]. Molecular Plant-Microbe Interactions, 2017, 30(5): 423-432.

[35]

崔荣强, 张久明, 马湘君, 李闯, 田黎. 海洋生境芽孢杆菌(Bacillus sp.)T28菌株对番茄生长的多功能促进作用[J]. 植物生理学报, 2015, 51(11): 1855-1860.

CUI

R Q

, ZHANG

J M

, MA

X J

, LI

, TIAN

. Multifunction of marine Bacillus sp. strain T28 on tomato growthpromoting[J]. Plant Physiology Journal, 2015, 51(11): 1855-1860.(in Chinese)

[36]

张婷, 张玲, 张莹莹, 郑然, 项福星, 李洁. 植物促生菌在农作物上的应用进展(综述)[J]. 河北农业科学, 2022, 26(3): 33-37.

ZHANG

, ZHANG

Y Y

, ZHENG

, XIANG

F X

, LI

. Application progress of plant growth promoting bacteria in crops[J]. Journal of Hebei Agricultural Sciences, 2022, 26(3): 33-37. (in Chinese)

[37]

HASSAN

T U

, BANO

, NAZ

, HUSSAIN

. Bacillus cereus: a competent plant growth promoting bacterium of saline sodic field[J]. Pakistan Journal of Botany, 2018, 50: 1029-1037.

[38]

韦廷舟, 文怡, 王超, 陈云, 张泽颖, 范青锋, 胡琬新, 龙治坚, 江世杰. 一株产IAA芽孢杆菌ST37对油菜的耐盐促生作用[J]. 江苏农业科学, 2023, 51(6): 210-215.

WEI

T Z

, WEN

, WANG

, CHEN

, ZHANG

Z Y

, FAN

Q F

, HU

W X

, LONG

Z J

, JIANG

S J

. Study on salt-tolerance and growth-promoting effect of an IAA-producing Bacillus ST37 on Brassica napus[J]. Jiangsu Agricultural Sciences, 2023, 51(6): 210-215. (in Chinese)

[39]

KAMAL

K P

, DEY

, SHERATHIA

D N

, DEVIDAYAL, MANGALASSERY

, KUMAR

, RUPAPARA

R B

, MANDALIYA

, RAWAL

, BHADANIA

R A

, THOMAS

, PATEL

, MAIDA

, NAWADE

B D

, AHMAD

, DASH

, RADHAKRISHNAN

. Alleviation of salinity stress in peanut by application of endophytic bacteria[J]. Frontiers in Microbiology, 2021, 12: 650771.

[40]

AL-TURKI

, MURALI

, OMAR

A F

, REHAN

, SAYYED

R Z

. Recent advances in PGPR-mediated resilience toward interactive effects of drought and salt stress in plants[J]. Frontiers in Microbiology, 2023, 14: 1214845.

[41]

郭彦钊, 杜春辉, 于烽, 黄敏刚, 齐飞. 旱区盐生植物根际促生菌的分离鉴定及其干旱、盐胁迫下促生特性[J]. 微生物学报, 2023, 63(2): 610-622.

GUO

Y Z

, DU

C H

, YU

, HUANG

M G

, QI

. Isolation and identification of growth-promoting bacteria in halophyte rhizosphere in arid region and their growth-promoting characteristics under drought and salt stresses[J]. Acta Microbiologica Sinica, 2023, 63(2): 610-622. (in Chinese)

2024年第45卷第8期

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doi: 10.3969/j.issn.1000-2561.2024.08.010

接收时间：2023-11-01
首发时间：2026-06-23
出版时间：2024-08-25

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收稿日期：2023-11-01
修回日期：2023-11-23

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中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(1630102023002)

作者信息

^1.海南大学生命健康学院，海南海口　570228

^2.中国热带农业科学院热带生物技术研究所/海南热带农业资源研究院/海南省热带农业资源保护与利用重点实验室，海南海口　571101

^3.中国热带农业科学院湛江实验站，广东湛江　524013

通讯作者:

^* 莫坤联（MO Kunlian），E-mail：mokunlian@163.com。

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2种不同金属材料的力学参数

科 Family	属数 Number of genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)	属 Genus	种数 Number of species	占总种数比例 Percentage of total species (%)
鹅膏菌科Amanitaceae	2	11	5.26	鹅膏菌属 Amanita	10	4.78
小菇科 Mycenaceae	2	12	5.74	丝盖伞属 Inocybe	5	2.39
多孔菌科 Polyporaceae	8	14	6.70	蜡蘑属 Laccaria	5	2.39
红菇科 Russulaceae	3	23	11.00	小皮伞属 Marasmius	6	2.87
				小菇属 Mycena	11	5.26
				光柄菇属 Pluteus	5	2.39
				红菇属 Russula	17	8.13
				栓菌属 Trametes	5	2.39

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